FIJACION BIOLOGICA DEL NITROGENO

Indice:
1. Introduccin:
1.1 Importancia del nitrgeno en el ecosistema terrestre 1.2 Ciclo biognico del nitrgeno

2. Fijacin biolgica del nitrgeno:

2.1 Microbios fijadores 2.2 Asociaciones fijadoras de nitrgeno 2.3 Fijacin bioqumica del nitrgeno 2.4 Proteccin frente al oxgeno 2.5 Evolucin de los fijadores de nitrgeno

3. La simbiosis Rhizobium_ leguminosa 4. La simbiosis Frankia_planta no leguminosa 5. Otras simbiosis:

Algas cianofceas y sus simbiontes con plantas Empleo de la simbiosis Azolla_Anabaena Asociacin de Azospirillium con races de plantas Fijacin del nitrgeno en termitas

6. Limitaciones en la fijacin de Nitrgeno en ambientes de tipo Mediterrneo 7. El quemado de rastrojos y la fijacin de nitrgeno 8. Futuro y restos en biotecnologa
BIBLIOGRAFIA

INTRODUCCION
1. IMPORTANCIA DEL NITROGENO EN EL ECOSISTEMA TERRESTRE

El nitrgeno es un elemento que cuantitativamente y tras el carbono, oxgeno e hidrgeno es el ms abundante en la materia viva que constituye un 8-16%. Cualitativamente forma parte de molculas muy importantes para la actividad biolgica como los cidos nucleicos, donde se asienta la informacin gentica o las protenas y enzimas, compuestos estructurales fundamentales en la organizacin de la materia viva y catalizadores de los procesos biolgicos respectivamente. Como constituyente de las protenas est en una proporcin del 10-15%. La tierra es muy rica en nitrgeno, con ms de 60000 billones de toneladas de las que el 94% se encuentra en la corteza terrestre. Del 6% restante, el 99,86% se haya en la atmsfera como nitrgeno molecular y el 0,04% aparece en los organismos vivos, suelos y aguas en forma de compuestos orgnicos e inorgnicos. El nitrgeno se encuentra en estado molecular y el que respiramos tiene un carcter inerte y no es utilizable por los organismos vivos, excepto por los que pueden convertirlo en compuestos aprovechables. De hecho las plantas, los animales y casi todos los microbios, slo pueden utilizar nitrgeno combinado, es decir, el nitrgeno en un compuesto qumico. Las plantas y la mayora de los organismos son dependientes de formas inorgnicas de este elemento (nitratos, amonio...) mientras que los animales requieren nitrgeno orgnico obtenido directa o indirectamente de las plantas. Las plantas pueden acumular nitrgeno en la vegetacin por periodos de cientos de aos (rboles), o en ciclos estacionales (cosechas anuales). La cantidad de nitrgeno estimada absorbida anualmente por las plantas puede obtenerse de los valores de carbono asimilado por fotosntesis. La cantidad global de carbono fijado es alrededor de 70000 Tg (terragramo = 1 milln de toneladas mtricas) aunque no existe relacin nica C-N para las plantas (50:1 es la relacin ms frecuente). Las plantas utilizan solamente entre un 30-60% del nitrgeno mineral asequible en el suelo. Por tanto, para una eficacia del 40%, es aproximadamente el 3% del nitrgeno total contenido en el suelo. La fijacin simbitica del nitrgeno representa el 8,5% del consumo total de nitrgeno de la planta, debido a la eficacia de la transferencia de este nitrgeno fijado a la misma. Los fertilizantes aportan una cantidad de nitrgeno equivalente al 50% del nitrgeno asimilado por la fijacin biolgica. En la siguiente tabla se muestran las prdidas de nitrgeno.

(TABLA 1. Contenido global de nitrgeno y flujo en el suelo.) NITRGENO

Contenido (Tg) Flujo anual (Tg)

Nitrgeno atmosfrico.

3.9x109

Nitrgeno en el suelo.

105.000

Nitrgeno mineralizado en el suelo.

3500

Consumo por plantas.

1400

Fijacin simbitica del nitrgeno.

120

Fijacin asociativa y libre de nitrgeno.

50

Fertilizantes nitrogenados.

65

Fertilizantes nitrogenados utilizados.

26

Aportaciones de la atmsfera.

25

Desnitrificacin, volatilizacin. 135

Erosin.

25

Lixiviacin.

93

Las alteraciones del ecosistema natural son las principales causas de la prdida de nitrgeno, tanto en ambientes gaseosos como acuosos. Las reas perturbadas ecolgicamente y las reas cultivadas son las que requieren un mayor aporte de nitrgeno.

1.2 CICLO BIOGEOQUIMICO DEL NITROGENO

El ciclo biogeoqumico de nitrgeno es un conjunto de transformaciones donde se dan varias etapas:

A.

MINERALIZACION: formacin de nitrgeno inorgnico, como amoniaco, nitrito y nitrato, a partir de nitrgeno orgnico procedente de la desintegracin de los organismos y sus excreciones. B. ABSORCION: El nitrgeno inorgnico puede ser absorbido por plantas y microorganismos, pasar de nuevo a formar parte de la materia viva y circular a lo largo de las cadenas alimenticias. C. DESNITRIFICACION: El nitrgeno puede ser transformado en nitrgeno molecular y sus xidos, que mediante este proceso pueden escapar a la atmsfera. D. FIJACION: El nitrgeno molecular atmosfrico pasa a forma combinada. La mineralizacin incluye dos procesos: -Amonificacin -Nitrificacin La amonificacin consiste en la formacin de compuestos amoniacales microorganismos hetertrofos, entre los que se encuentran bacterias y hongos. realizada por

La nitrificacin es la oxidacin de amonio a nitrato en dos etapas realizadas por dos tipos de microbios que obtienen de ellas toda la energa que necesitan para su crecimiento. En la primera etapa de la nitrificacin las bacterias del gnero NITROSOMONAS oxidan el amonio a nitrito: NH4+ + 3/2 O2 NO2- + H2O + 2H+ En la segunda etapa bacterias del gnero NITROBACTER convierten el nitrito en nitrato: 2NO2- + O2 2NO3La velocidad de mineralizacin es un factor importante en la determinacin de la fertilidad del suelo. Gran parte del amoniaco formado es retenido por minerales de la arcilla en el complejo de cambio del suelo, donde podr ser cambiado por otros cationes y entonces ser nitrificado o absorbido por las plantas. Otra parte del amonio puede volatilizarse y escapar a la atmsfera, esto puede ocurrir en suelos alcalinos. La nitrificacin tiene lugar con rapidez en la mayora de los suelos constituyendo el nitrato la fuente de nitrgeno ms importante para la mayora de las plantas, donde unas enzimas conocidas como nitrato-reductasas lo convierten en amonio que es utilizado en la sntesis de aminocidos y protenas. A diferencia del amonio, el nitrato es retenido fcilmente por el suelo y es transportado por lixiviacin. Este lavado de los nitratos es un importante factor de prdida del nitrgeno que puede ser del 50%. El proceso opuesto a la mineralizacin es la inmovilizacin, en ella los microbios hetertrofos convierten por amonificacin el nitrgeno orgnico en nitrgeno amoniacal, parte del cual se utiliza para su crecimiento, inmovilizndolo o hacindolo no disponible para las plantas.

