04 - PD - BT - Microbiología y Taxonomía Microbiana

Microbiologa y taxonoma microbiana
Programa desarrollado
Ingeniera en: Biotecnologa
Programa de la asignatura: Microbiologa y taxonoma microbiana
Clave: 200920416 190920416
ESAD

Unidad 1. Taxonoma microbiana

Antes del descubrimiento de los microorganismos se crea que todos los seres vivos que existan eran plantas y animales, sin embargo durante el siglo XIX se comprob que los microorganismos tienen propiedades tanto de plantas y animales. En 1866, Haeckel propuso que los microorganismos se incluyeran en un clado separado, el del los Protistas, que inclua a: algas, hongos, protozoarios y bacterias. Sin embargo a mediados del siglo XX las nuevas tcnicas de microscopa electrnica, revelaron que las bacterias por su estructura celular difieren fundamentalmente de los otros tres grupos; por lo que se localizan dentro del reino Monera, ya poseen un tipo de estructura celular ms primitiva llamada procaritica. Linneo un estudioso de la botnica nacido en Suecia categoriz un enorme grupo de especies estableciendo divisiones que las agrupaban para su estudio, muchas de esas categoras son usadas en la actualidad (Solomon et al., 2008). La clasificacin Linneana es la denominada clasificacin binomial, que se escribe en latn y denomina a las especies y gneros de cada ente vivo, establecindose as un lenguaje cientfico adoptado internacionalmente. Existen 5 reinos en orden evolutivo: Monera (se incluyen a las bacterias y a las algas verde-azules o cianobacterias, no tienen ncleo ni orgnulos definidos), Protista (incluye a los microorganismos eucariotas, como algas rojas y pardas; y los protozoos), Fungi y/o Hongos (no son plantas aunque parezcan, poseen clulas eucaritas con su ncleo y paredes celulares definidas pero carentes de pigmentos fotosintticos), Plantae y/o plantas (presentan pigmentos fotosintticos) y Animalia y/o animales (que incluye a todos los animales invertebrados y vertebrados). La mayor parte del mundo cientfico utiliza hoy estos cinco reinos para clasificar al mundo de la diversidad biolgica; por lo que al biotecnlogo le sern de gran utilidad el conocer a los microorganismos para usarlos a nivel industrial y en beneficio del ambiente que lo rodea (Solomon et al., 2008).
Presentacin de la unidad
La importancia de estudiar taxonoma microbiana radica en conocer las investigaciones y logros cientficos, mediante anlisis taxonmicos, donde el alumno desarrollar habilidades para identificar los sistemas de clasificacin de microorganismos y como es que llevan a cabo su proliferacin de tal manera que se apliquen los conocimientos adquiridos para la elaboracin de un ensayo.
Propsitos
- Analizars la forma de nombrar a los microorganismos y su importancia dentro del mbito ambiental e industrial.

- Incorporars los conceptos fundamentales de taxonoma microbiana con el fin de entender el desarrollo cuantitativo de las bacterias, lo cual posteriormente te permitir desarrollar habilidades para la investigacin, resolucin de problemas y toma de decisiones.
Competencia especfica
Analizarla taxonomaycrecimientobacteriano mediantela comprensindesusfundamentos ybeneficios para proponermejorasalos distintosprocesos biotecnolgicos.
1.1. Definicindetaxonoma
La taxonoma es un rea de la ciencia biolgica que comprende tres disciplinas diferentes: clasificacin, nomenclatura e identificacin. La taxonoma se divide en: Microtaxonoma: su objetivo es identificar, describir y delimitar especies. Macrotaxonoma: su finalidad es construir clasificaciones de los taxones y se auxilia de la microtaxonoma (Solomon et al., 2008). Ahora bien, para llevar a cabo la clasificacin de las bacterias, los taxnomos bacterianos se vieron forzados a buscar, adems de las caractersticas estructurales, diferentes tipos de propiedades como las bioqumicas, fisiolgicas y ecolgicas. Dicha clasificacin se basa en atributos funcionales, ya que la mayor parte de las bacterias slo pueden identificarse por lo que hacen y no simplemente por su apariencia. Esto representa un problema adicional para el taxnomo bacteriano, el estudio de estas propiedades funcionales conlleva a la realizacin de experimentos, por lo tanto ste nunca podr estar seguro de haber llevado a cabo los experimentos adecuados con fines taxonmicos: podra ocurrir que omitiera la realizacin de ciertos experimentos que indicaran la existencia de agrupamientos significativos dentro de una coleccin de cepas. Sin embargo, est tomando auge una nueva alternativa biotecnolgica que podra resolver pronto el problema, son las tcnicas moleculares para la caracterizacin genotpica bacteriana, que proporcionan una posible base objetiva para la definicin de especie bacteriana (Trtora, 2008).

En el siglo XVIII, Carlos Linneo desarroll un sistema de clasificacin para nombrar a los microorganismos como una forma de facilitar la comunicacin eficaz entre los microbilogos, por lo que se le conoce como el Padre de la Taxonoma, que es la ciencia encargada de la clasificacin y denominacin de la gran variedad de especies existentes (Solomon et al., 2008).
Carlos Linneo (1707-1778) (http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Carl_von_Linn%C3%A9.jpg) La taxonoma (del griego , taxis, "ordenamiento", y , nomos, "norma" o "regla") es la ciencia de la clasificacin; est relacionada con la Sistemtica, que se refiere a la clasificacin o agrupamiento sistemtico de los organismos en grupos o categoras llamados taxa (del griego, transliterado como taxis, "ordenamiento"), por lo tanto es un grupo de organismos emparentados, que en una clasificacin dada han sido agrupados, asignndole al grupo un nombre en latn, una descripcin, y un "tipo", de forma que el taxn de una especie es un espcimen o ejemplar concreto. La taxonoma se divide en tres partes: a) Clasificacin: es el agrupamiento ordenado de unidades dentro de unidades mayores. b) Nomenclatura: es la denominacin de las unidades definidas tomando en cuenta su clasificacin. c) Identificacin: hace uso del criterio establecido por la clasificacin y nomenclatura mencionadas, ya que los microorganismos se identifican comparando las caractersticas de las unidades desconocidas y las conocidas.
1.1.1.Nomenclatura
Como se mencion anteriormente, la nomenclatura es una de las partes de la taxonoma y, respecto a sta, existen cdigos como el zoolgico, botnico y bacteriolgico que se basan en determinados principios comunes mediante el sistema de clasificacin de Linneo, el cual se denomina sistema binomial de nomenclatura, donde a cada especie se le asigna un nombre compuesto de dos partes: la primera designa el gnero, y la segunda el epteto especfico, los cuales se escriben en letra cursiva; los dos anteriores forman el nombre cientfico de cada especie. Es importante destacar que el epteto especfico siempre debe ir precedido del nombre del gnero abreviado o completo (Solomon et al., 2008).

