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TP N°01
Dosage de la créatinine
plasmatique.
Réalisée par:
• GHERMI Mohamed.
• CHAREF KHODJA Meriem.
• TAHRI Mahmoud.
• BETTAYEB Mohamed Amine.
I- Définition :
Créa vient du grec kreas qui veut dire chair. Une mesure de la créatinine donne des
informations sur deux points : la fonction rénale et la masse musculaire. La
créatinine est une molécule chimique générée par le métabolisme musculaire. La
créatinine est produite à partir de la créatine, une molécule de première
importance pour la production d'énergie dans les muscles. Environ 2 % de la
créatine du corps sont convertis chaque jour en créatinine. La créatinine est
transportée par le sang vers les reins.
II- Métabolisme :
1- Rappel physiologique :
a- Origine métabolique :
La créatinine provient de la déshydratation de la créatine, elle même
présente dans le muscle strié où elle permet le stockage d'ATP sous forme
de créatine phosphate ou phosphagène par une réaction catalysée par la
créatine kinase (CK).
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3- Formation de la créatinine :
Le métabolisme de la créatine et donc celui de la créatinine peuvent être
résumés dans ce schéma explicatif.
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2- Clairance
Elle établit le rapport entre la quantité de cette substance apportée par le
plasma au niveau du rein et la quantité de cette substance éliminée par le
rein.
C'est le coefficient d'épuration plasmatique ou nombre de ml de plasma
totalement épurés par le rein dans l'unité de temps. Ce volume théorique
s'exprime dans le cadre des unités SI en ml/seconde. Il est utile, pour
manipuler simplement les clairances, de retenir que 24 h correspondent à 1
440 minutes et 86 400 secondes.
C = U.V/P
De plus la formule C = U.V/P est valable pour le sujet adulte normal dont la
surface corporelle est voisine de 1,73 m2. Chez l'enfant et le nourrisson il faut
tenir compte de la surface corrigée Se :
Ce = C x 1,73/Se
La Se est obtenue grâce aux tables de Dubois qui permettent, en joignant par
une droite la taille et le poids, d'obtenir la surface corporelle recherchée à
l'intersection avec la ligne des surface corporelles.
Cette clairance correspond au débit de filtration glomérulaire DFG qui est un
des éléments essentiels dans l’étude de la fonction rénale.
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Sinon cette même DFG peut être calculé par la Formule de Cockcrott et
Gault (1976).
Clairance de la créatinine = K x Poids (kg) x [140-âge(ans)] /
Créatinine(µmol/l)
K = 1,05 chez la femme
K = 1,25 chez l'homme
• Prélèvements :
- Sang veineux :
Matériel nécessaire :
Garrot, seringue et aiguille, désinfectant, coton, sparadrap, tubes avec ou
sans anticoagulant, gants.
Mode opératoire :
Le prélèvement se fait habituellement au pli du coude, on peut aussi le
réaliser en cas de problèmes sur la face dorsale de la main.
Prévoir tout d'abord les tubes nécessaires, mettre éventuellement
l'anticoagulant.
Se munir d'une seringue au volume correspondant aux analyses totales, en
comptant 5 ml par tube.
Garrotter le bras du patient, désinfecter la zone cutanée, décoincer une
première fois le piston de la seringue puis le remettre dans sa position
initiale.
Aboucher la seringue à l'aiguille et piquer la veine.
Tirer le piston, retirer tout d'abord l'aiguille, la jeter dans un récipient
destiné aux consommables jetables puis remplir les tubes en commençant
toujours par le tube sec, boucher immédiatement tous les tubes et remuer
soigneusement ceux contenant l'anticoagulant.
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Ne jamais remplir de tubes avec une seringue sur laquelle on a pas enlevé
l'aiguille (risque d'aérosols, d'éclaboussures et d'expulsion brutale de
l'aiguille).
- Urine :
Matériel nécessaire:
Un flacon pour analyse d'urine ou à défaut un récipient fermé propre et sec.
Mode opératoire :
Pour mesurer la clairance de la créatinine ou exprimer la protéinurie en
mg/jour, on pratique un prélèvement d'urine de 24 heures. Il est donc
préférable que le malade reste une journée et deux nuits à proximité du
laboratoire, ou qu'il effectue ce prélèvement chez lui, si on lui a bien
expliqué.
Le matin, faire uriner le malades dans les latrines. Il doit boire normalement
pendant l'épreuve.
Recueillir ensuite dans une grande jarre (minimum 3 litres) toutes les
urines de la journée, de la nuit et enfin celles du petit matin au réveil.
Boucher la jarre, puis l'agiter. Mesurer précisément le volume en ml grâce à
une éprouvette graduée en plastique de 2000 ml.
Procéder ensuite à un dosage de la créatinine urinaire.
Pour doser la créatinine, plusieurs méthodes ont été mises au point, parmi celles-
ci :
1- Méthodes enzymatiques :
a- Méthode enzymatique à lecture UV :
é
Créatinine > Créatine + ATP > Créatine(P) + ADP
é
Phospho-énol-pyruvate + ADP > Pyruvate + ATP
Pyruvate + NADH.H+ > Lactate + NAD+.
Créatinine > Sarcosine + H2O2
é ! !
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Créatinine + H20 > créatine.
é
Créatine + H20 > sarcosine + Urée.
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Sarcosine + 02 + H20 > glycine + formaldéhyde + H202
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H202 + leucodérivé > coloration proportionnelle à la
concentration en créatinine.
Rmrq :
Ces précédentes méthodes bien que très spécifique sont énormément
couteuses ce qui limite probablement leurs application générale dans le
laboratoire de biochimie.
( )) !
Créatinine + acide picrique > complexe jaune-rouge
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Rmrq :
Plusieurs personnes ont affirmé que, ni la méthode de Jaffé, ni la méthode
enzymatique ne procure de résultats acceptables dans le contexte clinique.
Selon Thomas Hostetter, MD, MPH au National Kidney Disease Education
Program du National Institute of Health (USA) : “le rendu de résultats de
créatinine sérique peut varier de 30 % pour des laboratoires certifiés de
qualité”.
La connaissance de la méthodologie utilisée pour la mesure de la créatinine
est donc essentielle du fait que les interférences méthodologiques peuvent
altérer significativement les résultats et influencer ainsi les décisions
thérapeutiques.
V- Valeurs normales :
1- Créatininurie :
♂ : 1 à 1,8 g/24H. (9 - 16 mmoles/24H);
♀ : 0,8 à 1,2 g/24H. (7 – 10,5 mmoles/24H).
2- Créatininémie :
♂ : 6,8 à 13 mg/l. (60 – 115 µmoles/l);
♀ : 5,65 à 11,3 mg/l. (50 – 100 µmoles/l).
Enfant : 3,5 à 7,5 mg/l. (31 – 66 µmoles/l).
Nouveau née / Nourrisson : 2,3 à 5,6 mg/l. (20 – 50 µmoles/l).
3- Clairance de la créatinine :
≈ 120 ml /min / 1,73 m2.
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Y= 0,29 * 40 /10.
Y=1,16 g.
2- Manipulation :
DO à 30’’ DO à 90’’
A 0,506 0,536
B 0,524 0,582
0,582.0,524
C (échantillon) = [20]
0,536.0,524
C=38,66 mg/l
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