FISIOLOGIA - ARTIGO DE REVISO

xido ntrico e o sistema vascular: uma reviso

WAGNER DE JESUS PINTO MIGUEL ARCANJO AREAS FELIX G. R. REYES

Pinto W de J, Areas MA, Reyes FGR. xido ntrico e o sistema vascular: uma reviso.Acta Cien - Biol Sade 2003 jan-jun; 5(1): 47-61. RESUMO O xido ntrico um radical livre, inorgnico, gasoso, inodoro, incolor, hidrofbico e altamente difusvel atravs das membranas plasmticas. reconhecido como uma das mais potentes substncias vasodilatadoras influenciando, portanto, o tnus vascular e, conseqentemente a presso arterial. Processos patolgicos que interfiram na integridade do endotlio vascular tais como diabetes e aterosclerose podem reduzir a sntese de xido ntrico e, assim, alterarem a presso arterial pelo comprometimento da regulao do tnus vascular. Alm de seu efeito vasodilatador, o xido ntrico atua como neurotransmissor do sistema nervoso central e perifrico e, tambm proporcionando defesa imunolgica inespecfica do hospedeiro em relao a diversos patgenos e clulas tumorais, incluindo bactrias, fungos, parasitas, metazorios e protozorios. PALAVRAS-CHAVE: xido ntrico; Radicais livres; Ateroesclerose. RECEBIDO EM: 12/03/2003 APROVADO EM: 10/08/2003

