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Técnicas de colecta y tinción de parasitos - Microbiología II

Técnicas de colecta y tinción de parasitos - Microbiología II

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Published by José Manuel
FES Zaragoza, QFB BC, 2009-1, 1701, Técnicas de colecta y tinción de parasitos - Microbiología II
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Técnicas decolecta ytinción deparásitos
24 de septiembre
2008 
Las tinciones se utilizan para diferenciar fácilmente la morfología y estructurade los organismos en observación. Los colorantes modifican el índice derefracción de las sustancias que colorean.
Práctica III
 
[TÉCNICAS DE COLECTA Y TINCIÓN DEPARÁSITOS]
 24 de septiembre de20082
Técnicas de colecta y tinción de parásitos
Práctica 3
Universidad Nacional Autónoma de México.
Facultad de EstudiosSuperiores Zaragoza, UNAM. Av. Guelatao 66, Col. Ejército de Oriente, 09230México D.F.Laboratorio de Microbiología L-121Pérez Pérez José Manuel, Equipo 1, Grupo 1701
 
Introducción:
MÉTODOS DE COLORACIÓN:
Se utilizan para diferenciar fácilmente la morfología yestructura de los organismos en observación.Los colorantes modifican el índice de refracción de lassustancias que colorean.
COLORACIÓN DE GIEMSA
: se emplea en Hematologíapara observar los elementos sanguíneos normales y enMicrobiología para identificar parásitos (protozoarios dela sangre y los tejidos), espiroquetas, levaduras y hongos (Chlamydia).Observación: Los núcleos de células y protozoarios seobservan en color, el citoplasma en color azul claro. Loseritrocitos en color gris claro.Utilidad: se emplea principalmente en frotis sanguíneospara observar a los agentes patógenos junto a las célulassanguíneas y mostrar las diferencias entre ambos. Seponen en evidencia lamorfología y estructura de los microbios. Estas diferencias pueden ayudar aldiagnóstico certero de varias enfermedades infecciosasde la sangre.Nota: El colorante de Giemsa es un colorante compuestoya que es una mezcla de varios colorantes. Por esto sedice que la coloración de Giemsa es una coloracióncompuesta o diferencial (ya que emplea más de uncolorante).Fundamento: se basa en la distinta afinidad quedemuestran las células y sus componentes a los distintoscolorantes incluidos en el colorante de Giemsa.Técnica: se realiza el extendido de la gota de sangre (gotagruesa del pulpejo del dedo gordo). Se deja secar, secubre con la solución de Giemsa, se lava con agua y seobserva. El fijador (metanol o etanol) se usa cuando secuentan con muestras de tejidos, no debe usarse conextendidos de sangre.Resultados erróneos: se deben principalmente a erroresdurante el extendido sanguíneo o durante la aplicacióndel fijador.La tinción de Giemsa emplea como colorantefundamental, una mezcla de tiácinicos catódicos, como elazur A,B y azul de metileno, que colorean el núcleo,mientras que la eosina para coloración citoplasmática,estas sustancias están disueltas en alcohol metílico. Sufundamento está en la disociación controlada de las salesde eosinato, que ocurre por la mezcla de Giemsa conagua destilada. La cromatina nuclear adopta la tinciónazul violácea algo distinta a la habitual para loscolorantes tiacínicos y que recibe la denominación deefecto GiemsaResultaos e interpretación:Los eritrocitos se tiñen de rosaLas plaquetas de violetaLos núcleos de los leucocitos de violetaEl citoplasma de los leucocitos es rosa.La tinción de Giemsa al igual que la tinción de Wrightsirven para la identificación de parásitos tales como elPaludismo en los cuales es conveniente un tiempo de 30minutos hasta una hora para Giemsa y de tres a cincominutos para Wright aunque se podrían obtener mejoresresultados si se le deja a éste ultimo hasta por 15minutos. El método de Wright brinda buenos resultadosy requiere de muy poco tiempo, pero se obtiene detallesmás precisos con la tinción de Giemsa.El método de Wright solo se puede aplicar a frotisdelgados mientras que en Giemsa se pueden usar frotisdelgados y frotis de gota gruesa omitiendo el paso defijación con alcohol metílico.Las preparaciones en fresco son utilizadasprincipalmente para la identificación de Tripanosomas ymicrofilarias; los frotis teñidos (delgados) sirven paraidentificar diferencias morfológicas de protozoarios encélulas sanguíneas, mientras que la gota gruesa esutilizada cuando escasean los parásitos o cuando enfrotis delgados los resultados son negativos, pero es muydifícil la identificación estructural de estos; estos tambiénse utilizan para la identificación de Tripanosomas,microfilarias, plasmodios y leishmanias.Uno de los inconvenientes del uso de canastillas durantelas tinciones es la cantidad de colorante que se requiere
 
