http://webdelprofesor.ula.ve/nucleotrujillo/elciv/clases_parasitologia/parasitologia.pdf http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/pdf/Teoria_Parasitol_2011.

pdf

vNAEGLERIA, ACANTHAMOEBA, BALAMUTHIA

Dra. Teresa Uribarren Berrueta Departamento de Microbiologa y Parasitologa, Facultad de Medicina, UNAM berrueta@unam.mx Introduccin. Durante la primera mitad del siglo XX, las amibas de vida libre eran conocidas como "amibas del suelo", protozoos no patgenos, ubicuos en suelos y agua, utlizados como modelos por los bilogos celulares. En 1958, Culbertson demostr el potencial patgeno de Acanthamoeba spp., y en 1965 Fowler y Carter reportaron el primer caso de meningoencefalitis amibiana primaria (MEAP) causado por Naegleria fowleri en Australia; posteriormente, en Checoeslovaquia se identific, de manera retrospectiva, un brote de 16 casos de MEAP adquirida en una alberca calentada artificialmente (1962 - 1965). En 1972 se hizo evidente que Acanthamoeba spp., produca enfermedad en el humano; varios genotipos de Acanthamoeba (entre ellos, algunas especies conocidas, tales como A. castellani, A. culbertsoni, A. healyi, A. polyphaga, A. rhysodes) son agentes causales de encefalitis granulomatosa (en sujetos inmunocomprometidos, casi exclusivamente) y queratitis en personas aparentemente sanas. Balamuthia mandrillaris, aislada de un mandril por Visvesvara y cols, en 1990, fue reconocida como agente etiolgico de encefalitis granulomatosa en pacientes inmunocomprometidos y ms recientemente en personas inmunocompetentes, sobre todo en los extremos de la vida; asimismo, se ha identificado en forma creciente en individuos de origen latinoamericano y en pacientes recipientes de transplantes. Entre cientos de amibas de vida libre (AVL), Naegleria fowleri, especies de Acanthamoeba y Balamuthia mandrillaris, son considerados organismos emergentes, de alta patogenicidad, causantes de enfermedad a nivel de SNC, con una mortalidad >95%. Presentan formas de trofozoito y quiste, y ambas pueden ser infectantes. (Visvesvara et al., 2007). Balamuthia mandrillaris y Acanthamoeba spp. tambin pueden causar infecciones granulomatosas diseminadas, que involucran a la piel, pulmones, senos nasales. Sappinia pedata, antes S. diploidea, otra amiba de vida libre, se report como agente etiolgico en un caso de encefalitis en 2001 y su ultraestructura se di a conocer en 2003. (Walochnik et al., 2010). Desde hace algunos aos, se ha considerado el papel de estas amibas como reservorios de bacterias y virus patgenos. (Visvesvara GS, Schuster FL. 2008).

http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/parasitologia/amibas-vida-libre.html

Introduccion y Biologia
Las Amebas de vida libre son protozoos que se desarrollan en el ambiente, principalmente, en aguas temperadas que se mantienen relativamente inmviles (piscinas, lagunas, estanques), estas se movilizan mediante pseudopodos y se reproducen por fisin binaria, se les denomina de vida libre ya que no dependen de un solo habitat para poder vivir, y aludiendo a su nombre, poseen una vida libre.

De las amebas de vida libre los tres generos que producen enfermedades en el hombre son: Naegleria, Acanthamoeba y Balamuthia . Las patologias mas comunes son la Meningitis amibiana primaria (MAP) y la Encefalitis amibiana granulosa (EAG), estas patologias se denominan de rango primario para diferenciarlas del mecanismo de accion patologico de la Entamoeba histolytica (no es del genero de vida libre) la cual a partir de su localizacion en los intestinos se expande a otros tejidos (esto es el rango secundario). Es importante decir que estas Amebas son capaces de vivir de dos formas: como parasitos y como organismos de vida libre, a raiz de esto se denominan amebas anfizoicas. Estas se distribuyen apliamente por toda la naturaleza abarcando suelo, agua y aire.
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Caracteristicas principales y ciclo biologico

