MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA BACTERIANA

Mara Catalina Prez.

Analizaremos algunos aspectos de la morfologa y estructura de las bacterias, microorganismos que integran la flora normal de las superficies cutneo-mucosas del hombre y estn vinculadas a numerosas y frecuentes patologas infecciosas humanas. Importancia del tema: En las ltimas dcadas se han hecho importantes avances en el estudio de la ultraestructura bacteriana, logrndose una identificacin bioqumica de muchas de las fracciones subcelulares, estos avances han permitido ubicar definitivamente a las bacterias en el reino Procariota. El conocimiento en profundidad de las diferentes estructuras y su composicin ha permitido comprender, como muchas bacterias se relacionan con el hombre, ya sea cuando lo hacen como integrantes de la flora normal o cuando se comportan como agresoras para el mismo. Ha sido fundamental poder demostrar que muchas estructuras bacterianas bien identificadas son importantes inmungenos, siendo posible utilizarlas para la preparacin de vacunas que han significado verdaderos avances en la Medicina de los ltimos aos (Ejemplo: vacunas contra agentes causantes de meningoencefalitis supuradas: Haemophilus influenzae tipo b). El conocimiento de la composicin bioqumica de las diferentes estructuras de las bacterias, asi como de su metabolismo, ha permitido la comprensin del mecanismo de accin de diferentes antibiticos. De gran relevancia han sido tambin los avances en el estudio del material gentico bacteriano cromosmico y plasmdico que han posibilitado el desarrollo de tcnicas

con aplicaciones en investigacin y diagnstico que han revolucionado las ltimas dcadas. Es justo de todos modos sealar que a pesar de todas estas innovaciones la observacin al microscopio ptico y la reaccin de las bacterias ante las diferentes coloraciones sigue siendo de fundamental importancia en la taxonoma e identificacin bacteriana. Definicin: Las bacterias o procariotas, son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisin binaria (divisin simple). Muchos tienen vida libre. Contienen informacin gentica, sistemas de produccin de energa y sistemas biosintticos necesarios para el crecimiento y reproduccin. Ubicacin dentro de los sistemas biolgicos: La gran divisin de los seres vivos se realiza segn el tipo de clulas: eucoriota y procariota. Como veremos en el cuadro 1, animales y plantas, individuos multicelulares, tienen clulas eucariotas. Tambin poseen este tipo de clulas algas, hongos y protozoos. (eu significa verdadero, cariota: ncleo). Las bacterias son microorganismos unicelulares, siendo entonces clulas procariotas. Existen dos grupos de procariotas evolutivamente distintos, las eubacterias y las arquebacterias. Una clula bacteriana tpica tiene las siguientes estructuras: Material gentico ADN, bajo forma de un cromosoma nico que no est rodeado de membrana nuclear, esta caracterstica es la diferencia fundamental con la clula eucariota, la cual posee siempre membrana nuclear. Presentan adems ribosomas, citoplasma y membrana

Cuadro 1 SERES VIVOS Organizacin unicelular sin diferenciacin Organizacin unicelular o colonial Multicelulares. Diferenciacin celular en tejidos Uni o multicelular Uni o multinuclear Clula procariota (ncleo primitivo) Clula eucariota (ncleo verdadero) Clula eucariota Clula eucariota Procariota: bacterias Protistas: protozoarios, fitoflagelados Reinos: animal y vegetal Hongos, algas oscuro como cuerpos brillantes. Esta tcnica se usa para el examen de microorganismos no teidos en suspensiones lquidas como es el caso de Treponema pallidum, agente de la sfilis, que se observan como espiroquetas delgadsimas. Forma: Al MO o ME las bacterias se presentan con una morfologa definida que est determinada por su pared rgida. Se pueden presentar como esfricas, ovaladas, denominndose cocos. Si la forma es cilndrica se denominan bacilos o bastones. Estos bastones pueden ser rectos, curvos o con forma de espiral, en este ltimo caso les llamamos espirilos. Figura 2. Las clulas bacterianas pueden mantenerse unidas en grupos despus de que se han dividido, pero conservando siempre la independencia una clula de otra. Cocos o bacilos pueden agruparse en cadenas, en el caso de los cocos, cuando se presentan as agrupados, se denominan estreptococos. Tambin se pueden presentar como diplococos. Si los planos de divisin son variados pueden agruparse en ttradas o como racimos, denominndose estafilococos. Los bacilos pueden ser muy cortos, recibiendo el nombre de cocobacilos, otras veces pueden ser muy largos, pudiendo tener una longitud 10 veces superior a su dimetro. Los extremos pueden ser redondeados o rectos, pueden presentarse aislados, en largas cadenas o pueden agruparse en empalizadas o formando letras chinas. La morfologa bacteriana se observa al MO sin tincin como se seal, o utilizando diferentes tcnicas de tincin que ayudan a su mejor visualizacin ya que son incoloras. Las diferentes tcnicas de tincin consisten en colorear las clulas con diferentes colorantes que tienen afinidad por materiales celulares especficos. Hay colorantes catinicos, de carga positiva que tienen afinidad por constituyentes celulares de carga negativa, como los cidos nucleicos y los polisacridos. Algunos ejemplos de colorantes catinicos: azul de

