CONTROL, MONITOREO Y MANEJO DE MICOTOXINAS EN EXPLOTACIONES AVCOLAS

1. Principales micotoxinas de importancia en la avicultura En la tabla 1 se muestran las micotoxinas de mayor ocurrencia en avicultura

Tabla 1: Principales micotoxinas, hongos productores, alimentos ms contaminados y condiciones para su aparicin en la avicultura.

Aflatoxinas Las Aflatoxinas son metablitos secundrios, producidos por los hongos Aspergillus flavus, A. parasiticus y A. nominus. Las aflatoxinas fueron descubiertas en 1960, al provocar una enfermedad con alta mortalidad en pavos en Inglaterra que fue conocida como Enfermedad X del pavo. En esta enfermedad, miles de aves murieron despus que consumieron una racin formulada con torta de almidn. El principal hongo encontrado en la torta de almidn fue Aspergillus flavus. En la aflatoxicosis en el campo, una de las caractersticas ms marcadas es la mala absorcin que se manifiesta tales como partculas de la racin mal digeridas en las excretas de las aves; est asociada con esteatorrea o excrecin aumentada de lipidos. Esta mala absorcin perjudica la conversin alimenticia y, consecuentemente, aumenta el costo de la produccin. La esteatorrea presente en la aflatoxicosis puede ser severa con el aumento de grasas en la materia fecal; en pollos de engorde es acompaada por una disminucin en las actividades especficas y totales de la lipasa pancretica, principal enzima digestiva de las grasas, y por la disminucin de las sales

biliares, necesarias tanto para la digestin como para la absorcin de grasas, llevando a esteatosis heptica (hgado graso). Tambin se observa extrema palidez de las mucosas en pollos y ponedoras que reciben racin contaminada con aflatoxinas; esta pigmentacin deficiente parece ser el resultado de la menor absorcin, de la disminucin en el transporte y de la deposicin residual de los carotenoides de la dieta, siendo la aflatoxicosis identificada como Sndrome del ave plida. Efecto de las Aflatoxinas Sobre la Postura La percepcin de los disturbios causados por las aflatoxinas sobre la produccin de huevos es posible solamente despus de algunos das o semanas. La disminucin de la produccin est precedida por la reduccin en los niveles sanguneos de protenas y lpidos. La presencia de folculos maduros antes del consumo de la micotoxina en el tracto reproductivo de las aves justifica esta respuesta tarda. Aves ponedoras comerciales que consuman una dieta con 20 ppm de aflatoxinas durante 7 das presentan reduccin en la produccin de huevos a partir del octavo da, bajando 35% su postura hasta una semana despus de retirada la micotoxina de la dieta. Adems de reducir la produccin de huevos, la aflatoxicosis tambin es responsable de la reduccin del tamao del huevo, as como por la reduccin proporcional en el tamao de las yemas, debido a los perjuicios causados en la sntesis proteica y lipdica. Con todo, la deposicin de calcio en la cscara de los huevos por si sola no es afectada. La resistencia de la cscara aumenta cuando las aves consumen aflatoxinas, debido a que la reduccin en la cscara de esos huevos no es en la misma proporcin de la reduccin que ocurre en clara y yema. Este aumento del espesor de la cscara puede afectar la eclosionabilidad, por reduccin en el intercambio gaseoso entre embrin y medioambiente. La mejor explicacin para los perjuicios en la eclosionabilidad de huevos frtiles, producidos por aves que consuman aflatoxinas, est en la transmisin de estas micotoxinas a los huevos. La aflatoxina B1 puede ser transmitida tanto por las yemas como por las claras. Las Aflatoxina B1, M1 y el aflatoxicol pueden ser encontrados en los huevos 24 horas despus del inicio del consumo de la racin contaminada. Por tanto, es necesario aclarar que, el ndice de postura es afectado solamente 8 das despus del inicio de la intoxicacin, pero la eclosionabilidad comienza a ser afectada inmediatamente despus del inicio del consumo de la racin contaminada. Tricoticenos Las principales micotoxinas txicas del grupo de los tricoticenos comprenden principalmente la Toxina T-2, Deoxynivalenol (DON), Diacetoxyscirpenol (DAS), producidas por hongos de diversos gneros, principalmente por especies de Fusarium.