INTRODUO Em 1980, Furchgott e Zawadsky (1) alteraram significativamente o conceito sobre a regulao do tnus vascular quando propuseram que havia um fator relaxador derivado do endotlio, posteriormente identificado como sendo o xido ntrico (ON ou NO do ingls Nitric Oxide), reconhecido como o mais potente vasodilatador formado pelas clulas do corpo humano(2). Estudos mostraram que o NO est envolvido em diversas atividades biolgicas vitais, tais como neurotransmisso no sistema nervoso central e perifrico defesa imunolgica inespecfica(3-5) e regulao da atividade leucocitria e plaquetria contribuindo, assim, para a manuteno da homeostase dos sistema cardiovascular(6-8). Desse, modo, reduo na sntese de NO, foi verificada, por exemplo, em condies de hipertenso arterial, doena aterosclertica ou simplesmente hipercolesterolemia e diabetes. O desbalano de NO detectado nestas patologias devese ao fato de que, em condies desfavorveis de pH e reduo nas concentraes de substratos e cofatores, a enzima xido ntrico sintase endotelial (eNOs) apresenta extrema labilidade (9, 10) . A ampliao dos conhecimentos sobre processos fisiopatolgicos nos quais o NO est envolvido fez com que o endotlio vascular outrora, concebido como uma simples barreira semi-seletiva, seja agora considerado um rgo endcrino(11,12). Fisiologia do endotlio vascular Diversos autores ao realizar seus trabalhos com aortas isoladas demonstraram que apenas em preparaes nas quais se mantinha o endotlio ntegro o efeito vasorrelaxante da acetilcolina se manifestava. Notaram que a retirada mecnica do endotlio abolia a resposta vasodilatadora, tornando-a constritora mesmo com concentraes crescentes de acetilcolina. O mesmo fenmeno foi demonstrado tambm para os vasos da
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Pinto W de J, Areas MA, Reyes FGR. microcirculao, mostrando que a vasodilatao endotlio dependente. Foi a partir dos trabalhos pioneiros de Furchgott e Zawadzki(1) que o endotlio vascular passou a ser reconhecido como o maior regulador da homeostase vascular, uma vez que pode integrar e responder a sinais de natureza qumica e mecnica, regulando a liberao de substncias vasoativas que tm um papel importante na modulao da presso arterial e no remodelamento vascular(11). O endotlio est estrategicamente localizado entre as clulas sanguneas e as clulas da camada muscular do vaso. Em um homem adulto de 70 Kg o endotlio cobre uma rea de aproximadamente 700 m2 e pesa de 1 a 1,5 Kg(13). Nesta posio o endotlio percebe no s alteraes humorais mas tambm mudanas no fluxo sanguneo e presso arterial por meio da variao do dimetro do vaso. A integridade funcional do endotlio extremamente importante para a manuteno do fluxo sanguneo lamelar e da capacidade antitrombtica, uma vez que o endotlio libera fatores humorais que controlam o relaxamento e a constrico vascular, a trombognese, a fibrinognese, assim como a ativao e inibio plaquetrias (13, 12) . O grande nmero de substncias regulatrias liberadas pelo endotlio vascular incluem: prostaglandinas, xido ntrico, fatores de hiperpolarizao, peptdeo natriurtico, endotelina, esterides e receptores para diversas substncias. Estas substncias tm efeito sobre as clulas adjacentes e sua interao extremamente complexa. Substncias geradas durante a ativao plaquetria tambm apresentam efeito paradoxal sobre o vaso. Plaquetas ativadas liberam nucleotdeos (ATP e ADP), serotonina, tromboxane A2 e tromboplastina (que originar trombina), e fator ativador de plaquetas (PAF). Alguns destes elementos so estimulantes da musculatura lisa vascular; mas, assim como os nucleotdeos, tambm liberam NO quando em presena de endotlio ntegro. Nessa condio, h tambm liberao de prostaglandinas I 2 (PGI2) e o prprio xido ntrico propiciando aumento de fluxo local, remoo das plaquetas ativadas e inibio da agregao plaquetria. Assim sendo, o efeito vasodilatador prevalece sobre o vasoconstritor impedindo a formao de trombo. Contudo, a mesma ativao plaquetria em presena de endotlio alterado ou na ausncia deste acarreta, como efeito final, agregao plaquetria, formao de trombo e espasmo vascular por estarem o NO e a PGI2 diminudos ou ausentes. Prevalece
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agora o efeito vasoconstritor do PAF, do TXA2 e da serotonina. Outro fator que atua nas clulas endoteliais promovendo sntese de NO o atrito exercido pelo fluxo sanguneo sobre o endotlio ( shear stress ) o que leva a vasodilatao e conseqentemente, aumento do fluxo sanguneo. Assim, a clula endotelial est sob constante estmulo para liberao do NO. Influncia do endotlio sobre microcirculao O endotlio desempenha funes que transcendem em muito o simples papel de barreira fsica entre o meio circulante e os demais componentes da parede vascular. A fluidez adequada do sangue dependente da integridade endotelial. A complexa maquinaria bioqumica endotelial o torna apto a sintetizar grande nmero de substncias biologicamente ativas, incluindo compostos vasoativos, como angiotensina II e certas prostaglandinas. Substncias envolvidas na manuteno das caractersticas da superfcie do endotlio, tais como colgeno e proteoglicanos, substncias que atuam na funo plaquetria, como o fator de Von Willebrand, fator ativador de plaquetas, fatores de crescimento e outras. Esses compostos exercem efeitos extremamente restritos, influenciando, sobretudo as estruturas adjacentes, especialmente as clulas musculares lisas vasculares (efeito parcrino). Contudo, como as clulas endoteliais distribuem-se por todo o territrio vascular, sua atividade termina por exercer enorme influncia sobre a circulao sistmica. Dentre as substncias biologicamente relevantes produzidas no endotlio, destacam-se, de modo especial, os compostos vasoativos, capazes de influenciar diretamente o tnus vascular. Um desses compostos, a endotelina o mais poderoso dos vasoconstritores conhecidos, apresentando ao intensa sobre a vasculatura renal e sistmica. Apesar dos profundos efeitos hemodinmicos da administrao exgena de endotelina, no se conseguiu demonstrar papel fisiolgico consistente para a endotelina endgena, uma vez que o tratamento agudo ou crnico com antagonista da endotelina no tem efeito hemodinmico mensurvel. possvel, no entanto, que a endotelina desempenhe papel relevante na patognese da hipertenso arterial. Embora raros, os hemangioendoteliomas produtores de endotelina promovem hipertenso arterial, que revertida aps a remoo desses tumores. Alm de endotelina e de outros vasoconstritores,
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xido ntrico e o sistema cardiovascular: uma reviso. tais como angiotensina II e o tromboxane, o endotlio tambm capaz de produzir compostos vasorrelaxantes, cuja relevncia fisiolgica pode ser ainda maior. O mais importante desses compostos , sem sombra de dvida, o xido ntrico. Biossntese do xido ntrico no endotlio vascular O NO produzido por meio da clivagem do terminal nitrognio-guanidina da L-arginina atravs da enzima xido ntrico sintase (NOs), numa reao que requer FMN (Flavina mononucleotdeo), FAD (Flavina adenina dinucleotdeo), NADPH (Nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato) e BH4 (tetrahidrobiopterina) como cofatores e a presena do oxignio molecular que atua como substrato (Figura 1)(14-17). O efeito de cisalhamento promovido pelo fluxo sanguneo (shear stress), constitui o principal fator para a liberao de xido ntrico por parte do endotlio vascular e tambm considerado o estmulo fisiolgico mais potente para induzir a sua sntese in vivo (18). Segundo diversos autores(11, 19, 20) , substncias vasoativas como acetilcolina, bradicinina, angiotensina II, vasopressina, histamina, norepinefrina e serotonina tambm estimulam a sntese de NO ligando-se aos seus receptores especficos na membrana da clula endotelial ativando, assim, a formao dos segundos mensageiros intracelulares (Figura2), inositoltrifosfato (IP3) e diacilglicerol (Dag). O IP3 aumenta a concentrao intracelular de clcio na clula endotelial, promovendo, conseqentemente, a ligao da NOs calmodulina-clcio-dependente(21, 22) . Nessa condio, a NOs e seus cofatores clivam a L-arginina e oxidam seu terminal nitrognio guanidina produzindo o radical NO e L-citrulina como subprodutos da reao(13, 15, 23). O xido ntrico, aps sua sntese no endotlio vascular, difunde-se para as clulas do msculo liso vascular onde ativa a enzima solvel guanilato-ciclase(11, 19, 24) atravs de sua ligao ao stio Ferro-heme dessa enzima. A guanilato ciclase, ento, converte a guanidina trifosfato (GTP) em guanidina monofosfato cclico (GMPc), um segundo mensageiro para diversos efeitos biolgicos, dentre os quais o relaxamento da musculatura liso-vascular e a inibio da agregao plaquetria(22, 25). Assim, devido a esses efeitos tem sido sugerido que a sntese basal de xido ntrico atua como tampo a vasoconstritores endgenos e exgenos. O oxido ntrico tem meia vida extremamente curta de trs a cinco segundos(2628) . In vivo, o NO rapidamente oxidado a nitrito (NO2) e, posteriormente, a nitrato (NO3), o qual eliminado na urina (29-31). Tanto o GMPc, segundo mensageiro na biossntese de NO(29, 30), quanto o nitrato podem ser utilizados no diagnstico da integridade endotelial, uma vez que a determinao direta do NO, n vivo, invivel devido curta meia vida desses radicais, como mencionado anteriormente(15, 29, 32). A enzima xido ntrico sintase As enzimas responsveis pela sntese de NO foram purificadas e clonadas em 1991 (33, 34) , sendo, identificadas como xido ntrico sintases (NOs); no so designadas sintetases porque no utilizam ATP nas reaes qumicas para obteno do NO(14, 35, 36). As NO sintases fazem parte de uma famlia de isoenzimas(23) que apresentam forte ligao a um centro heme(37, 38) estando presentes sob as seguintes formas: NOs tipo I ou nNOs, constitutiva do Sistema
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Figura 1. Biossntese do xido ntrico. Em destaque os tomos que iro unir-se para formar a molcula de xido ntrico.