citoplasmtica. Figura 1. Por fuera est la pared bacteriana, estructura que por su composicin bioqumica se puede decir que es propia de las bacterias, ya que las clulas vegetales tienen una pared celular pero est compuesta por celulosa. Algunas bacterias como los micoplasmas, carecen de pared celular. Las diferentes estructuras bacterianas que observamos en la figura 1 las podemos dividir, segn sean constantes en las clulas o no, en estructuras permanentes y variables. Estructuras permanentes: - membrana celular - ribosomas - material gentico Estructuras variables: - pared celular - flagelo - fimbrias o pilis - cpsula - esporas Al decir estructuras variables queremos decir que estas estructuras existen en algunas bacterias y no en todas, y aun en un mismo grupo bacteriano o una misma cepa bacteriana las puede presentar o no, dependiendo de las condiciones en donde se desarrolle. Las estructuras variables no son necesarias para la vida de la clula bacteriana. Tamao: Las bacterias presentan una amplia diversidad de tamaos, que va desde 0.5 a 2 micrmetros y algunas pueden llegar a 10 micras. No son visibles por supuesto al ojo humano y se visualizan con microscopio ptico (MO) o electrnico (ME). Las bacterias pueden ser observadas al MO sin ser coloreadas si se las coloca en glicerol o soluciones no acuosas que aumenten el ndice de refraccin. Las bacterias se pueden observar sin colorear utilizando la tcnica de microscopa de campo oscuro en la que utilizando un condensador especial se ven sobre un fondo

Material gentico:
Ribosomas: La clula bacteriana presenta ribosomas libres en el citoplasma con coeficiente de sedimentacin de 70S a diferencia de la clula eucariota que es de 80S. Se presentan tambin como polirribosomas que son cadenas de ribosomas asociados a ARN mensajero y en parte en relacin con el ADN cromosmico. Contienen todos los componentes que permiten la sntesis proteica. Las clulas poseen ms ribosomas si estn creciendo en medios ricos. El alto contenido de ARN determina gran afinidad por los colorantes bsicos. ADN bacteriano:Como se seal, la clula procariota a diferencia de la eucariota carece de una membrana nuclear, tampoco posee nuclolo, ni aparato mittico, y nunca configura una masa cromosmica definida. El material gentico est compuesto de una estructura fibrilar, constituida por un ADN circular de doble cadena, enrollado sobre s mismo. Si bien se asocia a protenas bsicas, estas no son verdaderas histonas. Los mesosomas son, al parecer, invaginaciones de la membrana citoplasmtica y participan en la divisin celular y en la replicacin de ADN. Si bien hay autores que opinan que son artefactos de tcnica que se observan en las microfotografas electrnicas, hay otros que han observado que claramente el ADN se fija al mesosoma en la etapa previa de la divisin celular. En las ltimas dcadas se han desarrollado muchas tcnicas que permiten estudiar el ADN bacteriano, todas ellas con importantes aportes en la investigacin y el diagnstico. Por ejemplo, es posible por tcnicas de secuenciacin, conocer genomas enteros de bacterias o sectores de l que tengan inters, ya sea porque codifican la produccin de alguna estructura, una toxina, etc. Estos sectores de ADN, se pueden separar del ADN total con enzimas de restriccin para su posterior anlisis o utilizacin en estudios de biologa molecular. Estas tcnicas de biologa molecular estn destinadas a identificar sectores de ADN especfico de una bacteria, por ejemplo: las tcnicas de hibridizacin que identifican un trozo de ADN con una sonda gentica complementaria de ese sector y marcada con un compuesto revelador; o la tcnica de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) que amplifica miles de veces el sector de inters.

