UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR Facultad de Ciencias Qumicas INFORME DEL PROYECTO DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

TEMA: Aislamiento Identificacin y Preservacin de Cepas de bacterias fermentadoras de Embutidos crnicos tipo Salami
INTEGRANTES: Cadena Sandra Guerrero Carol Pazmio Estefani Pinto Alejandro 8vo. Semestre Alimentos Tutor: Dra. Blanca Estela Bravo

2010

INFORME

Tabla de contenido
1. TEMA: Aislamiento Identificacin y Preservacin de Cepas de bacterias fermentadoras de Embutidos crnicos tipo Salami............................................................ 3 2. 3. 4. RESUMEN............................................................................................................................. 3 INTRODUCCIN .................................................................................................................. 3 OBJETIVOS .......................................................................................................................... 4 4.1. 4.2. 5. OBJETIVO GENERAL: ...................................................................................................... 4 OBJETIVOS ESPECFICOS: ............................................................................................... 4

MARCO TEORICO ............................................................................................................... 4 5.1. 5.2. 5.3. Informacin General ..................................................................................................... 4 Clasificacin de las cepas segn su propiedad ............................................................. 5 Caractersticas de las cepas ........................................................................................... 5

6.

MARCO METODOLOGICO.................................................................................................. 6 6.1. 6.2. Mtodos Generales de Anlisis ................................................................................... 6 Mtodos Especficos de Anlisis: ................................................................................ 6

6.2.1. Caldo de enriquecimiento y Medios De Cultivo Para Su Aislamiento E Identificacion De Lactobacilos Plantarum ............................................................................. 6 6.2.2. CALDO DE ENRIQUECIMIENTO Y MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE MICROCCUS .......................................................................................... 6 6.2.3. CALDO DE ENRIQUECIMIENTO Y MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE MOHOS Y LEVADURAS. ......................................................................... 8 7. 8. 9. 10. 11. RESULTADOS: ..................................................................................................................... 9 DISCUSIONES .................................................................................................................... 12 CONCLUSIONES................................................................................................................. 13 Bibliografa ................................................................................................................... 14 ANEXO ............................................................................................................................ 15

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1. TEMA: Aislamiento Identificacin y Preservacin de Cepas de bacterias fermentadoras de Embutidos crnicos tipo Salami 2. RESUMEN
El objetivo principal fue el aislamiento de los microorganismos que proporcionan sabor, olor y color en los productos crnicos fermentados. Para el asilamiento de microorganismos se emple medios especficos que proporcionen las condiciones adecuadas de crecimiento. Con lo que se obtuvo un total de 7 cepas en las que estn mohos (3), levaduras (2) y bacterias (2). Con lo que se concluy que este producto tiene dos tipos de fermentaciones una aerobia causada por los mohos y las levaduras y otra anaerobia causada por las bacterias.

3. INTRODUCCIN
Los productos crnicos fermentados se pueden definir como una mezcla de carne picada y otros aditivos, que es introducida en las tripas naturales o artificiales y sometida a un proceso de fermentacin llevado a cabo por microorganismos, seguida de una fase de secado. El producto final se almacena normalmente sin refrigeracin y se consume sin tratamiento trmico. Los cambios en la composicin, sabor, olor y color que tienen lugar en los productos crnicos fermentados se deben fundamentalmente a la microflora natural o aadida, que se desarrolla en el producto durante la fermentacin y maduracin de este y ejerce una actividad enzimtica intensa. Los tipos de cepas de microorganismos usados en la industria de la charcutera son: las bacterias lcteas, las micrococceas, los mohos y la levadura de diferentes especies. El propsito del presente estudio es buscar un mtodo efectivo para aislar, seleccionar y preservar los microorganismos, encargadas de la fermentacin de un producto crnico, tipo salami, a partir de un embutido comercial, del muestreo en el lugar de almacenamiento y maduracin del producto y usando para su aislamiento medios especficos tanto comerciales como formulados en el laboratorio segn la cepa. Este estudio se realiz debido a que el pas tiene empresas que se dedican a la elaboracin de estos embutidos y no existen investigaciones publicadas respecto al tema de seleccin de microorganismos especficos o elaboracin de un cultivo iniciador propio para nuestros embutidos, en unos casos las empresas usan cultivos iniciadores comerciales importados y otro caso la fermentacin se realiza sin adicin de cultivo iniciador. Una vez realizado el estudio de logr aislar 7 cepas de los microorganismos encargados de la fermentacin del producto, de que la mayora son mohos y levaduras; estas cepas son las encargadas de la fermentacin en la parte externa del producto. Se logr identificar algunas de las cepas que la bibliografa indica que son usadas como cultivos starter entre las que se que estn el micrococcus y el Lactobacilos.

