ACCION DE UNA ENZIMA EN TEJIDOS VEGETALES Y ANIMALES

Vanesa Bedoya Betancur Jennifer Mosquera Cuartas

Manuela Macas Montoya Jose A. Mosquera Copete

Universidad de Antioquia, Escuela de Microbiologa. Laboratorio de Biologa Medelln, Antioquia, Colombia

RESUMEN Las enzimas son protenas que ayudan a que la reaccin en los organismos de los seres vivos se lleven con mayor rapidez. Permitiendo que la reaccin que catalice sea ms eficiente, las protenas se ven afectadas por diferentes factores fsicos como son: la temperatura, pH, concentracin y sustrato(molcula sobre la que acta la enzima). Para determinar la presencia de enzima en un cuerpo o sustancia en la cual encontramos catalizadores que pueden ser inorgnico (MnO2) u otro orgnico como la Peroxidasa la cual se encuentra en tejidos vegetales como animales, estos actan sobre el perxido de hidrogeno (H2O2) el cual al estar en exceso intoxica la clula y as ser degradado por una enzima se obtiene un producto de agua(H2O) Y (O2)

2H2O2---------------2H2O+O2 Peroxidasa

PALABRAS CLAVES
Enzima, Catalizador Orgnico, Catalizador Inorgnico, Tejido Animal, Tejido Vegetal, Protena.

OBJETIVOS
Observar el efecto de la enzima peroxidasa, que se halla presente en tejidos animales y vegetales sobre el agua oxigenada. Comparar la accin de la peroxidasa (catalizador orgnico) y del bixido de manganeso (catalizador inorgnico) sobre un mismo sustrato (agua oxigenada). Comprobar el efecto de la variacin de la temperatura en la actividad enzimtica. Ver cul de los dos catalizadores en ms eficiente en distintos cuerpo Observar la efectividad de la enzima peroxidasa que se encuentra en los tejidos animales y vegetales, utilizando el perxido de hidrogeno como sustrato. Comprobar cmo la reaccin de la enzima es afectada por la temperatura.

INTRODUCCION
Todos los organismos vivos contienen en su estructura fundamental clulas, estas producen varias estructuras bsicas llamadas protenas, las cuales son una base fundamental para la vida debido a que ellas satisfacen necesidades propias de dichos organismos. Las protenas son tan importantes como las enzimas ya que estas actan de tal manera que hacen que la energa de activacin disminuya, logrando producir muchas ms en nuestro cuerpo utilizando el menor tiempo posible. Tambin debemos conocer los factores afectantes del funcionamiento de dichas protenas: tales como el pH, la temperatura o la concentracin de la enzima y el sustrato, ya que ello nos ayudara a entender cmo o cuando la accin de las enzimas es ms fuerte o ms dbil. Las enzimas son las que ayudan a un ser vivo a descomponer los sustratos que ingresan en su interior, actuando en la reaccin de descomposicin de estos.

OBSERVACIONES

CATALIZADOR

MnO2 (dixido de manganeso)

PEROXIDASA (HIGADO)

PEROXIDASA (PAPA)

TEMPERATURA

MACERADO

En este fue el que ms reacciono

En este fue el que ms reacciono

FRIO

La que fue Presencia de expuesta al frio la burbujeos pero no reaccin fue tan intensos mnima.

Presencia de burbujeos pero no tan intensos

AMBIENTE

Temperatura ambiente reacciono pero con menor intensidad que la caliente. Fue de mayor intensidad cuando se expone a una temperatura alta.

Reacciono pero menor que en macerado

Reacciono pero menor que en macerado

CALIENTE

No reacciona

No reacciona

CONCLUSION
Todos los organismos vivos, ya sean clulas que conformen tejidos animales o vegetales, cuentan con catalizadores especficos, denominados enzimas, los cuales sirven para ayudar a acelerar la velocidad de los procesos metablicos. Las reacciones de las enzimas pueden ser afectadas en su funcin por algunos factores como la temperatura, el cual es denominado

proceso de desnaturalizacin, es decir, cuando la protena sufre una modificacin en su estructura qumica. La reaccin de la peroxidasa con el agua oxigenada es mucho mayor que la reaccin que se produce con la papa. Cuando hay ms clulas expuestas, la reaccin es mucho ms notoria y ms acelerada ya que hay ms enzimas.