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Figura 2. Substncias vasoativas como acetilcolina, bradicinina, angiotensina II, vasopressina, histamina, norepinefrina e serotonina estimulam a sntese de NO ligando-se aos seus receptores especficos na membrana da clula endotelial vascular gerando IP3 como segundo mensageiro. O IP3 aumenta a concentrao intracelular de clcio na clula endotelial, promovendo, conseqentemente, a ligao da NOs calmodulina-clcio-dependente. Nessa condio, a NOs e seus cofatores clivam a L-arginina e oxidam seu terminal nitrognio guanidina produzindo o radical NO e L-citrulina como subprodutos da reao. O xido ntrico, aps sua sntese no endotlio vascular, difunde-se para as clulas do msculo liso vascular onde ativa a enzima solvel guanilato-ciclase atravs de sua ligao ao stio Ferro-heme dessa enzima. A guanilato ciclase, ento, converte a guanidina trifosfato (GTP) em guanidina monofosfato cclico (GMPc), um segundo mensageiro para diversos efeitos biolgicos, dentre os quais o relaxamento da musculatura liso-vascular. Os altos nveis de GMPc produzem abertura dos canais de K+, o que provoca efluxo macio desse on para o meio extracelular. A abrupta sada de K+ gera um gradiente negativo na membrana plasmtica interna (hiperpolarizao) que induz ao fechamento dos canais de Ca+2 voltagem dependentes. O resultado um decrscimo dos nveis citoslicos de Ca+2 levando reduo da resistncia dos vasos mesentricos.