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4. OBJETIVOS
4.1.OBJETIVO GENERAL:
El propsito del presente estudio es buscar un mtodo efectivo para aislar, seleccionar y preservar los microorganismos, encargadas de la fermentacin de un producto crnico, tipo salami, a partir de un embutido comercial y del muestreo en el lugar de almacenamiento y maduracin de los mismos.

4.2.OBJETIVOS ESPECFICOS:
Establecer puntos clave de muestreo que permita colectar en su totalidad todos los microorganismos encargados de la fermentacin del embutido. Establecer las caractersticas mas propicias para que los microorganismos puedan desarrollarse en laboratorio. Establecer cuales son los medios mas adecuados para el aislamiento especifico de microorganismos fermentadores de embutidos tipo salami Seleccionar y dar un medio propicio para el desarrollo solo de los microorganismos de inters. Buscar el mtodo mas adecuado para la conservacin de las cepas puras de microorganismos seleccionados.

5. MARCO TEORICO
5.1. Informacin General
Tradicionalmente la elaboracin de embutidos ha sido emprica, ya que no se conoca la relacin entre la actividad microbiana, y los cambios, fundamentalmente sensoriales, que se desarrollaban en el producto durante el curado. En la actualidad sabemos que los cambios en la composicin, sabor, olor y color que tienen lugar en los productos crnicos fermentados se deben fundamentalmente a la microflora natural o aadida, que se desarrolla en el producto durante la fermentacin y maduracin de este y ejerce una actividad enzimtica intensa. Hoy en da los productos crnicos fermentados se pueden definir como una mezcla de carne picada, grasa, sal, agentes del curado, azcar, especias y otros aditivos, que es introducida en las tripas naturales o artificiales y sometida a un proceso de fermentacin llevado a cabo por microorganismos, seguida de una fase de secado. El producto final se almacena normalmente sin refrigeracin y se consume sin tratamiento trmico. Los tipos de cepas de microorganismos usados en la industria de la charcutera son: las bacterias lcteas, las micrococceas, los mohos y la levadura, como se indica en la tabla No. 1, que brindan las caractersticas especiales al producto, Tabla No. 2, interviniendo en su color, sabor, bioproteccin, etc. Tabla No 1. Algunas cepas involucradas en la fermentacin del salami Bacterias Lactobacillus sake, curvatus, Plantarum Pediococos acidilactici, pentosaceus Staphylococcus xylosus,carnosus Micrococcos varians Mohos Levaduras Penicillium nalgiovense, Debaryomyces hansenii, chysogenum, cantarellii, kloeckerii. roquefortii, frecuenstans, verrucosum. Aspergillus Eurotium Pgina 4 de 18

5.2. Clasificacin de las cepas segn su propiedad

Las bacterias responsables de la fermentacin del salami contribuyen al desarrollo de las caractersticas organolpticas y reolgicas del alimento, sino que generan en los mismos ambientes poco favorables para el desarrollo de microorganismos patgenos debido a su marcada capacidad antagonista, la cual favorece su proliferacin en el alimento (tabla 2). Adems de este importante papel en procesos de bioconservacin, se ha podido comprobar que algunas cepas de bacterias lcticas, son beneficiosas para la salud. Tabla No 2 Propiedades que brindan las cepas Caractersticas Acidificantes sabor/color Bioprotectoras Cepas Pediococcus cerevisiae Lactobacillus plantarum Micrococcus varians Staphylococcus carnosus Lactococcus lactis

5.3. Caractersticas de las cepas

En la tabla No. 3 se indica algunas caractersticas de las cepas involucradas en la fermentacin del salami que se trataran en el presente trabajo:

