PRCTICA # 1 IDENTIFICACIN DEL NCLEO CELULAR

OBJETIVOS Utilizar adecuadamente el microscopio ptico Observar en diferentes clulas de diferentes tejidos el ncleo y sus caractersticas

INTRODUCCIN El componente ms notorio y evidente cuando se observa la clula al microscopio es el ncleo. Es el centro de control celular y encierra la informacin gentica que le otorga a cada clula las caractersticas morfolgicas, fisiolgicas y bioqumicas que le son propias. Es imprescindible para la sobrevida de la clula. Caractersticas del ncleo interfsico En los perodos no divisionales el ncleo no presenta en general cromosomas visibles y por eso se lo denomina ncleo interfsico. Estructura: En todas las clulas se encuentra un ncleo con caracterstica morfolgica similar y constituida por una membrana nuclear, jugo nuclear, cromatina o cromosomas y nuclolo, hablndose en estos casos de ncleos tpicos. (Nucleoide: no existe ncleo como una estructura definida, el material nuclear se halla disperso en grnulos por el citoplasma no existe carioteca que limite y encierre lo componentes nucleares) Forma: La forma del ncleo puede ser regular o irregular Regular: esfrica, ovoide, cbica, etc. Coincidiendo con la forma de la clula. Es decir que la forma del ncleo coincide generalmente con la de la clula. Irregular: como en los glbulos blancos polimorfonucleares, su morfologa polilobulada y en forma de herradura es la que le da aspecto irregular al ncleo. Tamao: Su tamao es variable pero en general guarda relacin con la clula. Podemos referirnos a l en trminos absolutos en cuyo caso daremos una medida en micrones. O hacerlo en forma relativa y referirlo a la relacin ncleo citoplasma. Posicin: La posicin del ncleo vara segn el tipo de clula considerada y segn la materia acumulada en la clula. Cada clula tiene el ncleo en una posicin caracterstica en casi todas las clulas animales es cntrico, en algunas como las adiposas y las de las fibras musculares estriadas esquelticas es excntrico, en las epiteliales se ubica en la zona basal. Nmero: La mayora de las clulas son mononucleadas pero las hay binucleadas (clulas Cartilaginosas, clulas Hepticas) multinucleadas (fibra muscular estriada) Envoltura nuclear membrana nuclear o carioteca Su importancia radica en que el proceso de transcripcin de ARN, a partir de ADN est fsicamente separado tanto en el tiempo como en el espacio del sitio de la sntesis proteica, traduccin. En las procariotas existe poca posibilidad de alterar el ARN que se ha transcripto antes de que sea traducido a protena, en cambio en las eucariotas los ARN que se han transcripto pueden ser extensamente alterados (revisados, madurados) en el ncleo antes de su traduccin a protena en el citoplasma. Esto se denomina procesamiento de ARN. Al microscopio electrnico se presenta como una doble membrana (dos membranas de 90 A y un espacio intermedio de 140 A). Podemos observar que la cromatina tiende a adherirse a su cara interna; mientras que a su cara externa se adhieren los ribosomas. La composicin qumica es de tipo lipoproteica. Posee mltiples poros cuyo dimetro oscila en los 80nm.

Poro: estructura supramolecular que parece estar organizada y mantenida en su lugar mediante la lamina nuclear una red proteica que tapiza la parte interior de la membrana nuclear interna y ayuda a configurar el ncleo y a organizar a los cromosomas. El nmero y tamao de los poros vara con el tipo de clula. Se cree que en los mamferos estos ocupan el 10% con relacin a la superficie total, se encuentran rodeados por estructuras circulares llamadas anillos que en conjunto forman el complejo del poro. Por dichos poros pueden pasar macromolculas y las unidades ribosomales pero el intercambio es selectivo, su funcin es impedir la entrada de los ribosomas activos en el ncleo. Lgicamente la funcin de estos es mantener una estrecha comunicacin entre ambas partes de la clula, el canal central por el que se produce esta mide 10 a 15 nm. Por ejemplo: hay protenas como la ARN polimerasa, ADN polimerasa e histonas que se sintetizan en el citoplasma y luego deben ser transportadas al ncleo las clulas tienen la capacidad de ubicar las protenas especficas en los compartimentos celulares adecuados. Existe una interesante comunicacin entre la membrana nuclear y el retculo endoplsmico, (la membrana nuclear externa forma un todo continuo con la membrana del retculo) tambin sabemos que en la profase de la mitosis al desaparecer la membrana esta pasa a formar parte del retculo para en la telofase volverse a formar en cada clula hija a expensas de aquel. Jugo nuclear, cariolinfa, carioplasma El jugo nuclear est en amplia comunicacin con el jugo citoplasmtico merced a los poros de la membrana. Al igual que en el citoplasma, por la cariolinfa circulan iones diversos, molculas pequeas, macromolculas, etc. Nucleolo Es la fbrica celular donde se producen los ribosomas. Para poder construir sus 10 millones de ribosomas, una clula en crecimiento debe sintetizar en cada generacin celular 10 millones de copias de cada tipo de molcula de ARNr y esto solo puede lograrse gracias a que la clula tiene varias copias de los genes que codifican los ARNr (genes de ARNr). Las clulas humanas contienen unas 200 copias de ARNr distribuidas en pequeos grupos en cinco cromosomas diferentes. Los nuclolos se dispersan durante la mitosis y se reconstruyen en localizaciones especficas que se denominan organizadores nucleolares, estas zonas se reconocen por presentarse como una constriccin secundaria del cromosoma donde se ubican bucles de ADN. El ARNr recin sintetizado es empaquetado inmediatamente con protenas ribosmicas conformando las subunidades mayor y menor para ser luego exportadas por separado al citoplasma en tiempos tambin distintos. Estructura esferoide casi siempre presente en las clulas cuyo n oscila entre 1 y 3. En l podemos distinguir dos zonas: Zona granular, formada por partculas de ribosomas en distintos estadios de ensamblado mide entre 15 y 20 nm y ocupa la parte perifrica del nuclolo. Zona fibrilar, mide entre 5 y 10 nm y ocupa una regin ms cntrica. A diferencia de los orgnulos celulares el nuclolo carece de membranas, su tamao vara en diferentes clulas y puede variar dentro de una misma clula. Cromatina El ADN es el principal componente gentico de la clula y el que lleva la informacin codificada de una clula a otra y de un organismo a otro. En las clulas eucariotas