Nervoso Central e Perifrico(16, 39) b) NOs tipo II ou iNOs, induzidas por certas citocinas em clulas macrofgicas(4) c) NOs tipo III ou eNOs, constitutivas do endotlio(16, 34) (Figura 3). As isoformas da NOs so compostas por subunidades de tamanho mdio (80-125 KDa) formando um homodmero(33, 40) constitudo de um ligante para citocromo P 450-heme no domnio nitrognio terminal, um ligante de calmodulina no domnio central e um ligante para os cofatores BH4, FAD, FMN, NADPH no domnio carbxi terminal (Figura 4)(33). Segundo Inagami(11), enquanto a isoforma III da
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NOs (endotelial) est presente na membrana celular, as isoformas I e II localizam-se na frao solvel da clula. O gen que expressa a NOs tipo I localiza-se em uma nica posio do cromossomo 12 (41, 42) enquanto para a NOs tipo II o gen encontra-se no cromossomo 7 e o da NOs tipo III localiza-se em um dos lados do centrmero do cromossomo dezessete(42). Segundo Ishikawa et al(38) e Fu et al(38), a ativao tanto da Nos tipo III quanto da tipo I requer influxo celular do on clcio enquanto que na NOs tipo II a ativao considerada clcio independente pois a calmodulina permanece ligada enzima (Tabela 1).
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Figura 3. Sntese de xido ntrico (NO) no tecido endotelial (1) pela enzima NO sintase endotelial (eNOs) e nervoso (2) pela enzima NO sintase neuronal (nNOs) e num macrfago (3) pela enzima NO sintase induzvel (iNOs). Tabela 1. Clulas e tecidos que expressam a enzima xido ntrico sintase; eNos=xido ntrico sintase endotelial (constituitiva); nNOs = xido ntrico sintase neuronal (constituitiva ); iNOs=xido ntrico sintase induzvel; FMN=flavina mononucleotdeo; FAD=flavina adenina dinucleotdeo NADPH=nicotinaminicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato; BH4=tetrahidrobiopterina. *calmodulina-dependente Adaptado de Jefery(4).
NO Sintase Tipo I nNOs Clulas ou tecidos Neurnios, msculo esqueltic o, mcula densa, epitlio epigstrico, fotorrec eptores, epitlio brnquico. Presente em clulas mac rofgic as Tempo para sntese de NO segundos Cofatores necessrios NADPH BH 4 FAD FMN segundos NADPH BH 4 FAD FMN NAPDH BH 4 FAD FMN Sim Calmodulina dependente Sim