Tabla No. 3 Caractersticas microorganismos Micrococos Mayora tiene necesidades NaCl de hasta 1015% 25 - 30C Aerobios (anaerobias facultativas) Positivo 6.0-8.0 Positiva BAL Mohos Levaduras Requerimientos mas altos que los mohos. 20 30C Aerobios

Necesidades nutricionales

Exigentes

Requerimientos bajos

Temperaturas Requerimiento de Oxgeno Reduccin de nitratos a nitritos pH Tincin Gram

Msofilas (40C) Aerotolerantes Anaerobios Negativos 4.5 6.4 Negativo

20 30C Aerobios

Negativos 5,6 --------

Negativos 5.0-7.5 --------

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6. MARCO METODOLOGICO
6.1.Mtodos Generales de Anlisis
Muestreo: Las muestras fueron recolectadas de la Industria Crnica El Salinerito seleccionando al azar la o las unidades que conformaron la muestra. Se realiz un hisopado sobre la superficie del salami y el hispo se lo coloc en un frasco con 60 ml de agua de peptona. Adems se cort aspticamente una pequea porcin de carne de partes diferentes de una pierna, la muestra se puso en un frasco plstico de boca ancha y se la refriger. Se utiliz material estril tanto para la toma como para contener la muestra.

6.2.Mtodos Especficos de Anlisis:

6.2.1. Caldo de enriquecimiento y Medios De Cultivo Para Su Aislamiento E Identificacion De Lactobacilos Plantarum Preparacin del medio de cultivo:

El plasma se obtuvo a partir de sangre fresca de bovino mediante la tcnica descrita por Barboza Y. y col. 1994 (se utiliz como fuente proteica). Luego se le adicion dextrosa al 1 % y los dems componentes. El pH del medio se le ajust a 6,2 con cido actico. En el caso en que se necesit preparar el medio en forma slida se le adicion 15 gramos de agar. Condiciones de cultivo:

Las bacterias cido lcticas crecieron a 37C en medio MRS y Medio plasma de Bovino. Seleccin de las cepas:

De las cepas se hicieron observaciones al microscopio, conservndose nicamente aquellas con morfologa de bacilos. Posteriormente se realizaron coloraciones de Gram. Medio de conservacin:

Como mtodo de conservacin a largo plazo se congelaron a 20C en caldo MRS con 30 % de glicerol. 6.2.2. CALDO DE ENRIQUECIMIENTO Y MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE MICROCCUS Caldo de enriquecimiento Infusin Cerebro Corazn:

Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de corazn vacuno y la peptona, son la fuente de Pgina 6 de 18

carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad buffer.
Frmula (en gramos por litro) Infusin de cerebro de ternera Infusin corazn vacuno Peptona Cloruro de sodio Glucosa Fosfato disdico Instrucciones Suspender 37 g del polvo en un litro de agua destilada. Calentar a ebullicin hasta disolver completamente. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar rpidamente sin agitar.

200.0 250.0 10.0 5.0 2.0 2.5

Medio de cultivo Agar Manitol Salado:

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de especies del Genero Micrococus, a partir de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria. Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.

Frmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona d-Manitol Cloruro de sodio Agar Rojo de fenol

1.0 10.0 10.0 75.0 15.0 0.025

Instrucciones Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121C durante 15 minutos.

Condiciones de cultivo: Los Micrococcus crecen bien en este medio, formando colonias rojas, relativamente grandes, elevadas, cupuliformes y opacas, de consistencia cremosa, a las 18-24 horas de incubacin a 35-37 C, en aerobiosis. No fermentan el manitol. Seleccin de las cepas: De las cepas se hicieron observaciones al microscopio, conservndose nicamente aquellas con morfologa de micrococcus. Posteriormente se realizaron coloraciones de Gram. Medio de conservacin: Como mtodo de conservacin a largo plazo se congelaron a 20C en caldo infusin cerebro corazn con 30 % de glicerol.

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6.2.3. CALDO DE ENRIQUECIMIENTO Y MEDIOS DE CULTIVO PARA SU AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE MOHOS Y LEVADURAS.