METODOLOGA
Dentro de la prctica del laboratorio se observar especficamente la accin degradante o intensidad de reaccin de un catalizador inorgnico (MnO2) y uno inorgnico (Peroxidasa) sobre el agua oxigenada. Para la Enzima Inorgnica: Se enumeraran 3 tubos de ensayo y cada uno contendr una pequea cantidad de bixido de manganeso y se procede as: * El primer tubo se temperatura ambiente deja a

Se enumeran 8 tubos de ensayo (4 para cada procedimiento) y cada uno contendr una pequea cantidad de: * Hgado (Orgnico Animal) * Papa (Orgnico Vegetal) A continuacin se procede as: * El primer tubo se temperatura ambiente. deja a

* El segundo tubo se lleva al bao mara durante 10 minutos (para aumentar su temperatura) * El tercer tubo se deja en un recipiente con hielo durante 10 minutos (para bajar su temperatura) * El cuarto tubo contendr macerado de la sustancia orgnica (hgado papa) en la que se va a observar la accin externa a la enzima. Luego de esto se echa 1 ml de agua oxigenada (sustrato) a cada uno de ellos y se observa la accin que tuvo la temperatura sobre cada una de las reacciones. Se conserva la muestra que se puso al bao mara para despus de pasado un tiempo (vuelva a bajar su temperatura) se le agregue nuevamente 1 ml de agua oxigenada y observar esta vez el efecto de la enzima sobre el sustrato.

* El segundo tubo se lleva al bao mara durante 10 minutos (para aumentar su temperatura) * El tercer tubo se deja en un recipiente con hielo durante 10 minutos (para disminuir su temperatura) Luego echamos 1 ml de agua oxigenada (sustrato) a cada uno de ellos y se observa la accin que tuvo la temperatura sobre cada una de las reacciones. Conservamos la muestra que se puso al bao mara para despus de pasado un tiempo (vuelva a bajar su temperatura) se le agregue Agregar nuevamente 1 ml de agua oxigenada y observar esta vez el efecto de la enzima sobre el sustrato. Para la enzima Orgnica:

RESULTADOS
Para la Enzima Inorgnica: Se enumeraron los tubos as:

1-MnO2 con Agua Oxigenada a temperatura ambiente. 2- MnO2 con Agua Oxigenada al bao mara. 3- MnO2 con Agua Oxigenada en Hielo. Al tubo 1 le agregamos MnO2 (dixido de manganeso), al echar el agua oxigenada la reaccin fue intensa y persistente y hubo desprendimiento de calor. El tubo 2, tambin contena MnO2 y lo sometimos al bao Mara, despus le agregamos agua oxigenada y observamos que la reaccin fue con mucha mayor intensidad que la del tubo 1. La temperatura catalizador? afecto el

En cuanto al desprendimiento de calor, podemos decir que en la reaccin del hielo y en la reaccin a temperatura ambiente hubo reacciones exotrmicas (desprendimiento de calor), mientras que en el bao de mara no se podra distinguir abiertamente por la temperatura elevada del tubo, pero aun as ah desprendimiento de calor. La intensidad de la reaccin o presencia de burbujas (Desprendimiento de un gas) se dio as: Con mayor presencia en la muestra que estuvo expuesta al bao mara, seguida de la muestra a temperatura normal y por ltimo la muestra a temperatura fra. La muestra al bao mara presenta despus de cierto tiempo una reaccin mayor, evidencindose por el gas desprendido de dicha reaccin. En hielo la reaccin es ms lenta y hay poca cantidad de liberacin de oxgeno. A temperatura ambiente hay una reaccin igualmente rpido pero no tanto como en la del bao mara, se liber oxgeno. Por ltimo el macerado presenta la reaccin ms rpida y una gan liberacin de oxgeno. La cantidad de agua oxigenada que quedo fue abundante en el bao de mara mientras que disminuyo en las otras reacciones por la liberacin de dicho oxgeno.