metileno, cristal violeta, safranina. Ms adelante analizaremos algunos detalles de la coloracin ms utilizada en Bacteriologa, denominada coloracin de Gram en honor a quien en 1884 la describi. Es esta una coloracin diferencial que permite dividir a las bacterias en Gram positivas, refirindose a aquellas que toman el primer colorante utilizado que tie las bacterias de color violeta y las Gram negativas, las que toman el ltimo colorante utilizado en la tcnica como colorante de contraste que las tie de rojo o rosado. Este tipo de coloracin se denomina diferencial por lo que acabamos de analizar. Otras coloraciones simples como el azul de metileno, se utilizan para observar simplemente la morfologa. Analizaremos la clula desde su interior para luego dedicarnos a las estructuras externas y apndices. Las estructuras internas de la clula estn inmersas en el citoplasma, solucin acuosa y viscosa, que contiene solutos orgnicos e inorgnicos y elementos especializados como ribosomas y grnulos de inclusin.

Plsmidos y episomas: Algunas bacterias poseen material gentico extracromosmico, denominados plsmidos y episomas. Los plsmidos son elementos genticos constituidos por secuencias de ADN cortas circulares que se replican en forma autnoma. Como se ver en el captulo de gentica bacteriana, stos poseen genes que codifican factores de agresin, factores de resistencia a antibiticos, produccin de toxinas, etc. Los episomas son elementos genticos extracromosmicos que pueden existir en forma autnoma o incorporados al material gentico.

produccin de energa. Dentro de las diversas actividades enzimticas vinculadas a las protenas de la membrana citoplasmtica, podemos sealar su participacin en la biosntesis del ADN, de los constituyentes de la pared, etc. Ya hemos hecho mencin ms arriba de los mesosomas que son organelos que se asocian a la membrana. Se observan al ME como sacos citoplasmticos que contienen estructuras verticiladas, laminares, tubulares o vesiculares, y a menudo se asocian con tabiques de septacin. Se ha demostrado que los mesosomas fijan el ADN cromosmico a la membrana citoplasmtica.

Membrana celular: Estructura delgada que rodea a la clula de 8 nm de espesor. Es una estructura vital, si se altera, la clula pierde su vitalidad. Composicin: es similar a al mayor parte de las membranas biolgicas. Figura 3. Una doble capa fosfolipdica en donde el cido graso hidrofbico se orienta hacia el interior y el glicerol hidroflico hacia el exterior de la clula. A diferencia de la clula eucariota no posee esteroles (excepto los micoplasmas). Algunos antibiticos, cuyo blanco de ataque en la clula bacteriana es la membrana celular, actan inmediatamente que la clula se pone en contacto con stos. Los antibiticos de este tipo, son por su mecanismo de accin, txicos para los tejidos humanos y poco utilizados en medicina clnica. Funcin: Delimita el interior del exterior celular, es una barrera osmtica muy importante, interponindose a la libre difusin entre el medio ambiente interno y externo. Es una membrana con permeabilidad selectiva, a travs de la cual ingresan los nutrientes y salen los productos de desecho. El transporte de solutos se realiza muchas veces por un sistema de transporte activo, como se analizar al estudiar el metabolismo bacteriano. En la membrana celular estn los sistemas de fosforilacin, oxidacin y transporte de electrones (citocromos) para la