Caldo de Enriquecimiento Extracto de malta: COMPOSICIN EN g/l Extracto de malta Dextrina Peptona de gelatina

13.0 2.5 5.0

Se sugiere para el crecimiento de las levaduras, la utilizacin de caldo extracto de malta acidificado ya que es un medio ms rico en nutrientes y adecuado para el desarrollo de este grupo microbiano. Medio de Cultivo Agar papa glucosa (PDA): Medio de cultivo utilizado para el aislamiento y recuento de hongos y levaduras. Tanto la glucosa presente como la infusin de papa favorecen el desarrollo exuberante de hongos y levaduras, mientras que el desarrollo bacteriano es inhibido con el agregado de cido tartrico luego de la esterilizacin hasta alcanzar un pH: 3.5 0.2. Una vez agregado el cido no se puede recalentar ya que el agar se hidroliza. Frmula (en gramos por litro) Infusin de papa 4.0 Glucosa 20.0 Agar 15.0 Instrucciones Disolver 39 g de polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar hasta ebullicin con agitacin continua. Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Si se desea ajustar el pH a 3.5 agregar aproximadamente 14 ml de una solucin estril de cido tartrico al 10 %.

Condiciones de cultivo: En aerobiosis, a 22-25 C 30-32 C, durante 5 das o mayor tiempo. Seleccin de las cepas: De las cepas se hicieron observaciones macroscpicas de su morfologa. Medio de conservacin: En cajas petri que contienen medio PDA con micelio de hongo crecido se lavan las esporas con 3,75ml de caldo Extracto de malta, se coloca esta suspensin en un frasco que contiene 1,25ml de glicerol estril (autoclavado). Homogenizar y alicutar a razn de 1,5ml en crioviales estriles, rotular los tubos con la identificacin correspondiente. Conservar los tubos a 20C en el congelador.

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7. RESULTADOS:

Tabla No. 1.- Codificacin Muestras tomadas RECIPIENTE Tubo 1 Frasco 1 Frasco 2 Frasco 3 Frasco 4 Bolsa 1 CODIFICACIN Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4 Muestra 5 Muestra 6 MUESTRA Hisopado superficie Hisopado superficie Hisopado superficie Trozo pierna Hisopado superficie pierna Producto (salami)

Tabla No. 2.- Resultados de crecimiento de mohos y levaduras por caja de siembra

RECIPIENTE

CRECIMIENTO CAJAS + 10-2 + +

MORFOLOGA levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso moho azul halo blanco levaduras amarillas redondas, brillosa de aspecto baboso levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso moho azul halo blanco moho verde levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso moho blanco, de textura algodonosa moho azul halo blanco levaduras amarillas redondas, brillosa de aspecto baboso
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Muestra 1 + 10-4 + + + 10-2 Muestra 2 + 10-4 + +

+ + + 10-2 + Muestra 3 + 10-4 + + 10-2 + Muestra 4 + 10-4 + + 10-3 + Muestra 6 + 10-5 +

levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso moho blanco, de textura algodonosa levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso moho verde levaduras amarillas redondas, brillosa de aspecto baboso levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso moho verde levaduras amarillas redondas, brillosa de aspecto baboso levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso moho verde levaduras amarillas redondas, brillosa de aspecto baboso levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso

Simbologa: + Crecimiento positivo Crecimiento negativo

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Tabla No. 3.- Resultados de crecimiento de bacterias por caja de siembra Muestra 4 Muestra 5 Muestra 6

10 E-02
CRECIMIENTO MICROCOCCUS + bacterias pequeas, redondas blancas Cocos TINCIN GRAM (color azul)

10 E-04
-

10 E-02
+

10 E-04
+

10 E-02
+

10 E-04
+

MORFOLOGA

----

bacterias bacterias bacterias bacterias pequeas, pequeas, pequeas, pequeas, redondas redondas redondas redondas blancas blancas blancas blancas Cocos Cocos Cocos (color azul) Cocos (color azul)

-----

(color rojo) (color rojo)

LACTOBACILOS (PLASMA HUMANO)

10 E-02
CRECIMIENTO +

10 E-04
+

10 E-02
+

10 E-04
-

10 E-02
+

10 E-04
+

MACRO MORFOLOGA

bacterias bacterias bacterias pequeas, pequeas, pequeas, redondas redondas redondas blancas blancas cremas Bacilos (color azul) Bacilos (color azul) Cocos (color rojo)