N. fowleri Clasificacin segn ubicacin: Histoparasito Morfologa: Su ciclo vital se compone de tres estadios: Trofozoito, Flagelado y Quiste. En la forma de torfozoito mide aproximadamente de 15 a 25 m. El citoplasma es finamente granular y contiene multiples mitocondrias, lisosomas y vacuolas, el nucelo es central y contiene un nucleolo central denso y esfrico. La forma flagelada suele ser biflagelada aunque en ocasiones puede contener a mas de 10 flagelos y es un signo que describe la etapa en que la ameba no se alimenta. El quiste es esferico mide de 8 a 12 m y posee una densa pared este no se encuentra en la meningitis amibiana granulomatosa. Forma infectante: La fase flagelada. Va de infeccin: Neuroepitelio Olfatorio (inhalacin polvo o ingestinn de agua contaminada) Mecanismo de infeccin: Este trofozoito al llegar al Neuroepitelio Olfatorio es fagocitado por sus celulas lo cual le permite a la ameba atravezar la placa cribiforme y llegar asi al espacio subaracnoideo en donde se multiplica y prolifera hacia el SNC Hbitat definitivo: Pueden vivir como organismos de vida libre y como parsitos.

Acanthamoeba

Clasificacin segn ubicacin: Histoparasito Morfologa: Su ciclo se compone de dos fases: trofozoito y quiste. El trofozoito mide entre 15 a 35 m, posee citoplasma, mitocondrias, lisosomas, ribosomas y vacuolas. Su movilizacin es atravez de pseudopodos filamentosos (acantopodio) y su pared le da una forma estrellada. Poseen nucleo central con un nucleolo prominente y redondo. El quiste mide entre 15 a 20 m y contiene una doble pared, la cual se forma cuando las condiciones del medio ambiente no son adecuadas. Forma infectante: la fase de quiste. Va de infeccin: aire, agua y polvo Mecanismo de infeccin: es un parasito oportunista, podemos distinguir tres vas de infecciones distintas, estas son: va cutnea (por heridas en la piel), va nasal (ingreso de aguas contaminadas, polvo, etc) y va respiratoria, en individuos inmuno comprometidos. Hbitat definitivo: Pueden vivir como organismos de vida libre y como parsitos.

Balamuthia mandrillaris Clasificacin segn ubicacin: Histoparasito Morfologa: Su ciclo se compone de dos fases: trofozoito y quiste, el trofozoito es mas grande que la de la Acanthamoeba. El quiste mide entre 15 a 20 um, tiene una pared triple. Forma infectante: La fase de quiste. Va de infeccin: por el aire, el agua y polvo, al igual que la Acanthomoeba. Mecanismo de infeccin: al igual que la Acanthamoeba es un parasito oportunista, podemos distinguir tres vas de infecciones distintas, estas son: va cutnea (por heridas en la piel), va nasal (ingreso de aguas contaminadas, polvo, etc) y va respiratoria en individuos inmuno comprometidos. Hbitat definitivo: Pueden vivir como organismos de vida libre y como parsitos.

El ciclo biologico de las Amebas de vida libre es monoxenico simple ya que este no posee hospederos intermediarios. La N. fowleri durante su ciclo comprende tres estadios los cuales son; Trofozoito, Flagelado y Quiste. La Acanthamoeba y Balamuthia se distinge de la anterior ya que solo posse en un su ciclo las fases de trofozoito y quiste.

En la imagen podemos explicar el mecanismo de infeccion y formas infectantes de estas ambeas diferenciando sus formas morfologicas.
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Taxonomia
Si nos basamos en la nomenclatura actual, podemos decir que las amebas de vida libre pertenecen al reino Protozoa y las que generanpatologas en el ser humano, pertenecen a dos phyla de este reino: Percolozoa y Rhizopoda.