Pared celular: Estructura rgida presente como ya se

dijo en la mayora de las bacterias, se sitan por fuera de la membrana citoplasmtica. Es una estructura vital para las bacterias que las poseen. Si sta se destruye o se impide su formacin, la clula pierde su viabilidad. El peptidoglicano, principal constituyente de la pared, es un polmero constituido por unidades repetidas del monmero formado por: dos derivados de carbohidratos, N-acetil Glucosamina y N-acetil Murmico (N-Ac.G, NAc.M), unidas por enlaces beta 1-4 y asociados a cortas cadenas peptdicas a travs del N-acetil Murmico. Figura 4. El espesor de la pared en los diferentes microorganismos, oscila entre 0,150 m y 0,500 m de (m=micra). Podemos imaginar entonces la pared celular, como una macromolcula gigante constituida por peptidoglicano, que en forma de bolsa rodea toda la clula, representando del 10 al 40 % del peso de la bacteria. Unido al N-acetil murmico se encuentra un tetrapptido como se aprecia en la figura 4. Los tetrapptidos de una cadena de peptidoglicano se unen con los de la otra a travs de puentes peptdicos. Los aminocidos que forman los tetrapptidos son los siguientes: L-Alanina, Acido DGlutmico, Acido mesodiaminopimlico (o L-Lisina) y D-

de la clula en divisin. A nivel de esas brechas o aberturas es donde se agrega el peptidoglicano de la nueva pared en formacin. Figura 5. La mayor parte de la informacin se ha obtenido de la sntesis del peptidoglicano de Staphylococcus aureus y la explicacin que sigue se restringir a este organismo. En el citoplasma se une el N-acetil Murmico a un transportador lipdico de membrana: el bactoprenol, luego se une la Nacetil Glucosamina y, finalmente, el puente de pentaglicina. El bactoprenol transporta el bloque formado a travs de la membrana citoplasmtica. Una vez en el espacio periplsmico, estos bloques son colocados en las brechas ya formadas. El paso final y fundamental para una correcta funcin de la pared es la unin los monmeros de peptidoglicano entre si. Esta unin la realizan enzimas denominadas transpeptidasas. A este paso se lo conoce como transpeptidacin. La Penicilina y sus derivados, los antibiticos ms usados en Medicina, actan precisamente inhibiendo la sntesis de la pared celular, llevando a la lisis de la bacteria. La unin de los puentes peptdicos se pueden hacer como ocurre en la mayora de las bacterias por uniones directas transpetdicas entre la D-Alanina de un puente peptdico y el cido diaminopimlico (DAP) de otro tetrapptido adyacente. En Staphylococcus aureus la reaccin de transpeptidacin se efecta mediante un puente de pentaglicina, el cual une la L-Lysina de un tetrapptido con la D-Alanina de otro tetrapptido adyacente. Existen diferencias en el espesor de esta estructura bsica, el peptidoglicano de las bacterias Gram positivas tienen una capa gruesa de 0,02 a 0,06 m en forma de multicapas, mientras que las bacterias Gram negativas y las bacterias cido alcohol resistentes la tienen ms fina, de 0,01 m. Al peptidoglicano se le unen otros componentes que son, por lo tanto, tambin integrantes de la pared. Son diferentes en las bacterias Gram positivas, negativas y cido alcohol resistentes. Revisaremos algunos aspectos de la composicin de los tres tipos de paredes. (Cuadro 2) Pared de bacterias Gram negativas: Si observamos la pared de las bacterias Gram negativas al microscopio electrnico podemos observar 3 zonas: 1. La membrana citoplasmtica. 2. El espacio periplasmtico, ubicado entre la membrana citoplasmtica y el peptidoglicano. 3. Una fina capa de peptidoglicano. 4. Membrana externa que contiene fosfolpidos, el lipopolisacrido (LPS) caracterstico de estas bacterias y protenas (protenas de membrana

Alanina. Podramos resumir de la siguiente manera la sntesis del pptidoglicano: En el momento de la divisin celular se debe formar la nueva pared celular. Las autolisinas, enzimas producidas por la propia bacteria, forman brechas en la "vieja pared"