La cantidad de nitrgeno en el suelo en forma asimilable para las plantas y en ausencia de aportes nitrogenados externos es funcin de la cantidad de nitrgeno orgnico de reserva en el mismo. La fijacin de nitrgeno es la etapa reguladora del ciclo, el nitrgeno atmosfrico pasa a forma combinada compensando las prdidas de sta por desnitrificacin y volatilizacin del amoniaco. Hay tres rutas: -Fijacin espontnea: proceso a partir del cual se obtiene energa por descargas naturales para originar xidos de nitrgeno o amoniaco a partir de nitrgeno molecular atmosfrico. -Fijacin industrial qumica: produccin de amoniaco y fertilizantes nitrogenados por la industria a partir del nitrgeno del aire. -Fijacin biolgica: conversin de nitrgeno atmosfrico en amoniaco, realizada por microbios libres o en asociacin con plantas superiores, microbios que reciben por ello el nombre de diaztrofos (azoe = nitrgeno, trofos = alimentacin). BALANCE DE NITROGENO Ganancias: Fijacin biolgica. Fijacin espontnea. Abonado nitrogenado. Prdidas: - Desnitrificacin. - Lavado de nitratos. - Volatilizacin de amonio. - Explotacin de cosechas. La fijacin de nitrgeno en la biosfera se estima en unos 275 millones de toneladas anuales, de las cuales 175 corresponden a la fijacin biolgica, 70 a la industrial y 30 a la espontnea. Por lo tanto la fijacin biolgica supone ms del 60% del nitrgeno fijado y es con mucho el proceso ms importante y que a continuacin se desarrolla. (Punto 2).

2. FIJACION BIOLOGICA DE NITROGENO

Los efectos beneficiosos del nitrgeno para las plantas ya se conocan por los romanos desde hace unos 2000 aos. Autores Chinos en la misma poca descubrieron el efecto beneficioso del uso de Azolla en el cultivo del arroz.

2.1- MICROBIOS FIJADORES.

La fijacin biolgica aparece nicamente en bacterias, algas cianofceas y actinomicetos, microorganismos procariotas que tienen la capacidad de utilizar el nitrgeno atmosfrico. Entre los ms de 60 gneros conocidos se encuentran formas aerobias facultativas, anaerobias, auttrofas y hetertrofas, con hbitats muy dispares y con requerimientos ambientales de temperatura, humedad, pH, etc muy heterogneos. Los organismos responsables de la fijacin de nitrgeno contienen la enzima NITROGENASA y se llaman DIAZOTROFOS y en ellos se incluyen bacterias organotrficas, bacterias sulfurosas fototrficas y cianobacterias.

(Ver tabla 2, pgina siguiente.)

(TABLA 2. Clasificacin de microbios fijadores de nitrgeno de inters agrcola y forestal.)

Forma de vida Libre

Tipo de microbio
Bacteria Alga

Gnero microbio Numerosos Numerosas

Tipo de planta Localizacin de microbio

Asociacin (Rizocenosis) Simbitica

Bacteria

Azospirillum Gramneas: sorgo, Azotobacter. Maz. Rhizobium.

Zona de la raz

Bacteria

Leguminosas: Ndulo lenteja, veza, radical. garbanzo, haba, etc. rboles y arbustos: Aliso, casuarina, etc. Ndulo radical

Actinomiceto Frankia

Alga Cianofcea

Numerosos Nostoc

Hongo ascomiceto Hongos, hepticas, Musgos, gimnospermas, angiospermas.

Talo de liquen Variable

Anabaena

Helecho azolla Cavidad foliar

La capacidad para fijar el nitrgeno por los organismos procariotas ha sido muy estudiada por grupos de investigadores, si bien parece estar relacionada con las caractersticas y composicin de la atmsfera de nuestro planeta en tiempos pasados. CANTIDAD DE NITROGENO FIJADO ANUALMENTE POR VIA BIOLGICA De los 175 millones de toneladas de nitrgeno fijado anualmente por va biolgica, 140 millones de toneladas corresponden a ecosistemas terrestres y 35 millones de toneladas a ecosistemas marinos. Dentro de los ecosistemas terrestres, 45 millones de toneladas son fijadas por tierras de cultivo, 45 millones de toneladas por prados y pastos y 50 millones de toneladas por reas forestales y otras. Los microorganismos fijadores de vida libre tienen escaso rendimiento fijador debido a que consumen mucha energa en el proceso y los substratos necesarios para obtenerla son poco

abundantes en la biosfera. Los microorganismos libres de mayor importancia ecolgica en este sentido son las algas azul verdosas fijadoras, ya que son capaces de utilizar la energa solar para conducir la fijacin biolgica del nitrgeno. Entre las bacterias fijadoras de vida libre las ms numerosas y eficaces son formas aerbicas pertenecientes al gnero Azotobacter: A. Chroococcum es la especie ms abundante en los suelos neutros y alcalinos, mientras que otros como A. Beijerinckia domina en suelos cidos. Entre las bacterias anaerbicas destacan los gneros Clostridium y Desulfovibrio y entre las facultativas Bacillus y Klebsiella.

2.2- ASOCIACIONES FIJADORAS DE NITRGENO.

Las asociaciones entre microbio fijador y planta admiten varios grados de interdependencia de ambos simbiontes. En el nivel inferior, con un menor grado de relacin, estn las rizocenosis que se establecen en la rizosfera de algunas plantas, como las formadas por la bacteria Azospirillum y con cereales como sorgo y maz o tambin por Azptobacter paspali y la gramnea Paspalum notatum. En el nivel superior, con una interdependencia muy elevada entre los microorganismos asociados, estn las simbiosis mutualsticas, que conducen a la formacin de estructuras especializadas, generalmente ndulos o tumoraciones en races y ms raramente en los tallos, como en Sesbania Spp. Las plantas superiores forman este tipo de simbiosis fijadora de nitrgeno, con bacterias (Rhizobium), actinomicetos (Frankia), y algunas algas azul verdosas, teniendo todas ellas especial impacto en la produccin vegetal de sus respectivos hbitats y/o cultivos. Destaca la relevancia de las leguminosas en la actividad agrcola y forestal, de las plantas leosas actinorricicas (aliso, casuaria etc) en colonizacin y forestacin, y del helecho acutico Azolla en arrozales sumergidos. Es importante mencionar que todos los microorganismos implicados en esta simbiosis pueden tener cierta actividad fijadora en el suelo en ausencia de la planta, salvo que se sepa, en rizobios de crecimiento rpido. Sin embargo, es en simbiosis con la planta donde dicha actividad se manifiesta plenamente. Algunas algas azul-verdosas (Nostoc y Anabaena) pueden vivir simbiticamente, bien con hongos formando lquenes, bien en ndulos radicales de gimnospermas del grupo de las cicadineas, o en glndulas de la base foliar de la angiosperma Gunnera. Las simbiosis con Rhizobium y Frankia respectivamente, se establecen como resultado de la expresin de unas caractersticas propias del microbio de la planta hospedadora y de la asociacin de ambos. Entre las propiedades de la simbiosis cabe destacar:

A.

La especificidad: propiedad por la que el microbio infecta selectivamente a la planta hospedadora. La magnitud de la misma vara de unas simbiosis a otras. Esta especificidad, que tambin se da en plantas actinorcicas, aquellas que forman simbiosis con actinomicetos, ha llevado a definir varios grupos de rhizobium y frankia.

B.

Infectividad: la capacidad de un microbio para invadir la planta.