Estudios con intoxicaciones crnicas involucrando toxina T-2 o DAS provocaron reduccin en el consumo de racin y ganancia de peso, lesiones orales, necrosis de los tejidos linfoide, hematopoyetico y mucosa oral, con eventuales disturbios nerviosos (posicin anormal de las alas, disminucin de reflejos), emplume anormal y disminucin en el espesor de la cscara de los huevos. Particularmente en ponedoras, las lesiones orales ocurren en aproximadamente 50% de los lotes cuando estas aves reciben 2 ppm de la toxina T-2, disminuyendo paralelamente la produccin de huevos. La toxina T-2 es txica para los macrfagos de los pollos, inhibiendo su capacidad fagocitaria. Esta toxina tambin puede formar perxidos a partir de los lpidos, trayendo como consecuencia la disminucin de la concentracin de vitamina E. Otras aves como pavos y gansos son ms susceptibles a la toxina T-2 que los pollos de engorde. En gansos, a partir de 0,1 mg/kg de peso vivo ocurre la disminucin en la produccin de huevos y los niveles de postura y la eclosionabilidad disminuyeron en 50%, cuando fueron administrados 300 mg de toxina T-2/kg de peso vivo. Las micotoxinas T-2 y DAS producen lesiones orales en pollos de engorde, cuando estn presentes en niveles de 1 ppm en la racin. Ocurren efectos txicos ms significativos con niveles de 4 ppm. Las aves presentan bajo consumo, retardo en el crecimiento, alteraciones en el cuadro hemtico y neurotoxicidad. Tambin fueron observadas lesiones orales en pavitos alimentados con racin que contena concentraciones de 5 ppm de la toxina T-2 y reduccin de ganancia de peso con 10 ppm de la misma micotoxina. En una comparacin directa, se concluy que los pavitos son ms sensibles que pollos de engorde. Los gansos tambin son muy sensibles, para la Toxina T-2 pudiendo presentar mortalidad cuando est presente en concentraciones de 3 ppm. Estudios similares realizados con DON han mostrado que, con excepcin de un descenso transitorio en los niveles de hemoglobina, o un levsimo efecto en la calidad del huevo; no hay evidencia significativa de que esta toxina afecte el desempeo de las aves ya que son capaces de tolerar concentraciones relativamente altas de DON en la dieta y un poco menores T-2 y DAS. Los niveles de DON normalmente encontrados en raciones contaminadas (0.35 a 8.0 ppm), no presentan indicaciones de algn problema sanitario en pollos. Concentraciones de DON arriba de 82,8 ppm fueron administrados en ponedoras Leghorn por 27 das sin ningn efecto sobre el desempeo y tambin sin presentar lesiones en las aves. Otros estudios describen lesiones muy leves y reduccin en la calidad de huevos en aves que recibieron 18 ppm de DON en la dieta. Los tricoticenos generalmente no inducen aumento de mortalidad en otras aves, requieren de niveles de varias centenas de partes por milln para causar mortalidad. De forma semejante, en casos de toxicosis, atribuidos a toxina T-2 que afectaron patos domsticos, gansos, equinos y cerdos, solamente hubo mortalidad en gansos, sugiriendo una gran sensibilidad de esta ave.

Fumonisinas Los efectos txicos de las fumonisinas en aves fueron estudiados primeramente, usando cultivos de Fusarium moniliforme como fuente de esta micotoxina. El cultivo fue administrado a las aves junto con la racin. Fueron alimentados pollos de engorde de 1 da durante 3 semanas con raciones que contenan 525 ppm de fumonisina B1. Las aves que recibieron 450 y 525 ppm tuvieron una disminucin significativa en la ganancia de peso y conversin alimenticia, aumento de peso de los riones e hgado y aumento de concentracin de hemoglobina. Comparado con el control, todas las aves que fueron alimentadas con fumonisina B1 presentaron niveles elevados de esfinganina y esfingosina (precursores de los esfingosdos oculares) en el suero sanguneo. Debido a la inhibicin de la biosntesis de esfingolipdos, por accin de las fumonisinas, los autores sugieren que las dietas que contienen ms de 75 ppm de fumonisina B1 pueden ser txicas para pollitos bebes. Pero los autores no enfatizaron que el Fusarium moniliforme produce, adems de fumonisinas, otras micotoxinas como moniliformina, fusarina, cido fusrico y un nmero an desconocido de metabolitos citotxicos. Como ellos no purificaron la fumonisina y si utilizaron el cultivo puro de Fusarium moniliforme, estos resultados deben aceptarse con reservas. En un estudio realizado con pavos, fue demostrado que solamente hubo efecto de la fumonisina B1 en niveles por encima de 200 ppm en la dieta. Entretanto, otro trabajo, utilizando metodologa semejante, mostr que 75 ppm ya presentan toxicidad para pavitos. El uso de fumonisina B1 purificada, a las dosis de 0, 20, 40 y 80 ppm en pollos de 1 hasta 21 das de edad, demostr que estos niveles de toxina no causaron efectos adversos sobre ganancia de peso, conversin alimenticia o consumo de agua. En cuanto a la interaccin entre fumonisina B1 y otras micotoxinas, no hubo accin sinrgica entre sta y aflatoxina en pavos. Este sinergismo ocurre con moniliformina en pollos y con toxina T2 en pavos cuando se administran 300 ppm de fumonisina ms 5 ppm T2 Esta relativa inocuidad de las fumonisinas fue rebatida en otros estudios, en donde pollitos de 1 da fueron intoxicados con 10 mg/kg (ppm) en la racin durante 6 das. Se observ que la fumonisina B1 pudo contribuir en la aparicin de petequias, aumentando el tiempo de coagulacin sangunea y disminuyendo la concentracin de albmina srica. Control y manejo de micotoxinas El control y manejo de micotoxinas implican un proceso que posee una serie de actividades crticas. Todo se inicia con la toma de la muestra, pasa por una gama de anlisis y controles y se cierra en la toma de una decisin. sta debe considerar el uso seguro de la dieta en la cual el riesgo de la intoxicacin por micotoxinas pueda ser minimizado y que La relacin costo/beneficio sea cuantificada en forma exacta, permitiendo la maximizacin de la productividad del lote.