Si, cuando la temperatura es elevada la reaccin es mucho ms poderosa en el caso del MnO2 (Catalizador inorgnico) . El tubo 3, tambin contena MnO2, este lo sometimos al frio en un recipiente con hielo, despus se le echo agua oxigenada, la disminucin de la temperatura hizo que la reaccin del MnO2 fuera mnima pero hubo tambin desprendimiento de calor. El papel que desempea el MnO2 en la reaccin es que tiene la tendencia de ganar electrones cuando entra en reaccin, por lo tanto, durante una reaccin qumica, el catalizador (MnO2) gana electrones, este proceso se denomina reduccin.

Igualmente inorgnico presentan (reacciones excluyendo volver a oxigenada. Para la (Hgado):

que con el catalizador todas las reacciones liberacin de calor exotrmicas), reaccin mediana al adicionarle agua

La muestra al bao mara no presenta reaccin, cuando dejamos que vuelva a temperatura normal y le agregamos nuevamente agua oxigenada no se produce ningn cambio. Para la Enzima Orgnica (Papa):

Enzima

Orgnica

1-Peroxidasa (Papa) con oxigenada al bao mara. 2-Peroxidasa (Papa) oxigenada en hielo. con

agua

Se enumeraron los tubos as: 1-Peroxidasa (Hgado) con agua oxigenada al bao mara. 2-Peroxidasa (Hgado) con agua oxigenada en hielo. 3-Peroxidasa (Hgado) con agua oxigenada a temperatura ambiente. 4-Peroxidasa (Macerado Hgado) con agua oxigenada a temperatura ambiente. La del bao mara que presenta prcticamente una mnima reaccin o no presenta. La intensidad de la reaccin o presencia de burbujas (oxigeno) se dio as: Rapidez: En primer lugar el macerado, segundo el de temperatura ambiente, tercero la temperatura fra y cuarta al bao mara. Cantidad: Podemos ver que el macerado y la muestra a temperatura ambiente alcanzan gran cantidad de liberacin de oxgeno, seguida por el hielo y con una cantidad casi nula al bao mara.

agua

3-Peroxidasa (Papa) con agua oxigenada a temperatura ambiente. 4-Peroxidasa (Macerado Papa) con agua oxigenada a temperatura ambiente. Al bao mara prcticamente no hubo reaccin solo se observan unas pequeas burbujas en la parte de abajo del tubo de ensayo, con el hielo la reaccin fue rpida y hubo liberacin de oxgeno, a temperatura ambiente hay una reaccin rpida mayor que el hielo pero con mayor cantidad de oxgeno y finalmente en el macerado se produce la reaccin con mayor cantidad de burbujas (oxigeno) y presenta una mayor cantidad de estas a lo largo del tubo. Igualmente las reacciones exotrmicas solo dejan de aparecer o aparecen muy poco en la muestra que estuvo expuesta a grandes temperaturas o al bao mara y esta a su vez contiene la mayor cantidad de agua oxigenada al finalizar la reaccin. La intensidad de la reaccin o presencia de burbujas (oxigeno) se dio as:

Rapidez: Macerado, seguido de la que est a temperatura ambiente, luego la muestra en temperatura frio y por ltimo la que estuvo en bao de mara. Cantidad: macerado, temperatura hielo y por bao mara. Primero est el luego la muestra a ambiente, seguida del ltimo la que est al

ptimas se desnaturalizaran y no siguieran regulando el proceso dentro de la reaccin que se estaba dando. Por otro lado, en el otro extremo tenemos las muestras expuestas a una temperatura relativamente baja (en hielo), estas reaccionan al contacto con el agua oxigenada, aunque es baja la temperatura todava no es lo suficientemente para desnaturalizarse, pero s perdern sus molculas energa cintica por lo que se volvern ms rgidas. Por este motivo se presenta una reaccin pero con una cantidad menor de liberacin de oxigeno que en muestras a temperaturas ambiente. Lo que vemos en las muestras a temperatura ambiente es la accin de las enzimas en su rango lgico de funcionamiento, no es el valor ideal pero tampoco es un valor de temperatura extremo (muy bajo o muy alto) por lo que las enzimas intervendrn en la reaccin produciendo una mayor cantidad de oxigeno que en las muestras de diferentes temperaturas. El macerado tambin es una muestra a temperatura ambiente por lo que debera parecerse la reaccin a la muestra completa de las enzimas orgnicas, en efecto en las muestras a temperatura ambiente es donde se presenta mayor accin enzimtica pero en la del macerado es ms rpida y con un apreciable incremento de oxgeno. Podremos asociar los sucesos de velocidades de reaccin a otro factor de cambio externo que puede darse: la concentracin de la enzima y del sustrato. Decimos que como en el macerado el sustrato esta subdividido la enzima podr actuar