1.1.3.Biologa sistemtica
En el sistema binomial de nomenclatura se agrupa a las especies dentro de un gnero comn, estos a su vez se constituyen en familia, las cuales a su vez se agrupan en ordenes, los ordenes en clases, las clases en filums filo (phylum, plural phyla que es un tipo de organizacin),los filums forman reinos y los reinos dominios (Solomon et al., 2008). Categora o nivel taxonmico Especie Caractersticas Organismo que solo se puede reproducir con otro de su misma especie Grupo de especies relacionadas. Grupo de gneros relacionados. Grupo de familias relacionadas. Grupo de rdenes relacionadas. Grupo de clases relacionadas. Grupo de phyla relacionados Grupo de reinos. Las especies que habitan el planeta.
Gnero Familia Orden Clase Filum o Phylum Reino Dominio Vida Niveles taxonmicos
La forma de nombrar a los microorganismos es mediante la clasificacin en grupos de una serie grande de microorganismos; los cuales deben parecerse entre s con un grado mayor de semejanza que los miembros de otro grupo. De esta manera, el objetivo del nombre cientfico es el de poseer un nico nombre que pueda ser utilizado en todo el mundo, en cualquier lengua, para referirse a un nico taxn (Solomon et al., 2008). Los nombres cientficos son en latn, o latinizados. A continuacin se muestran algunos ejemplos:

Nombre vulgar Perro bacteria que causa el clera bacteria causante de la fermentacin del yogurt
Nombre cientfico Canis familiaris o C. familiaris Escherichia coli o E. coli Lactobacillus bulgaricus o L. bulgaricus.
Los nombres cientficos no son muy usuales, puesto que se escriben en latn y es muy difcil su pronunciacin; por lo que es preferible usar el nombre vulgar o comn a pesar de que suele variar segn las localidades o regiones.
Actividad 1. Archivo evolutivo

En esta actividad ejercitars el dominio de nomenclatura analizando la clasificacin taxonmica de dos microorganismos distintos.Ests de acuerdo en la forma de nombrar a los organismos que nos rodean como lo propuso Linneo?Con base en lo que has aprendido menciona que clasificacin propondras t si fueses taxnomo, realiza lo que a continuacin se te pide: 1. Elige dos microorganismos diferentes. 2. Por medio de un cuadro comparativo,describe la clasificacin taxonmica de cada uno de elloshaciendo nfasis en sus diferencias 3. Apoyatu trabajo con imgenes y s cuidadoso con la ortografa. 4. Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U1_A1_XXYZ y envalo a tu Facilitador(a) mediante la seccin de Tareas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu Facilitador(a) puede detectar esta situacin sin dificultad; tu formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
1.4.1. rboles filogenticos

La clasificacin moderna a menudo recibe el nombre de sistemtica, porque se basa en relaciones evolutivas entre los organismos. Muchos taxnomos utilizan la sistemtica ya que tratan de reconstruir la historia evolutiva o filogenia (produccin de los filums) de los organismos.Por lo tanto un rbol filogentico muestra las relaciones evolutivas entre varias especies u otras entidades que se cree que tienen un ancestro en comn; es una forma de cladograma (Solomon et al 2008).

Un cladograma es un diagrama representativo en la clasificacin taxonmica de los organismos, en el que se muestra la relacin entre distintas especies segn una caracterstica derivada, resultado del anlisis cladstico de una especie. Los cladogramas son importantes herramientas filogenticas para el estudio de conceptos cientficos. En biologa, se utilizan rboles parecidos a los genealgicos para representar cmo se encuentran emparentados evolutivamente los organismos, se les conoce como rboles filogenticos. En los rboles genealgicos se utiliza informacin proporcionada por los familiares y para los rboles filogenticos se usa informacin proveniente de fsiles, as como aqulla generada por la comparacin estructural y molecular de los organismos (Solomon et al., 2008).
rbol filogentico de la vidahttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/55/Phylogenetic_tree-es.png En la figura anterior se explica a manera de rbol filogentico el origen evolutivo de la vida en el planeta, de acuerdo a las caractersticas morfolgicas de dichos organismos,stos van desde las formas sencillas como las bacterias hasta las ms complejas como las plantas y animales (Solomon et al., 2008). Debido al origen evolutivo de las especies, estas pueden tener diferentes formas de rboles filogenticos: Monofilticos: es un grupo de organismos que tiene un antepasado comn con todos y cada uno de sus descendientes.

rbol monofiltico http://www.ual.es/GruposInv/myco-ual/galer13.htm Parafiltico: si faltan algunos de los descendientes, los cuales han sido incluidos en otros grupos.
rbol parafiltico http://www.ual.es/GruposInv/myco-ual/galer13.htm Polifiltico: si contiene organismos de varios clados, es decir, que no proceden de un antepasado comn cercano; simplemente, se han reunido por conveniencia de los investigadores.
rbol Polifiltico http://www.ual.es/GruposInv/myco-ual/galer13.htm

Actividad 2. Bacterias fichadas

Con la finalidad de reforzar lo visto anteriormente sobre rboles filogenticos, en esta actividad profundizars en el conocimiento de las relaciones que existen dentro del rbol filogentico enfocado a las bacterias patgenas y especies de microorganismos que causan enfermedades comunes en Mxico. 1. Realiza una lista de cuatro especies de bacterias que causan enfermedades en Mxico y coloca entre parntesis la enfermedad provocan. 2. Analizala siguiente cuestin, tomando en cuenta su distancia filogentica y metabolismo:Cul es la relacin filogentica entre ellas?En un documento de Word, construye un rbol filogentico que lo explique 3. Ingresa a la base de datos y comparte con tus compaeros tu listado, el rbol filogentico que construiste y la respuesta a la pregunta. Nota:Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu Facilitador(a) puede detectar esta situacin sin dificultad; tu formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
1.2. Crecimientoindividualypoblacional
El crecimiento bacteriano implica un aumento ordenado en el nmero de clulas (poblacin) y de los componentes celulares de un organismo del estado inmaduro al estado adulto; incluye inmersamente la divisin de una bacteria en dos clulas hijas en un proceso llamado fisin binaria, biparticin, las clulas hijas resultantes sern genticamente idnticas a la clula original. De este modo tiene lugar la "duplicacin local" de la poblacin bacteriana. Las dos clulas hijas creadas tras la divisin no sobreviven necesariamente (Brooks, 2011) Sin embargo, si el nmero de supervivientes supera la unidad, la poblacin bacteriana experimenta un crecimiento exponencial. La medicin de una curva del crecimiento exponencial de las bacterias en un cultivo ha sido tema de estudio de los microbilogos. Los procesos fundamentales empleados para ello son la enumeracin bacteriana (recuento celular) por mtodos directos e individuales (microscopa), mtodos directos y masivos (biomasa), por mtodos indirectos e individuales (conteo de colonias), o por mtodos indirectos y en bloque (nmero ms probable (NMP), turbidez, absorcin de nutrientes).