---

bacterias bacterias pequeas, pequeas, redondas redondas blancas blancas Positivo (color azul) Positivo (color azul)

TINCIN GRAM MICRO MORFOLOGIA

-------

LACTOBACILOS (PLASMA BOVINO)

10 E-02
CRECIMIENTO +

10 E-04
+

10 E-02
-

10 E-04
-

10 E-02
+

10 E-04
+

MORFOLOGA

bacterias bacterias pequeas, pequeas, redondas redondas blancas blancas Positivo Positivo (color azul)

-- -

---

bacterias bacterias pequeas, pequeas, redondas redondas blancas blancas Positivo (color azul) Positivo (color azul)

-----

-----

TINCIN GRAM

(color azul)

Simbologa: + Crecimiento positivo Crecimiento negativo

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Tabla No. 4.- Identificacin de mohos y levaduras. # 1 2 3 4 5 MORFOLOGA levaduras blancas redondas, brillosa de aspecto baboso levaduras amarillas redondas, brillosa de aspecto baboso moho verde moho blanco, de textura algodonosa IDENTIDFICACIN Debaryomyces hansenii Sin identificacin Penicillum commune Penicillum nalgiovense Penicillium roqueforti

moho azul halo blanco

Tabla No. 5.- Identificacin de bacterias.

# 1 2

MORFOLOGA bacterias redondas blancas bacterias pequeas, redondas blancas

IDENTIDFICACIN Microccus variens Lactobacillus plantarum

8. DISCUSIONES
Las muestras originales, pese a ser de los mismos productos fueron tomadas de diferentes reas. Hisopado de la parte externa para ver crecimiento de Mohos y Levaduras e hisopado de la parte interna para ver el crecimiento de Bacterias, debido a que son aerobios y microaeroflicos respectivamente. Para el crecimiento de Lactobacilos se utiliz dos formulaciones diferentes del medio con plasma, una con plasma humano y otra con plasma de bovino, obteniendo un crecimiento similar, esto se debe a que los componentes generales de ambos plasmas son parecidos como fuente de nitrgeno, diferencindolos solo en los anticuerpos que poseen. Cabe destacar que existi un poco de dificultad al momento de realizar los medios con plasma, debido a lo difcil que se hizo conseguir este componente, por la gran cantidad de sangre que se necesita para obtenerlo y gran diversidad de tcnicas de preparacin del medio que existe en la bibliografa utilizada.

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 En el proceso de aislamiento de mohos y levaduras se adicion al agar PDA una solucin de gentamicina al 2% como inhibidor de bacterias, para evitar el crecimiento de la flora acompaante que pese a que el medio es exclusivo para este tipo de cepas, se obtuvo tambin un crecimiento de bacterias principalmente gram negativas (identificadas por tincin) sobre las cuales la gentamicina tiene un gran espectro de accin. Pese a que el medio (agar manitol salado), utilizado para el aislamiento de micrococcus no es especfico para esta cepa, se obtuvo gran cantidad de colonias, acompaadas de otras bacterias principalmente staphylococcus gram negativos, identificadas al microscopio. En la identificacin de las levaduras aisladas se determin la especie de una de las dos cepas obtenidas, mientras que la otra no fue factible caracterizarla, debido a que no contamos con el conocimiento ni la bibliografa adecuada que nos ayude a su tipificacin. Por falta de tiempo no se alcanz a realizar la caracterizacin de especies de las cepas aisladas por medio de pruebas bioqumicas, sino que su precaracterizacin se la realiz solo basndose en la bibliografa utilizada, que nos muestra las morfologas de cada microorganismo responsable de la fermentacin del producto. Al momento de la entrega del informe se est aun trabajando en la preservacin de las cepas, mediante las tcnicas mencionadas en el proyecto.