[TÉCNICAS DE COLECTA Y TINCIÓN DEPARÁSITOS]
 24 de septiembre de20083
para llenar hasta el borde superior de los portaobjetos yla contaminación de los reactivos (figura 1y 2), así comotambién la posibilidad de formación de espacios libres decolorante por la presencia de aire entre los portaobjetosimpidiendo la tinción.*Tinción de WrightFundamento:La tinción de Wright es una tinción de tipo Romanowsky.Es extremadamente importante en el laboratorio dehematología este tipo de tinción, ya que puedeobtenerse una cantidad abundante de información apartir del examen de un frotis de sangre periférica bienteñido.Una tinción de Romanowsky consiste en azul de metilenoy sus productos de oxidación, así como eosina Y o eosinaB.La acción combinada de estos colorantes produce elefecto Romanowsky y da una coloración púrpura a losnúcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos yde color rosado a los eritrocitos. Los componentes deeste efecto son el azul B y la eosina YLas propiedades de tinción de Romanowsky dependendel enlace de los colorantes a las estructuras químicas yde las interacciones del azul B y la eosina Y. Losagrupamientos de ácidos nucleicos, las proteínas de losnúcleos celulares y el citoplasma inmaduro reactivo, fijanel azul B, colorante básicoLa eosina Y, colorante ácido, se fija a los agrupamientosbásicos de las moléculas de hemoglobina y a lasproteínas básicas.La naturaleza ácida o básica de las estructuras celularesdetermina su avidez por los componentes del colorantepolicromático de Wright; es así como los ácidos nucleicosse tiñen con azul B que es el básico y la hemoglobina conla eosina Y que es ácida. Otras estructuras se tiñen poruna combinación de ambos y se denominan neutrófilas.ObservacionesUna tinción satisfactoria debe dar los siguientesresultados:Glóbulos Rojos: rojo amarillento.Neutrófilos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma rosapálido y gránulos lila.Eosinófilos: cromatina púrpura oscuro, citoplasma azulpálido y gránulos rojo brillante.Basófilos: cromatina púrpura oscuro, gránulos azuloscuro. Linfocitos: cromatina púrpura oscuro, citoplasmaazul cielo.Monocitos: cromatina púrpura medio, citoplasma azulgrisáceo y gránulos lila Plaquetas: centrómero violeta opúrpura, hialómero azul claro.Causas de error en la tinción del frotis sanguíneo.Una extensión excesivamente azul (basófila).Extensión gruesa.Lavado insuficiente.Tiempo tinción excesivamente prolongado.Empleo de colorante excesivamente alcalinoUna coloración excesivamente rosada (acidófila).Extensión delgada.Exceso de buffer.Empleo de colorante excesivamente ácido.Solución colorante de GiemsaLa solución colorante de Giemsa se usa tanto paramanchas de sangre como para manchas de bacterias.Una parte de la solución base concentrada se deberádiluir en diez partes de agua destilada.Utilice una mancha de sangre secada al aire y fije lapelícula al portaobjeto colocándola en alcohol metílicode 70% de tres a cinco minutos. Seque el portaobjeto alaire. Luego coloque el portaobjeto en un plato o frasco(en el frasco de Coplin, si se cuenta con uno) quecontenga solución colorante de Giemsa de 15 a 30minutos. Finalmente lave el portaobjeto en aguadestilada y séquelo.Muchas soluciones colorantes (generalmente aquellasque son tintes básicos de anilina, como la fucsina básica,el violeta cristal, el azul de metileno y la safranina) puedeser usadas para colorear la bacteria. Se deberá diluir lasolución colorante; vierta una parte de la solución baseconcentrada en diez partes de agua. Se deberá aplicar lasolución colorante de uno a dos minutos, lavando luegoy, por último, secando con papel secante. Loscubreobjetos no son necesarios a menos que quieravolver sus portaobjetos en permanentes. En tal caso,añada una gota de bálsamo cuando el portaobjeto estéseco y luego añada un cubreobjeto.FILARIASSon un tipo de gusanos de aspecto filamentoso, largos ydelgados, que suelen aparecer en el tejido linfáticoenrollados unos a otros.La hembra puede tener distintas localizaciones en elorganismo y es la que produce las microfilarias quealcanzan el torrente circulatorio. Cuando el individuo espicado por un mosquito, le transfiere las microfilarias yen su interior desarrolla el ciclo infeccioso de las larvas.Cuando este mosquito vuelve a pica a otra persona, letransmite las larvas.La detección se lleva a cabo en sangre periférica y seránecesario realizar varias tomas ya que la presencia ensangre es variable.Las dos especies más importantes desde el punto devista clínico son: (infecta los vasos linfáticos y regióninguinal) yTécnicas para la coloración de protozoosMétodo de Klein modificado (impregnación de plata paratri codínidos)Preparar frotis delgados tanto de piel como de lasbranquias en un portaobjeto bien limpio.Se deja secar al ambiente.

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Jhon Kleyder added this note
muy buena
StRellita Flowers added this note
muy bnaa....
Ingrid Arge added this note
excelente!!!!
ESTA DEMASIADO CLARO ME PARECE MUY CLARA LA EXPLICACIÓN
Virib Garcia liked this
Iris Resendiz liked this
Jonathan Niato liked this
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