El objeto de estudio del biotecnlogo es reconocer de manera terica el crecimiento bacteriano en un cultivo que conlleva a resumirse en cuatro fases diferentes: fase Log, fase exponencial, fase estacionaria y fase de declive o muerte; y de esta manera podr aplicar los conocimientos a nivel industrial y ambiental dichos microorganismos para un beneficio especfico tomando en cuenta factores del ambiente tanto abiticos como pH, Temperatura en C, O2, (oxigeno), presin osmtica, nutrientes (CHONSP) y biticos como la competencia por los nutrientes, depredacin y lisis viral (Trtora, 2008). Las clulas bacterianas son microorganismosunicelulares que presentan un tamao de unos pocos micrmetros (0.5 a 5 m) y diversas formas incluyendo esferas (cocos), barras (bacilos) y hlices (espirilos) (Fig. 7). Las bacterias son procariotas (no tienen ncleo definido ni presentan orgnulosmembranosos internos), poseen una pared celular compuesta de peptidoglucanoestructura bsica de la pared celular de las bacterias; la molcula es un copolmero formado por una secuencia alternante de N-acetil-glucosamina y el cido N-acetilmurmico unidos mediante enlaces -1,4. Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del estudio de las bacterias se encarga la bacteriologa (rama de la microbiologa) (Trtora, 2008). Respecto al tamao de las bacterias que son microscpicas, hablemos primero cuando medimos la longitud de un objeto, estamos viendo cuantas veces entra una unidad de medida en el largo del objeto. La unidad de medida de la longitud es el metro (m). El sistema de unidades de medida que incluye al metro junto a sus mltiplos y submltiplos se llama Sistema Mtrico Decimal. Mltiplo mirimetro 1 mam = 10,000 m kilmetro 1 km = 1,000 m hectmetro 1 hm = 100 m decmetro 1 dam = 10 m Submltiplos Metro m Decmetro 1 dm = 0.1 m Centmetro 1 cm = 0.01 m Milmetro 1 mm = 0.001 m Longitudes microscpicas Micrmetro 1m = 0.001 mm 1 mm = 1000 m 1 m = 0,001 mm = 1 10-3 mm 1 m = 0,000 001 m = 1 106 m 1 m = 1 000 000 m
1 m = 10 dm = 100 cm = 1 mm Conversiones para determinar las diferentes longitudes

Morfologa de las bacterias http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Morfolog%C3%ADa_bacteriana.jpg Generalmente el crecimiento de las bacterias es porque se reproducen ya sea por biparticin o fisin binaria (forma asexual); tras la duplicacin del ADN, que est dirigida por la ADN-polimerasa que se encuentra en los mesosomas, la pared bacteriana crece hasta formar un tabique transversal separador de las dos nuevas bacterias. Tambin presentan reproduccin sexual o parasexual (intercambian fragmentos de ADN) (Trtora, 2008). Es importante distinguir el crecimiento individual de clulas y el crecimiento de poblaciones de clulas: Crecimiento individual: es el incremento de una clula respecto al tamao y peso, es usualmente un preludio a la divisin celular Crecimiento poblacional: es el incremento en el nmero de clulas como una consecuencia del crecimiento y divisin celular El crecimiento microbiano se divide principalmente en cuatro etapas que son:
Etapas del crecimiento bacteriano (Trtora et al, 2007)

a) Fase Lag o de rezago Este periodo consiste en la adaptacin de las clulas microbianas a su nuevo ambiente. En esta fase, las clulas microbianas no tienen muchos metabolitos y enzimas, debido a las condiciones desfavorables que representaba el cultivo previo. En este lapso de tiempo se forman las enzimas y los metabolitos intermedios hasta alcanzar las concentraciones necesarias para reiniciar el crecimiento (Trtora, 2008). Este periodo se puede prolongar en el caso de que el medio de cultivo previo y las condiciones actuales resulten tan diferentes que las clulas sean genticamente incapaces de sobrevivir, por lo que slo unas cuantas mutantes podrn subsistir, y obviamente se requerir ms tiempo para que stas se multipliquen lo suficiente y sea notorio el aumento de clulas (Trtora, 2008). b) Fase exponencial En esta fase las clulas se encuentran en un estado de crecimiento sostenido. Se sintetiza nuevo material celular a una tasa constante (tasa = relacin entre la cantidad y la frecuencia de un fenmeno), pero ste material es en s cataltico y la masa aumenta de manera exponencial, es decir crece muy rpidamente en el tiempo. Matemticamente exponencial se refiere elevar un nmero o -base- X a un determinado exponente- y (xy); por ejemplo, si la base x es igual a 2 y el exponente y es igual a 4; la potencia ser 24 lo cual equivale a 2x2x2x2 = 16. Para el caso del crecimiento microbiano por razones y resultados experimentales la base de potencia que se considera es el nmero e- que es la base de los logaritmos de Neper, el cual es un nmero importantsimo en la naturaleza que vale e = 2.7182818284; por lo tanto sus potencias se escriben y = ex o x = ey. El crecimiento continuar hasta que uno o ms nutrimentos se agoten, o hasta que se acumule tal cantidad de metabolitos txicos que se inhiba el crecimiento. El nutrimento limitante para los organismos aerobios suele ser el oxgeno: cuando la concentracin bacteriana es de aproximadamente 1 x 107 ml es necesario incrementar el ingreso de oxgeno mediante agitacin o burbujeo; pero cuando la concentracin alcanza 4 o 5 x 109 bacterias por ml, la tasa de difusin de oxgeno no puede satisfacer las demandas aun en un medio aireado, por lo que el crecimiento disminuye progresivamente (Trtora, 2008). A diferencia del crecimiento exponencial, el crecimiento lineal slo implica que se est aumentando en solo una unidad la masa con respecto al tiempo. c) Fase estacionaria Ante el agotamiento de nutrimentos en el medio o la acumulacin de metabolitos txicos el crecimiento cesa por completo despus de un periodo de decrecimiento en la tasa de crecimiento. Por lo general en esta fase se observa recambio celular, lo cual se debe a que, aunque existe una prdida lenta de clulas por muerte, dicha prdida se compensa

exactamente por la formacin de nuevas clulas a travs de crecimiento y divisin. As, la cifra de clulas viables se mantiene constante, aunque en realidad en el conteo aumente poco a poco el nmero de clulas, si se cuentan tambin las muertas (Trtora, 2008). Para comprender lo anterior debemos considerar que, para una clula microbiana, muerte significa la prdida irreversible de la capacidad para reproducirse (crecer y dividirse), lo cual se comprueba cuando una clula es incapaz de producir una colonia en cualquier medio. De lo anterior se deriva que designar a una clula microbiana como muerta no implica su destruccin fsica. La duracin de esta fase depende de la naturaleza del microorganismo y de las condiciones del medio. d) Fase de declinacin y/o muerte Esta fase representa el decremento de clulas debido al aumento progresivo de la tasa de mortalidad, misma que tarde o temprano alcanza un valor sostenido. Por lo general, una vez que la mayora de las clulas ha muerto, la tasa de mortalidad disminuye bruscamente, por lo que un nmero pequeo de sobrevivientes pueden persistir en cultivo por meses o aos. Dicha persistencia puede deberse a que las clulas consiguen crecer gracias a los nutrimentos liberados por las clulas que mueren y se lisan, observndose recambio celular (Trtora, 2008).
1.2.1.Tasadecrecimientoy tiempodegeneracin
El crecimiento microbiano que es el cambio en el nmero de clulas por unidad de tiempo determinada. El tiempo juega un papel muy importante para que la clula se divida en dos, el cual puede ser desde minutos, horas y hasta das. Tasa de crecimiento: es el cambio del nmero de clulas o masa por unidad de tiempo Generacin: intervalo para la formacin de dos clulas provenientes de una. Tiempo de generacin: tiempo que tarda una poblacin en duplicarse. Se puede definir tambin como la cantidad de tiempo requerida para completar un ciclo de divisin. Factores que influyen en el crecimiento a. Factores externos Condiciones ambientales o culturales: pH, T (en escala centgrada = grados centgrados C), disponibilidad de H2O, O2, CO2 y tiempo. Condiciones nutricionales: Tasa C/N 10:1, 12:1, azufre y otros microelementos. b. Factores internos Estos factores son inherentes a cada microorganismo o especie en particular, principalmente se refiere a su capacidad metablicapara transformar los nutrientes que