Tipo II iNos

Tipo III eNO s

Clulas endoteliais

4 a 6 horas

no

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Figura 4. Modelos das trs isoformas de NO sintases, h 60% de homologia entre a eNOs e a iNOs. Os stios de ligao representados so: Cam=calmodulina; FMN=flavina mononucleotdeo; FAD=flavina adenina nucleotdeo; NADPH (2 stios)=nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato reduzido; PKA=stio de fosforilao. Inibidores da sntese de xido ntrico A sntese de xido ntrico pode ser inibida de diversas formas como, por exemplo: a) agentes que atuam na guanilil ciclase na clula muscular lisa impedindo os eventos enzimticos responsveis pelo relaxamento da musculatura liso-vascular. Um desses agentes o azul de metileno, um inibidor inespecfico da guanilato ciclase(44, 45). b) substncias que depletam o NO durante seu breve trnsito do endotlio musculatura liso-vascular, como radicais livres tais como, o nion superxido (O2-) ou o radical hidroxil (OH*), por exemplo, ou mesmo a hemoglobina que inibe o NO em virtude de uma vida ligao dessa molcula com o grupamento heme da hemoglobina. c) inibidores competitivos pelo stio enzimtico da NOs como mostrado na figura 5(16, 28, 46). Estes inibidores so aqueles que competem com a L-arginina pelo stio enzimtico da NO sintase como, por exemplo, LNMMA (Nw - Monometil Larginina) e L-ADMA (Nw-Nw Dimetil L-arginina) que se originam de resduos resultantes da metilao da arginina durante o seu turnover protico. Embora a concentrao plasmtica desses compostos seja baixa (<1M), em algumas circunstncias patolgicas (falncia renal) podem acumular-se em quantidades suficientes para promover inibio enzimtica(47). O LNMMA parece ser um inibidor no especfico da NO sintase, sendo relatado que esse frmaco promove inibio irreversvel da NOs tipo I
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e tipo II durante incubao prolongada, embora desconhea-se o mecanismo dessa inibio irreversvel(2, 48, 49). Por outro lado, outros inibidores mostram alguma seletividade. Assim, a LCanavanina, o Nw-amino-L-arginina e o L-NIO inibem com maior intensidade a NO sintase macrofgica do que a NOs do tipo III e do tipo I(50-53). H uma grande quantidade de compostos (Nw-Nitro-L-arginina seu metil ster L-NAME, por exemplo) que, como o LNMMA, inibem competitivamente a NO sintase atuando, contudo, de maneira seletiva e parcialmente reversvel sobre NOs tipo I(16, 54, 55), enquanto o Nw-iminoetil L-ornitina (L-NIO) inibe a NOs tipo II(50-53). Inibidores da sntese de xido ntrico A sntese de xido ntrico pode ser inibida de diversas formas como, por exemplo: a) agentes que atuam na guanilil ciclase na clula muscular lisa impedindo os eventos enzimticos responsveis pelo relaxamento da musculatura liso-vascular. Um desses agentes o azul de metileno, um inibidor inespecfico da guanilato ciclase(44, 45);b) substncias que depletam o NO durante seu breve trnsito do endotlio musculatura liso-vascular, como radicais livres tais como, o nion superxido (O2-) ou o radical hidroxil (OH*), por exemplo, ou mesmo a hemoglobina que inibe o NO em virtude de uma vida ligao dessa molcula com o grupamento heme da
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xido ntrico e o sistema cardiovascular: uma reviso. com maior intensidade a NO sintase macrofgica do que a NOs do tipo III e do tipo I(50-53). H uma grande quantidade de compostos (Nw-Nitro-L-arginina seu metil ster L-NAME, por exemplo) que, como o LNMMA, inibem competitivamente a NO sintase atuando, contudo, de maneira seletiva e parcialmente reversvel sobre NOs tipo I(16, 54, 55), enquanto o Nw-iminoetil L-ornitina (L-NIO) inibe a NOs tipo II(50-53). Gnese da placa de ateroma A hiptese da inativao do xido ntrico por radicais livres A inativao do xido ntrico por radicais livres considerada uma importante causa da queda da sua atividade biolgica(28). Radicais livres so espcies qumicas intermedirias que possuem um eltron despareado na ltima camada (56, 57) . Como conseqncia, este radical livre pode doar eltrons atividade redutora ou retirar eltrons de outra substncia para se estabilizar atividade oxidante. Vrios elementos qumicos podem gerar radicais livres (Quadro 1); porm, por razes de natureza eletrnica, a molcula de oxignio apresenta forte tendncia a formar esses radicais (Quadro 2). Os principais radicais livres de importncia biolgica formados a partir do oxignio molecular so o radical superxido (O2-) e o radical hidroxila (OH*). Por sua natureza qumica instvel os radicais livres promovem danos moleculares que se propagam em cadeia. A teoria oxidativa da aterognese ampliou o conhecimento do papel fisiopatolgico dos radicais livres vasculares. Nesse processo, o xido ntrico e o nion superxido, formados por leuccitos residentes na parede vascular aterosclertica (58-60) e pelas clulas do prprio endotlio vascular (61) formam o nion citotxico perxinitrito que altamente reativo(57, 62, 63). Assim, os superxidos e outros radicais livres colaboram para a formao da leso aterosclertica quando interferem na bioatividade do NO impedindo que esse exera seu efeito antiagregante plaquetrio(9, 23, 64) e quando promove peroxidao das lipoprotenas LDL(65, 66). Uma vez oxidadas, as LDL so captadas pelos macrfagos residentes dando origem s clulas espumosas contribuindo, ainda mais, para a inativao do NO(67-69). xido ntrico em condies fisiopatolgicas Hipercolesterolemia e aterosclerose A falta de NO, segundo Bger(15), modula uma srie
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Figura 5 L-arginina e alguns de seus inibidores anlogos que competem pelo stio da NO sintase endotelial, impedindo a formao de xido ntrico.