C. Efectividad: capacidad para que en un ndulo se realice la secuencia de un proceso que lleve a la reduccin de nitrgeno atmosfrico en amoniaco. El microbio entra en la planta bien por los pelos absorbentes de la raz bien a travs de su epidermis, posteriormente se ubican en los ndulos aislado del ambiente exterior. Esta localizacin plantea la necesidad de la existencia de un intercambio metablico entre los dos simbiontes que implica el suministro por la planta de los nutrientes y componentes carbonados necesarios para el microbio, as como el transporte hacia la planta de los productos nitrogenados resultantes de la actividad fijadora del microbio.

2.3 BIOQUMICA DE LA FIJACIN BIOLGICA DEL NITRGENO.

La dinitrogenasa constituye el equipo enzimtico que cataliza la reduccin del nitrgeno a amoniaco. N2 + 8 H+ + 8 e- 2 NH3 + H2 La dinitrogenasa, es un complejo enzimtico formado por un componente 1, molibdo-ferroprotena, y un componente 2 ferro-protena. El componente 1 tiene por misin la reduccin de nitrgeno a amoniaco, y el componente 2 la transferencia al 1 de la energa necesaria para que ste pueda realizar la reduccin. Para que tenga lugar la reduccin del nitrgeno se necesita: o La presencia de ambos componentes. o Energa biolgica en forma de ATP. o Iones magnesio. o Poder reductor. o Protones. o Un ambiente anaerobio, ya que la dinitrogenasa es rpidamente desactivada por el oxgeno. 2.3.1. Limitaciones en la fijacin biolgica del nitrgeno La fijacin del nitrgeno consume aproximadamente 28 molculas de ATP, este alto consumo energtico limita la importancia ecolgica de los fijadores de nitrgeno. Adems de proporcionar esta energa, los productos de la fotosntesis, o fotosintatos, van a ser utilizados como fuente de compuestos carbonados para la incorporacin del amoniaco en su estructura qumica, y tambin en el crecimiento y desarrollo de los ndulos y otros rganos. Si tenemos en cuenta que el rendimiento fotosinttico no es muy alto, se comprende fcilmente que la fotosntesis sea un factor limitante en la fijacin de nitrgeno. Por otro lado, la fotorrespiracin puede consumir gran parte de la energa fijada fotosintticamente, lo que supone una seria reduccin de la fotosntesis neta. Otra limitacin que incide en gran medida en el proceso fijador la constituye la liberacin de hidrgeno gaseoso, paralela a la formacin de amoniaco, lo que hace que se malgaste un alto porcentaje de la energa en una funcin sin inters aparente.

2.4. PROTECCIN FRENTE AL OXIGENO.

Los dos componentes de la dinitrogenasa son inactivados por el oxgeno. Para protegerse del oxgeno, los sistemas fijadores de nitrgeno han desarrollado una serie de estrategias fisiolgicas, entre las cuales cabe citar:

A.

Una mayor actividad respiratoria en el caso de fijadores libres cuando la oxigenacin del entorno aumenta, se consigue un nivel de oxgeno lo suficientemente bajo para que no sea nocivo. B. En cianofceas, se desarrollan unas clulas especializadas: los heterocistos, en las cules se localiza exclusivamente la nitrogenasa, y donde no hay liberacin de oxgeno. C. En los ndulos radicales, donde el microbio encuentra las condiciones idneas para expresar su actividad fijadora y donde existe un pigmento que regula el suministro de oxgeno al microbio para su respiracin, y a niveles que no afecten a la actividad fijadora. El amoniaco formado en la fijacin de nitrgeno, es asimilado rpidamente a travs de una ruta metablica en la que intervienen dos enzimas, la glutaminosintetasa y la glutamatosintetasa, con el resultado final de la incorporacin del nitrgeno a la molcula de glutamato. La asimilacin del amoniaco en la simbiosis es realizada por la planta. Una vez en la clula vegetal del ndulo el

amoniaco pasa a formar parte de la glutamina y del glutamato, que son los primeros productos orgnicos llamados asociaciones simbiticas. La glutamina puede salir como tal del ndulo, o bien sufrir transformaciones a asparraguina, alantona, o cido alantoico. Las leguminosas, en general, poseen el mecanismo necesario para producir ureidos (alantona o cido alantoico). Se estudian hiptesis sobre cmo aumentar la eficiencia fijadora de una asociacin planta-microbio, mediante manipulacin gentica.

2.5. EVOLUCION DE LOS FIJADORES DE NITROGENO

Hace unos 3100 millones de aos, parecen haber existido microbios procariotas, segn se deduce de los microfsiles encontrados en Canad. Estas primeras formas vivas tuvieron que ser anaerobias porque en la atmsfera primitiva no exista oxgeno libre, posteriormente fueron apareciendo microbios fotosintticos liberadores o no de oxgeno, formas auttrofas no fotosintticas, y hetertrofos aerobios. Se calcula que el oxgeno libre aparece en la atmsfera hace 2000 millones de aos. La proliferacin de estos grupos sobre la tierra fue uno de los factores que hizo posible la colonizacin de los ambientes terrestres muy pobres en nutrientes hasta entonces. Algunas caractersticas de la dinitrogenasa, relacionan su presumible antigedad con las condiciones del medio primitivo:

A. B.

slo funciona en ausencia de oxgeno libre. Su composicin es una metaloprotena que tiene hidrgeno y azufre, elementos presentes en el medio donde se desarrollan las primeras formas vivas. C. Los aminocidos que la componen se encuentran entre los termodinmicamente ms estables, lo cual slo ocurre en molculas primitivas. El origen de la fijacin simbitica es mucho ms reciente, aproximadamente 150 millones de aos. Una de las hiptesis que trata de explicar la evolucin de la simbiosis supone una adaptacin ecolgica que debi ocurrir de acuerdo con las siguientes fases; 1) Asociacin entre un fijador de vida libre y la planta sobre le superficie radical. 2) Establecimiento de la simbiosis dentro del tejido cortical de la raz. 3) Formacin de un tejido especializado en la fijacin de nitrgeno, el ndulo. Quizs la fijacin simbitica es todava demasiado joven, y en una previsible evolucin de las plantas surjan especies vegetales fijadoras de nitrgeno, con orgnulos semejantes a los cloroplastos en sus hojas y/o races, como sugiere J-R. Postgate. o quizs existen ya estas especies y an no las hemos encontrado.

3. LA SIMBIOSIS RHIZOBIUM- LEGUMINOSA.

Las leguminosas constituyen la familia de plantas con flores ms numerosa despus de las gramneas, con unos 700 gneros y 14000 especies. La nodulacin es una caracterstica de las leguminosas en general, pero existen gneros que no forman tales estructuras (en la subfamilia Papilionoideae, donde se incluyen alfalfa, soja, juda garbanzo, se dan ndulos en un 95% de los individuos examinados, en la Caesalpinioideae no se ha encontrado nodulacin en un 67% de los miembros estudiados). Si se tiene en cuenta que ms del 50% de las leguminosas no han sido examinadas respecto a si nodulan o no, se llega a la conclusin de que este tema necesita mayor atencin.