consume en elementos que pueden utilizarse para su crecimiento, reproduccin y el mantenimiento de sus condiciones de vida, el metabolismo le permite adaptarse a los cambios en su medio permitindole sobrevivir, sin embargo estosfactores internos pueden verse modificados cuando los factores externos ejercen mucha presin sobre el microorganismo, en ocasiones la presin es tal que sobrepasa la capacidad de un microorganismo para adaptarse, lo conlleva a la muerte. Un ejemplo claro de esta situacin es el efecto que los antibiticos tienen sobre el crecimiento de microorganismos patgenos.
1.2.2.Crecimientoexponencial ysincrnico
El crecimiento de una poblacin resulta de la suma de los ciclos celulares de todos los individuos de dicha poblacin. Crecimiento exponencial: durante el crecimiento exponencial, la tasa de crecimiento de las clulas (medida en gramos de biomasa producida por hora), cuando el crecimiento no es limitado por los nutrimentos, se puede obtener multiplicando la constante de la tasa de crecimiento por la concentracin de biomasa. La constante de la tasa de crecimiento es la tasa a la cul las clulas producen ms clulas, y el valor que esta toma se interpreta como los gramos de biomasa producidos por cada gramo de biomasa preexistente creados en una hora. El crecimiento se denomina exponencial porque la biomasa se incrementa exponencialmente con respecto al tiempo. De lo anterior se deriva que, si graficamos el logaritmo de la concentracin de la biomasa (o celular) en funcin del tiempo, como ocurre en la curva del crecimiento, obtendremos una lnea recta como representacin de esta fase (Trtora, 2008). Crecimiento sincrnico: todas las clulas se encuentran simultneamente en la misma fase del crecimiento celular. Los cultivos sincrnicos son muy difciles de mantener por lo que su importancia est principalmente ligada a los estudios bsicos de biologa microbiana. Sin embargo, en la naturaleza, las bacterias del suelo se encuentran en condiciones de crecimiento prximas a la fase estacionaria (en la que se produce una cierta sincronizacin del cultivo) y, por consiguiente, durante cierto tiempo las poblaciones naturales probablemente se comporten como relativamente sincrnicas (Trtora, 2008).
1.2.3.Determinacindel crecimiento
Existen diferentes sistemas para detectar y medir el crecimiento de microorganismos. Se mide por cambios sucesivos en el nmero de clulas o por el peso de la masa de las clulas. Existen varios mtodos para contar las clulas o estimar la masa de stas (Brooks, 2011).

Formas de visualizar el crecimiento bacteriano Caja petri autora nuestra de practica en el laboratorio (crecimiento bacteriano colonias blancas) y Tubos de ensaye color amarillo indica presencia de colonia Recuento de clulas 1) Conteo de clulas al microscopio: se emplea un dispositivo graduado con 25 cuadrados cuyo volumen y rea es conocido: Cmara de Petroff-Hausser, cmara de Neubauer, hemocitmetro. Limitaciones: Es muy cansado, no es prctico para un gran nmero de muestras. No es muy sensible, se necesitan al menos 106 bacterias/ml para que sean observadas al microscopio No distinguen clulas vivas de muertas.
http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/3_4_3recue nto.htm Dispositivo graduado para el conteo de clulas bacterianas 2). Conteo de clulas viables: una clula viable es definida como aqulla que es capaz de dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo. El conteo en placas es el mtodo ms utilizado. Pueden ser: Diseminacin en placa (siembra en placa por extensin). Se asume que cada colonia surgi de una clula nica, contando el nmero de colonias uno puede calcular el nmero de clulas viables en la muestra.

Mtodo de vaciado en placa.
Forma de contar clulas bacterianas en placas de agar
1.2.4.Medida demasamicrobiana
Mtodos directos: estos mtodos requieren preparaciones limpias, sin partculas extraas. 1. Determinacin del peso hmedo: se tara (calibrar hasta que la balanza especifique el peso real) un tubo de centrfuga se centrifuga el cultivo y se elimina el sobrenadante se determina el peso del sedimento. Inconvenientes: grandes errores, debido al lquido intercelular retenido, cuya cuanta depende a su vez de la forma y tipo de agrupaciones de la cepa, intensidad del empaquetamiento, etc. 2. Determinacin del peso seco: como el anterior, pero el sedimento se seca antes de ser pesado (105oC, toda la noche), hasta peso constante. Las medidas de peso seco suelen representar el 10-15% de los valores de peso hmedo. Inconvenientes: mtodo tedioso (requiere mucho tiempo) y con bastantes errores: es difcil pesar menos de 1 mg con exactitud en las balanzas habituales de laboratorio. 1 mg de peso seco equivale a unas 5x109 bacterias. 3. Determinacin del nitrgeno total: tcnica de micro-Kjeldahl. 4. Determinacin de un componente caracterstico: peptidoglucano, ADN, ARN, protenas, entre otros. Mtodos indirectos: se determina mediante lo que se observa, sin necesidad de una caracterstica especial para su visualizacin. 1. Medida de consumo de nutrientes o de produccin de algn metabolito por unidad de tiempo. Ejemplos: consumo de oxgeno (QO2) y consumo de carbnico (QCO2), determinados por el respirmetro de Warburg. Produccin de cidos.

2. Mtodos turbidimtricos (pticos). La base comn de estos mtodos consiste en la medicin de la cantidad de luz dispersada o transmitida a travs de un cultivo bacteriano. 3. Medicin de luz transmitida: Escala de MacFarland: Se trata de una serie de patrones de turbidez (no son claros o transparentes como el agua) previamente calibrados. Consiste en varios tubos de vidrio hermticamente cerrados que contienen {1% de Cl2Ba + cantidades crecientes de H2SO4 (cido sulfrico) al 1%}; por lo tanto, en cada tubo se origina un precipitado de SO4Ba, origen de la turbidez. Para cada cepa bacteriana hay que establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la masa o la concentracin de bacterias (en cls/ml) que genera una turbidez similar. Se trata de una serie de patrones de turbidez previamente calibrados. Consiste en varios tubos de vidrio hermticamente cerrados que contienen {1% de Cl2Ba + cantidades crecientes de SO4H2 al 1%}; por lo tanto, en cada tubo se origina un precipitado de SO4Ba, origen de la turbidez. Para cada cepa bacteriana hay que establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la masa o la concentracin de bacterias (en cls/ml) que genera una turbidez similar. Espectrofotmetro: Este aparato es de uso habitual en cualquier laboratorio de Microbiologa o Bioqumica. Mide la densidad ptica (D.O.), es decir la absorbancia. D.O. = A = -logT/100 donde T= transmitancia Nefelmetro: Es un aparato similar al anterior, pero el dispositivo sensor est situado en ngulo recto respecto de la direccin de la luz incidente, y lo que se mide es pues, la luz dispersada directamente por la preparacin. Posee mayor sensibilidad que el espectrofotmetro.
1.2.5.Medida del nmero de individuos

Mtodos directos: se mide lo que se observa a simple vista o con ayuda de equipo especial. 1. Cmara de recuento de Petroff-Hauser: Consiste en un portaobjetos especial con una graduacin en superficie y unas medidas muy concretas: excavacin con 0.02 mm de profundidad rea de 1 mm2, dividida en un retculo de 25 cuadrados grandes cada cuadrado grande est subdividido a su vez en 4x4 = 16 cuadrados pequeos. O sea, la muestra se distribuye en 16X25 = 400 celdillas (cuadros pequeos). La muestra, una vez dispensada entre el porta y el cubre, se deja reposar sobre la plataforma del microscopio durante unos minutos, y se cuenta el nmero de clulas en varias celdillas (normalmente en 16, equivalentes a uno de los cuadros grandes). Se anota el nmero n de clulas observadas en esas 16 celdillas. Entonces, la concentracin celular es fcil de establecer: n x 25 x 50 x 1000 = concentracin en clulas/ml.