Tericamente, el plan debe tener en consideracin algunos aspectos bsicos, como: Con qu probabilidad, un lote con una determinada concentracin de micotoxinas es aceptado o rechazado? Cul es el porcentaje de error en la clasificacin de los lotes. La concentracin de una determinada toxina en un lote se acepta o se rechaza? Cual el costo del programa de muestreo? Diagnstico de micotoxinas La metodologa ms especfica, precisa y confiable es la obtenida con la ayuda de procesos qumicos. Estos procedimientos pueden ser tanto los obtenidos por Cromatografa en Capa Delgada (TLC), como por Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC) y recientemente surgi el HPLC adaptado a la deteccin por Espectrometra de Masa (HPLC/MS) adems de la Cromatografa de Gases adaptada a la MS (GC/MS). Estas metodologas presentan resultados semejantes. Las pruebas de inmunoensayo pueden ser utilizadas y en casos excepcionales, para la semicuantificacin. El uso de las pruebas qumicas comerciales disponibles, constituyen las metodologas internacionalmente ms aceptadas y recomendables para los laboratorios de diagnstico de micotoxinas. Actualmente, el uso de extraccin en fase slida avanza, principalmente en la formulacin de patrones y automatizacin de los anlisis micotoxicolgicos. El sistema de anlisis usado en el monitoreo en lnea es el HPLC acoplado a metodologas automatizadas de extraccin, purificacin y derivatizacin. El tiempo necesario para el anlisis desde la entrada de la muestra hasta la expedicin del certificado final no pasa de 48 horas para un anlisis bsico, que comprende aflatoxinas y zearalenona. La muestra para bsqueda de micotoxinas. El procedimiento de la toma de la muestra es, sin duda, la actividad ms importante del monitoreo de micotoxinas. Una muestra incorrecta lleva a la toma de decisiones erradas, en la disponibilidad de un silo, por ejemplo. Esto implica costos, uso del producto fuera de las especificaciones y micotoxinas en las dietas que llevan a la prdida de productividad y prdidas econmicas, como tambin riesgo a la salud pblica. Las causas principales que interfieren en la toma de la muestra, segn los estudios de Whitaker et al. (1972) muestran que la variabilidad de los resultados pueden ser disminuida por:

 Muestreo con mayor tamao de la muestra y mayor nmero de puntos muestreados. Sub-muestreo con aumento de tamao (peso) de la sub-muestra o disminucin del tamao de las partculas por toma. Analizar un mayor nmero de muestras: Por ejemplo, si se dobla el peso de la muestra que a analizar, la varianza en el muestreo (en decir, el error) se reduce a la mitad. Esta relacin tambin es verdadera para obtener la reduccin de la varianza en el proceso de sub-muestreo y de anlisis. Algunos cuidados bsicos deben ser adoptados para permitir un muestreo eficiente: Recoleccin de una muestra representativa, siguiendo un plano de muestreo. La muestra deber ser recogida lo ms cerca posible al sitio en que el animal intoxicado consumi el alimento (comederos). La toma de sangre y rganos permite un anlisis retrospectivo de algunas contaminaciones, principalmente en las situaciones en que el alimento no se encuentra disponible. Algunas micotoxicosis, como la causada por ocratoxina A, son detectables en sangre hasta 35 das despus de la ingestin de la toxina. Identificacin del componente (o componentes) en la alimentacin contaminada, en los casos en que se detectan micotoxinas en la racin formulada. Planeacin de un programa de anlisis de micotoxinas Este planeamiento requiere el conocimiento de las caractersticas de la distribucin de las micotoxinas. Los trabajos de Whitaker et al. (1974) sobre la distribucin de los resultados de los anlisis de micotoxinas en lotes son de lectura obligatoria. El conocimiento de curvas operacionales (OC) y la forma de interferir en la disminucin del riesgo del muestreo son presupuestas fundamentales. La forma ms prctica, encontrada en nuestras condiciones, para la disminucin del riesgo del muestreo y con una relacin costo/beneficio adecuada se encuentra definida en la Figura 1. El programa de muestreo utilizado en la mayora de las industrias asistidas por el LAMIC es el recomendado por la Comisin de normas de la Unin Europea (Amtsblatt der Europische Geneinschaften N L 102/1, TEIL II, 1976 y Futtermittorecht mit Typenliste fur Einzo - und Mischfuttermitton, 1994). Las adaptaciones fueron