La muestra al bao mara no presenta reaccin, cuando dejamos que vuelva a temperatura normal y le agregamos nuevamente agua oxigenada no se produce ningn cambio. DISCUSION Teniendo en cuenta los resultados obtenidos vemos que la accin de las protenas enzimticas se ve afectada por factores externos como la temperatura, vemos que los catalizadores inorgnicos y los orgnicos sufrirn modificaciones en su forma de actuar ya que los resultados de las reacciones obtenidos a diferentes temperaturas pueden llegar a ser valores extremos e inversamente proporcionales a la temperatura con la que son expuestos los agentes enzimticos. Podemos decir (por teora) que en general la accin catalizadora aumenta con la temperatura pero solo hasta cierto punto de actuacin, en dicho punto las enzimas dejan de aprovechar la energa cintica de sus molculas y en vez de eso se desnaturalizan, provocando as que en el experimento las muestras que estaban al bao mara a temperaturas ms altas que las

independiente sobre cada concentracin de sustrato orgnico, posibilitando una mayor cantidad de reaccin en menor tiempo (accin general de las enzimas). Con respecto a la liberacin de calor, se puede entender como el resultado de que las enzimas y toda la reaccin tengan que disipar energa, ya que esta no se puede destruir, solo convertir o transferir. Pues bien la energa es transferida una vez es utilizada en la reaccin al medio exterior liberndose en forma de calor. Con la cantidad de agua oxigenada que queda, podemos decir que entre ms agua oxigenada (sustrato) reaccione y se convierta, el sustrato original ir disminuyendo y mientras que entre menos cantidad de sustrato se catalice mayor ser la cantidad de agua oxigenada original quede. Las muestras al bao mara son dejadas un tiempo para recuperar parte de la temperatura original (ambiente), pero al agregarle el sustrato no reacciona ya que la desnaturalizacin que sufri es un proceso irreversible. Por ltimo podemos decir que las acciones catalizadoras orgnicas e inorgnicas presentan caractersticas similares en cuanto a los factores externos de los que ellas dependen. Pero como los compuestos y las enzimas tienen diferentes propiedades fsicas y qumicas, el rango de accin de temperatura ideal de los catalizadores puede cambiar de acuerdo a situaciones particulares del medio en que este o su propia configuracin como protena.

Preguntas procedimiento
1. A. Qu papel desempea el bixido de manganeso en la reaccin? Y el agua oxigenada? Hubo desprendimiento de calor? El bixido de manganeso es el catalizador inorgnico y el agua oxigenada es el sustrato de la enzima. Hubo desprendimiento de calor y solo se libera oxgeno y agua. B. Ocurri con mayor o menor intensidad? El aumento de la temperatura afecto el catalizador? La temperatura alta altera el catalizador y este aumento hace que reaccione ms rpidamente y con mayor intensidad para el caso del inorgnico, en el catalizador orgnico este se desnaturaliza y no reacciona. C. Cmo afecto la disminucin de la temperatura la accin del bixido de manganeso? La disminucin de la temperatura hace que el catalizador reaccione con menor intensidad, pero igual hay desprendimiento de calor. 2. A. Qu papel desempea el hgado en la reaccin? Cul es la naturaleza qumica de la sustancia que cataliza esta reaccin? Hubo desprendimiento de calor? El hgado es el tejido que contiene la enzima que acta como catalizador en la reaccin, es de carcter animal y si hubo desprendimiento de calor.