Ventajas: es un mtodo muy rpido Inconvenientes: slo sirve para suspensiones relativamente concentradas (>10x106 cls./ml). Por debajo de este valor el nmero de clulas vistas en el campo del microscopio es muy pequeo y poco significativo estadsticamente. En bacterias mviles, hay que inmovilizarlas previamente, con una mezcla de alcohol y agua. 2. Recuento en preparaciones teidas: Se dispone de un porta con una excavacin circular (de rea At) con un volumen conocido (v). Sobre esta excavacin se extiende la muestra con asa de siembra o con micropipeta, y se fija y tie por algn colorante. Se observa con un microscopio dotado de un juego de ocular y objetivo que delimitan un rea de campo (Ac). Si en dicho campo se cuentan n bacterias, la concentracin de bacterias por mililitro ser: nAt/Ac 1/v 3. Recuento proporcional de Wright: Se mezcla la suspensin bacteriana problema con una cantidad conocida de bolitas de ltex o de hemates (clulas sanguneas = sangre). La concentracin bacteriana se deduce de la proporcin de bacterias y partculas observadas en el mismo campo microscpico. Este mtodo se emplea ms frecuentemente en Virologa. 4. Contadores electrnicos de partculas (tipo Coulter): Se hace pasar una suspensin bacteriana por un tubo capilar, entre los dos polos de una corriente elctrica. Cada vez que por un orificio (30 mm dimetro) pasa una partcula (p. ej., bacteria) se interrumpe la corriente, lo cual es recogido por un dispositivo de registro electrnico, que detecta el nmero y el tamao de las partculas que van pasando. (El tamao detectado es funcin de la intensidad del pulso de voltaje al paso de la partcula). Recientemente se ha introducido la citometra de flujo activada por fluorescencia (FACS). Es una sofisticada modificacin en la que las partculas a contar se marcan previamente con un anticuerpo monoclonal anticuerpo homogneo producido por una clula hbrida producto de la fusin de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y nica clula madre y una clula plasmtica tumoralu otro ligando especfico hacia alguna molcula de superficie, unidos a su vez a un fluorocromo, una molcula que emite fluorescencia al incidir sobre ella un haz de luz lser. Mtodos indirectos: Son mtodos que miden el nmero de bacterias viables (que no equivale al de totales). 1. Mtodo del nmero ms probable: Su fundamento estriba en la distribucin de Poisson: una distribucin aleatoria de partculas en una serie de muestras iguales, en funcin del nmero medio de partculas presentes en una suspensin (presencia y ausencia de microorganismos). La tcnica consiste en sembrar alcuotas de la suspensin original problema sobre un medio lquido o slido adecuado; tras el tiempo de incubacin adecuado se anota la proporcin obtenida de muestras donde no se haya dado crecimiento, P0 (x = 0).

Entonces, segn la distribucin de Poisson: P0= em y por lo tanto es fcil calcular el valor de m: m = -lnP0
Conteo de numero ms probable (NMP) para bacterias http://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p4-nmpenumeracion.pdf 2. Recuento de viables en placa: Como esta tcnica ser explicada al alumno en clase, y adems la realizar en las prcticas, remitimos a las pertinentes explicaciones "en vivo". Es una de las tcnicas de recuento ms usadas en la rutina del laboratorio de Microbiologa. Precauciones: para minimizar los errores estadsticos de muestreo (para que los resultados san concretos y creibles), se recomienda sembrar 5 placas de cada dilucin, porque llega haber ocasiones en donde no crece nada. hay que usar pipetas nuevas en cada dilucin. contar las placas donde existan entre 50 y 300 colonias. 3. Determinacin de la proporcin clulas viables/clulas totales: Si se est interesado en conocer esa proporcin se recurre a una tcnica de microcultivos en cubreobjetos: hay que seguir peridicamente la evolucin del crecimiento de clulas individuales y determinar la proporcin de aquellas clulas no viables (visibles al microscopio, pero incapaces de crecer). 4. Recuento sobre filtros de nitrocelulosa: Se usa para suspensiones diluidas de bacterias. Se hace pasar un gran volumen de suspensin a travs de una membrana de nitrocelulosa estril, que retiene las bacterias. Posteriormente, el filtro se deposita sobre la superficie de un medio de cultivo slido. Las colonias se forman sobre el filtro y se cuentan, deducindose la concentracin original en funcin del volumen de suspensin que se hizo pasar por el filtro. Actividad 3. Un mundo raro Esta actividad representa uno de los mayores retos pues implica crear un mapa conceptual (MMCC) en el cual reflejars tu dominio de los temas anteriormente vistos, al construirlo describirs en l las relaciones entre los conceptos de la microbiologa relacionados con las fases de crecimiento bacteriano y sus formas de medirlo, adems de la morfologa bacteriana. Elaborar un mapa mental que ejemplifique la morfologa bacteriana, las fases de crecimiento bacteriano y formas de medir dicho crecimiento.

En un documento de texto o archivo de imagen plasma un mapa conceptual que contenga las siguientes caractersticas: El mapa conceptual debe presentar una estructura arborescente que incluya los siguientes aspectos: 1. 2. 3. 4. 5. Concepto o idea original Palabras clave Conectores Conectivos y palabras de conexin Conceptos en diferentes niveles en este caso puedes desarrollarlo mnimo en tres niveles De esta manera a partir del concepto o idea de origen ocurre: 6. Desprendimiento de conceptos secundarios 7. Conectores y proposiciones.- conectores son palabras o preposiciones insertas entre dos conceptos y son tiles para producir nuevas proposiciones o enunciados con sentido. 8. Enlaces cruzados.- son puentes entre proposiciones dentro de la arborizacin. 9. Jerarquizacin.- es el orden en ascendente-descendente en funcin de la complejidad de los conceptos o proposiciones tratados en la arborizacin del MMCC.
Evidencia de aprendizaje. Mi extincin