realizadas para muestrear siempre las materias primas (despus se utilizarn como modelos), posibilitando mejor accesibilidad y representatividad. La recoleccin de las muestras debe ser realizada cuando el material se encuentra en movimiento y molido, a intervalos de tiempo pre-establecidos, dependiendo de la cantidad de toneladas a procesar por turno de produccin. As, una fbrica de alimentos que produce 100 Ton/da, har una muestra colectiva mnima de 45 kg de material molido. De este material deber ser retirada una muestra de mnimo 1 kg que ser enviada al laboratorio. Los responsables de recolectar el material debern siempre estar involucrados en el proceso y correctamente entrenados para tal fin. La participacin del tomador de la muestra es fundamental para la operacin y el buen funcionamiento de un sistema de control de micotoxinas. Figura 1: Programa de monitoreo y control de micotoxinas

El envo al laboratorio deber ser lo ms rpido posible, el material debe ser acondicionado en empaque resistente. Para reas lejanas, se recomienda el uso del servicio de transporte areo. Es importante que el tiempo de transporte no supere las de 48 horas. El anlisis y principalmente la definicin de cuales micotoxinas son las que deben entrar en un programa de control, solamente puede ser definido por el conocimiento de la incidencia de las mismas en el rea de origen del material. En funcin de la necesidad de la toma de decisiones rpidas en las empresas agroindustriales, se recomienda que el anlisis sea realizado lo ms rpido posible, en un tiempo no superior a 48 horas.

En la obtencin de los resultados es necesario, inicialmente, establecer los limites de confianza para el sistema de muestreo. El procedimiento usual inicia con la recoleccin de no menos de 3 y no ms de 5 muestras por turno de produccin. Los resultados son evaluados en su totalidad, para con esto ajustar el nmero mnimo de muestras a ser analizadas. Despus un perodo inicial, de aproximadamente 1 mes, es posible reducir el nmero de muestras hasta 1 por da, dependiendo de la produccin total y del cereal utilizado. Control de micotoxinas a travs del uso de adsorbentes Una vez que las micotoxinas estn formadas, cualquier esfuerzo en el sentido de prevenir el crecimiento fngico es intil. Un mtodo ampliamente utilizado para el control de las micotoxicosis es el uso de materiales inertes en la dieta animal, con el fin de disminuir la absorcin de las micotoxinas en el tracto gastrointestinal de las aves. Estas sustancias son genricamente llamadas Adsorbentes de micotoxinas, que son arcillas de origen volcnico, stos son los aluminosilicatos y las bentonitas. No existe una frmula para la utilizacin de adsorbentes en el control de micotoxinas. Lo que se debe tener en consideracin son las condiciones de los lotes contaminados, niveles de contaminacin, disponibilidad del adsorbente y su calidad y su costo. Comnmente, cuando la presencia de Aflatoxinas es detectada en anlisis de las muestras por encima de 10 ppb en ms del 15% de las muestras analizadas, es recomendable la adicin de adsorbentes a la racin elaborada con los granos contaminados. Pero esta no es una regla general, cada caso debe ser analizado con cuidado, siempre evaluando y midiendo la relacin costo/beneficio de la utilizacin de estos productos. Conclusiones y recomendaciones Un programa de monitoreo de micotoxinas puede presentar gran variabilidad asociada al anlisis de productos como los cereales. La concentracin de micotoxinas no puede ser determinada con 100% de exactitud. Esta es el resultado de la varianza del muestreo (92,7%), sub-muestreo (7,2%) y del anlisis (0,1%). Para disminuir esta variabilidad de resultados, deben considerarse los siguientes aspectos en un monitoreo: Adoptar un programa de muestreo comparativo con la realidad, ejecutado integralmente, y en todas las muestras. Aumentar el nmero de las sub-muestras cambindolas y sistematizndolas ms con distribucin aleatoria. Aumentar el nmero de partculas por unidad de masa, a travs del almacn de granos.

 Efectuar el mayor nmero de anlisis posible. Recoger las muestras cuando el material se encuentra en movimiento, de preferencia con alimentadores automticos. En las raciones terminadas, en los casos de sospecha de micotoxicosis, recoger las muestras ms cercanas al punto final de consumo. Protocolizar las muestras correctamente, permitiendo la localizacin del sub-lote contaminado con presencia de micotoxinas.