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LA COLORACIÓN DE GRAM

LA COLORACIÓN DE GRAM

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LA COLORACIÓN DE GRAMI. Introducción
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles dever con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre lacélula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es lautilización de colorantes.Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía,son suficientes los procedimientos que usan unos solo colorantes llamados detinción simple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igualmodo todas las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muyusado en microbiología es la tinción Gram. Basándose en su reacción a la tinciónGram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos: gram positivas y gramnegativas. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya queindica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.Mientras que las bacterias gram negativas son constantes en su reacción, losmicroorganismos gram positivos pueden presentar respuestas variables en ciertascondiciones (son gram lábiles). Por ejemplo, los cultivos viejos de algunasbacterias gram positivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y enconsecuencia, se tiñen por la safranina apareciendo como gram negativas. Análogo efecto se produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo, opor ligeras modificaciones en la ejecución de la técnica. Por este motivo, espreciso atenerse, en la práctica, al procedimiento establecido.Para explicar el mecanismo de la tinción de gram se han propuesto variashipótesis fundadas en la naturaleza química de las paredes celulares de losmicroorganismos. Aquí puedes ver las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de paredbacteriana:
 
 
Pared Gram+
 
capa densa y uniforme de 200 a 800 A)
 
ácidos teicoicospolisacáridos
 
proteínas (pocas veces)
 
glicopéptido (50% del peso seco)
 
Pared Gram -
 
capa interna delgada de 20 a 30 A cubiertapor capas externas de densidad menor)
 
lipopolisacáridos
 
lipoproteínas
 
proteínas
 
glicopéptido (10% del peso seco)
 
El mecanismo de la tinción Gram es el reseñado en el siguiente esquema:
Productosque seutilizan
 
Reacción y coloración de las bacterias
 
GRAM +
 
GRAM -
 
1) Cristalvioleta
 
Células color violeta
 
Células color violeta
 
2) Lugolsolucióniodada
 
Se forma el complejo CV-I. Lascélulas continúan teñidas decolor violeta.
 
Se forma el complejo CV-I. Lascélulas continúan teñidas decolor violeta.
 
3) Alcohol
 
Se deshidratan las paredescelulares. Se contraen los poros.Disminuye la permeabilidad. Elcomplejo CV-I no sale de lascélulas que continúan teñidas decolor violeta.Eliminación por extracción degrasas de las paredes celulares.Aumenta la porosidad. Elcomplejo CV-I se separa de lacélula.4) Safranina
 
Células no decoloradas; Quedanteñidas de color violeta.
 
Células decoloradas; Se tiñen decolor rosado.
 
 
II. Objetivos
Comprender los pasos necesarios para realizar la tinción de Gram
Reconocer los microorganismos Gram positivos y negativos, al igual dela aplicabilidad clínica de la tinción
.III. Fundamento teóricoLa tinción de Gram o coloración de Gram
Es un tipo detinción diferencialempleado enBacteriologíapara la visualización debacterias,sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombrealbacteriólogodanésChristian Gram,que desarrolló la técnica en1884.Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándoseBacteria Gram positivaa las bacterias que se visualizan de color moradasyBacteria Gram negativaa las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.La tinción de gram es la técnica principal utilizada para el examen microscópico delas bacterias. Casi todas las bacterias de importancia clínica pueden detectarsecon este método. Las únicas excepciones son: Los microorganismos que se hallancasi con exclusividad dentro de las células huésped (p. ej., clamidias).Los quecarecen de pared celular (p. ej., micoplasmas y ureoplasmas).Los que tienen untamaño insuficiente para ser observados por el microscopio óptico (p. ej.,espiroquetas).Los que tienen una diferente composición en su pared y no captanlos colorantes (p. ej., mycobacterias)El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante.Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica desu pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después deltratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que seobservan de color púrpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativaspierden el colorante básico cuando son tratadas con el decolorante debido a que

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