Muchas de las plantas que no nodulan en su ambiente natural quizs pudieran hacerlo si las condiciones fueran otras. La cantidad de nitrgeno fijado depende de la cepa o estirpe de bacteria, de la planta hospedadora y de las condiciones ambientales. El empleo de las leguminosas en la agricultura aparece junto con el de los cereales, ya en registros arqueolgicos, y el reconocimiento de que fertilizan el suelo y que tienen, por tanto, gran inters para la cosecha siguiente, se manifiesta en algunos de los escritos ms antiguos de griegos, romanos, chinos y civilizaciones precolombinas. Las estimaciones recientes indican que contribuyen en la actualidad con ms de la mitad del nitrgeno fijado por sistemas biolgicos, con un aporte anual superior al de fertilizantes qumicos. Las leguminosas se utilizan para forraje, fertilizacin de pastizales, obtencin de aceites y grano para el consumo y como abono verde (prctica muy extendida en regiones tropicales y subtropicales). Aproximadamente los dos tercios del nitrgeno total se encuentran en la parte area de la planta, de forma que si sta se retira como heno, por pastoreo, o por cosecha de la semilla, ir en perjuicio del suelo disminuyendo la cantidad de nitrgeno que va a parar a l. El tiempo que media desde el enterrado de la leguminosa hasta la siembra del cultivo principal es un factor crtico, pues ha de transcurrir un perodo de tiempo suficiente para la descomposicin del abono verde, pero no excesivo, para evitar que haya prdidas por drenaje. El estado de madurez en el que se encuentra la leguminosa en el momento de enterrarla constituye otro factor importante en el aumento de la fertilidad del suelo. En el caso de su empleo como forrajes para la alimentacin animal se ha de elegir una que tenga calidad nutritiva aceptable, y que sea capaz de persistir y regenerarse aun cuando el pastoreo sea intensivo. El animal en rgimen de pastoreo favorece la transferencia de nitrgeno de la leguminosa a la gramnea, ya que retiene solamente una pequea parte del que toma del pasto, desechando el resto en forma de orina y estircol. Este nitrgeno devuelto al suelo es reutilizado por las plantas del pasto, por eso es recomendable el sistema del pastoreo. Se ha estimado que la mitad o los dos tercios del nitrgeno fijado por la leguminosa se incorpora al suelo por accin del ganado. Transferencia de nitrgeno fijado por la leguminosa a la gramnea no fijadora en un pasto mezcla de ambas. El hombre puede intervenir en el sistema suelo-planta-animal regulando la proporcin de mezcla, as como la adiccin de nitratos, materia orgnica y carga mineral. El efecto beneficioso de las leguminosas puede manifestarse tambin en el rea de la selvicultura, donde especies de tipo leoso, como Robinia (falsa acacia) o bien herbceas forrajeras o de grano, como trboles, pueden ser utilizadas en algunas explotaciones forestales de plantas no fijadoras. LIMITACIONES DE SU EMPLEO En general se hace la recomendacin de aumentar el cultivo de leguminosas con el fin de disponer de un adecuado suministro de alimentos, pero existen algunos obstculos para seguir tales recomendaciones ya que muchas sociedades no tienen el hbito de cultivar y consumir leguminosas y adems existen algunas limitaciones ms como son la presencia de algunas substancias txicas en algunas leguminosas (como hemaglutininas, bocigenos, ciangenos o antagonistas de vitaminas), lenta digestibilidad y que la mayora tienden a contener poca cantidad de algunos aminocidos importantes (como los azufrados metionina y cistina). No obstante existe alguna leguminosa, como la soja, que no solamente posee un contenido de protenas superior a la mayora, sino que tambin aporta una mejor composicin de aminocidos y una mayor digestibilidad. Para el agricultor, las leguminosas pueden originar un problema ms inmediato: el aumento de las producciones conduce a un incremento en el consumo de otros elementos esenciales, principalmente

de potasio, fsforo, calcio y azufre, que hay que proporcionar al suelo si ste no los contiene en cantidades suficientes para obtener un beneficio mximo del cultivo. Otros elementos que inciden en una mayor actividad fijadora son el molibdeno, como parte constitutiva de la dinitrogenasa, y el cobalto, como constituyente de la leghemoglobina de los ndulos, por lo que en ciertos suelos deber contemplarse la necesidad de su adiccin. La incorporacin de fertilizante nitrogenado al suelo deber hacerse en cantidades moderadas, dado su efecto inhibidor sobre la nodulacin y fijacin de nitrgeno. SIMBIOSIS MULTIPLE EN LEGUMINOSAS En la relacin simbitica de las leguminosas con rizobios puede existir simultneamente la intervencin de otros microbios que contribuyen a un aumento de la produccin y este es el caso de los hongos micorrcicos y bacterias Azospirillum. Se sabe que un centmetro de raz micorrizada se halla recubierta de un metro, aproximadamente, de hifas o filamentos del hongo. Estas hifas se propagan por el suelo invadiendo zonas donde el sistema radical de la planta no llega directamente, aumentando as el volumen de suelo explorado y la cantidad de nutrientes minerales y agua que la planta recibe a travs del hongo. Las micorrizas tambin facilitan la llegada de fosfatos a la raz, hecho que es muy beneficioso ya que el fsforo es un factor limitante crtico que participa en la nodulacin, fijacin de nitrgeno y crecimiento de la planta. Un segundo tipo de simbiosis mltiple es la formada por leguminosa-rizobio-azospirilo . La interaccin de los dos microbios, cuando se aplican a la planta en forma de un inculo a partes iguales de ambos, conduce a una mayor produccin vegetal. Si en el inculo predominan los azospirilos sobre los rizobios, no se forman ndulos radicales, pero si produce una interaccin de ambos microbios que conduce tambin a un aumento de productividad respecto de los controles inoculados con azospirilos solamente. INOCULACION CON RHIZOBIUM La inoculacin de leguminosas con microbios adecuados es de gran importancia para el desarrollo de stas. Un criterio de seleccin es que el rizobio forme ndulos en las races de la planta hospedadora bajo un amplio espectro de condiciones ambientales, muestre capacidad de competir con ventaja sobre otros rizobios no deseados, sobreviva y se multiplique en el suelo, tenga resistencia a pesticidas, desecacin, etc. Se han obtenido resultados muy satisfactorios cuando se inocula el suelo directamente y a continuacin se siembra la semilla. Otra posibilidad para obtener simbiosis efectivas Rhizobium-leguminosa consiste en seleccionar las plantas a fin de reducir su especificidad simbitica, lo que les permitir asociarse con cepas nativas del suelo. GENES DE LA NODULACION Y FIJACION DE NITROGENO Mediante la manipulacin gentica del sistema regulatorio de la fijacin, se puede llegar a lneas ms eficientes y tolerantes de altos contenidos en nitrgeno en el suelo. Hasta el momento se han identificado unos 45 genes en 8 especies leguminosas (alfalfa, guisante, soja, trbol, garbanzo, cacahuete...) que de algn modo regulan la nodulacin y fijacin de nitrgeno. Estos genotipos se han obtenido de mutantes espontneos, o por mutagnesis bien qumica o radiactiva.