9. CONCLUSIONES
En la siembra de las muestras originales, se obtuvo colonias mezcladas de todo tipo, las que se identificaron por medio de tincin gram para su posterior aislamiento. En el reconocimiento de los diferentes mohos encontrados en la flora natural del salami, se determinaron tres cepas diferentes que fueron Penicillum de las especies: commun, roqueforti y nalgiovence, que pudieron ser identificados por morfologa y comparando con bases de datos electrnicos. Las cepas de mohos y Levaduras aisladas son las encargadas de la fermentacin del producto por la parte externa, debido a que son aerobias. Se aisl Lactobacillus plantarum, que fue determinado por medio de tincin gram y observacin al microscopio por la formacin caracterstica de redes de bacilos de color azul como indica la bibliografa.

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 Se logro comprobar que las cepas eran efectivamente de Lactobacilos al sembrarlos en una caja con ausencia de oxigeno en la que no se logro desarrollar la cepa debido a que es microaeroflica. El reconocimiento de micrococcus de la especie varians, se efectu por medio de su micromorfologa al compaginar la imagen de la cepa aislada en el laboratorio con las imgenes encontradas en la red. Basado en los resultados obtenidos, se concluye que aunque el agar que utiliza plasma como fuente proteica, es muy inestable se logro aislar las cepas de lactobacillos deseadas.

10.

Bibliografa

1. R., Jorge Ruiz. ELABORACIN DE UN PRODUCTO CRNICO FERMENTADO CON L. PLANTARUM UTILIZANDO PLASMA DE BOVINO COMO MEDIO DE CULTIVO. [En lnea] 2 de Febrero de 2001. [Citado el: 14 de Mayo de 2010.] http://revistas.luz.edu.ve/index.php/rc/article/viewFile/4700/4572. 2. Santa, Dalla. CARACTERSTICAS DE SALAMIS FERMENTADOS PRODUCIDOS SIN ADICIN DE CULTIVO INICIADOR. [En lnea] 2006. [Citado el: 14 de Mayo de 2010.] http://redalyc.uaemex.mx/pdf/724/72450309.pdf. 3. Ruilova, Irina del Carmen Torres. DESARROLLO DE UN SNACK CRNICO FERMENTADO-SECO-MADURADO, CON VALOR FUNCIONAL Y ESTABILIDAD ORGANOLPTICA, UTILIZANDO CEPAS DE MICROORGANISMOS FERMENTADORES Y CEPAS PROBITICAS. [En lnea] 2008. [Citado el: 16 de Mayo de 2010.] http://www.dspace.espol.edu.ec/bitstream/123456789/5416/1/D-38755.pdf. 4. Samaniego Fernndez Luz Mara. LACTOBACILLUS SPP.: IMPORTANTES PROMOTORES DE ACTIVIDAD PROBITICA, ANTIMICROBIANA Y BIOCONSERVADORA [En lnea] 2006. [Citados el: 16 de Mayo de 2010] http://www.bibliociencias.cu/gsdl/collect/libros/index/assoc/HASH011d/e18c5081.dir /doc.pdf 5. Pacheco Morales Pedro Antonio. MICROCOCCUS [En lnea] 2009. [Citados el: 16 de Mayo de 2010] http://www.slideshare.net/pedritopacheco/micrococcus 6. Castillo T. Jorge L. MICROBIOLOGA INDUSTRIAL. FAMILIA MICROCOCCACEAE [En lnea] 2007. [Citados el: 16 de Mayo de 2010] http://www.monografias.com/trabajos15/micrococcaceae/micrococcaceae.shtml

7.

FAO. Guia para Muesrteo de Alimentos. Ginebra : FAO.

8. P., Doyle Michael. Microbiologa de los Alimentos Fundamentos Fundamentos y fronteras. Zaragoza Espaa : Acribia, 2001.

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11.

ANEXO

ANEXO 1: FOTOS DE CAJAS DE 1era SIEMBRA

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ANEXO 2: FOTOS DE MICROORGANISMOS AISLADOS. BACTERIAS Lactobacillus Siembra en agar Plasma de bovino Siembra en agar Plasma humano

Tincin Gram

Micrococcus Agar Manitol Salado Tincin Gram

Foto obtenida del internet

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MOHOS
Siembra en agar PDA Penicillium nalgiovense

Penicillium comn

Penicillium Roqueforti

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LEVADURAS Debaryomyces

Levadura amarilla (sin identificar)

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