B. Hubo reaccin? Compare con el resultado obtenido en el tem 1B y explique lo observado. Es diferente a lo ocurrido en el tem 1B, debido a que en este la temperatura aumenta y permite que la intensidad de la reaccin sea mayor, lo contrario que pasa con el hgado a esta misma temperatura, que no reacciona ya que la enzima se desnaturaliza. C. Hubo reaccin? Cmo es su intensidad en relacin con la observada en el tubo 1 del tem 2a? Qu efecto tiene la disminucin de la temperatura sobre la accin del catalizador? Cree usted que si el agua oxigenada se agregara despus de dejar que el hgado vuelve a la temperatura ambiental, la intensidad de la reaccin ser como la de dicho tubo 1? Hay reaccin pero en menor intensidad, la disminucin de la temperatura es lo que influye en que no haya casi reaccin. Cuando dejamos que el hgado vuelva a su temperatura ambiente, la intensidad de la reaccin es diferente ya que en el tubo 1 no se ha expuesto a ningn catalizador y por esto reacciona, en cambio en el tubo 3 ya hubo exposicin y esto hace que no haya reaccin. D. Esta reaccin es mayor o menor en intensidad a la del tubo 1 del tem 2 A? Por qu? Presenta mayor intensidad porque al agregarle el sustrato reacciona rpidamente ya que hay ms disponibilidad de la enzima.

E. Qu observa en cada tubo? Explique esos resultados. En el catalizador inorgnico el calor afecta la enzima y hay poca reaccin y en el caso del hgado, el calor desnaturaliz sus componentes. 3. A. Qu papel desempea la papa en la reaccin?Cul es la naturaleza qumica de la sustancia que cataliza esta reaccin?Hubo desprendimiento de calor? La papa es el tejido vegetal el cual contiene la enzima que acta como catalizador y hay desprendimiento de calor. B. Hubo reaccin? Compare con el resultado obtenido en el tem 1B y explique lo observado Es contrario a lo que ocurre en el tem 1B, el aumento de la temperatura permite que la reaccin sea intensa, en cambio en la papa a temperatura alta no se produce reaccin ya que la enzima se desnaturaliza. C. Hubo reaccin? Cmo es su intensidad en relacin con la observada en el tubo 1 del tem 2a? Qu efecto tiene la disminucin de la temperatura sobre la accin del catalizador? Cree usted que si el agua oxigenada se agregara despus de dejar que la papa vuelve a la temperatura ambiental, la intensidad de la reaccin ser como la de dicho tubo 1? Hay reaccin pero en menor proporcin comparada en la que est a temperatura ambiente. Cuando dejamos que la papa vuelva a su temperatura ambiente, la

intensidad de la reaccin es diferente ya que en el tubo 1 no se ha expuesto a ningn catalizador y por esto reacciona, en cambio en el tubo 3 ya hubo exposicin y esto hace que no haya reaccin D. Esta reaccin es mayor o menor en intensidad a la del tubo 1 del tem 2 A? Porque? Con la papa macerada hay ms reaccin debido a que hay ms exposicin de la enzima provocando ms intensidad al reaccionar con H202. E. Que observa en cada tubo? Explique esos resultados El tubo que contena papa con H202 deja que vuelva a temperatura ambiente y se le vuelve a agregar agua oxigenada, est ya no se presenta reaccin. El tubo que contena hgado con H2O2 deja que vuelva a temperatura ambiente y se le vuelve a agregar agua oxigenada, este ya no presenta reaccin. El tubo que contena MnO2 con H2O2 deja que vuelva a temperatura ambiente y se le vuelve a agregar agua oxigenada, este ya no presenta reaccin. Esto sucede porque cuando una enzima se desnaturaliza, causa un proceso irreversible por lo tanto ya no produce reaccin alguna. La intensidad de la reacciones fue mayor o menor cuando se utiliz hgado o cuando se utiliz papa? Hay mayor reaccin en el hgado que en la papa.