Phylum Percolozoa: dentro de este phyla se agrupan organismos primitivos, algunos de los cuales pueden ser ameboflagelados con un flagelo transitorio; no poseen aparato de Golgi, pero poseen mitocondrias o hidrogenosomas y peroxisomas. El Phylum incluye la clase Heterolobosea, el orden Schyzopyrenida, la familia Vahlkampfiidae y los gneros Naegleria y Vahlkampfia. Phylum Rhyzopoda: aqu se agrupan organismos que poseen pseudopos que le permiten la locomocin y la alimentacin adems de mitocondriascon crestas tubulares. La gran mayora de las especies incluidas en esta phyla son de vida libre. Las dos clases que se incluyen son: 1. Clase Lobosea Orden Hartmannellida: - Familia Hartmannellidae Gnero: Hartmannella - Familia Acanthamoebidae Gnero: Acanthamoeba Orden Leptomyxa: - Familia Leptomyxidae Gnero: Balamuthia 2. Clase Entamoebidae: Orden Amoebida: - Familia Entamoebidae Gneros: Entamoeba, Endolimax* e Iodamoeba* * Se cree que pertenecen al gnero. Si bien existen muchas amebas de vida libre solo unas pocas son patgenas o han sido encontradas en humanos. De ellas, Naegleria,Acanthamoeba y Balamuthia se consideran de importancia en medicina humana, incluyendo por ejemplo a N. fowlerii, A. castellanii, A.culbertsoni, A. astronyxis, A. polyphaga, A. healyi, Acanthamoeba sp y B. mandrillaris.
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Patogenia
Naegleria

N. fowleri es la nica patgena de su gnero, como mencionamos antes esta es la nica que posee tres estadios en su ciclo, es inhalada a travs de las aguas contaminadas, el aire y el polvo. Al ingresar al neuroepitelio olfatorio, estas son capaces de inducir fagocitocis, en donde penetran la placa cribiforme del hueso etmiodes, llegando al espacio subaracnoideo en donde se multiplican y proliferan; generando a nivel de S.N.C necrosis hemorrgica y edema, por esta razn se dice que literalmente se come el cerebro. En el estudio con microscopia hacia el paciente se observa compromiso de materia gris con meningoencefalitis aguda y encefalitis necrotizante hemorrgica, ademas de la presencia en espacio perivasculares de los trofozoitos. A nivel macroscpico se presenta con edema cerebral marcado, evidencia de hipertensin endocraneana y congestin severa adems de un compromiso de las meninges en los lbulos temporal, frontal e hipotlamo. Algunos estudios indicaran que aparentemente solo invadira al S.N.C. Aqu tenemos un pequeo video, el cual relata el caso de la muerte de un nio en estados unidos, al haber inhalado a N.fowleri en un lago al baarse.

Acanthamoeba y Balamuthia mandrillaris

Generalmente producen un cuadro denominado encefalopata amebiana granulomatosa (EAG), que a nivel macroscpico presenta, al igual que la Naegleria, encefalitis necrtica hemorrgica, la cual es multiple y focal, asociada a una inflamacin subaguda de clulas granulomatosas. En las lesiones provocadas por estos gneros se observa la presencia de quistes y trofozoitos.

La Acanthamoeba afecta el estroma corneal, provocando traumas en su epitelio.

La queratitis es uno de estos traumas, se caracteriza por una inflamacin del estroma corneal, ya sea agudo o crnico. En esta infeccin se observan polimorfonucleares, eosinfilos y linfocitos alrededor de los quistes principalmente y trofozoitos.

Imgenes de queratitis por Acanthamoeba

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Epidemiologia
La Naegleria fowleri tiene una distribucin universal, se le ha aislado del suelo, polvo, aire, aguas frescas, piscinas y de muestras de la nariz de individuos aparentemente sanos. El grupo de riesgo comprende a individuos jvenes que se baan en lagos, piscinas, o aguas contaminadas durante el verano estos son los que suelen adquirir esta ameba. Acanthamoeba y Balamuthia, estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, en aguas oceanicas, lagunas, ros, filtros de aire, polvo y en descarga nasal de individuos sanos. Se han encontrado una asociacin con Legionella pneumophila especialmente en aires acondicionados. Se presenta habitualmente en individuos con enfermedades crnicas, inmunocomprometidos y en cualquier poca del ao considerandoseparsitos oportunistas.

