Ponente: Fernando Ruiz Iribarne fernando@ral-sa.

com

EXPORT TRAINING
HEMOSTASIS

HEMORRAGIA VS TROMBOSIS
HEMORRAGIA TROMBOSIS

VS

HEMOSTASIS COAGULACIN

HEMOSTASIS
Es

la reaccin en cadena que se produce para parar una hemorragia. la transformacion de la sangre lquida a slida.

COAGULACIN
Es

TODOS LOS TEST REALIZADOS EN LABORATORIO ACABAN EN UN COGULO.

SE NECESITA EN

Preoperatrios Controles Hepticos Control de terapia oral Control de anticoagulante Control de embarazo

DIAGNOSIS

PT (test de quick )

Terapia de Warfarina (Coumadina) Obstrucciones del tracto Biliar Cirrosis

Coagulacin intravascular diseminada

Hepatitis Mala absorcin Deficiencia de la Vitamina K Deficiencia del Factor VII Deficiencia del Factor X Deficiencia del Factor II (Protrombina)

Deficiencia del Factor V

Deficiencia del Factor I (Fibringeno)

DIAGNOSIS

APTT Control de Heparina Cirrosis Coagulacin diseminada intravascular Deficiencia del Factor XII Hemofilia A (Def. Factor VIII) Hemofilia B (Def. Factor IX) Hipofibrinogenemia Mala absorpcin Enfermedad de Von Willebrand Control anticoagulante de Lupus

DIAGNOSIS

FIB (I):
Alta

Concentracin:

Inflamacin

(Neumonia, TB, Artritis Reumatoide) Infarto de Miocardio Sndrome Nefrtico Cancer, Melanoma mltiple Enfermedad de Hodking Coagulacin diseminada intravascular no compensada Embarazo Diferentes enfermedades vasculares cerebrales

DIAGNOSIS

FIB (II):
Baja

Concentracin:
diseminada intravascular no

Hepatopata

Coagulacin

compensada Cancer Disfibrinogenemia Fibrlisis primaria y secundaria Hipofibrinogenia Hereditaria Consumo de drogas y alcohol

FASES de la HEMOSTASIS

Fase Plasmtica:

Es la fase mas importante del estudio de todas las proteinas que participan en los procesos de la coagulacin.

Fase Dinmica:

Es la elasticidad del cogulo

Tromboelastgrafo Agregacin plaquetaria Viscosidad (Reometra)

FASE PLASMTICA

Via Extrnseca
Se

activa por contacto del tejido con la tromboplastina activada activa por el contacto con el flujo sanguneo

Via Intrnseca
Se

FASE PLASMTICA
Cascada de Mac Farlane
EXTRNSECA Factor VII
ACTIVADA POR EL CONTACTO DE TEJIDO CON LA TROMBOPLASTINA

INTRNSECA Factor XII Factor XI Factor IX Factor XIIa Factor XIa Factor IXa
Factor VIIIa

ACTIVADA POR EL CONTACTO CON EL FLUJO SANGUNEO

Factor VIIa

Factor X

Factor VIII

Factor Xa Factor III,CA++ Factor V Factor XIII Factor Va

PT
PLASMINGENO (Se activa evitando los polmeros de la fibrina)

Factor II

Factor IIa

Factor XIIIa

PPT
COGULO

Factor I

Factor Ia

PLASMINA

FIB

FASE PLASMTICA

Cascada corta: Para recordar la secuencia de proteinas

hacemos un pequeo resumen.

TROMBOPLASTINA ACTIVADA

Protrombina (II)

Trombina (II a)

Factor XIII

Fibrina (I)

Fibrina (Ia)

FIBRINA (P)

Plasmingeno

Plasmina

PREPARACION DE LAS MUESTRAS

El anticoagulante bloquea los iones de Ca++ (Citrato sdico 3.2%) Una (1) parte de anticoagulante + nueve (9) partes de sangre (1:10) bien mezcladas Centrifugar 10-12 a 3.000 rpm Separar el plasma y dispensar en un tubo de plstico Usar muestras fresca, antes de las 4 horas siguientes a la extraccin (Si no es posible, conservar en nevera (4-8C) )

Mezclar bien el plasma a temperatura ambiente antes de cualquier test.

