INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

Proceso por el cual se restringe el movimiento de los enzimas, dando lugar a una forma de los mismos insoluble en agua. Dichos enzimas deben mantener su actividad cataltica. En estos sistemas, los mecanismos difusionales cobran gran importancia (transporte de reactivo-substrato y productos). Ventajas
Permite uso en continuo del enzima.

Inconvenientes
El proceso de inmovilizacin puede afectar a la actividad del enzima.

Simplifica las etapas de purificacin del producto.

Permite reutilizacin del enzima en reactores discontinuos. Mayor concentracin del enzima.

Procesos limitados por factores difusionales.

Aumento de la complejidad del sistema.

Mayor rendimiento.

Mayores caudales de entrada/salida para el mismo tamao de reactor.

Mayor estabilidad del enzima. Resistencia a la desnaturalizacin.

Reduce el riesgo de contaminaciones accidentales del proceso.

Adecuado para conversiones sencillas, una sola etapa.

Conversiones de varias etapas: preferible el uso de clulas enteras.

Menores costes de operacin.

Mayor control sobre la reaccin. Permite mayor automatizacin del proceso.

The
ENZIMAS

AGENTE PORTADOR

properties of enzymes
Propiedades bioqumicas

immobilized
Caracterstica s qumicas

Cintica y mecanismo

Propiedades mecnicas

Mtodo de inmovilizacin

Transferencia de materia

Estabilidad

Performance

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

ADSORCIN ENLACE COVALENTE ENLACES CRUZADOS ATRAPAMIENTO MEMBRANAS

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

ADSORCIN
Para enzimas y clulas enteras. El ms antiguo y sencillo (adsorcin de -D-fructofuranosidasa en Al(OH)3, Nelson
y Griffin, 1916)

Etapas: o Contacto: solucin acuosa de enzimas-adsorbente o tads o lavado

Interacciones: o Tipo inico o Puentes hidrgeno o Van der Waals

Proceso muy suave: o La actividad del enzima se conserva o Proceso reversible en funcin de las condiciones (T, pH) o Estricto control de las condiciones de adsorcin. Tcnicas de inmovilizacin por adsorcin: o o o o Adsorcin esttica Electrodeposicin Proceso en reactor Bao con agitacin

Gran variedad de soportes para la adsorcin (orgnicos/inorgnicos).

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

ENLACE COVALENTE

Adecuado para enzimas. Formacin de enlaces covalentes entre enzima y soporte. Mucho ms fuertes que el caso anterior.

Variedad de soportes: o Naturales: celulosa, dextrano o Sintticos: polmeros (poliacrilamida, poliestireno) o Vidrio, materiales cermicos La unin covalente debe afectar a grupos funcionales del enzima que no intervengan en el proceso cataltico. Etapas previas: o Activacin del soporte (creacin de grupos funcionales adecuados para su unin con los del enzima): activacin por bromuro de ciangeno, carbodiimida, complejos de diazonio o Vidrio y cermica (inorgnicos): recubrimiento superficial con grupos funcionales orgnicos adecuados. Puede haber prdida de actividad debida a: o Participacin del centro activo del enzima en el enlace covalente o Impedimentos estricos

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

ENLACES CRUZADOS

Formacin de agregados tridimensionales entrecruzados, insolubles en disolucin acuosa. Se prescinde del soporte. Enlace (bi-multi)covalente entre enzimas y reactivos bi-multifuncionales (comerciales y baratos). Fcil preparacin Alta especificidad (condiciones ptimas varan segn cada caso), ensayos prueba-error en laboratorio.

INCLUSIN O ATRAPAMIENTO

Mayoritariamente para clulas. Poco usado para enzimas (baja retencin). Inclusin del enzima en una matriz tridimensional, quedando atrapado. La matriz se forma en presencia del enzima. Se debe permitir la difusin de substrato/productos. Uso de polmeros sintticos o geles de origen natural.

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

MEMBRANAS
Retencin del encima en un espacio limitado por una membrana semipermeable. o Microencapsulacin o Membranas preformadas

a) Microencapsulacin
Partculas esfricas de pequeo tamao. El enzima queda incluido en suspensin dentro de las esferas. Ventaja: se consigue una suspensin en medio lquido (buena difusin) Procedimiento: o Formacin de emulsin en orgnico[monmero] + enzima) o Polimerizacin de la emulsin

disolucin

acuosa

(lquido

Puede hacerse tambin para fibras polimricas.

b) Membranas preformadas
Membrana impermeable a las enzimas y permeable a substrato/producto. Fibras huecas: Reactor cilndrico con enzimas retenidos en membranas.

VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LOS MTODOS DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

MTODO
ADSORCIN No se requieren reactivos y las etapas de activacin son sencillas Mtodo sencillo y econmico. Estabilidad del enzima. No se desliga. Mtodo muy flexible, segn se elija el agente portador y mtodo de enlace.

VENTAJAS
Los centros activos permanecen inalterados.

INCONVENIENTES
Posible desorcin de enzimas por cambios en pH, temperatura Mtodos no especficos para cada reaccin/enzima

Mtodo caro y complicado. La actividad puede reducirse si los reactivos usados son txicos para el enzima. Los centros activos pueden modificarse/daarse durante el proceso. Puede daar los centros activos. Puede haber problemas difusionales que limiten el rendimiento. Prdida de enzima durante preparacin. Problemas difusionales debidos a la membrana. Posible inactivacin de enzimas, sometidos a fuerzas de cizalla elevadas. Mal funcionamiento a bajas concentraciones de sustrato (adsorcin de ste en la membrana) Estricto control del tiempo de residencia para sustratos de bajo peso molecular.

ENLACE COVALENTE

ENTRECRUZAMIENTO

Enzima muy estable, fuertemente enlazado. Puede usarse en combinacin con la adsorcin para prevenir prdida de catalizador.

Simplicidad. Posibilidad de uso simultneo de varios enzimas. Uso de membranas selectivas: control de sustratos/productos en mezclas. Proteccin del enzima ante inhibicin, envenenamiento No hay prdidas. Adecuado para sustratos de alto peso molecular, buen contacto enzima-sustrato: altas conversiones.

MEMBRANAS

ELECCIN DEL MTODO DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

CARACTERSTICAS PREPARACIN FUERZA DE UNIN ACTIVIDAD ENZIMTICA REGENERACIN SOPORTE COSTE ESTABILIDAD APLICABILIDAD PROTECCIN FRENTE A ATAQUE MICROBIANO DEL ADSORCIN ENL. COVALENTE ENTRECRUZAMIENTO MEMBRANAS

Simple Dbil Intermedia Posible Baja Baja Si No

Difcil Fuerte Alta Rara Alta Alta No No

Intermedia Fuerte Baja Imposible Intermedia Alta No Posible

Difcil Intermedia Baja Imposible Intermedia Alta Si Si