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lunes, 26 de noviembre de 2007

Cuadro clnico
Cuando se habla de la meningoencefalitis amebiana primaria (MAP), se presenta un cuadro clnico caracteristico. La MAP ocurre principalmente en individuos sanos, inmunocompetentes, nios o adultos jvenes, que relatan, en la mayora de los casos, el antecedente de bao o zambullida en agua fresca justo antes del inicio del cuadro. El periodo de incubacin dura 3 a 7 das, aunque en algunos casos es mayor a dos semanas. Los sntomas comienzan abruptamente, con fiebre leve y malestar general, algunas veces acompaados de rinitis y odinofagia; estos sntomas progresan rpidamente, con acentuada cefalea y fiebre, seguido por vmitos, rigidez de nuca y signos de irritacin menngea. Hacia el final del tercer da de evolucin, el paciente est muy desorientado, si no comatoso. Algunos sntomas leves de compromiso respiratorio superior pueden estar presentes. Al ingreso al hospital, el diagnstico es generalmente de meningitis pigena; en el hospital, el cuadro clnico es de un continuo deterioro, somnolencia, y algunas veces con convulsiones. La puncin lumbar arroja un fluido turbio con presin elevada. Otros sntomas y signos neurolgicos estn ausentes. El paciente fallece de insuficiencia respiratoria en menos de 10 das de iniciados los sntomas. Unos pocos pacientes han sido aparentemente tratados en forma exitosa, pero la identificacin del parsito en algunos de estos casos ha sido cuestionada. Las pruebas de laboratorio muestran un aumento de los leucocitos polimorfonucleares en sangre. El LCR tiene elevados contenidos de protenas, clulas mononucleares, trofozoitos amebianos mviles y hemates. Por las caractersticas del LCR y el cuadro clnico, la enfermedad frecuentemente se confunde con meningitis viral. Tomografas computarizadas muestran un proceso menngeo con obliteracin de los espacios alrededor del cerebro medio o slo edema difuso inespecfico. En el caso de la encefalitis amebiana granulomatosa (EAG), el compromiso del cerebro por acantamebidas ocurre en todas las edades, igual en ambos sexos, sin predileccin racial para Acanthamoeba sp, pero con aparente predileccin de hispanoamericanos en caso de B. mandrillaris. Las manifestaciones clnicas son variables pero en la mayora de los pacientes se presenta como una encefalopata focal o difusa y con signos de irritacin menngea. Algunas veces las manifestaciones clnicas dependen de una lesin que ocupa espacio, con los consiguientes signos de aumento de la presin intracraneana. Los sntomas ms comunes son anormalidades del estado mental, letargo, cefalea, hemiparesias y meningismo. La fiebre est presente en cerca de la mitad de los casos y, en un menor grado, nuseas, vmitos, anorexia, ataxia, y afasia. El curso de la enfermedad es subagudo o crnico, de 7 a 120 das. Algunos pacientes tienen, simultneamente, lesiones cutneas ulceradas.

Las anormalidades de laboratorio ms significativas en el LCR son pleocitosis con 20 a 100% de linfocitos, una glucosa normal o lmite, aumento del nivel de protenas, y unas pocas clulas polimorfonucleares. La glucorraquia normal o lmite y el recuento subanormal de clulas polinucleares ayuda a diferenciar esta infeccin de la meningoencefalitis bacteriana. Tcnicas imagenolgicas, tales como TAC, angiograma cerebral y tcnicas con galio, usualmente demuestran graves lesiones vasculares localizadas en cualquier parte dentro del cerebro, de manera especial en el cerebelo o cerebro medio. En algunos pacientes, la TAC revela grandes oclusiones arteriales y la RM demuestra lesiones en la mdula espinal. Una disminucin del espacio ventricular puede ser demostrado. En algunos pacientes, la presentacin suele parecer una masa tumoral en el rea parietal, con incoordinacin de la extremidad superior comandada y debilidad del hemicuerpo involucrado, incremento de los reflejos tendinosos profundos, y signos de Babinski positivo en el lado afectado. Una infeccin con Balamuthia sp puede presentarse como un aparente glioma del tronco cerebral. La gran mayora de los pacientes se deteriora progresivamente hasta llegar al coma y la muerte.
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Diagnstico