Esta actividad implica que exteriorices en un cuerpo de ideas e informacin todo lo que hasabordado en esta asignatura. Para ello enfocars tus conocimientos en un agente patgeno que ha trado consecuencias fatales a la especie humana, el Virus del VIH, para lo cual investigars algunas teoras que lo caracterizan, as como propuestas cientficas actuales para combatirlo.Como colofn incursionars en algunas ideas que te permitan desarrollar las propias acerca de la diferencia que existe entre un microorganismo y un virus. Con base en lo anterior, realiza lo que a continuacin se te pide: 1. Lee los siguientes artculos: Determinantes de la transmisin vertical del VIH en Catalua (19972001): es posible su eliminacin? Infeccin-enfermedad por VIH/SIDA Estrategias de eliminacin del sarampin en el mundo 2. Con base en las lecturas, elabora un ensayo en un documento de texto que

contenga propuestas tericas sobre el virus del VIH y la forma de eliminarlo.Tambin debes incluir la diferencia que existe entre el Virus VIH con respecto a una bacteria. 3. Considera que tu documento debe contarcon los siguientes elementos: Una extensin de por lo menos una cuartilla. Nombre del tema. Introduccin, desarrollo y conclusiones. Bibliografa y ligas de pginas web consultadas. Contenido sin ningn signo de plagio. Tipo de letra Arial 11 e interlineado de 1.15. 4. Guarda tu actividad con la nomenclatura MTM_U1_EA_XXYZ yenvalaa tu Facilitador(a) para recibir retroalimentacin.
Cierre de la Unidad
Como te habrs dado cuenta, la clasificacin de un microorganismo es un proceso elaborado que toma en cuenta no solo aspectos evolutivos, anatmicos o de desarrollo, si que tambin incorpora aspectos moleculares que te pueden aportar mayor conocimiento sobre los diferentes procesos metablicos microbianos que puedes emplear en tus actividades diarias en la industria de la Biotecnologa. Adems de contar con bases slidas sobre filogenia, taxonoma y sistemtica ahora sers capaz de profundizar en el estudio de los microorganismos ms tiles en los procesos que se llevan a cabo en el sector donde te desarrolles y podrs elegir los microorganismos o procesos metablicos que estos llevan a cabo que te permitan desarrollar mejor tu trabajo. As mismo, cuentas con las bases para determinar los patrones de crecimiento te un microorganismo , este proceso en particular es de vital importancia ya que la productividad de una industria (por ejemplo la cervecera) est directamente relacionada con el crecimiento del microorganismo que utilicen para un proceso determinado, ahora t tienes las bases para determinar las tasas de crecimiento de manera directa e indirecta, esto te permitir identificar todos los elementos que intervienen en el crecimiento de los microorganismo y determinar acciones para mejorar este y otros procesos para obtener resultados exitosos en tu prctica diaria.
Fuentes de consulta
Bibliografa bsica Gonzlez,G. M. (2007) Microbiologa ambiental. Corpus. Pidello,A. (2011) Ecologa microbiana. Corpus Willey,J. (2009) Microbiologa Mc.Graw Hill / Interamericana

Bibliografa complementaria
Solomon, P. E., Berg, R. L. y Martin, W. D. (2008). Biologa. 8 ed. Editorial Mc Graw Hill. 1338 pp. Trtora, G. J., Funke, B. R. y Case, C. L. (2007). Introduccin a la microbiologa. 9a ed.Editorial Mdica Panamericana. pp 956. Brooks. (2011). Microbiologa Mdica. 25 ed. Mc Graw Hill. pp 815. Brock, Madigan, Martinko, Parker. 2004. Biologa de los microorganismos, 10 ed, Prentice Hall Prescott, Harley, Klein. (2004). Microbiologa, McGraw-Hill Interamericana.

Unidad 2 Microbiologa
La importancia de la Microbiologa deriva de la necesidad biolgica de estudiar los organismos que no son visibles a simple vista, y que slo con ayuda de un microscopio se pueden observar, pero que su presencia en diferentes ambientes naturales o en la industria es indispensable, ya sea participando dentro de los ciclos de incorporacin de nitrgeno, azufre y carbono, como aportando sus propiedades metablicas dentro de algn proceso. Una de sus caractersticas importantes es que poseen la propiedad de adaptar su medio encontrando rpidamente las condiciones ptimas para crecer y colonizarlugares y ambientes tan variados e inimaginables que puedan existir, como la superficie de una prtesis ya implantada en el cuerpo de un paciente, un geiser a altas temperaturas, aguas con alto contenido en sales, las cavidades corporales de animales una herida, un reactor, entre muchos otros.
Propsitos
El alumno comprender que los microorganismos son seres diminutos, plsticos y adaptables, capaces de crecer en nmeros insospechados y expandirse haciendo uso de su metabolismo tan variado y especializado; identificarn su importancia dentro del mbito industrial y ambiental, donde incorporar los conceptos fundamentales de microbiologa, medios de cultivo, y condiciones ptimas del crecimiento con el fin de entender el desarrollo cualitativo de las bacterias.
Analizar el crecimiento bacteriano mediante el estudio de su fundamentacin qumica para determinar el tipo y medio de cultivo segn los distintos criterios de anlisis de crecimiento.
Microbiologa
La microbiologa es una rama auxiliar de la biologa dedicada al estudio de la vida microscpica,es decir de los microorganismos de los que ya hemos hablado que comnmente se les suele llamar microbios; podemos encontrarlos en todas partes (ubicuos) ya que son los ms abundantes de la Tierra, El ser humano pudo darse cuenta de su existencia y observarlos hasta la llegada del microscopio a mediados del siglo XVII.

Los primeros en visualizar la abundancia y diversidad de microorganismos a pesar de lo rudimentario de sus instrumentos, por ejemplo, los primeros microscopios fueron Robert Hooke y Antonie van Leeuwenhoek, observaron diferentes formas de vida microscpicas como levaduras, algunas bacterias entre otros microorganismos presentes en el agua de lluvia encharcada, fluidos corporales, superficies como suelos y rocas, entre otras. http://www.kyrene.org/staff/sreed/Scien ce/Scientist/Webpages/2009_10 /Period%204/Leeuwenhoek_Ant on%20van/index.htm
Izquierda Robert Hooke y Derecha Antonie van Leeuwenhoek
2.1 Definicin de Microbiologa

La Microbiologa etimolgicamente proviene delos vocablos griegosmicro que significa pequeo, bios que significa vida y logosque quiere decir estudio o tratado; por lo tanto es la ciencia que estudia los seres vivos muy pequeos, cuyo tamao se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano, por lo que se requiere el empleo del microscopio. Abarca una enorme heterogeneidad de tipos estructurales, funcionales y taxonmicos: desde partculas no celulares como los virus y hasta organismos celulares tan diferentes como las bacterias, los protozoos y parte de las algas y de los hongos. http://smilejud ith.blogspot.c om/2010/10/ microbiologia. html
Campo de estudio de la microbiologa
Podemos definir, pues, a los microorganismos como seres de tamao microscpico dotados de individualidad, con una organizacin biolgica sencilla, y que necesitan para su estudio una metodologa propia y adecuada a sus pequeas dimensiones. Las caractersticas estructurales, su fisiologa bioqumica, gentica, taxonoma, ecologa, entre otras son aspectos del estudio de la microbiologa.

