EFECTO DE HONGOS ENTOMOPATOGENOS EN LA CATARINA Hippodamia convergens DEPREDADOR DEL PSLIDO ASITICO DE LOS CTRICOS Diaphorina citri Kuwayama

Effect of entomopathogenic fungi on the ladybug Hippodamia convergens a predator of the asian citrus psillid Diaphorina citri Kuwayama.
Reyna Ivonne Torres-Acosta1, Jos Isabel Lpez-Arroyo1, Jorge Ariel Torres-Castillo2, Humberto de la FuenteSaucedo1, Efran Acosta-Daz1, Juan Martnez Medina1.
1 2

INIFAP, Campo Experimental General Tern, car. Montemorelos-China Km 31 Gral. Tern, N. L. Mxico 67400. Universidad Autnoma de Nuevo Len, Laboratorio de Biotecnologa-Facultad de Agronoma, Francisco Villa S/N, Col. Ex Hacienda El Canad, Escobedo, Nuevo Len, Mxico. 66050. ivonnetorresacosta@yahoo.com.mx

RESUMEN En Mxico el combate del pslido Diaphorina citri se realiza por diversas estrategias, una de ellas es el control biolgico con entomopatgenos; sin embargo, los insectos benficos no estn exentos de ser afectados, por este motivo, se estudio el efecto de entomopatgenos sobre la catarina Hippodamia convergens, evaluando cinco cepas de Metarhizium anisopliae y cuatro de Isaria fumosorosea. El testigo fue tratado con agua ms Tween 80 al 0.01%. Los tratamientos se incubaron a 25 C 1C, 70% HR con 16:8 horas luz: oscuridad. Los datos analizados demuestran que la cepa de M. anisopliae que caus menor mortalidad en H. convergens fue la C121 (28.9%) y en I. fumosorosea la cepa C126 con un 5%. Se demuestra que los enemigos naturales no estn exentos a la infeccin por entomopatgenos; sin embargo, algunas cepas causan bajo porcentaje de mortalidad en adultos de H. convergens
PALABRAS CLAVE: Metarhizium, Isaria, Diaphorina citri, Hippodamia convergens.

Abstract. In Mexico, the combat of psyllid Diaphorina citri it is carried out throughout several strategies, one of them is the biological control with entomopathogens; however, the beneficial insects could be damage, because of this, it was studied the effects of entomopathogenic fungi on the ladybug
Hippodamia convergens, by the evaluation of five strains of Metarhizium anisopliae and four strains of Isaria fumosoroseus. The control was treated with water plus 0.01% of Tween 80. Treatments were incubated at 25 C 1C, 70% RH with 16:8 h light:darkness. Analyzed data demonstrated the minor mortality was caused by strain C121 (28.9%) of M. anisopliae and strain C126 (5%) of I. fumosoroseus. It was demonstrated that natural enemies are not free of infection caused by entomopathogens, however, some strains could cause low mortality percentage of H. convergens adults.
PALABRAS CLAVE: Metarhizium, Isaria, Diaphorina citri, Hippodamia convergens.