externa). Esta capa est estrechamente unida al peptidoglicano y se la considera un componente de la pared celular de las bacterias Gram negativas. Figura 6. En el lipopolisacrido se pueden distinguir 3 componentes diferentes bioqumicamente. La porcin lipdica, el lpido A, est inmersa en el centro de la membrana externa. En su sector externo la porcin polisacardica, el denominado polisacrido O, o antgeno O, est ubicado en la cara externa. Entre estos dos componentes est el core del LPS, que es tambin polisacardico. El antgeno O es muy variable en su composicin entre las diferentes familias y especies de bacterias Gram negativas, en cambio, el polisacrido del core es constante en las diferentes bacterias Gram negativas. El polisacrido O por su variabilidad es utilizado frecuentemente para la clasificacin serolgica de familias bacterianas de inters mdico. Al lipipopolisacrido (LPS) se le denomina endotoxina, siendo el lpido A su la porcin txica. Como el lpido A est inmerso en el centro de la membrana slo ejerce sus efectos txicos cuando la clula es lisada, ya sea por ataque del complemento y fagocitosis, o por lisis celular como consecuencia de la accin de antibiticos. Si se inyecta a un animal de experimentacin endotoxina, ocurren una serie de eventos fisiolgicos, el primero es la fiebre. La endotoxina estimula a las clulas del husped a liberar protenas denominadas pirgenos y stos modifican el centro termorregulador del encfalo. Pero el animal tambin puede sufrir otras alteraciones como disminucin de leucocitos y plaquetas en sangre, sufriendo finalmente un estado inflamatorio generalizado que lo puede llevar a la muerte (fenmeno de Shwartzman-Sanarelli). Efectos similares ocurren cuando por destruccin bacteriana hay endotoxinas en sangre. La gravedad del cuadro clnico se sabe hoy que depende en parte de la cantidad de endotoxinas circulantes, pudiendo determinar desde un simple cuadro infeccioso con fiebre, a sepsis,
CUADRO 2 Composicin de la pared celular de Gram positivas y Gram negativas Bacterias Gram positivas Bacterias Gram negativas Glucopptidos 0.02 a 0.06 m m Protenas Acidos lipoteicoicos Acidos teicoicos Glucopptido 0.01 Membrana externa: Lipoprotenas Lipopolisacridos

shock sptico o la muerte. La toxicidad del lpido A radica primariamente en su habilidad para activar el complemento y estimular la liberacin de citoquinas por parte de las clulas del husped (leucocitos, macrfagos, etc.). El complemento y las citoquinas en condiciones normales son parte de los mecanismos de defensa del husped, pero si estn en altas concentraciones desencadenan un proceso perjudicial. Desencadenan localmente un proceso inflamatorio y una respuesta sistemtica que constituye el shock sptico. Entendemos por shock la serie de eventos que determinan el colapso del sistema circulatorio que lleva a la falla de mltiples rganos vitales y, finalmente a la muerte (multiple organ sistem faillure, MOSF). An hoy no es posible decir exactamente como se desencadena este fenmeno. Se acepta que cuando en la sangre se libera LPS de bacterias Gram negativas lisadas, stos se unen a protenas, denominadas protenas fijadoras de LPS. El complejo LPSprotena fijadora de LPS interacta con receptores CD14 de monocitos, macrfagos y clulas endoteliales. Posteriormente se desencadenan 3 fenmenos que tienen como accin final el dao endotelial difuso y, por ende, la falla multiorgnica. El primero es la liberacin de citoquinas por los monocitos, macrfagos y otras clulas tisulares como IL1, IL6, IL8 (IL interleuquina), factor de necrosis tumoral (FNT). Estas a su vez estimulan la produccin de prostaglandinas y leucotrienos, que son los mediadores del dao endotelial en mltiples rganos. En segundo lugar se activa el complemento y en tercer lugar se activa la cascada de la coagulacin. Figura 7. La membrana externa contiene adems numerosas protenas. Algunas de ellas la atraviesan de lado a lado, constituyendo canales, denominados porinas. Estos poros permiten el pasaje de molculas de bajo peso molecular, como nutrientes. Las grandes molculas no atraviesan la membrana externa, por esto estas bacterias, a diferencia de las Gram positivas, no son sensibles a una enzima, la lisozima que destruye el peptidoglicano. Incluso algunos antibiticos de alto peso molecular no pueden atravesar la membrana externa y, por lo tanto, las bacterias no son sensibles a ellos. Pared de las bacterias Gram positivas: Lo primero a sealar es la gruesa capa de peptidoglicano en forma de mltiples capas. Unidos a l se encuentran los cidos teicoicos (del griego techos, pared). Son polisacridos que se unen al cido N-acetil murmico del