Las lneas mutantes son fuentes valiosas para conseguir un mejor conocimiento de los genes que en la planta se hallan relacionados con el inicio, desarrollo y funcionamiento del ndulo, as como son en potencia poseedoras de una informacin muy til con respecto a la autorregulacin del nmero de ndulos y su inhibicin por nitratos. Por otra parte, dado que la membrana peribacterioidal parece ser el mediador primario en el desarrollo del bacteroide, y el lugar donde se controla el intercambio nutritivo entre la planta y el microorganismo, los anlisis comparativos de tales membranas, en los genotipos eficientes y en los ineficientes, podra revelar la contribucin de estas estructuras a la simbiosis. PROTEINAS ESPECIFICAS DE LA NODULACION Las protenas sintetizadas por la planta en respuesta directa a la infeccin radicular y formacin del ndulo se conocen como "protenas ndulo-especficas" y tras la propuesta de un investigador se las ha llamado nodulinas. La leghemoglobina es la protena que da a los ndulos su color rosado, y es la nodulina mejor caracterizada hasta el momento. Los estudios que emplean mutantes de Rhizobium sugieren que hay muchos tipos de seales envueltas en la expresin de los genes de las nodulinas. Las tecnologas emergentes del ADN recombinante y la manipulacin in vitro ofrecen una gran promesa en relacin a la mejora de plantas, stas podran aportar unos mtodos nuevos de seleccin, propagacin e hibridacin, y tambin la capacidad de insertar genes forneos directamente en el genoma vegetal. El empleo del cultivo celular como herramienta de seleccin ofrece la promesa ms inmediata para la incorporacin en programas de cruzamientos ya existentes. Los genes extraos podran ser fuentes de variacin importantes para caracteres heredables de forma simple, tales como resistencia a herbicidas o a enfermedades, si se pudieran transferir con todos los sistemas de control intactos, por el contrario, los caracteres cuantitativos tales como rendimientos y fijacin de nitrgeno, sern ms difciles de cambiar utilizando cualquier procedimiento que afecte a un reducido nmero de genes. La mejora vegetal ser necesaria para traspasar los productos de las manipulaciones genticas no convencionales del laboratorio a la produccin agronmica.

4. LA SIMBIOSIS FRANKIA-PLANTA NO LEGUMINOSA

Esta simbiosis fijadora de nitrgeno entre el actinomiceto, o bacteria filamentosa FRANKIA y plantas no leguminosas, todas ellas leosas, tiene gran importancia en reas forestales. El beneficio que se puede derivar de su empleo nos viene dado a ms largo plazo que en el caso de las leguminosas, este es el motivo fundamental de que las investigaciones sobre esta simbiosis hayan ido siempre por detrs de la simbiosis de leguminosas, que proporcionan un beneficio inmediato a la economa del agricultor medio. Los actinomicetos del gnero frankia forman ndulos en asociacin con 170 especies de plantas no leguminosas, pertenecientes a 17 gneros y 7 rdenes. Estas asociaciones ocurren en hbitat muy dispares, tales como desde el rtico al trpico, o como de ambientes semidesrticos a bosques muy hmedos.

(TABLA 3: Clasificacin de Angiospermas no leguminosas fijadoras de nitrgeno en simbiosis con Frankia)

Nmero de especies noduladas (en parntesis nmero total de especies) Casuarinales Myricales Casuarinaceae Myricaceae Casuarina Myrica Comptonia Fagales Betulaceae Eleagnaceae Alnus Eleagnus Hippophae Shepherdia Rhamnales Rhamnaceae Ceanothus Discaria Colletia Trevoa Coriariales Rosales Coriariaceae Rosaceae Coriaria Rubus Dryas Purshia Cucurbitales Datiscaceae Datisca 24 (45) 26 (35) 1 (1) 33 (35) 16 (45) 1 (3) 3 (3) 31 (55) 6 (10) 3 (17) 1 (6) 13 (15) 1 (250) 3 (4) 2 (2) 2 (2) 18-60

orden

Familia

Gnero

Rendimiento estimado de fijacin de nitrgeno (Kg/ha ao)

230 32-25 26-30 26-300 15 2-180 60

(Adaptada de Becking, 1982. In "advances in agricultural Microbiology")

4.1 UTILIZACIN E IMPORTANCIA ECOLGICA.

El nitrgeno tambin es un factor limitante en los cultivos forestales. Las plantas actinorrcicas pueden representar una solucin a este problema, puesto que asociadas a otras de inters forestal contribuyen a la nutricin nitrogenada de stas, as como ellas mismas pueden ser empleadas en la obtencin de pulpa para la fabricacin de papel y en la industria maderera.

(TABLA 4: Resultados de una plantacin pinus-myrica a los 12 aos de la introduccin de esta.)

Parcela Planta N de Altura Dimetro Volumen Nitrgeno rboles/ de tallo ha (m) (cm) (kg.N/Ha) (cm3x103)

Pinus

1540

6.2 4.1

7.6 4.9

17238

85 259

Myrica 4300

Pinus

2850

5.0 3.5

5.9 4.5

10287

94 125

Myrica 2380

Pinus

6490

4.4

4.5

3403

53

Resultados de una plantacin pinus-myrica a los 12 aos de la introduccin de sta. Las hojas de algunas plantas actinirrcicas, por ejemplo las del aliso, conservan a su cada una gran parte del nitrgeno que contenan en vida. Ello hace que la adiccin del elemento al suelo sea un proceso continuo y ms ventajoso para la vegetacin vecina, que si el nitrgeno quedase almacenado en los dems rganos de la planta hasta su muerte. El efecto fertilizante de estas plantas se manifiesta tambin en pastizales, habindose demostrado que el aliso incrementa la produccin de un pasto de gramneas subyacente, proporcionando al ganado un alimento de mayor calidad. Tambin es importante destacar que las especies que crecen en los mrgenes de las corrientes de agua actan como fuente de protenas para la alimentacin de la fauna acutica, debido a esto las zonas de pesca ms ricas en aguas dulces se sitan donde existen alisos. Las plantas actinorrcicas son tpicamente pioneras, con lo cual su uso puede extenderse a la colonizacin de hbitat desrticos, fijacin de dunas o regeneracin de suelos pobres o de aquellos que han sido alterados por la accin del hombre o que estn sometidos a una fuerte erosin. Ejemplos en este sentido:

1.

En el oeste de EEUU se colonizaron miles de kilmetros cuadrados por los gneros Alnus, Ceanothus y Purshia. 2. En pases tropicales se usa causarina para fijar dunas mviles. 3. Myrica gale se utiliza para recuperar suelos erosionados y reforestacin, es una especie comn en zonas pantanosas de Europa y Norteamrica. 4. Uso a gran escala del Aliso en muchos pases europeos, asiticos y americanos, en la lucha contra la erosin, en la colonizacin de tierras recuperadas al mar en Holanda, en la regeneracin de terrenos de cultivo agotados, zonas forestales degradadas, zonas glaciares desnudas, suelos pedregosos de altitudes e incluso como indicadores de agua.

Por ltimo, las especies arbreas de gran porte se emplean como cortavientos y como proteccin de diferentes cultivos frente a la invasin de arena. En Mxico se ha utilizado "Casuarina" para proteger a la ciudad de los vientos cargados de polvo procedentes del lago Texoco. Respecto al problema de la erosin hay que tener en cuenta que en nuestro pas un 25% sufre fenmenos de erosin grave, y ms del 27% sufre de erosin moderada (es muy posible que estos datos hayan aumentado ya que la fuente consultada se public en 1985). Cada ao las aguas arrancan y transportan 1000 millones de toneladas de nuestro suelo. Todo ello presenta a nuestro pas como el nico europeo en claro proceso de desertizacin. Por lo tanto es urgente la realizacin de estudios sobre la viabilidad de la utilizacin de plantas actinorrcicas, tanto para regenerar las zonas degradadas como para fertilizar otras especies usadas en repoblacin forestal.