Tambin se ocupa del estudio de las diferentes actividades microbianas y su relacin con el ser humano, ya que pueden acarrear consecuencias tanto benficas, como perjudiciales; por esta razn se estudian los nichos ecolgicos de los correspondientes agentes, sus modos de transmisin, los diversos aspectos de la microbiota patgena en sus interacciones con el hospedador, los mecanismos de defensa de ste, as como los mtodos desarrollados para combatirlos y controlarlos, no olvidndose de aquellas que reportan beneficios por medio de los procesos microbianos para la obtencin de materias primas o elaboradas, y de su modificacin y mejora racional con vistas a su imbricacin en los flujos productivos de las sociedades. La microbiotacomnmente denominada flora nativa de un cuerpo sano (los integrantes de esta microbiota son bacterias), son un conjunto de microorganismos que intervienen benficamente en los procesos vitales como la digestin de alimentos, la sntesis de vitaminas en el intestino, proteccin frente a patgenos, entre otras. A continuacin se muestra un cuadro de las bacterias consideradas flora normal en humanos y su localizacin anatmica:
Bacterias Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus Streptococcus mitis Streptococcus salivarius Streptococcus mutans Streptococcus faecalis Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes Neisseriae Neisseria meningitidis Veillonellae B. Coliformes (E. coli) Proteus mirabilis Pseudomonas Piel ++ + Conjuntiva + +/Nariz ++ + Faringe + + + ++ + +/+/+/+/+ + + +/+ + ++ + Boca ++ + ++ ++ ++ + + + + ++ + + + +/+/++ + + +/+ ++ + + +/+ + + Intestino Grueso + ++ +/Uretra ++ +/+ Vagina + + +
+/+/-
+/+
+/+ +/-
+ + +/-
+ +

aeruginosa Haemophilus influenzae Bacteroides Espiroquetas Lactobacilos Clostridios Clostridium tetani Corinebacterias Micobacterias Actinomicetos Micoplasmas
+/-
+ + + +
+ + + ++ +/++ + + ++ +/+ + + + +/++
++ +
++ +/-
+ +/+ +
+ + +
+ + +/-
++ = ms frecuente; + = comn; +/- = irregular, ocasional o transitorio.Copyright 2011 Mama.com.mx Derechos reservados http://rantes22.blogspot.com/ 2011/04/la-flora-bacterianaintestinal-podria.html
Localizacin de la flora normal del cuerpo humano Finalmente, la Microbiologa se ocupa de todas las tcnicas y metodologas destinadas al estudio experimental, manejo y control de los microorganismos.
2.1.1. Microbiologa Ambiental

La microbiologa ambiental abarca el estudio de los microorganismos que habitan o existen en ambientes naturales o artificiales. El origen de los trabajos cientficos en este campo se basa en las observaciones de Antonie van Lewenhoeck (1677). Los microorganismos pueden existir como clulas aisladas o como agregados celulares. Las clulas microbianas aisladas son capaces de llevar a cabo sus funciones vitales de crecimiento, generacin de energa y reproduccin independiente de otras clulas.

Adems pueden alcanzar una elevada densidad poblacional en cultivos y son ms fciles de manipular para estudios genticos como la manipulacin de su ADN. La microbiologa, adems de ser una ciencia que auxilia a la biologa, es una ciencia que proporciona herramientas para determinar la naturaleza de los procesos caractersticos de la vida en los que intervienen algunos microorganismos, enfocndose en la resolucin de muchos problemas prcticos que son importantes en medicina, agricultura y la industria. La fertilidad de los suelosdepende en gran medida de los procesos que algunos microorganismos llevan a cabo, por entre ellos la fijacin biolgica del nitrgeno atmosfrico, este proceso consistente en la reduccin de N2(nitrgeno molecular) a NH4+(amonio) a cargo de la enzima nitrogenasa, es despus de la fotosntesis, la ruta metablica ms importante para el mantenimiento de la vida en la Biosfera. Curiosamente, este proceso crucial slo puede ser llevado a cabo por unos pocos procariotas; los microorganismos fijadores de nitrgeno no constituyen un grupo taxonmico homogneo, la nica caracterstica que comparten es la presencia de la enzima nitrogenasa en sus procesos metablicos, dichas bacterias comprenden organismos fototrofos, como bacterias pertenecientes a la familia Rhodospirillaceae, Clorobiaceae y Cianobacteriae; organismos quimioautotrofos, como bacterias de los gneros Thiobacillus, Xanthobacter y Desulfovibrio y organismos heterotrofos como las bacterias petenecientes a la familia Frankiaceae, al grupo Rhizobiaceae y a los gneros Azotobacter, Enterobacter, Klebsiella y Clostridium. http://www.porquebiotecn ologia.com.ar/educacion/ cuaderno/ec_24.asp?cua derno=24
Ciclo de nitrgeno donde intervienen las bacterias

Estos organismos pueden realizar la fijacin biolgica de nitrgenoindependientemente o estableciendo relaciones simbiticas con otros organismos; estas formas simbiticas son entre las rizobiceas y las leguminosas, que antiguamente eran aprovechadas para la renovacin de los suelos mediante la prctica de la rotacin de cultivos. http://www.porq uebiotecnologia. com.ar/educacio n/cuaderno/ec_2 4.asp?cuaderno =24
Ubicacin de las bacterias fijadoras de nitrgeno
2.1.2. Microbiologa Industrial

A la Microbiologa Industrial tambin se le ha denominado biotecnologa microbianase puede definir como el mbito de la microbiologa orientado a la produccin de elementos de inters industrial mediante procesos en los cuales intervenga, en algn paso, un microorganismo. Por ejemplo, la produccin de: alimentos (fermentacin del pan o cerveza) y suplementos dietticos (como los cultivos de algas, vitaminas o aminocidos), biopolmeros, como el xantano, alginato, celulosa, cido hialurnico, polihidroxialcanatos;3biorremediacin de entornos contaminados4o tratamiento de desechos;5as como la produccin de principios activos de inters en medicina, como la insulina y hormona del crecimiento o de sustancias implicadas en el diagnstico. La microbiologa industrial es tan antigua como la manipulacin de alimentos fermentados como el vino, pan o yogur. No obstante, durante el siglo XX su aplicacin se diversific con el nimo de generar un gran nmero de compuestos qumicos complejos de forma ms sencilla y barata que mediante sntesis orgnica; este hecho se debe a la enorme versatilidad metablica de los microorganismos que, frecuentemente, son capaces de producir los compuestos deseados o sus precursores. Por ejemplo, la microbiologa industrial ha sido clave en la produccin de penicilinas, naturales, como la penicilina G (esto es, producidas de forma totalmente microbiolgica) o semisintticas, como la meticilina, que requieren la purificacin de un intermediario que luego ha de modificarse

qumica o enzimticamente. Finalmente, la tecnologa del ADN recombinante ha permitido, con un enfoque de ingeniera gentica, diversificar an ms la disciplina, llegando a producirse protenas humanas mediante microorganismos transformados con genes humanos.
8
http://luisita28.blogspot.com/, http://sociologiarural.skyrock.c om/,
mbito industrial de la microbiologa En la industria de los lcteos, frecuentemente se utilizan bacterias de tipo Gram (+) anaerobias, se caracterizan por una gran produccin de acido lctico, se incluyen los gneros Lactobacillus,Streptococcus,Leuconostoc y Pediococcus. Por ejemplo la acidificacin de la leche llevada a cabo por Streptococcus lactis y cremoris, la produccin del yogurt y quesos de pasta cocida Steptococcus thermophilus. http://www.sciencep hoto.com/search?su btype=keywords&se archstring=lactobacill us&oldsearchstring= bacterias&matchtype =&sort_results=&me dia_type=images&lic ense=both&channel =sc Lactobacillus casei Shirotay algunos productos lcteos Obtenida de: www.sciencephotolibrary.com
Actividad 1. Con meln o con sanda En esta actividad comparars entre los diferentes mbitos de estudios de la microbiologa en las ramas de la microbiologa ambiental e industrial. 1.- De las diferentes ramas de la microbiologa realiza un cuadro comparativo haciendo nfasis en la importancia de cada rama. 2.- Escoge un ejemplo de aplicacin de cada una de las ramas de la microbiologa y menciona que pasara si no se llevase a cabo tal proceso. 3.- Apoya tu trabajo con imgenes y s cuidadoso con la ortografa