Introduccin El pslido asitico de los ctricos constituye un peligro latente para la citricultura nacional por ser el vector de la enfermedad conocida como Huanglongbing o HLB, esta enfermedad es la responsable de la disminucin en rendimientos y provoca la muerte de arboles frutales de ctricos. La bsqueda de un mtodo de control incluye desde el uso del control qumico hasta el control biolgico con parasitoides, depredadores y entomopatgenos. Sin embargo, el control biolgico se enfrenta a una serie de problemas para mantener su eficacia, entre las dificultades ms importantes estn la integracin de entomopatgenos con depredadores o parasitoides, esto impide la realizacin de programas de manejo ms sustentable en el control de plagas. En el caso de D. citri diversos investigadores han descrito varios entomopatgenos atacando al pslido: Isaria fumosorosea Wize (= Paecilomyces fumosoroseus); Hirsutella citriformis Speare; Cephalosphorium lecanii Zimm (Verticillium lecanii); Cladosporium sp. Berk; Capnodium citri Berk & Desm y Beauveria bassiana (Bals.) Vuill (Csique Valdez et al., 2010; 2011, Hall et al., 2012, Gandarilla-Pacheco et al., 2011, Reyes-Rosas et al., 2009, Lezama-Gutirrez, 2011), mismos que se pueden ser formulados y aplicados en campo, donde normalmente interactan en forma conjunta la plaga con enemigos naturales, un ejemplo es la catarinita Hippodamia convergens un excelente depredador de ninfas del pslido, la cual no se encuentra exenta de ser infectada por los hongos entomopatgenos al igual que otros insectos no blanco, por este motivo, se requiere pasar por una etapa previa en donde se establezcan los posibles efectos negativos de la interaccin entomopatgenos-insectos benficos, mediante pruebas de laboratorio. El estudio de este aspecto es importante en la conservacin de la fauna benfica (Vzquez, 2003), esto permitir evitar el uso de aquellas cepas con consecuencias negativas y fomentar el uso de los que causen un menor impacto ecolgico (Iannacone y Lamas, 2003). Por lo anterior se realiz un estudio de patogenicidad y virulencia de diversas cepas de Metarhizium anisopliae e Isaria fumosorea en adultos de la catarina H. convergens, depredador del pslido asitico de los ctricos D. citri. Materiales y Mtodo La parte experimental de la presente investigacin se llev a cabo en el laboratorio de Entomologa del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales Agrcolas y Pecuarias (INIFAP) del Centro Experimental de General Tern (CEGET), en Nuevo Len, Mxico. Insectos: Los especmenes utilizadas en el presente estudio fueron proporcionados por el laboratorio de Entomologa del INIFAP-CEGET. Se utilizaron adultos de la catarina H. convergens, se utilizaron adultos, mismos que fueron colectados directamente de campo en los cultivos de girasol, frijol y trigo. La colecta se realiz mediante succionadores y se mantuvieron en el laboratorio dos semanas antes de realizar los bioensayos con el objetivo de desechar el material biolgico que vinieran parasitadas con himenpteros o que estuvieran a punto de morir por causas ajenas al experimento. Las catarinas se alimentaron con dieta artificial, huevos de Sitotroga cerealella y agua-miel y el alimento fue cambiado cada tercer da. Los datos de mortalidad se tomaron diariamente. Ambos insectos no blanco fueron mantenidos a 25 C 1C, 70% HR con 16:8 horas luz: oscuridad. Cepas: Las cepas de hongos entomopatgenos utilizados en el presente trabajo pertenecen a la Coleccin del INIFAP (CIRNE-GENERAL TERN), y se eligieron con base en los altos ndices de virulencia que presentaron sobre adultos de D. citri

(Torres, 2012). Los datos biolgicos y ecolgicos de las cepas usadas en este estudio se presentan en el cuadro 1. La cepa IS45 y 126 de I. fumosorosea fueron aisladas originalmente de D. citri, mientras que el resto de las cepas, fueron aisladas directamente de suelo mediante la tcnica de cinco de oros con el insecto trampa; Tenebrio molitor (Pea, 2011). La identidad de los hongos fue confirmada mediante caractersticas morfolgicas y coloracin del conidio, conidiforo y colonia, de acuerdo a Humber (1998). Los hongos se multiplicaron en Agar Papa Dextrosa, el medio de cultivo se esteriliz a 120 C por 15 minutos (15 lb/pg2) posteriormente se verti en Cajas Petri y se dejaron en reposo por 24 horas para gelificar el medio de cultivo. La siembra de los conidios se hizo con un asa bacteriolgica estril mediante la tcnica de estras, en el interior de una campana de flujo laminar. Posteriormente el material biolgico se incub por 20 das a una temperatura de 25 C (Arthurs y Thomas 2001).
Cuadro 1. Aislamientos de hongos entomopatgenos evaluados para el control de adultos de Diaphorina citri el pslido asitico de los ctricos.

Clave 127 122 12.13 123 121 126 129 128 IS45

Localidad Municipio Estado Gral., Tern Nuevo Len Hualahuises Nuevo Len Barretal Tamaulipas Gral., Tern Nuevo Len Gral., Tern Nuevo Len Gral., Tern Nuevo Len Hualahuises Nuevo Len Hualahuises Nuevo Len Gmez Tamaulipas Faras

Especie hospedera Tenebrio molitor Tenebrio molitor Tenebrio molitor Tenebrio molitor Tenebrio molitor Diaphorina citri Tenebrio molitor Tenebrio molitor Diaphorina citri

Hongos entomopatgenos Gnero Especie Metarhizium anisopliae Metarhizium anisopliae Metarhizium anisopliae Metarhizium anisopliae Metarhizium anisopliae Isaria fumosorosea Isaria fumosorosea Isaria fumosorosea Isaria fumosorosea