hemoglobina. c) inibidores competitivos pelo stio enzimtico da NOs como mostrado na figura 5(16, 28, 46) . Estes inibidores so aqueles que competem com a L-arginina pelo stio enzimtico da NO sintase como, por exemplo, LNMMA (Nw - Monometil Larginina) e L-ADMA (Nw-Nw Dimetil L-arginina) que se originam de resduos resultantes da metilao da arginina durante o seu turnover protico. Embora a concentrao plasmtica desses compostos seja baixa (< 1M), em algumas circunstncias patolgicas (falncia renal) podem acumular-se em quantidades suficientes para promover inibio enzimtica (47). O LNMMA parece ser um inibidor no especfico da NO sintase, sendo relatado que esse frmaco promove inibio irreversvel da NOs tipo I e tipo II durante incubao prolongada, embora desconhea-se o mecanismo dessa inibio irreversvel(2, 48, 49). Por outro lado, outros inibidores mostram alguma seletividade. Assim, a LCanavanina, o Nw-amino-L-arginina e o L-NIO inibem

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Pinto W de J, Areas MA, Reyes FGR. Quadro 1. Substncias que originam radicais livres. Adaptado de Martins(70).
Elemento Radical Superxido O 2 Oxignio H2O 2 Hidroxila OH NO Nitrognio Carbono Enxofre ONNOMetil Tiil Propriedades Provvel mediador de sinais em vasos. Relativamente pouco reativo, atravessa me mbranas celulares atravs de canais inicos Relativamente inerte por si s, pode, contudo originar radicais citotxicos. Bastante permevel a membranas biolgicas. O mais potente oxidante conhecido, passvel de ser formado em condie sbiolgicas. Radical livre gasoso. Pouco reativo per se, lipossolvel e altamente permevel me mbranas biolgicas. D origem ao um potente oxidante, o on nitrnio (NO 2+) Possvel envolvimento em danos ao DNA Intermedirio da oxidao e interconverso de tiis. Significado biolgico incerto

Quadro 2. Nas quatro reaes acima, pode-se verificar a formao de trs espcies intermedirias de radicais livres: o nion radical superxido (O2-) , o perxido de hidrognio (H2O2) e o radical hidroxil (OH*)
Reao 1 Reao 2 Reao 3 Reao 4 O 2 + ! 02O 2 + + 2H+ ! H2O 2 H2O 2 + ! OH + OH* OH* + + H+ ! H2O