Rara vez se detectan las encefalopatas causadas por amebas de vida libre salvo en la autopsia. La realizacin de un TAC o una RM del encfalo pueden aportar en clnica medios diagnsticos cuando se han presentado sntomas de fallas neurolgicas, pero rara vez constituyen un medio diagnstico definitivo.

>Cuando se trata de una MAP, los exmenes a seguir deben orientar a la visualizacin directa de trofozoitos de Naegleria al microscopio de luz, obtenidos de la puncin del LCR o de una biopsia enceflica. Dicha puncin no arrojara presencia de bacterias y presentara un aumento de la presin y pleocitosis celular. El TAC en una MAP mostrara edema cerebral. Para el diagnstico diferencial se debe incorporar toda aquella meningitis purulenta que entregue una prueba de Gram negativa y que no muestre mejora al tratamiento antimicrobiano habitual. Para el caso de una EAG, el estudio del LCR presenta una importancia relevante. Se presentara pleocitosis con linfocitos y un aumento del los PMN con un moderado aumento de la presin e hipoglucorraquia. La observacin de la amebas en las lesiones cerebrales significara diagnstico inmediato, mientras que para el diagnstico diferencial se incluirn todas aquellas lesiones que ocupen espacio, tales como tumores, hemorragias, etc. Dado que la EAG se presenta normalmente en pacientes inmunocomprometidos, se deben realizar pruebas serolgicas que orienten en este aspecto. De igual manera, en el caso de Acanthamoeba y de Balamuthia, dado que, se preceden de una afeccin respiratoria que afecta las zonas baja del tracto respiratorio, un cultivo de esputo podra orientar en el diagnstico prematuro o en curso de la encefalopata. En el caso de la primera, de igual forma se puede obtener en un raspado corneal cuando se presente algn caso de queratitis inflamatoria.
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Tratamiento
Contra la Naegleria podemos nombrar la Anfotercina B que es la droga ms activa contra la N. fowleri y miconazol endovenosa e intraventricular. No existe un tratamiento efectivo para la EAG (encefalitis amebiana granulomatosa) . Para la Acanthamoeba y Balamuthia se ocupa el isocianato de pentamidina o polimixina B; tienen efecto inhibitorio a altas dosis, ketonazol. La queratitis por Acanthamoeba se trata con soluciones oftalmicas al 0,02% de poli-hexa-menilenbiguanida (PHMB)
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Pronstico
N.fowleri no posee un pronstico alentador, debido a la accin patgena acelerada que provocan las amebas de vida libre y a la tardanza de su diagnstico. La ms grave y de peor pronstico es la meningitis amebiana primaria (MAP), la muerte se presenta despus de cuatro a seis das luego del comienzo de los sntomas. Sin embargo la encefalitis amebiana granulomatosa (EAG), posee un mejor pronstico dado a su lenta evolucin. El curso que sigue es subagudo o crnico y en ausencia de tratamiento es fatal en el 100 % de los casos. En la queratitis por Acanthamoeba en ausencia de tratamiento podremos observar perforacin corneal, vascularizacin de la cornea con alteracin de la agudeza visual e incluso ceguera en ocasiones, su curso es subagudo o crnico y si es tratada a tiempo el riesgo de muerte se reduce considerablemente.
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Profilaxis
N.fowleri es susceptible a 1mg/L de cloro, por lo tanto la descontaminacin del agua de piscinas con cloro, asociado al no buceo en zonas sospechosas y la no introduccin de la nariz en esta aguas, parecen ser medidas razonables para evitar contraer la MAP. Se recomienda que se limpie con frecuencia el fondo de las piscinas, se limite el n de baistas, mantener una adecuada corriente y disminuir la cantidad de materia orgnica en el agua. La prevencin de EAG es difcil porque la gran mayora de las infecciones por Acanthamoeba sp y B.mandrillaris ocurre en pacientes con inmunodepresin previa. Es aconsejable inspecciones peridicas de los estanques de agua caliente, filtros de agua, sistemas de caeras y filtros usados para purificar el suministro de agua potable, dado que son los nicos sistemas conocidos como diseminadores de estas amebas. Para prevenir la queratitis por Acanthamoeba debe instruirse el uso de lentes de contacto con precaucin, el uso de soluciones estriles para desinfectar los lentes, el lavado y desinfeccin de los lentes cada vez que ellos sean removidos, adems del lavado de manos cada vez que ellos sean manipulados. Los lentes de contacto podran no usarse durante la natacin o cuando se realizan deportes acuticos.