Bioensayos: Para la realizacin de esta fase se utilizaron cuatro placas de hongos entomopatgenos. Las esporas utilizadas tenan entre una y dos semanas de edad. Las esporas se colectaron en agua destilada estril con Tween 80 al 0.03% + Citri-King para romper la tensin superficial. La suspensin se agit durante 3 minutos y se cuantificaron las esporas en una cmara de Neubauer, el conteo de esporas se realiz en un microscopio compuesto (40x) y se obtuvo el promedio de conidios por mililitro. Una vez conociendo la cantidad de conidios/mL de cada cepa de hongos entomopatgenos, se ajust a una concentracin de 1x108 conidios/mL (Ribeiro et al. 2007). La tcnica de aplicacin en los bioensayos fue por aspersin. El testigo fue tratado solo con Tween 80 al 0.03% + Citrus King (%) y colocado bajo las mismas condiciones que los tratamientos. Las suspensiones de esporas fueron preparadas el mismo da del bioensayo. C. Los individuos del testigo se trataron con agua destilada estril con Tween 80 al 0.3%. Anlisis Estadstico: El bioensayo se estableci bajo un diseo experimental completamente al azar, en el caso de I. fumosorosea se utilizaron cuatro tratamientos de cuatro repeticiones con 10 individuos cada uno. En el caso de M. anisopliae se utilizaron 7 tratamientos con cuatro repeticiones y 10 individuos cada uno. El porcentaje de mortalidad fue determinado durante un mes en base al nmero de insectos muertos en los tratamientos y comparado con la mortalidad del testigo. Los cadveres fueron desinfectados con hipoclorito de sodio y lavados en cuatro ocasiones, posteriormente los adultos fueron colocados en cmara hmeda para propiciar la esporulacin del hongo.

3. Resultados y discusin Todas las cepas usadas en el presente estudio fueron patognicas en los adultos de la catarinita H. convergens, sin embargo, la virulencia en el caso de I. fumosorosea fluctu desde un 5 hasta un 23% de mortalidad, en el caso de Metarzhizium el porcentaje de mortalidad fluctu entre un 28.9 hasta un 69.4% (Figura 1).

Figura 1. Mortalidad en adultos de la catarinita Hippodamia convergens inoculadas a una concentracin de 1x108 conidios/ml con Isaria fumosorosea y Metarzhizium anisopliae

Sin embargo, al realizar la prueba de infeccin por entomopatgenos, el porcentaje de catarinas con signos visibles de micelio es muy bajo (Figura 2).

Figura 1. Porcentaje de adultos micosados de la catarinita Hippodamia convergens inoculadas a una concentracin de 1x108 conidios/ml con Isaria fumosorosea y Metarzhizium anisopliae

Los datos se asemejan a los encontrados por James y Lighthart (1994) quienes realizaron bioensayos con aislamientos de M. anisopliae, Beauveria bassiana y Paecilomyces fumosorosea contra H. convergens y sealan un rango de mortalidad entre 56 y 95%. Ribeiro et, al, (2007)