Preguntas gua laboratorio

1. En toda reaccin enzimtica hay liberacin de energa? Explique. No necesariamente puesto que en algunos casos esta energa podr ser almacenada para luego poder ser utilizada en otras reacciones o mecanismos (Ejemplo: Funcionamiento de las Enzimas Celulares). 2. Siempre que en una reaccin enzimtica se libera energa es en forma de calor? Explique. Generalmente las reacciones catablicas como en este caso, cuando presentan una liberacin de energa es en forma de calor, debido a que los metabolismos ms complejos tienen enlaces de alta energa que al romperse generan dicho calor. Sin embargo la efervescencia que produce la liberacin de un gas (oxigeno) tambin se considera como liberacin de energa. 3. Qu cambios pueden sufrir, con relacin a la estructura qumica y al nmero inicial de molculas, el sustrato y la enzima en una reaccin? Durante una reaccin qumica el sustrato puede transformarse, es decir, perder o ganar molculas dependiendo de los compuestos y el medio con el cual reaccione (en este caso pierde porque se degrada). En cuanto a la enzima esta se puede desnaturalizar como vimos por acciones externas (temperatura), cambiar su configuracin qumica dependiendo

de la situacin o el factor, pero conservando su cualidad catalizadora. 4. Si usted hace reaccionar agua oxigenada con peroxidasa y espera hasta que termine la reaccin, Cmo comprobara que la enzima conserva su poder cataltico? Podramos adicionar nuevamente agua oxigenada a la muestra, una vez termine la reaccin dejar que la enzima acte completamente y quede libre de nuevo, luego ver si todava esta puede ser catalizada generando ms oxgeno. Tambin podramos eliminar el oxgeno que se produjo en la reaccin inicial del tubo de ensayo y adicionar nuevamente agua oxigenada una vez la enzima este libre y naturalizada para una nueva reaccin. 5. En cul organela celular se sintetizan las enzimas? En el retculo endoplasmtico rugoso, generalmente en los ribosomas que es donde se da la sntesis de protenas, como las enzimas son protenas entonces los ribosomas sintetizan de igual manera a estas, aunque hay algunas enzimas que son sintetizadas en las mitocondrias pero se emplean nicamente all y son muy pocas. 6. Las enzimas naturales actan nicamente en el interior de las clulas? Explique por medio de varios ejemplos. Muchas de las enzimas se encuentran en el citoplasma de la clula, otras estn unidas a otras clulas como las enzimas respiratorias que catalizan el

metabolismo del cido lctico, tambin las sustancias derivadas de cidos aminados (pertenecientes al grupo amino) y cidos grasos. Otro ejemplo puede serlos catalizadores inorgnicos utilizados actualmente (como el usado en el laboratorio, Bixido de manganeso). 7. Qu otros factores, adems de los cambios en la temperatura y en el pH, influyen en la actividad de una enzima? * La concentracin de sustrato y enzima *Inhibidores enzimticos (Competitivos y no competitivos) * Activadores *Cofactores (necesario accin de una enzima) para la

8. Desde el punto de vista enzimtico, Qu diferencia hay entre la leche cruda y la pasteurizada? En la leche cruda todos los nutrientes estn intactos, por lo tanto las enzimas tambin estarn intactas. Por otro lado en la leche pasteurizada se destruyen enzimas, pero a la vez tambin se destruyen bacterias, por lo que es un proceso de ambigua utilidad. 9. Cmo explicara el hecho de que la ptialina de la saliva acte sobre el almidn en la boca pero no en el estomago? La ptialina presente en la saliva empieza a actuar sobre el almidn que entra, degradndolo y formando maltosa, una vez degradado y vuelto un producto, la enzima no

puede volver a degradarlo, a partir de all entrara la funcin del estmago con sus cidos y otras enzimas que tomaran sus propios sustratos (bolo alimenticio) y los convertirn por medio de una

segunda transformacin en otros productos (quimo). 10. Cite cinco enzimas con los sustratos respectivos sobre los cuales actan y los productos que se obtienen:

ENZIMA Fenilanina Hidrolasa Ptilanina Peroxidasa Luciferasa

SUSTRATO Aminocido Fenilanina Almidn y Glucgeno Perxido de Hidrogeno Luciferina

Peptidasas

Protenas

PRODUCTO Tirosina Maltosa Agua y Oxigeno Molcula en estado excitado o de alta energa Protenas ms simples (con enlaces rotos) o directamente aminocidos