el ADN no se encuentra suelto sino unido a protenas especficas llamadas histonas con las que forma una compleja estructura denominada cromatina (tambin se encuentran otros tipos de protenas cromosmicas no especficas y pequeas cantidades de ARN). Las histonas son cinco protenas diferentes bsicas, de carga positiva, esta propiedad hace que se unan fuertemente al ADN que es cido, de carga negativa. La cromatina se presenta como una fibra de 10 nm como primer grado de organizacin (aunque no es muy probable que podamos observarla en este estado, no en forma natural al menos). El plegado de ADN es importante en las clulas eucariticas por dos motivos: en primer lugar es esencial para disponer las grandes molculas de ADN en forma ordenada dentro del ncleo celular. En segundo lugar la manera en que se pliega una regin del genoma de una clula en particular determina la actividad de los genes de esta regin y es aqu donde las histonas cumplen un papel primordial. Las histonas pueden ser agrupadas en dos: Histonas nucleosmicas H2A, H2B, H3, H4 que son las responsables del plegado del ADN en los nucleosomas. Histonas H1 responsables del plegado de los nucleosomas en la fibra cromatnica de 30 nm. Si se estirara la doble hlice de ADN de cada cromosoma humano este medira aproximadamente 5 cm. Las histonas son las responsables de empaquetar esta larga molcula de ADN dentro de un ncleo de unos pocos micrones de dimetro. Existen diversos grados de empaquetamiento y la unidad fundamental es el nucleosoma. l confiere a la cromatina su aspecto de cuentas ensartadas, cada cuenta nucleosmica posee un conjunto de 8 molculas de histonas, 2 copias de cada una de las cuatro histonas nucleosmicas. Estas molculas forman un ncleo proteico alrededor del cual se enrolla el fragmento de ADN de doble hebra. Cada cuenta esta separada de la siguiente por una regin de ADN espaciador que junto con la cuenta nucleosmica constituye un nucleosoma completo. El sistema de cuentas debe condensarse an ms para esto los nucleosomas se empaquetan entre s, esta forma bsica de empaquetamiento recibe el nombre de fibra cromatnica de 30 nm. De este empaquetamiento es responsable la histona 1. El empaquetamiento contina an ms, cuando se observa la estructura de ciertos cromosomas esto aparecen organizados en una serie de dominios estructurales en forma de bucle la hiptesis que se sostiene en este sentido es que las zonas de bucles de cromatina se establecen y mantienen por accin de ciertas protenas.

La cromatina durante el ciclo celular presenta distintos aspectos que ilustramos mediante un esquema del ciclo de condensacin descondensacin de los cromosomas. En G 1 los cromosomas estn dispersos; en S se