http://amebasdevidalibre.blogspot.mx/ http://es.slideshare.net/trecemicro/amibas-de-vida-libre

AMEBAS DE VIDA LIBRE EN MUESTRAS DE AGUA DE PISCINAS DEL DEPARTAMENTO DE LIMA

Beltrn de Estrada Mara y Uyema T. Norma*

Resumen.Las amebas de vida libre son numerosas y se encuentran en la naturaleza, en medios como: agua, suelos y vegetacin. Los gneros Naegleria, Acanthamoeba, Hartmannella y Vahlkampfia, tienen importancia en salud pblica, pues son oportunistas y afectan al hombre (enfermedad de los nadadores). Del estudio de 68 muestras de agua en 34 piscinas, 3 zonas de un ro y 7 estanques o lagunas, resultaron el 40,9% con amebas de vida libre tales como: Naegleria, Acanthamoeba, Hartmannella y Vahlkampfia La virulencia de las amebas de vida libre fue estudiada en los animales de laboratorio por inoculacin craneal, nasal y ocular. Los resultados obtenidos nos permiten recomendar y considerar el mantenimiento y tratamiento peridico y/o permanente de las piscinas con productos qumicos, eficaces y eficientes sin que perjudiquen la salud humana. Palabras Clave: Amebas vida libre. Abstract.Free-living Amoebae (FLA) are abundant and they are found in nature as well as water, soil and vegetation. Genera Naegleria, Acanthamoeba, Hartmannella andVahlkampfia are highly important to public health because they are opportunistic parasites that affect the human beings and cause the swimmers's disease. A total of sixty eigth water samples from 34 swimming pools, 3 rivers, 7 swamps or lagoons were studied with the following results: 40,9% of the samples had free living amoebae and they were Naegleria, Acanthamoeba, Hartmannella and Vahlkampfia. The pathogenicity of FLA was performed in laboratory animals trough brain, nasal and ocular innoculation. The use of efficient chemicals that do not involve any risk to human health is recommended for the periodical maintenance, and treatment of swimming pools based on these results. Key word: Free-living amoebae.

Introduccin.Las amebas de vida libre (AVL), son numerosas y estn ampliamente distribuidas en la naturaleza (agua, tierra, vegetacin) los gneros Naegleria, Acanthamoeba, Hartmannella, Balamuthia y Vahlkampfia son patgenas para el hombre. Las rutas de