VIA EXTRNSECA

Test de Quick o PT (Tiempo de Protrombina)

Preparacin del pool de plasmas con muestras normales. Es un plasma con el 100% de actividad de protenas

POOL: Es la referencia de cualquier laboratorio para elaborar la curva de calibracin.

Para preparar el pool de plasmas normales medir el tiempo de coagulacin de varios plasmas. Solo usar los de tiempos de coagulacin ms bajos (Normales) Mezclar para obtener el pool Efectuar la lectura del tiempo de coagulacin de ese pool, el cual corresponde al 100% de la actividad de las protenas.

VIA EXTRNSECA

Ejemplo para obtencin de un pool: Plasma 1: 12.4 segundos Plasma 2: 12.8 segundos Plasma 3: 12.4 segundos Plasma 6: 21.2 segundos Plasma 7: 12.5 segundos Plasma 8: 17.6 segundos

Plasma 4: 12.8 segundos

Plasma 5: 15.0 segundos

Plasma 9: 12.1 segundos

Plasma 10: 26.2 segundos

Tomar los valores ms bajos y descartar el resto. En este caso los plasmas 1, 3, 7 y 9 sern los adecuados para hacer el pool. Posteriormente mezclar la seleccin de plasmas y efectuar un test de PT Tiempo del Pool = 12.4 (100 % de actividad) El tiempo obtenido en este pool, se considerar como el 100% de actividad de las protenas.

VIA EXTRNSECA
Preparacin

de la curva de calibracin

El primer punto de la curva ser el del 100% de actividad (tiempo del pool) De ese pool de plasmas se preparar una dilucin al 50% con solucin salina y se efectua el test de PT, luego se diluye al 25% con solucin salina y se vuelve a leer el tiempo de PT 50% :1 parte del pool + 1 parte de solucin salina 25%: 1 parte del pool + 3 parte de solucin salina

VIA EXTRNSECA

Para preparar la curva de calibracin:

Poner la barrita de mezcla en todos los cubiletes Dispensar 200 ul de Tromboplastina clcica en todos los cubiletes Incubar los reactivos durante 5 minutos en el cubilete Poner el cubilete en la zona de lectura y presionar RESET para poner el cronmetro a cero. Cuando est a cero aadir 100 ul de plasma El equipo arranca automticamente y parar en el momento de la formacin del cogulo. Obtener resultados.

VIA EXTRNSECA

Los valores obtenidos se usarn para elaborar la curva de calibracin. ACTIVIDAD

100

50
25

12,6

14,4

17,8

TIEMPO

VIA EXTRNSECA

Para tener una linea recta, los valores se pueden transferir a un papel semi-logartmico: 1/Act vs Tiempo 1/ACTIVIDAD
1/12,5 = 0,008

Papel Semi-log

1/25=0,04 1/50=0,02 1/100=0,01 12,6 14,4 17,8 21,8

TIEMPO

VIA EXTRNSECA

Para diferentes reactivos, se obtienen diferentes curvas de calibracin

ACTIVIDAD A B C

Donde A, B y C son diferentes tromboplastinas clcicas

TIEMPO

VIA EXTRNSECA

La Asociacin internacinal de Hematologa estableci una tromboplastina de referencia que es el la Tromboplastina de Manchester.
La pendiente de la curva de calibracin indicar la sensibilidad del test frente al reactivo de referencia.

VIA EXTRNSECA

La pendiente se llamara ISI (Internal Sensitivity Index)

ACTIVIDAD ISI 1,8

ISI 1,5 ISI 1

Donde A, B y C son diferentes tromboplastinas clcicas

TIEMPO

VIA EXTRNSECA

Gernon ofrece 1 tipo de tromboplastina clcica la cual es lquida:

HEMOSPLATIN

ISI 1.2

VIA EXTRNSECA

RATIO:
RATIO = TIEMPO PT Muestra

TIEMPO PT Pool

INR (International Normalised Ratio):

ISI

INR = (RATIO)

Rangos teraputicos del INR

Indicacin teraputica
Profilaxis de la trombosis venosa

INR (Rango Terapetico)