produce la duplicacin que se completa en G 2. En la metafase, M, y en la anafase, A, la condensacin es mxima y se ven los dos centrmeros (flechas). Cromosomas Durante la divisin celular la cromatina se compacta hacindose visible al microscopio y recibiendo el nombre de cromosomas. Estos pueden clasificarse segn su forma que depende de la ubicacin del centrmero en: Telocntrico: un solo brazo centrmero en uno de sus extremos. Metacntrico: los brazos son iguales centrmero en el centro. Submetacntrico: centrmero en medio de dos brazos desiguales Acrocntrico: brazos desiguales, poseen constriccin primaria, secundaria y satlite En los cromosomas condensados es posible distinguir varios elementos: Cromatida: en la metafase cada cromosoma esta formado por dos componentes simtricos cada uno de los cuales contiene una molcula de ADN. Centrmero o cinetoco es la regin del cromosoma donde convergen las fibras del huso mittico, se encuentra en una parte ms delgada del cromosoma la constriccin primaria. Telmero: extremo del cromosoma se cree que su funcin es evitar que se "peguen" o fusionen con otros fragmentos. Zona que no posee informacin gentica. Constriccin secundaria: son constantes en su posicin y tamao, resultan tiles para identificar un cromosoma en particular. Los organizadores nucleolares son ciertas construcciones secundarias en las que los genes codifican a los ARNr. En el hombre los organizadores nucleolares se hallan en los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22 todos ellos son acrocntricos y tienen un pequeo cuerpo redondeado (satlite) separado del resto del cromosoma por la constriccin secundaria.1 Relacin ncleo / citoplasma En 1831 Brown indicaba que todos las clulas de los seres vivos tenan ncleo ( los eritrocitos carecen de l ). En cuanto a su tamao es variable, aunque guardan relacin con el volumen citoplasmtico. Esta relacin se expresa RNP = V ncleo / V clula - V ncleo, tiene que existir un equilibrio entre el volumen del citoplasma y el nuclear. Segn la expresin anterior al aumentar el volumen nuclear debe hacerlo el citoplasmtico y viceversa. El hecho de que en esta relacin se produzca cualquier variacin es un estmulo para la divisin celular. En general los ncleos suelen tener un dimetro de 5 a 30 micrmetros. En las clulas reproductoras el ncleo es de gran tamao, como en los ovocitos y en los zigotos, puede ser el ncleo de gran tamao en relacin a la cantidad de ARN. Suelen ser esfricos u ovalados aunque en las clulas alargadas el ncleo tambin adopta esta forma, tambin algunas clulas puede ser polimrfico, el que presente forma irregular indica alta actividad metablica. Casi todas las clulas son mononucleadas aunque en algunas hepticas son trinucleadas o incluso polinucleadas (mdula sea). La posicin es variable, pero constante para cada tipo de clula.2 MATERIAL Microscopio ptico Frotis de diversos tejidos Aceite mineral Goteros

PROCEDIMIENTO Observar en diferentes clulas el ncleo destacando: Forma Relacin ncleo /citoplasma Granulacin Rugosidad de membrana Inclusiones nucleares

RESULTADOS

Muestra de mdula sea a 100X

Se presentan clulas con diversas formaciones y tipos de ncleos de forma redonda, arrionada, irregulares, con grnulos pericromatinianos e intercromatinianos; no se observo el nucleolo. Relacin ncleo-citoplasma del 80%.

Linfocitos (sangre perifrica) a 100X

Se encuentran clulas de diversas formas, con ncleos redondos, sin inclusiones o granulaciones con una relacin ncleo-citoplasma del 10%.

Clulas epiteliales de tumor renal a 100X

Se encuentran ncleos de forma alargada y redonda, de hecho, varios ncleos dentro de una sola clula con grnulos intercromationianos y con una relacin ncleo-citoplasma de 20%.

Lnea celular U937 a 40X

Se observan ncleos de diversas formas, irregulares, redondos, casi ningn arrionado y alargados con una relacin de 90% con grnulos pericromatinianos e intercromatinianos.

DISCUSIN DE RESULTADOS: Para la mdula sea: Las clulas que se observaban morados y muy oscuros se encontraban en divisin celular. Algunas clulas se observaban segmentadas (ya que su ncleo se estaba segmentando), las clulas inmaduras se diferenciaban debido a que sus ncleos eran muy grandes; en general se observaron en esta muestra todo tipo de clulas. En las clulas del cultivo de sangre perifrica se observaron linfocitos con divisin celular, adems de que las clulas grandes se encontraban activadas debido a que estaban a punto de dividirse, esto se poda observar por su esponjosidad, y tambin se observaban otros ms pequeos. En las clulas del tumor renal se podan observar en una misma clula varios ncleos ya que la clula se divide tan rpido que no alcanza a dividirse adecuadamente y ya que son cancerosas por eso se presenta este tipo de poliploidia. En las clulas de la lnea celular, es decir de las clulas vivas leucmicas U937, se observaron clulas muertas que se diferenciaban por tener el citoplasma roto, otras que se encontraban muy expandidas ya que se estaban muriendo (ncleos muy grandes) y otras clulas de tamao normal pero con el ncleo muy grande. CONCLUSIN En esta prctica observamos gran cantidad de ncleos y las posibles configuraciones que este puede desarrollar, aprendimos a identificar algunas de sus caractersticas en diferentes tipos de clulas, en algunos casos se observaban los cromosomas. Esta prctica nos dar las enseanzas bsicas para trabajar con clulas e identificar sus componentes de manera efectiva para posteriores prcticas y reconocer todos estos compuestos que contiene un ncleo celular y como los ncleos de las diferentes clulas varan en cada tipo y como dentro de un mismo tipo celular el ncleo puede cambiar.

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http://www.alipso.com/monografias/nucleo_celular/(15/09/08 05:21pm) http://www.elergonomista.com/biologia/nucleo.htm (15/09/08 06:03pm)