Acidos teicurnicos Polisacridos

Fosfolpidos Protenas Polisacridos

efectos. A la luz de las investigaciones actuales, al aparecer fragmentos de peptidoglicano, cido teicoicos o una combinacin de los dos, juegan un papel semejante al LPS. Si se inyectan a animales tienen efectos similares que los LPS. Al peptidoglicano de la pared de las bacterias Gram positivas, se pueden unir protenas como la protena M de Streptococcus pyogenes (o Streptococcus grupo A) que se vincula con la virulencia, y tambin se pueden asociar polisacridos como el polisacrido C que permite la clasificacin en serotipos del gnero Streptococcus (A, B, C, D, E, F, etc.). Composicin de la pared de las bacterias cido alcohol resistentes (AAR): Nos referiremos como bacteria modelo de este grupo al gnero Mycobacterium. Adems del peptidoglicano, la pared celular de las micobacterias contiene una gran cantidad de glicolpidos como el complejo lipdico arabinogalactano y los cidos miclicos, stos ltimos son slo encontrados en Mycobacterium y Corynebacterium Spp. Esta gran cantidad de lpidos hace que las bacterias AAR no se coloreen o se coloreen mal con la coloracin de Gram. Para colorearlas, se somete a las bacterias a una coloracin con Fucsina (colorante rojo) con ayuda de calentamiento y luego que son teidas as, resisten la decoloracin con una mezcla de alcohol cido. Esta gran cantidad de lpidos de la pared, 10% del total del peso de la clula de micobacterias, protege a la bacteria de la accin deletrea de los componentes del fagolisosoma y, probablemente, sea esta la razn por la que las micobacterias pueden sobrevivir dentro de los macrfagos. Los componentes de la pared de las micobacterias tambin tienen la capacidad de estimular al sistema inmune, tanto es as que se utiliza para aumentar la produccin de anticuerpos cuando se inyecta antgenos proteicos, o sea, se utiliza como adyuvante. El adyuvante de Freund tiene como componente bsico, la pared micobacteriana.

peptidoglicano. Algunos cidos teicoicos tienen unido un lpido (cidos lipoteicoicos). Los cidos lipoteicoicos estn embebidos en la membrana citoplasmtica por su porcin lipdica. Los cidos teicoicos tienen por funcin estabilizar la pared. La superficie externa del peptidoglicano de las bacterias Gram positivas est usualmente cubierta de protenas. Los diferentes grupos de bacterias Gram positivas y las diferentes especies, difieren en la composicin de sus protenas y cidos teicoicos, siendo esto til para la clasificacin serolgica y la identificacin. En la pared de las bacterias Gram positivas no existe una endotoxina, sin embargo, la presencia de estas bacterias en los tejidos y en la sangre determina sntomas similares al shock sptico que ocurre ante la presencia de endotoxinas. Las mismas citoquinas que se liberan ante la presencia de los LPS, se sabe que son liberadas ante presencia de la pared de las bacterias Gram positivas con sus mismos

Despus de analizar las diferencias entre la composicin de las paredes de las bacterias Gram positivas, negativas y cido alcohol resistentes se puede ir comprendiendo la importancia que esto tiene en el momento de estudiar mecanismos de agresin, sensibilidad a antibiticos, taxonoma, clasificacin bacteriana, identificacin, etc. Tambin es necesario sealar que el tipo de pared celular podra determinar el hecho de que unas bacterias se tian con la coloracin de Gram y otras no, y por qu las que no lo hacen sean Gram positivas y otras negativas. Recientemente se ha demostrado que en las bacterias Gram positivas es la gruesa capa de peptidoglicano con numerosos cidos teicoicos unidos a ella, la que determina que estas bacterias retengan al colorante cristal violeta utilizado en el primer paso de la coloracin, y resistan la decoloracin con alcohol acetona. Por el contrario, las que lo pierden al ser descoloradas, las Gram negativas, tienen una fina capa de peptidoglicano y la membrana externa rica en lpidos, que podran ser solubilizados con alcohol acetona y facilitar as la prdida del cristal violeta, quedando finalmente coloreadas de rojo con safranina,