entrada al organismo son las mucosas nasales, oculares y drmicas; la invasin es selectiva como en los casos deNaegleria y Acanthamoeba, que ocurre por la depresin y/o resistencia disminuida del husped [14]. Esto explica la presencia de Acanthamoeba en secrecin farngea de individuos aparentemente sanos. Existen mltiples trabajos acerca de las AVL y han sido aisladas de secrecin: nasal, pulmonar, nasofarngea, lentes de contacto y en las heces. Nosotros aislamos de la secrecin ocular y lavado de las manos del paciente infectado [4] y en heces de cerdo. Fowler y Carter (1965) fueron los primeros en describir la infeccin fatal por amebas de vida libre en un australiano, debido a Naegleria fowleri. La patogenicidad de las AVL fue demostrada con la Acanthamoeba que produca la muerte en animales de laboratorio [11,13]. Material y Mtodos.OBTENCIN DE MUETSRAS DE AGUA Se obtuvieron 68 muestras de agua en 34 piscinas (privadas y de servicio pblico), 3 zonas del ro Rmac y en 7 estanques o lagunas. Las 34 piscinas estn ubicadas en diferentes distritos limeos: Ate, Jess Mara, San Juan de Lurigancho, San Borja, Surco, Lince, Rmac, Los Olivos y de la Provincia del Callao, siendo algunas de stas controladas por el Instituto Peruano del Deporte de la Provincia de Lima y Callao, de las cuales 15 funcionaron todo el ao y 19 slo durante los meses de verano. Las muestras fueron obtenidas por la maana, en el lugar de muestreo se anot la temperatura y en el laboratorio se midi la cantidad y el pH. Las muestras de agua se obtuvieron en frascos estriles con tapa y boca ancha, del fondo y de la superficie de las piscinas. En este estudio se tuvo en cuenta el tipo de construccin, sistema de circulacin y recirculacin de agua, el uso de filtros y desinfectantes. MEDIOS DE CULTIVO Se emplearon 3 medios de cultivos slidos: Malt Yeast Extract Agar (MYAS) empleado por Page [25], medio de agar empleado por Visvesvara y Balamuth [25,26], y el medio extracto de carne empleado por Musgrave y Clegg [28]. TCNICAS DE COLORACIN El colorante para amebas fueron colorantes vitales y Hematoxilina frrica de Heidenhain. PRUEBA DE VIRULENCIA Se emplearon ratones albino Mus musculus de 8 a 12 gramos de peso para la prueba de la patogenicidad que sigui la metodologa de Culberston [11], Callicot [6] y Andujar [1]. Resultados.-

El examen parasitolgico de 68 muestras de agua de 34 piscinas, 3 puntos del ro Rmac y 7 lagunas procedentes de los Distritos de la Provincia de Lima y Callao. En el estudio del anlisis macroscpico, se tuvo en cuenta: cantidad, turbidez, acidez, el pH fluctu de 3 a 7 predominando 5,5 a 6,5. El anlisis microscpico se hizo con la aplicacin de los mtodos: directo, filtracin y concentracin por centrifugacin, e inoculacin en medios de cultivo, se mantuvo a 37C por 5-12 das que se realiz la primera lectura utilizando colorantes vitales, se resembr y as se continu con el mantenimiento a 37C. La infraestructura de las piscinas estudiadas fueron: 32; de maylica de color blanco 18, de color celeste 14 y slo 2 fueron de cemento pulido. Los filtros de estas piscinas fueron de grava y los desinfectantes que emplearon fue hipoclorito de sodio y/o cloro gas. Las dimensiones consideradas fueron: grande, mediana y pequea. (Tabla 1).

Tabla N 1 Nmero, porcentaje, dimensin de las piscinas estudiadas. ffffff Piscina - Grande - Mediana - Pequea Ro Laguna (Estanque) TOTAL Dimensiones (metros) ffffff 50 x 25 x 1.50 m 25 x 20 x 1.30 m 20 x 12 x 1.20 m ffffff ffffff ffffff Total N ffffff 4 23 7 3 7 44 % ffffff 9.1 52.3 15.9 6.8 15.9 100.0

El estudio morfolgico y citolgico de las amebas de vida libre aisladas se hizo mediante la Clasificacin de las AVL segn Page [25]. El 40,9 (18) de las muestras fueron positivas a AVL y de ellas (34,1) 15 fueron de piscinas, predominando las de tamao mediano con 22,7% y 6,8% correspondiendo al ro y 15,9% a estanque. (Tabla 2).