seala que las cepas de Lecanicillium lecanii y M. anisopliae utilizadas en su reporte, son inocuos para los organismos benficos a una concentracin de 2.1 x107 conidios/mL. Ignoffo (1981) demostr que Nomuraea rileyii no causo mortalidad en Chrysoperla carnea cuando las crisopas fueron expuestas a altas concentraciones en ensayos de laboratorio. Sin embargo, bajo las condiciones en que se desarroll este trabajo se demuestra que no siempre se presenta este caso, por lo anterior se sugiere que las cepas seleccionadas para el control de D. citri, sean probadas con insectos benficos mediante bioensayos con el fin de descartar cepas altamente infectivas a insectos benficos. Conclusin En este estudio las cepas del gnero I. fumosorosea son menos virulentas para H. convergens, contrario a las cepas de M. anisopliae. Las cepa IS45 es prometedora en el control de D. citri por causar un buen porcentaje de mortalidad en el pslido (Torres, et. al., 2012) y causar bajo impacto en la mortalidad de insectos no blanco. Agradecimientos Este trabajo fue apoyado por el Fondo Sectorial SAGARPA-CONACYT 2009-108591. Se agradece a todo el personal del laboratorio de Entomologa del CEGET por valiosa aportacin para la realizacin del presente estudio. Literatura citada Casique-Valds, R., A.Y. Real-Molina, J.N. Ek-Mass, B.M. Snchez-Lara, A.Y. Reyes-Martnez, J.I. Lpez-Arroyo, y S.R. Snchez-Pea. 2010. Avances en el anlisis de los hongos entomopatgenos de Diaphorina citri en el Noreste de Mxico. 1er Simposio Nacional sobre Investigacin para el Manejo del Pslido Asitico de los Ctricos y Huanglongbing en Mxico. Monterrey, Nuevo Len, Mxico. 273- 274. Casique-Valdes, R., A.Y. Reyes-Martnez, S.R. Sanchez-Pea, M.J. Bidochka and J.I. LpezArroyo. 2011. Pathogenicity of Hirsutella citriformis (Ascomycota: Cordycipitaceae) to Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae) and Bactericera cockerelli (Hemiptera: Triozidae). Florida Entomologist. 94 (3), 703-705. Gandarilla-Pacheco, F.L., J.I. Lpez-Arroyo, I. Quintero-Zapata, R. RodrguezGuerra, C.F. Sandoval-Coronado. 2011. Bioensayos para la evaluacin de Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin contra ninfas de Diaphorina citri Kuwayama (Hemptera: Psyllidae). En: Memorias del XXXIV Congreso Nacional de Control Biolgico, Monterrey, N.L. Goettel, M.S., Poprawski, T.J., Vandenberg, J.D., Li, Z. and Roberts, D.W. 1990 Safety to Non target Invertebrates of Fungal Biocontrol Agents. In: Lard, M., Lacey, L.A. and Davidson, E.W., Eds. Safety of Microbial Insecticides. CRC Press, pp. 209-231. Hall, D.G., Hentz M.G., J.M. Meyer, A.B. Kriss, T.R. Gottwald and D.G. Boucias. 2012. Observations on the entomopathogenic fungus Hirsutella citriformis attacking adult Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae) in a managed citrus grove. Biocontrol. DOI: 10.1007/s10526-012-9448-0.

Humber, R.A., 1989. Synopsis of a revised classication for Entomophthorales (Zygomycotina). Mycotaxon. 34, 441460 Ignoffo, C.M. 1981. The fungus Nomuraea rileyi as a microbial insecticide. pp. 513-538 In: Burges H.D. (ed.). Microbial Control of Pests and Plant Diseases 1970-1980 1st ed. (Edited by), Academic Press, London. Iannacone, J.; G. Lamas: Efectos toxicolgicos de extractos de molle (Schinus molle) y lantana (Lantana camara) sobre Chrysoperla externa (Neuroptera: Chrysopidae) en Per, Agricultura Tcnica 63(4):347-360, Chile, 2003. Lezama-Gutirrez, R., G. Galvn-Gutirrez, Y. Contreras-Bermudes, S. Daz-Flores, G. ReyesMartnez, M. Barba-Reynoso, C. Angel-Sahagn, H.C. Arredondo-Bernal. 2011. Presencia natural y patogenicidad de los hongos Metarhizium anisopliae y Cordyceps bassiana (Ascomycetes) en ninfas y adultos de Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae) en el Estado de Colima. En: Memorias del XXXIV Congreso Nacional de Control Biolgico, Monterrey, N.L. Reyes-Rosas, M.A., Lpez-Arroyo, J.I. and Loera-Gallardo, J. 2009. Presencia del hongo entomopatgeno del pslido asitico de los ctricos Diaphorina citri, en Ro Bravo, Tamaulipas, Mxico. p.420-425. En: Memorias del XXXII Congreso Nacional de Control Biolgico, Villahermosa, Tab., Mx. Ribeiro, C. E., S. de Freitas, N. H. Teixeira & P. L. G. Amorim. 2007. Selectividade de Lecanicillium lecanii e Metarhizium anisopliae para larvas de primerio nstar de Ceraeochrysa cincta (Neuroptera: Chrysopidae) em laboratrio. Acta Sci. Agron. 29: 563-568. Torres-Acosta, R.I., O. Prez-Gonzlez, S. Daz-Martnez, R. Rodrguez-Guerra, J.A. TorresCastillo, S.R. Snchez-Pea y J.I. Lpez-Arroyo. 2012. Effect of entomopathogenic fungi on Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae) and its predator Hippodamia convergens rd (Coleoptera: Coccinellidae). 3 Annual Citrus Health Research Forum. Ft. Collins, CO. Upadhyay, R.K. 2003. Advances in Microbial Control of Insect Pests. Kluwer Academic/ Plenum Publishers. Proceeding 3rd International Conference on Biopesticides, Kuala Lumper, Malaysia, pp. 157-160. Vzquez, L.: Manejo integrado de plagas. Preguntas y respuestas para agricultores y extensionistas, Ed. Cidisav, La Habana, 2003.