colorante de contraste usado al final de la tcnica. Podramos decir que la pared bacteriana es un gran mosaico de antgenos que son utilizados en la clasificacin bacteriana y en la identificacin, como en el caso del antgeno O en enterobacterias, el polisacrido C para la serotipificacin de estreptococos, etc. Tambin antgenos de la pared han sido ensayados como inmungenos en la produccin de vacunas, como protenas de membrana externa en la vacuna antimeningocccica para el grupo B. La porcin central del LPS, que es invariable entre las diferentes bacterias y no es txica, se ha ensayado tambin como inmungeno. Tambin es importante sealar la funcin que cumple la pared celular como barrera osmtica. Cpsula: Es una envoltura externa, ubicada por fuera de la pared celular, mucosa, que forma un gel que se adhiere a al clula. Como se seal, es una estructura variable que la pueden producir tanto bacterias Gram positivas como Gram negativas. La gran mayora son polisacardicas.

No es una estructura vital para la clula, su prdida no se relaciona con la prdida de viabilidad de la clula, pero s se relaciona con cambios en la morfologa colonial y en la prdida de la virulencia bacteriana. La virulencia de algunos patgenos se correlaciona con la presencia de cpsula, como por ejemplo: Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae tipo b. La cpsula protege a la bacteria de la fagocitosis, principal mecanismo de defensa que pone en juego el husped ante la presencia de bacterias capsuladas. Una respuesta efectiva para defenderse de este tipo de bacterias implica la produccin de anticuerpos que se unan especficamente a la cpsula facilitando as la opsonizacin y la fagocitosis. De su capacidad antignica se desprende el uso de la cpsula para la produccin de diferentes vacunas que estimulan la formacin de anticuerpos especficos, y han demostrado ser efectivas (vacuna anti-neumocccica, antiHaemophilus influenzae tipo b, anti-meningocccica A y C, etc). Las bacterias que producen cpsula forman en los medios slidos colonias acuosas, mucoides (M) o lisas (S), en cambio, las cepas rugosas (R) no producen cpsula. La prdida de la capacidad de formar cpsula por mutacin S a R se correlaciona con la prdida de la virulencia y aumento de la facilidad de destruccin por los fagocitos, pero no afecta la viabilidad. La presencia de cpsulas tambin se puede demostrar por tincin negativa con tinta china. La tinta chino no penetra la cpsula pero delimita un contorno refringente alrededor del cuerpo bacteriano sobre un fondo oscuro. Los antgenos capsulares son muy tiles en la clasificacin

e identificacin de diferentes bacterias; Streptococcus sp. , S. pneumoniae, Haemophilus sp. , Neisseria meningitidis sp, etc. Frimbias o pilis: Las fimbrias son estructuras filamentosas proteicas similares a los flagelos en su composicin y morfologa, pero no participan en la motilidad y son menos abundantes y ms cortas. Es una estructura variable que la poseen algunas bacterias. Las fimbrias o pilis comunes se relacionan con la adherencia de las bacterias a superficies inertes o vivas. De gran importancia en este sentido es la adherencia especfica que presentan muchas bacterias a determinados epitelios, jugando un papel fundamental en la colonizacin. Esto se debe a que las fimbrias encuentran en las clulas epiteliales receptores especficos para ellas. A modo de ejemplo, las cepas de Neisseria gonorrohoeae patgenas son aquellas que poseen fimbrias que se adhieren especficamente al epitelio uretral del hombre o al crvix uterino en la mujer. Las cepas de E. coli capaces de causar infeccin urinaria tienen fimbrias que les permiten una adhesin especfica al epitelio del aparato urinario. Tambin E. coli enteropatgena clsica (EPEC) tiene fimbrias que le permiten adherirse especficamente al epitelio intestinal para luego producir los cambios a ese nivel que determinarn la instalacin de la diarrea. Existen otros pilis llamados sexuales que son ms largos y se presentan en nmero de dos o tres por clula. Estos pilis sexuales intervienen en el intercambio gentico entre bacterias, de all su nombre. El apareamiento de dos bacterias y la transferencia de ADN a travs del pili sexual se conoce como conjugacin. Se transfiere material gentico de una clula donadora a una receptora y se transfiere slo pequeos sectores de ADN, en general un plsmido o una porcin de cromosoma movilizada por un plsmido. La clula donadora tiene un plsmido llamado conjugativo que posee la informacin gentica para que esa clula

