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Objetivos de la practica.
Es aprender sobre los conceptos de enzima y la actividad enzimtica teniendo una definicin mas amplia de catlisis en cuanto a las principales variables que determinan su comportamiento como tambin estudiar el papel de la amilasa salival en el proceso de digestin de los carbohidratos.
Las enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas en los seres vivos. La actividad cataltica es la capacidad del catalizador de acelerar o disminuir una reaccin. se compone por tres partes: soporte, fase activa, selectividad.
Caractersticas especiales (enzimas) Son catalizadores selectivos y especficos. Son molculas que se pueden regular y controlar al igual que su actividad. Acoplan reacciones: Aprovechan la energa de la reaccin exergnicas e impulsan reacciones endergnicas.
Condiciones de reaccin:
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC) pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5 Presin atmosfrica normal
Capacidad de regulacin: Por concentracin de sustrato Por concentracin de enzima Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato) Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima) Por regulacin alostrica Alta especificidad de reaccin: Interaccin estere especfica con el sustrato No hay productos colaterales
La actividad cataltica de las enzimas se ve influenciada por varios factores: concentracin del sustrato y de la enzima, la ausencia o presencia de cofactores, inhibidores y efectores, el aumento o disminucin de la temperatura y las variaciones del pH.
Vo
37 85 Temperatura oC)
El almidn funciona como fuente de energa. Sus propiedades fsicas ayudan a mejorar la textura y la aceptabilidad de los alimentos. El almidn es un polmero de glucosas, unido por enlaces glicosdicos, y formado por dos compuestos diferentes: la amilosa (10 20 %) y la amilopectina (80 90 %).
La amilopectina esta ramificada y consta de residuos de alfa(1>4)D-glucopiranosa enlazadas entre s por uniones alfa(1->6)
Como carbohidrato de la dieta humana para ser absorbido a travs de la pared intestinal su digestin e hidrlisis es realizada por enzimas digestivas ubicadas en boca (amilasa salival, estomago (amilasa mas HCl) e intestino delgado ( amilasas pancreticas ( y ).
-Amilasa: Acta a lo largo de cualquier punto de la cadena de los carbohidratos y su pH ptimo est entre 6.7 y 7.2.
-Amilasa: Acta desde el extremo no reductor de la cadena, catalizando la hidrlisis del segundo enlace y rompiendo dos unidades de glucosa (maltosa) y tiene un PH optimo de 12
Amilopectina Amilopectina
-amilasa
-amilasa
-Amilasa: Actua en enlace glucosdico en el extremo no reductor de la cadena de amilosa y amilopectina liberando glucosa. A diferencia de las otras amilasas, esta forma es ms eficaz en medios cidos y su pH ptimo es de 3.
Objetivos.
Comprender la forma como diversos factores influyen sobre la actividad cataltica de las enzimas. Evaluar la dependencia que puede presentar una reaccin enzimtica con respecto a la acidez del medio, a la temperatura y a la concentracin de la enzima.
Materiales y reactivos.
Soluciones buffer 0.1 M, as: De citrato con pH 3.0, De fosfato con pH 5.0, De fosfato con pH 7.5, De borato con pH 9.0, De borato con pH 10.0 y de Borato con pH=11. Solucin de amilosa (almidn) al 1 %. Solucin de NaCl al 0.9 %. Solucin de lugol : 5 mmoles de 2 por litro de K (30 g/L). Solucin de amilasa salival diluida en agua en proporcin 1 en 4.
Sino aparece coloracin azul en el tubo con pH=7 adicione 3 gotas de lugol incluido el blanco.
A cada uno de los tubos agregue una solucin de amilasa salival y mezcle por inversin
Preparar un bao de: hielo a 4C, un termostatizado a 37C y uno de agua hirviendo a 94C
A cada uno de los tubos agregue 3 gotas de lugol. Agite y observe los resultados
Mezcle por inversin y llevar a cada tubo a respectivo bao por 5 mas.
Gracias.