vascular se as LDL sofrerem oxidao (LDL-ox) durante o desenvolvimento da aterosclerose(23, 75). Acredita-se, que as LDL-ox possuam efeito citotxico, e sua presena na camada ntima vascular seja responsvel por: a) hiperplasia da lmina basal; b) por induzirem a produo e liberao de fatores quimiotticos e molculas de adeso por parte das clulas endoteliais. Essas substncias orientam a chegada de moncitos a superfcie endotelial transmigrando-se para a camada ntima, onde sofrem modificaes fenotpicas que os transformam em macrfagos, e por ao quimiottica das LDL oxidadas, so impedidos de retornar ao plasma. Uma vez oxidado na camada ntima vascular, a partcula de LDL avidamente captada por macrfagos que apresentam diminuio do nmero de receptores B-E, (receptores que controlam o acmulo de lpides na clula), passando a expressar receptores scavenger que tem a propriedade de reconhecerem lipoprotenas oxidadas, as quais so avidamente incorporadas pelos macrfagos por uma via de captao chamada de scavenger pathway. Esse receptor no regulado pelos nveis intracelulares de colesterol e permite a captao macia da LDL ainda que a clula (macrfago) tenha suficiente quantidade de lpides para sua subsistncia. Este mecanismo faz com que os macrfagos tornem-se pletricos de LDL-colesterol dando origem s clulas espumosas(67, 79) (foam cells) e as estrias gordurosas (fatty streak) que so consideradas o primeiro sinal
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de processos patognicos envolvidos na progresso da leso aterosclertica (Figura 6). Assim, a deficincia de NO tem sido associada ao aumento da agregao plaquetria no endotlio (71) e ao aumento de adeso leucocitria(72, 73), evento que reconhecido como sendo o mais importante iniciador do processo aterosclertico(74). Sendo o LDL o maior carreador de colesterol do organismo(23), altos nveis dessa lipoprotena podem inibir a liberao endotelial de xido ntrico prejudicando, assim, o seu efeito vasodilatador. Demonstrou-se que a aterosclerose compromete a sntese de xido ntrico em segmentos articos isolados(75-77) por aumentar as concentraes plasmticas de dimetilargininas (inibidores endgenos da NOs) em coelhos alimentados com dieta hipercolesterolmica(47, 78). De fato, observa-se agravamento da deficincia da sntese de xido ntrico por parte do endotlio
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xido ntrico e o sistema cardiovascular: uma reviso. anatmico da doena aterosclertica (Figura 10). O acmulo de leuccitos na parede vascular, por sua vez, responsvel pela gerao de radicais livres(9, 80) , oxidao das LDLs presentes no espao subendotelial dando origem as LDL-ox(81). A captao das LDL-ox por macrfagos residentes para subseqente formao de clulas espumosas(67, 79) e liberao de citocinas e fatores de crescimento(74) resultando na proliferao e migrao de clulas musculares(74, 83) com conseqente espessamento da camada ntima vascular. Assim, foi demonstrado que pacientes tratados com drogas hipocolesterolmicas tiveram recuperado a resposta endotelial a vasodilatadores conseqentes ao restabelecimento da sntese vascular de xido ntrico(84). Radomski & Salas(23), descreveram as seguintes alteraes metablicas decorrentes da reduo da sntese de xido ntrico conseqente de leso aterosclertica: a disponibilidade de L-arginina: o nvel plasmtico de L-arginina, substrato para a biossntese de NO, de 100 mM e parece no alterar durante o quadro hipercolesterolmico (85). A L-arginina transportada para o meio intracelular atravs de um transportador seletivo para aminocidos catinicos(86-88), sendo que seus nveis intracelulares so maiores daqueles observados no plasma em funo do seu armazenamento em compartimentos especficos. Na aterosclerose, tanto o transporte quanto o armazenamento de L-arginina encontram-se prejudicados reduzindo, assim, a sntese de xido ntrico; b xido ntrico sintase De-Belder e colaboradores(89), demonstraram que a forma II da xido ntrico sintase ou seja, a enzima presente em macrfagos, encontra-se expressa na circulao de pacientes em avanado estado de aterosclerose coronria. Tais dados sugerem que a expresso da xido ntrico sintase tipo II deve ser a responsvel pelo aumento de metablitos de xido ntrico observados na aterosclerose. Entretanto, a atividade da xido ntrico sintase tipo III (endotelial) tem sua ao comprometida pela leso endotelial promovida pela aterosclerose, prejudicando, portanto, a capacidade vasodilatadora. Assim sendo, o NO ope-se indiretamente aos eventos promotores da leso aterosclertica pelo fato de reduzir o acmulo de leuccitos na parede celular arterial e, diretamente, interferindo nos sistemas enzimticos produtores de nions superxido (Inibio via NADPH-oxidase) e reduzindo a proliferao de clulas musculares lisas do vaso sangneo atravs da inibio da sntese de DNA(90- 92). Hipertenso arterial A hipertenso arterial um fator extremamente importante na etiopatogenia da doena cardiovascular, em especial a doena arterial coronria. Uma vez que o NO promove vasodilatao, a reduo na sua formao pode provocar alteraes no dimetro vascular e conseqentemente, elevao da presso arterial com aumento do shear stress, definido como sendo o efeito de cisalhamento do sangue contra o endotlio(93-95). Desse modo, a hipertenso arterial tambm interfere na homeostasia do endotlio uma vez que desencadeia reatividade endotelial em decorrncia do efeito do shear stress que desencadeia a produo de radicais livres. Ambos, radicais livres e o atrito mecnico do sangue contra a parede endotelial promovem processos de remodelagem do endotlio que envolve alteraes na forma e aumento do nmero de clulas endoteliais alm de aumentar a aderncia superfcie endotelial de linfcitos, moncitos e granulcitos. Assim, em decorrncia de alteraes estruturais (remodelamento) e bioqumicas (radicais livres) por parte do endotlio vascular so responsveis pela diminuio generalizada da capacidade vasodilatadora coronria, fato que invariavelmente conduz isquemia miocardica severa. In vivo, demostrou-se que a sntese de NO encontra-se reduzida na hipertenso essencial(7, 95), enquanto outros autores observaram elevao da concentrao plasmtica de endotelina, substncia vasoconstritora produzida pelo endotlio de indivduos hipertensos, a qual capaz de reduzir os efeitos vasodilatadores do xido ntrico nessa condio patolgica(96-98). Os efeitos da inibio da sntese de xido ntrico associados ao aumento da produo de endotelina, podem proporcionar aumento significativo da resistncia vascular perifrica que, por sua vez, constitui-se numa das mais importantes alteraes hemodinmicas responsveis pelo fenmeno hipertensivo(99). CONCLUSO Inicialmente considerado um poluidor atmosfrico, o xido ntrico reconhecido hoje como o mais potente vasodilatador produzido pelas clulas humanas, alterando o conceito cientfico sobre o endotlio vascular. Pelo fato da biossntese de xido ntrico ser dependente da presena do endotlio, este no pode mais ser compreendido como uma simples barreira semi-seletiva tornando-se a principal estrutura na resposta vasodilatadora. Assim,
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Aumento da adeso plaquetria e leucocitria na parede vascular