5. OTRAS SIMBIOSIS.
A continuacin se muestran algunas otras simbiosis destacables por su importancia en la captacin del nitrgeno: 1-LAS ALGAS CIANOFCEAS Y SU SIMBIOSIS CON PLANTAS. Las especies de algas conocidas que fijan nitrgeno superan el centenar, tienen una distribucin universal, siendo ms abundantes en las zonas tropicales y templadas; comprenden aguas dulces y saladas, ambientes terrestres y fijan nitrgeno en vida libre o en simbiosis con un gran nmero de organismos. Las algas implicadas en la fijacin de nitrgeno son fotosintticas por lo que no requieren aporte del exterior de compuestos carbonatados. Existen tres grupos principales de algas cianofceas fijadoras de nitrgeno: 1. Formas filamentosas con heterocistos (clulas filamentosas de pared gruesa; no fotosintticas intercaladas en los filamentos del alga). 2. Formas filamentosas sin heterocistos. 3. Formas unicelulares. El grupo de las algas filamentosas con heterocistos es el ms importante, fijan nitrgeno en condiciones aerobias y anaerobias. Algunos gneros como NOSTOC y ANABAENA, fijan nitrgeno en vida libre pero tambin pueden establecer simbiosis con un gran nmero de plantas. Desde un punto de vista de aplicacin a la agricultura, hay que destacar, las asociaciones simbiticas de estos organismos con plantas.

(Tabla5) Fijacin de nitrgeno de asociaciones simbiticas entre algas cianofceas y plantas. Planta asociada Gnero de Cianofcea (alga azul-verdosa) Cantidad de nitrgeno fijado. Kg. N/Ha. Ao.

Hongos Calothrix, Nostoc. 1-10 Hepticas Anthoceros Nostoc 1-10 Musgos Sphagnum Nostoc 1-10 Helechos Azolla Anabaena 10-200 Gimnospermas Macrozamia Nostoc 20 Angiospermas Gunnera Nostoc 10-70

1.

EMPLEO DE LA SIMBIOSIS AZOLLA-ANABAENA.

Su aplicacin ms extendida es como biofertilizante en los cultivos de arroz. El gnero Azolla agrupa a seis especies de pequeos helechos acuticos que viven flotando en aguas tropicales y templadas de todo el mundo, en la regin Castellano-leonesa podemos encontrar en ros y charcas la especie Azolla Caroliniana, las principales caractersticas que la hacen til como biofertilizante son: -capacidad fijadora del sistema, del orden de 3Kg. de nitrgeno por Ha y da. -rpida propagacin, duplican su biomasa entre tres y seis das. -rpida descomposicin en el suelo. -no trasmiten enfermedades a los cultivos. Es preciso controlar su desarrollo, ya que pueden causar algunos problemas ecolgicos provocando la desaparicin de otras plantas ya existentes. Esto ha hecho que muchas veces se la considere una mala hierba. La fertilizacin de Azolla con fosfatos es necesaria, y representa la inversin ms importante en su cultivo. Su utilizacin como fertilizante en ms de 1,7 millones de hectreas en el lejano Oriente data originalmente de tiempos remotos. En los cultivos de arroz, se usa adoptando las siguientes tcnicas:

a. b.

Antes de plantar el arroz, se incorpora como abono verde al suelo. Crecer Azolla junto al arroz en forma de sistema de doble cultivo.

Los aumentos en la produccin de arroz por el efecto de la incorporacin de Azolla son importantes, quedan reflejadas en la siguiente tabla. (Tabla6) Efecto de Azolla sobre el rendimiento de grano y paja de arroz. (Singh, 1977).

Rendimiento en Kg/Ha Tratamiento Grano Paja

Control

3.489 2.581 5.125 3.786

Azolla (10 Tm. Peso fresco/Ha) 47 47 % de aumento

La asociacin puede tener tambin un papel fertilizante en campos no sembrados o como abono verde, cuya prctica es til en otros cultivos distintos al del arroz como trigo, cebada, avena y otros. El empleo de Azolla con este fin en cultivos de trigo, ha sido estudiado por diversos autores, obteniendo aumento de peso fresco de plantas de trigo, cultivadas en maceta, del orden de 25-30 por ciento respecto de controles no fertilizados. Otro empleo de esta asociacin es como forraje, as en Indochina se recolecta Azolla para la alimentacin animal, y en Vietnam es utilizado como alimento para reses, aves de corral y peces.

2. ASOCIACIN DE AZOSPIRILLUM CON RACES DE PLANTAS.

Se trata de una asociacin que no se puede considerar exactamente como simbiosis. Azospirillum es una bacteria fijadora de nitrgeno que prolifera en y sobre races de maz, trigo, cebada, avena y otros cereales y plantas forrajeras constituyendo una rizocenosis no nodulante que lleva a un aumento del nmero de espigas y de biomasa vegetal. La cantidad de nitrgeno aportado directamente del microbio a la planta es pequea debido a que el microbio exporta a la planta una parte mnima del nitrgeno fijado, por lo que el cultivo se beneficia indirectamente a travs del suelo adonde va a parar el resto del nitrgeno. La inoculacin de los suelos se hace utilizando turba molida como portador, conteniendo 109 bacterias de Azospirillum por gramo de turba que se aplica antes o poco despus de la siembra. El aumento de cosecha alcanza un mximo en suelos que reciben un 30-50 por ciento menos de fertilizante nitrogenado del normalmente recomendado para estos cultivos. Junto a la capacidad fijadora existe una mayor produccin de hormonas de crecimiento que suponen un beneficio para el desarrollo de la planta y que llevan a la formacin de ms races y consiguiente aumento de absorcin de nutrientes.

3. FIJACIN DE NITRGENO EN TERMITAS.

Las termitas representan el mximo exponente en simbiosis fijadoras de nitrgeno en las que participan animales. La actividad microbiana presente en el aparato digestivo de las termitas, es realizada por dos importantes grupos microbianos: uno que descompone la celulosa en azcar, glucosa, y otro que a su vez utiliza esa glucosa como fuente de energa para fijar nitrgeno del aire. Esta complementacin es suficiente para que las termitas puedan nutrirse exclusivamente de compuestos celulsicos de la madera, causa de graves problemas en construcciones donde predomina dicho material. Se trata de un ejemplo de cmo tres organismos diferentes pueden beneficiarse mutuamente: el microbio fijador de nitrgeno utiliza la glucosa que le proporciona el celuloltico; ste recibe la celulosa triturada y aminocidos que la termita y el fijador de nitrgeno respectivamente le dan; por ltimo, la termita tiene a su disposicin una abundante fuente de alimentos celulsicos que ningn otro animal puede consumir de forma exclusiva.

6. LIMITACIONES EN LA FIJACIN DE NITRGENO EN AMBIENTES DE TIPO MEDITERRNEO.

La caracterstica principal del clima Mediterrneo, presente no slo en la Cuenca Mediterrnea sino tambin en otras regiones del mundo (centro y sur de California, parte central de Chile, Suroeste de la provincia del Cabo en Sudfrica y bordes sur y suroccidental de Australia) es la existencia de inviernos lluviosos y fros, seguidos de veranos secos y calurosos. Debido a la importancia econmica de la agricultura y ganadera en estos ambientes, especialmente en la Cuenca Mediterrnea, muchos de los estudios realizados estn dedicados a la optimizacin de los niveles de nitrgeno. El inters por un mejor uso desde el punto de vista agrcola, forestal y de

conservacin, hace que exista una mayor dedicacin de los investigadores al estudio de la influencia del stres y disponibilidad de nutrientes en dichos ecosistemas. La alternancia de una estacin generalmente calurosa y seca con otra fra y lluviosa origina un comportamiento peculiar de la actividad microbiana en las regiones mediterrneas. Existen dos momentos transitorios con mayor intensidad biolgica, uno al comienzo de la estacin seca y otro con las primeras precipitaciones otoales.