2,0-3,0

(Procedimiento quirrgico de alto riesgo) Tratamiento de la trombosis venosa

Tratamiento del embolismo pulmonar Prevencin del embolismo sistmico Vlvulas cardacas histicas Infarto agudo al miocardio (para prevenir el embolismo sistmico) Cardiopata valvular Fibrilacin auricular Embolismo sistmico recurrente Vlvulas cardacas protsicas mecnicas (alto riesgo)

2,0-3,0 2,0-3,0
2,0-3,0 2,0-3,0 2,0-3,0 2,0-3,0 2,0-3,0 2,0-3,0 2,0-3,0 2,5-3,5

VIA INTRNSECA

Test de APTT (Tiempo parcial de Tromboplastina activada) Para efectuar este test (de uno en uno):

Poner la barrita de mezcla en todos los cubiletes Dispensar 100 ul de reactivo de APTT en un cubilete Dispensar 100 ul de plasma en el cubilete y mezclar bien Poner el cubilete en la zona de lectura Incubar durante 4 minutos exactamente Cuando est a cero aadir 100 ul de CaCl2 El equipo arranca automticamente y parar en el momento de la formacin del cogulo. Obtener los resultados
NOTA: Es posible expresar el resultado en RATIO previamente calculando el tiempo del pool.

FIBRINGENO

Fibringeno Es necesario diluir las muestras 1:10 con IBS debido al la alta concentracin de Fibringeno en sangre. Preparacin de la curva de calibracin Del calibracin (Concentracin C) preparar soluciones 2C (1:5), C (1:10) y C/2(1:20) : 1:5 1 medida de calibrador + 4 medida de IBS 1:10 1 medida de calibrador + 9 medida de IBS 1:20 1 medida de calibrador + 19 medida de IBS
Anotar los resultados en un papel

ESTUDIO DEL FIBRINGENO

CONCENTRACIN
mg/dl gr/l

C1 C2 C3

T1

T2

T3

TIEMPO

FIBRINGENO

Para realizar el test:

Poner la barrita de mezcla en todos los cubiletes Dispensar 200 ul de la muestra prediluida 1:10 con IBS en todos los cubiletes Poner el cubilete en la zona de lectura Cuando est a cero aadir 100 ul de reactivo El equipo arranca automticamente y parar en el momento de la formacin del cogulo. Obtener los resultados NOTA: Los laboratorios que normalmente tiene pacientes con valores altos de fibringenos, se recomienda usar muestras prediluidas al 1:20 con IBS

FACTORES DEFICIENTES

Deficiencia de factores en plasmas Para efectuar los test:

Aadir 1 parte de plasma deficiente a 1 parte de plasma como pool Efectuar el test de coagulacin Si el tiempo es el mismo que el inicial: la muestra es deficiente en el mismo factor que el plasma aadido Si el tiempo es menor que el inicial: la muestra es deficiente en otro factor que el plasma aadido

FACTORES DEFICIENTES

Las factores mas importantes deficientes son:

Factor VIII: Hemofilia A Factor IX: Hemofilia B

EXPORT TRAINING
EQUIPOS

METODOLOGA DE TRABAJO
CUBILETE CON BARRITA AGITADORA LMPARA FOTOCLULA

IMPRESORA
IMAN

MOTOR

CIRCUITO ELECTRNICO

DISPLAY

METODOLOGA DE TRABAJO
1

ABS.
2 3

Poner un cubilete con 200 ml de tromboplastina con una barrita en el cubilete en el lector (en caso de PT ) Poner el tiempo a cero.

Aadir 100 ml de plasma.

Automticamente inicia el cronmetro por variacin de densidad ptica.

4 5
1 2 3 4

Tiempo de seguridad (unos 5 segundos)

Con la formacin de los polimeros de fibrina se para el mezclador y el temporizador.

TIEMPO

CLOTTY

CLOT SP

CLOT 2B

AUTOCLOT

NICHO DE MERCADO
NMERO DE PACIENTES
MANUAL INSTRUMENTO de 1 CANAL PTICO MECNICO TURBODENSITOMTRICO Clotty, Clot SP DOS CANALES Clot 2B

NMERO DE TEST

DOS CANALES Clot 2B

AUTOCLOT
DOS CANALES Clot 2B CUATRO CANALES TOTALMENTE AUTOMTICO MUY GRANDE Y TOTALMENTE AUTOMTICO

Muchas gracias por su atencin

Fernando Ruiz Iribarne fernando@ral-sa.com