"RECUENTO DE LEUCOCITOS"

CUENTA DE LEUCOCITOS
OBJETIVO Aprender a realizar y aplicar la metodologa para un recuento de Leucocitos por milmetro cbico de sangre e interpretar el resultado. FUNDAMENTO Para el conteo de leucocitos, se usan mtodos sistemticos que son ms rpidos y precisos, y los mtodos manuales. Todo mtodo manual de recuento celular incluye 3 fases: Dilucin de la sangre Muestreo de la sangre diluida en un volumen Recuento de clulas en ese volumen Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los campos 1, 3,7 y 9. Para su dilucin, se hace lo mismo que para los hemates pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solucin que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el lquido de Turk. El lquido de Turk es hipotnico de modo que se destruyen los hemates y as no entorpecen en el recuento. El lquido de Turk consta de cido actico glaciar 2ml, violeta de genciana disolucin de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deber filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos. En un principio es un poco difcil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hemates hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son ms refringentes (ms brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hemates. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmtica y de la membrana nuclear (a veces ms) como lneas finas y brillantes. Esto se observa fcilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrs MATERIAL Pipeta de Thoma para glbulos blancos (perla blanca) Equipo para venopuncion (Tubo lila) Boquilla blanca Tubo de goma Tubos de ensayo Papel parafilm Cmara de Neubauer Cubrehematimetro Microscopio Gasas SUSTANCIAS Alcohol al 70% Sangre venosa Liquido de Turk PROCEDIMIENTO 1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica puncin venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA

2. Colocar el tubo de plstico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3. Llenar la pipeta de glbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilucin de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

5. Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automtico o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

6. Montar la laminilla de vidrio en la cmara para recuento. Debe estar limpia y seca. 7. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente.

8. Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten

9. Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar en los 4 cuadrados angulares. 10. En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeo de recuento y no se consideran los que estn en los lmites inferior y derecho. OBSERVACIONES

Cmara de Neubauer, 40x Enfocando uno de los cuadros laterales, se aprecian claramente los 16 cuadros pequeos donde se tienen que contar los leucocitos que hay en ellos. Se debe de tener cuidado de no confundir los restos de eritrocitos hemolizados con los leucocitos, que deben de aparecer como puntos purpuras o negros, como los que estn a las 9

RESULTADOS Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso seran nmero de clulas por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3

Despus de contar los glbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente clculo: N de leucocitos x mm3 = altura x dilucin x rea N de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000 N de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50 N de leucocitos x mm3 = N de leucocitos contados x 50 En el anlisis hecho, los resultados de la cuenta de clulas quedaron as por casilla:

El nmero de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 5 550/mm3, lo que indica un ndice normal, sin embargo apenas y supera el mnimo, pues el paciente era un hombre, de 41 aos de edad. VALORES DE REFERENCIA (Millones de clulas/mm3) Hombres y Mujeres:..5 000-10 000 CONCLUSIN Los leucocitos son las clulas sanguneas que dentro del organismo participan desarrollando diferentes funciones como son: fagocitosis, defensa inmunolgica especfica o inespecfica. Existen dos grandes tipos de estos glbulos: Polimorfonucleares: Basfilos Eosinfilos Neutrfilos Mononucleares: Linfocitos (clulas T y clulas B) Monocitos El recuento leucocitario representa el nmero de leucocitos en un litro de sangre completa. La cuantificacin o recuento de leucocitos es muy importante para el diagnstico de enfermedades. Un bajo nmero de glbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse a: Insuficiencia de la mdula sea (por ejemplo: debido a infeccin, tumor o cicatrizacin anormal). Enfermedades vasculares del colgeno (como el lupus eritematoso sistmico). Enfermedad del hgado o el bazo. Radioterapia o exposicin a la radiacin. Un alto nmero de glbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse a:

Anemia. Tumores de la mdula sea. Enfermedades infecciosas. Enfermedad inflamatoria (como artritis reumatoide o alergia). Leucemia. Estrs emocional o fsico intensos.

Dao tisular (por ejemplo, quemaduras). Es muy importante comentarle al mdico acerca de cualquier medicamento que se est tomando, incluyendo productos de venta libre. Ciertos frmacos pueden interferir con los resultados del examen, como Sulfonamidas, Alopurinol, cido acetilsaliclico (aspirina), cloroformo, corticosteroides, epinefrina, heparina, quinina o triamtereno La cmara de Neubauer o hemocitmetro es una lmina portaobjeto gruesa, en cuyo centro se hayan dos superficies cuadriculadas iguales, separadas del resto de la lmina por surcos y dos barras transversales algo ms elevadas. Una laminilla cubreobjetos pticamente plan, que al colocarse sobre las barras elevadas de la lmina forma una cmara entre el cubreobjetos y la superficie cuadriculada, teniendo una altura de 0.1mm

En la cmara de Neubauer las reas de recuento de eritrocitos y leucocitos son diferentes, como se muestra en la imagen. .

Bibliografa: Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos, articulo web consultado el da 8 de marzo de 2012 en: http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisishematologicos-y-citologicos.html

Conteo de glbulos blancos, artculo consultado el da 16 de marzo en http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003643.htm

Martnez Fragoso, Vicente. Manual de Biometra Hemtica.CBTis199, Mxico, 2012. Pp. 22-24