6.1 FACTORES AMBIENTALES QUE LIMITAN LA FIJACIN DE NITRGENO EN LOS AMBIENTES MEDITERRNEOS.
La sequa: en el Suroeste de Australia, Lange observ que el 94% de las leguminosas posean ndulos activos en invierno, pero que slo un 3% los conservaban en verano. Se presenta por lo tanto un marcado descenso de la fijacin durante el verano. Inundacin peridica. Presencia de compuestos fenlicos procedentes de materia orgnica en descomposicin. Bajas temperaturas en invierno. Salinidad. pH bajo. Reducida disponibilidad de nutrientes. Defoliacin debida al fuego, sequa y presencia de animales herbvoros. La formacin de roco, factor que puede provocar una fluctuacin diaria en la actividad fijadora especialmente de las cianobacterias. Tanto la proliferacin de Rhizobium como la formacin de ndulos, requieren presencia de potasio, calcio, zinc, cobre y boro. El proceso de fijacin en si demanda hierro, molibdeno, cobalto, zinc, fsforo y en menor grado cobre, azufre y calcio. El problema es que algunos de estos nutrientes asociados con la actividad nodular tales como fsforo, hierro, calcio, molibdeno, cobre, cobalto y zinc son escasos; muy poco mviles y/o lixiviados en algunos de los suelos mediterrneos. En estos climas, con una estacionalidad marcada, y especialmente caracterizada por episodios repentinos de precipitaciones, la prdida de nutrientes esenciales para la fijacin mediante los procesos de lixiviacin es relativamente frecuente. En estos caso, las micorrizas constituyen un fenmeno bastante frecuente. Al ser estructuras que comunican la raz con los micrositios en los cuales tiene lugar la mineralizacin, reducen el riesgo de prdida de nutrientes. Por lo tanto, es muy posible que uno de los mecanismos adaptativos ms interesantes en muchos ambientes mediterrneos, y en general para las plantas colonizadoras de suelos nutricionalmente marginales, sea el poseer tanto infeccin nodular como micorrzica. Otra caracterstica ms de los ecosistemas mediterrneos es la elevada frecuencia de fuegos. La disminucin en la productividad al aumentar su incidencia se puede relacionar con prdidas de nitrgeno. Por tanto, en relacin al proceso de fijacin en si, hay que considerar:

1.
efectivos.

La actividad y supervivencia en el suelo de microorganismos fijadores

2.

La disponibilidad de elementos nutritivos tales como hierro, azufre, molibdeno, cobre, zinc y especialmente fsforo, que desempean funciones esenciales en el proceso de fijacin. El papel de las bacterias libres fijadoras de nitrgeno se considera de menor importancia en estas zonas al hallarse el proceso limitado bien por la falta de agua, bien por la escasez de materia orgnica, o incluso, por efecto de las temperaturas elevadas.

7. EL QUEMADO DE RASTROJOS Y LA FIJACIN DE NITRGENO.

Una prctica comn entre los agricultores es la quema de paja y restos de cereales tras la siega en lugar de reincorporarlos al suelo. Se ha observado que la incorporacin de paja al suelo aumenta la actividad fijadora de nitrgeno, contribuye a disminuir la erosin por el viento y agua de lluvia mejora la estructura del suelo y favorece el desarrollo de bacterias importantes del ciclo del nitrgeno, entre ellas las fijadoras y nitrificantes. El quemado de rastrojos produce adems una reduccin de la poblacin microbiana en genera, tanto ms drstica cuanto mayor sea la humedad. Por lo tanto, un modo de favorecer la fijacin de nitrgeno y, consecuentemente aumentar la produccin, consiste en incorporar la paja y restos de cereales al suelo, procurando que tenga lugar su degradacin antes de proceder a una nueva siembra.

8. FUTURO Y RETOS EN BIOTECNOLOGIA

Actualmente son muchos los estudios de organismos fijadores de nitrgeno que aplican la Biologa molecular para conseguir mejorar la fijacin del nitrgeno atmosfrico. Aunque los genes responsables de la fijacin de nitrgeno estn identificados y tienen la facultad de transferirse en bloques entre organismos, otros muchos genes y factores, adems de la nitrogenasa, estn implicados en el establecimiento de la simbiosis. Las perspectivas a corto plazo incluyen la expansin del uso de las simbiosis existentes, el estudio de las mal conocidas y la bsqueda de nuevas; a medio plazo, le mejora de la eficacia de los sistemas simbiticos conocidos y a largo plazo, el desarrollo de nuevos sistemas fijadores. El aumento de la eficiencia de los sistemas fijadores depende en muchos casos de las condiciones de cultivo y de las plantas utilizadas, por lo que la seleccin de variedades adecuadas y una prctica agrcola conveniente pueden aumentar sensiblemente los rendimientos. As, en la simbiosis Rhizobium-leguminosas, aparte de la seleccin de razas de Rhizobium mediante obtencin de mutantes por tratamientos fsicos, qumicos o bioqumicos, tambin puede seleccionarse la planta con vistas a obtener cultivares que den lugar a simbiosis ms efectivas, prctica que promete ser muy fructfera y que muchas veces se ha olvidado con las leguminosas. Actualmente se realizan numerosos estudios sobre la fisiologa de la fijacin simbitica y la influencia ambiental, tratando de encontrar la combinacin bacteria-leguminosa ms adaptada a una situacin ambiental concreta, as como el manejo ptimo del cultivo, poniendo nfasis en la resistencia a temperaturas extremas, sequa, salinidad y en la influencia de la fertilizacin nitrogenada y aplicacin de productos fitosanitarios. Pero sin duda, lo que ha despertado mayores expectativas es la utilizacin de la ms moderna y sofisticada tcnica: la ingeniera gentica, que es la que ofrece mayores expectativas debido a su novedad y a sus posibilidades casi ilimitadas. Los mtodos genticos han sido utilizados desde los primeros tiempos en agricultura, representados por la seleccin emprica de plantas con el fin de obtener variedades ms productivas, pero es en los aos 70 con la aparicin de las tcnicas de ingeniera gentica, como la del ADN recombinante, cuando se abren posibilidades espectaculares. La propia naturaleza del material gentico, permite, mediante su manipulacin, el desarrollo de proyectos con unos objetivos de gran inters aplicado, como son la alteracin de los genes de una