produzca el pili sexual que le permita la unin a la clula receptora. Una vez unidas los pilis sexuales se retraen, permitiendo que las clulas se unan y pase el ADN de la clula donadora a la receptora, formndose, al parecer, una verdadera unin entre las membranas de las clulas que forma un puente para el pasaje de ADN. La clula receptora est estrechamente emparentada con la donadora y posee un receptor especfico para los pilis sexuales. Flagelos: los flagelos son filamentos largos, delgados, helicoidales, de longitud y dimetro uniforme. Son responsables de la motilidad de las bacterias. Presentan flagelos fundamentalmente: bacilos Gram positivos y Gram negativos. El flagelo est compuesto de 3 partes, el filamento, el gancho y el cuerpo basal. El filamento es externo con respecto a la clula y se une al gancho en la superficie celular. El gancho est fijado al cuerpo basal, que a su vez est anclado en la membrana plasmtica. El cuerpo basal est compuesto de un cilindro y dos o ms juegos de anillos contiguos a la membrana plasmtica, el peptidoglicano y, en el caso de las bacterias Gram negativas, a la membrana externa. Figura 8. Los flagelos pueden variar en nmero desde uno, unos pocos o varios cientos como en algunas cepas de E. coli. Segn el nmero de flagelos y su topografa en la clula podemos hablar de monotricas cuando tienen un flagelo

nico, lofotricas cuando presentan un penacho de varios flagelos polares, anfitricas si los flagelos se encuentran en ambos polos y peritricas cuando los flagelos estn distribuidos sobre toda la superficie celular. Esporos: algunas bacterias producen en su interior esporos o endosporas. Estas estructuras son muy resistentes al calor, la desecacin, la radiacin, los cidos, y los desinfectantes qumicos. Los producen algunas familias de bacilos Gram positivos. El esporo se forma en la clula vegetativa en ciertas condiciones como son la escasez de nutrientes. En lugar de dividirse la clula, sufre una compleja serie de fenmenos que dan lugar a la formacin de la espora. Una espora puede permanecer en ese estado durante muchos aos pero puede convertirse de nuevo en una clula vegetativa y volver a multiplicarse, fenmeno denominado germinacin de la espora. El descubrimiento de que hay bacterias que forman esporos fue de gran importancia para la microbiologa. El conocimiento de que existen estas formas altamente termoresistentes fue esencial para el desarrollo de mtodos adecuados de esterilizacin de medicamentos, alimentos, medios de cultivo microbiolgicos, etc. El ciclo vital de una bacteria productora de esporos se puede ilustrar como se ve en la figura 9. Los esporos son impermeables a los colorantes, entonces se pueden observar como regiones no teidas dentro de clulas que han sido coloreadas con colorantes bsicos como el azul de metileno. Existen adems coloraciones especiales para teir los esporos. Si observamos una espora al microscopio electrnico se ve que presenta numerosas capas. La capa ms externa es una delicada y delgada cubierta llamada exosporium. Le sigue la cubierta de la espora, que est compuesta de una capa o ms de una sustancia parecida a la pared celular. Por debajo de la cubierta se encuentra la corteza y dentro de ella, el ncleo o corazn que contiene la pared de la bacteria que dio origen al esporo, la membrana citoplasmtica y la regin nuclear. Las esporas son ricas en cido dipicolnico e iones calcio y hay evidencias que esta asociacin cumple una funcin importante para conferir la excepcional resistencia al calor de los esporos. Inclusiones y productos de almacenamiento: dentro de algunas bacterias se pueden observar grnulos y otras inclusiones. Casi siempre su funcin es el almacenamiento de compuestos energticos como el cido poli hidroxibutrico que se utiliza como fuente de carbono y energa. En otros grnulos se almacena glucgeno. Con frecuencia las inclusiones pueden verse directamente con el microscopio de luz sin tinciones especiales.

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