Tabla N 2 Cuerpos de agua contaminados con amebas de vida libre en Lima. ffffff Piscina - Grande - Mediana - Pequea Ro Laguna (Estanque) TOTAL N N Total ffffff 4 23 7 3 7 44 Positivas N fffff,, 0 10 5 1 2 18 % ffffff 0 22.7 11.4 2.3 4.5 40.9 Negativas N fffffn 4 13 2 2 5 26 % ffffff 9.1 29.6 4.5 4.5 11.4 59.1

Todas las cepas de AVL aisladas, fueron observadas y cinco se seleccionaron para la inoculacin en animales de laboratorio. En los casos que se presentaban en su forma qustica se realiz el proceso de desenquistamiento (Foto 3). Los resultados de la prueba de virulencia son mostrados en la Tabla 3.

TABLA N 3 Inoculacin de muestras conteniendo amebas de vida libre. Va Nasal Craneal Ocular TOTAL Ratones inoculados 21 10 5 36 Cepas recuperadas 3 2 1 6

De los ratones inoculados se recuperaron seis cepas de amebas, 5 (13,1%) del tejido cerebral y 1 (2,7%) del ojo. La diferenciacin se llev a cabo por las caractersticas culturales morfolgicas y citolgicas del material fresco, fijado y coloreado con Hematoxilina frrica de Heidenhain [3,4]. Discusin.Las infecciones producidas por AVL son consideradas como enfermedad de los nadadores, porque la mayora de los casos estudiados se han encontrado en personas que se baaron en piscinas, ro o en algn momento estaban en contacto con el agua. Debido a la diversidad de forma (polimorfismo) (Fotos 1, 2, 3). Las formas trofozoticas se inocularon en ratones, produjeron alteraciones hasta la muerte en algunos casos; la patogenicidad depende del tiempo del cultivo, tamao del inculo y la susceptibilidad del husped [8,15,16].

Foto 1: Quiste Membrana gruesa forma redondeada

Hasta 1995 no se conoci en el Per publicacin alguna de lesiones oculares (conjuntiva), crnea, producidas por amebas de vida libre, nosotros lo aislamos de un paciente procedente de Piura [5]. En otros pases, adems de las infecciones oculares [20,21] refierenAcanthamoeba en la vagina [23]. Es necesario mayor consideracin en esta patologa. Las amebas de vida libre (AVL) se desarrollan en reservorios acuticos naturales o artificiales [2,9,13,17] as como suelos hmedos [13]. De all el riesgo de contaminacin y requiere la exploracin de otras reas u otros habitats diferentes a los estudiados.

Foto 2: Quiste de forma poligonal.

En este estudio que incluye 68 muestras del departamento de Lima, 40% resultaron contaminadas con amebas de vida libre de los gneros: Naegleria, Acanthamoeba, Hartmannella y Vahlkampfia, predominando las formas de la familia Acanthamoebidae. Las cepas de amebas de vida libre aisladas e inoculadas en los animales de laboratorio demostraron la virulencia en los ratones inoculados por va craneal, ocular e instilacin nasal. Asimismo las piscinas que tienen mayor demanda de atencin al pblico fueron las ms contaminadas, probablemente por presentar materia orgnica, que permite mayor desarrollo y multiplicacin de las AVL y por lo tanto mayor riesgo de contaminacin a las personas por ello es recomendable que los cambios de filtros, sistemas de circulacin y recirculacin de agua deben ser en forma regular y permanente. Las AVL encontradas en los estanques o lagunas nos indican el riesgo de contaminar al pblico ms an conociendo que los nios con limitados recursos se baan en estos lugares.

Foto 3: Amebas en proceso de desinquistamiento.

Es recomendable efectuar el tratamiento permanente de las piscinas con hipoclorito de sodio, cloro gas u otros productos qumicos eficaces y eficientes sin perjuicio de la salud humana. Es importante e imprescindible el control biolgico de los cuerpos de agua. El saneamiento bsico debe tener en cuenta el estudio de los parsitos y protozoarios contaminantes (rotferos, ciliados, levaduras y caros etc). En el control sanitario se debe incorporar a las amebas de vida libre.