forma especfica y predeterminada o la transferencia de genes de inters de unos organismos a otros, adicionndolos o sustituyendo parte de su dotacin gentica. De este modo puede lograrse un incremento de la eficacia de fijacin de nitrgeno. La manipulacin y transferencia de genes ligados a la fijacin del nitrgeno y de otros estrechamente relacionados con ella, permitir conseguir nuevas o mejores cepas de microbios fijadores, crear nuevos sistemas, e incluso obtener plantas capaces de utilizar nitrgeno atmosfrico en ausencia de un microbio diaztrofo asociado. Respecto a esto es importante destacar la presencia de un vector natural microbiano: Agrobacterium tumefaciens, causante de la formacin de tumores en forma de cresta de gallo en plantas, que tiene la propiedad de transmitir al genoma de la planta dicho carcter tumorgeno, con lo cual el tumor puede proliferar en ausencia de aquel tumor que lo inici. As se pretende introducir en la planta el carcter deseado incorporndolo previamente en el genoma de Agrobacterium. Por otro lado la alteracin de los genes que regulan la fotosntesis y de otros relacionados con el metabolismo y fisiologa de las plantas, permitir un incremento de la fotosntesis neta y de la capacidad de utilizacin de los nutrientes, una motor tolerancia a las condiciones naturales extremas y una cierta independencia de las caractersticas fsicas y qumicas de los suelos, la obtencin de plantas resistentes a plagas y pesticidas y la mejora de su calidad nutritiva. GENES DE LA FIJACION DEL NITRGENO La actividad fijadora de nitrgeno atmosfrico est codificada por los llamados genes nif, que han podido transferirse por manipulacin gentica bajo forma de plsmidos (material gentico extracromosmico) desde microorganismos fijadores a otros que no lo son. Las investigaciones actuales sobre estos genes se centran en los siguientes aspectos: -Caracterizacin y manipulacin del grupo nif con objeto de producir plsmidos estables y de alta velocidad de replicacin. -Transformacin de los microorganismos que habitualmente colonizan la rizosfera de las plantas. -Transferencia del grupo nif directamente a las plantas. La transferencia de genes nif a las bacterias y hongos rizosfricos no fijadores constituye un objetivo interesante, pero muy dificultoso. En el caso de microorganismos de vida libre, hay que tener en cuenta que la fijacin biolgica de nitrgeno consume tal cantidad de energa que hace difcil la obtencin de niveles de fijacin apreciables. A esto hay que aadir que los fijadores libres reducen nicamente el nitrgeno que estrictamente necesitan, por lo que la planta no puede aprovecharse de l hasta que no haya sido reciclado, y por otra parte, no fijan en presencia de nitrgeno combinado salvo que existan mutantes apropiados. Por tanto, aunque se dispusiera de una fuente de energa suficiente para conseguir un nivel de fijacin elevado, la misma existencia de ese nitrgeno fijado inhibira la propia fijacin. Sera mucho ms interesante la conversin en fijadores de microorganismos rizosfricos simbiticos con plantas, particularmente de hongos formadores de micorrizas, que contribuyen a la nutricin fosforada de la planta. Sin embargo, existen grandes obstculos para lograr este objetivo, el mayor de los cuales es la prctica incapacidad del hongo de tipo endotrfico para desarrollarse en ausencia del hospedador, lo que dificulta la investigacin gentica. Mientras se resuelven estos problemas, los estudios en levaduras han abierto nuevos caminos al haber hecho posible la introduccin del ADN en Saccharomyces cerevisiae, la levadura de cerveza, que, adems, tiene la ventaja de tener ADN extracromosmico (comparable a los plsmidos bacterianos), con lo que puede usarse como un sistema de reproduccin de genes, y entre ellos los genes nif, que han sido ya transferidos a S. Cerevisiae, aunque hasta el momento no se ha detectado fijacin de nitrgeno en las clulas transformadas.

El problema principal radica en la regulacin de la expresin de los genes nif, es decir, si se consigue transferir estos genes a una clula vegetal y se mantienen estables podran llegar a expresarse?. Por lo tanto, la introduccin del grupo nif en los organismos superiores, como los cereales, no basta, sino que es necesaria tambin la introduccin de genes auxiliares para hacer posible su expresin, lo que significa una modificacin del metabolismo y estructuras vegetales, para lo cual, los avances tcnicos actuales an no estn dispuestos. GENES DE LA FOTOSINTESIS Y OTROS Cualquier accin que incremente el fotosintato o compuesto carbonado disponible, producir un motor rendimiento en la fijacin del nitrgeno, como se ha demostrado en numerosos experimentos en los que se ha incrementado la intensidad luminosa, o utilizando atmsferas enriquecidas en dixido de carbono. La ribulosadifosfato-carboxilasa es la enzima que cataliza la fijacin de dixido de carbono, pero tambin cataliza una reaccin colateral (funcin oxigenasa) en la que se sintetiza el substrato inicial de la fotorrespiracin, por lo que una alteracin de este enzima, que conduzca a la desaparicin o disminucin de la actividad oxigenasa, mediante la manipulacin de los genes que codifican su sntesis, constituye una alternativa prometedora. Por otro lado, la produccin de fotosintato requiere ATP y poder reductor, como el reductor deriva del agua una manipulacin adecuada de los genes disruptores (que producen ruptura) de agua conducir a un mayor poder reductor y a un incremento en la produccin de fotosintatos. Otra forma de incrementar la fijacin de nitrgeno consiste en conseguir que las plantas que forman simbiosis fijadoras puedan cultivarse con buenos rendimientos en condiciones extremas. Presentan gran inters los genes correguladores (osm) que proporcionan proteccin frente a gran variedad de tensiones ambientales, tales como la sequedad, calor o exceso de sales, y que funcionan en numerosas bacterias. La resistencia de las plantas a las diferentes plagas y pesticidas posee tambin un evidente efecto indirecto sobre la fijacin de nitrgeno. Otra posibilidad de la ingeniera gentica es la de mejorar la calidad nutritiva de las protenas de las leguminosas, para ello la localizacin cromosmica de los genes que codifican estas protenas permitir disear experimentos de integracin de caracteres seleccionados, presentes en otras especies vegetales, cuya expresin en plantas de mayor inters agrcola, determinar la sntesis de polipptidos de mayor calidad. Finalmente cabe incluir los genes de utilizacin de celulosa (cut) y los genes de desnitrificacin (den). La celulosa representa una de las mayores fuentes de material orgnico del suelo, proporcionando energa a bacterias hetertrofas fijadoras de nitrgeno libre; adems, el acoplamiento dentro de una misma bacteria de los genes cut y nif permitir la conversin de los desechos celulsicos, en alimentos, energa y productos qumicos. Por su parte los genes den son importantes en la fertilidad del suelo, donde anulan la actividad de los genes de la fijacin del nitrgeno, con el resultado de que se necesitan mayores niveles de fertilizantes nitrogenados para compensar las prdidas. Al margen de todo o anterior hay que considerar que en este tipo de investigaciones existe siempre una serie de signos negativos, ya que cabe la posibilidad de que se llegue a desequilibrar el funcionamiento del ciclo biogeoqumico del nitrgeno. En realidad puede decirse que antes de la fabricacin a gran escala de fertilizantes qumicos y del extensivo cultivo de plantas que forman simbiosis con microorganismos fijadores, la cantidad de nitrgeno extrado de la atmsfera por procesos naturales de fijacin estaba prcticamente compensada por la cantidad devuelta a la misma por desnitrificacin y volatilizacin del amonaco. En la actualidad, sin embargo, existe un desequilibrio a favor de la fijacin, cuya cuanta puede ya superar en un 10 por ciento a la cantidad de nitrgeno devuelta a la atmsfera.

La acumulacin de nitrgeno fijado, es decir, la eutrofizacin de ambientes acuticos y terrestres, es un peligro que debe ser neutralizado mediante una investigacin dirigida a proveer mecanismos de desnitrificacin y prcticas de fertilizacin efectivas, de modo que el ciclo del nitrgeno se mantenga en un equilibrio razonable. El nitrgeno atmosfrico se encuentra a nuestra disposicin, pero hemos de saber cmo y en qu medida debemos utilizarlo.

BIBLIOGRAFA
- Rodrguez Barrueco, C; Sevillano Garca, F; Subramaniam, P . La fijacin del nitrgeno atmosfrico. - Mejas Guijo, M; Palomares Daz, AJ; Ruz Berraquero, F . Aportaciones a la biologa de la fijacin del nitrgeno. Publicaciones de la universidad de Sevilla. - www.utexas.edu/world/lecture/mic/ - www.grain.org - www.amcchemical.com - www.www.gaiker.es