Vasoconstrio

Aumento da proliferao das clulas da camada muscular lisa do vaso

Defic inc ia vascular de NO Aumento da agregao palquetria Aumento da Oxidao de lipoprotenas Aumento da expresso de mo lculas de adeso

Figura 6. Conseqncias da reduo vascular na sntese de xido ntrico.

Aumento dos nveis plasmticos de LDL colesterol Depsito de LDL no endotlio Injria vascular Gerao de O2

Clulas espumosas

Captao das LDLox por macrfagos residentes

Progresso da leso Instalao da placa de ateroma

Figura 7. Participao do LDL-colesterol nos eventos que conduzem patogenia da aterosclerose. Note que os radicais livres (O2- e ONOO-) tm papel decisivo na instalao da placa. diversos estados de morbidade como, por exemplo, aterosclerose, diabetes e hipertenso arterial ou mesmo aumento da taxa de radicais livres interferem na sntese de xido ntrico ou em seus mecanismos de ao repercutindo na homeostase cardiovascular. Desta forma, os estudos sobre a sntese e ao do xido ntrico abrem perspectivas para o desenvolvimento de substncias doadoras de radicais NO como ferramentas teraputicas a diversas patologias.

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NITRIC OXIDE AND THE CARDIOVASCULAR SYSTEM: A REVIEW ABSTRACT Nitric oxide is an inorganic, gaseous, scentless, colorless, free radical, hidrophobic, and highly diffusible through the biological membranes. It is recognized as one of the most potent vasoactives substances influencing, therefore, that vascular tonus and consequently, the blood pressure. Many pathological processes act against the integrity endothelium, such as diabetes and atherosclerosis. Those conditions can reduce the biosynthesis and the action of nitric oxide and changing the blood pressure impairing the vascular tonus regulation. Also, the nitric oxide acts with neurotransmitter of the central and periferic nervous system and, also providing inespecific imunological defense. KEY WORDS: Nitric oxide; Free radicals; Atherosclerosis.

INFORMAES SOBRE OS AUTORES Wagner de Jesus Pinto e Miguel Arcanjo Areas Departamento de Fisiologia e Biofsica, IB/UNICAMP. Felix G. R. Reyes Departamento de Cincia de Alimentos, FEA/UNICAMP. Cidade Universitria Zeferino Vaz, s/n, Caixa Postal 6121; CEP 13083-970, Campinas - SP.

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