4.- Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U2_A1_XXYZ y envalo a tu facilitador (a) mediante la seccin de tareas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu facilitador (a) puede detectar esta situacin sin dificultad; tu formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
2.2. Crecimiento microbiano

En un sistema biolgico se define al crecimiento como el aumento ordenado de las estructuras y los constituyentes celulares de un organismo; por ejemplo cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos comienzan a dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de cultivo para "fabricar" nuevos microorganismos. Este proceso contina hasta que algn nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene. El aumento de la masa celular producido por acumulacin de productos de reserva no constituyen crecimiento. http://graficas.explora.cl/ otros/biotec/lacto.html
Visualizacion del crecimiento en caja petri y en el microscopio
2.2.1. Crecimiento Individual

Consiste en el aumento del tamao y peso de las clulas que precede a la divisin celular. Esta divisin implica tambin un aumento en el nmero de clulas (proliferacin de la poblacin). Uno de los procesos que comnmente experimentan las bacterias para dividirse es la fisin binaria, a travs de la cual una clula madre al alcanzar un determinado volumen se divide dando dos clulas hijas. El proceso de fisin binaria consiste en la autoduplicacin del material hereditario seguido de la reparticin en las dos clulas hijas, las que se separan por estrangulamiento de la membrana celular y formacin de la pared celular. Podemos referirnos mas especficamente al crecimiento individual cuando realizamos el famoso experimento de germinar una semilla de frijol o de maz, al cabo de unos cuantos das observamos que comienzan a brotar las partes que van a conformar una planta madura.

http://es.wikipedia.org/wiki/ Archivo:Binary_fission_es. svg http://www.unavarra.es/ge nmic/microgral/Tema%200 2.kj%20Cultivo%20de%20mi croorganismos.pdf
Divisin celular de una bacteria mediante el proceso de fisin binaria
2.2.2. Crecimiento Poblacional

Es un crecimiento respecto al nmero de clulas (proliferacin de la poblacin). Se conoce como tiempo de duplicacin generacional al tiempo en que tarda una poblacin en duplicar su nmero. Los tiempos de duplicacin varan segn el microorganismo del que se trate. Por ejemplo, para obtener la primera generacin de Eschericha coli (bacteria causante de infecciones intestinales) tarda en promedio12.5 min., Rhizobium meliloti (bacteria que fija nitrgeno atmosfrico) 1.8 hr y Nitrobacter sp (bacterias que fijan nitrgeno atmosfrico) aprox. 20 hr. Las poblaciones microbianas raramente mantienen un crecimiento exponencial prolongado. Si ello ocurriera en poco tiempo la tierra estara cubierta de una masa

microbiana mayor que la de la tierra misma. El crecimiento est normalmente limitado por la disponibilidad de nutrientes y por la acumulacin de productos del propio metabolismo microbiano que en altas concentraciones resultan txicos para la poblacin.
2.3. Cultivo de Microorganismos

Un medio de cultivo, es un recurso que sirve para lograr la multiplicacin de microorganismostales como bacterias, hongos y parsitos en el laboratorio, la finalidad de un medio de cultivo es proporcionar el ambiente ptimo para favorecer el crecimiento del microorganismo deseado. Los cultivos son empleados en los campos de la medicina humana y veterinaria como mtodosde propagacin para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades. Por ejemplo nuestras manos que estn en continuo contacto con diversas superficies que contienen un sinfn de microorganismos, por eso se recomienda lavarse antes de cada alimento y despus de ir al bao. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura ptima ajustada a las necesidades particlares del microorganismo, al igual que la humedad y presin de oxgeno, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. Se recomienda por ejemplo lavarse las manos con frecuencia para evitar que la piel adquiera caractersticas ideales para alojar microorganismos que puedan causar algn dao. http://cienciaslacoma.blogspot.com/2010/09/mi croorganismos-en-nuestras-manos.html
Medio muy ptimo el que crecen bacterias
2.3.1. Tipos de Cultivo

Un medio de cultivo para bacterias, es una mezcla de sustancias que permiten el crecimiento de las bacterias en el laboratorio. Un microorganismo se puede cultivar o sembrar en medio lquido o en medio slido. Los medios de cultivo deben estar enriquecidos con distintos nutrientes que van, desde carbohidratos simples (azcares),

protenas, lpidos (grasas) hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne, as como los requerimientos que nosotros necesitamos para crecer. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. http://es.wikipedia.org/wiki/Cultivo_(microbiolog%C3%ADa)
Izquierda medio de cultivo slido y derecha medio de cultivo liquido.
Se pueden clasificar segn sus caractersticas fsicas en: slidos, semislidos y lquidos. La diferencia es slo la cantidad de una sustancia que llevan para solidificar (agar): Lquidos: se preparan todos los constituyentes en una disolucin acuosa (agua destilada). Ya disueltos, se reparten en matraces o tubos de ensayo que tapamos y esterilizamos con calor,proporcionan nutrientes a las bacterias y, adems, es ms fcil determinar sustancias producidas por las bacterias porque es ms fcil purificar sustancias en medio lquido. Por ejemplo el medio de cultivo lquido de cerebro corazn infusin es apto para el crecimiento de bacterias aerobias y anaerobias como los estreptococos y neumococos. http://www.google.com.m x/imgres?q=cultivos+bact erianos+en+tubos+de+en saye&um=1&hl=es&biw= 1280&bih=593&tbm=isch &tbnid=51jS9cBFRnSynM :&imgrefurl= y http://www.slideshare.net/ breid/pruebasbioqumicas-y-medios-decultivo-en-bacterias
Forma de esquematizar un medio de cultivo lquido

Slidos: Se procede del mismo modo que con los medios lquidos, pero, al disolver en agua destilada, aadimos de 15 a 20 g/l de agar. Lo esterilizamos y lo depositamos en placas o cajas petri cuando est a unos 60 C y cuando alcance los 50 C ya sern slidos. El agar nutritivo es utilizado como medio de cultivo slido general para obtener el crecimiento de bacterias con pocas exigencias nutritivas, otro medio el agar Mac Conkey que se utiliza para el crecimiento d bacilos Gram negativos.
http://www.stockphotos.mx/image.php?img_id=4 367343&img_type=1
Forma de esquematizar un medio de cultivo slido
Semislidos: su apariencia es de gel. Slo llevan 5 g/l de agar, se utilizan poco, por ejemplo para determinar la movilidad bacteriana. Si se hace una siembra y la bacteria es inmvil, la bacteria crecer en la cara interna del tubo donde hicimos la siembra, pero si la bacteria es mvil crecer alrededor de ese tubo.
Actividad 2. Buen provecho. Esta actividad es un gran reto ya que implica crear un mapa conceptual (MMCC) en el cual reflejars tu dominio del tema anterior, al construirlo describirs en el las relaciones entre los tipos de medios de cultivo y su aplicacin en el mbito microbiolgico. En un documento de texto o archivo de imagen plasma un mapa conceptual que contenga las siguientes caractersticas: El mapa conceptual debe presentar una estructura arborescente que incluya los siguientes aspectos: 1.- concepto o idea original 2.- palabras clave 3.- conectores 4.- conectivos y palabras de conexin 5.- conceptos en diferentes niveles en este caso puedes desarrollarlo mnimo en tres niveles De esta manera a partir del concepto o idea de origen ocurre: 1.- desprendimiento de conceptos secundarios 2.- conectores y proposiciones.- conectores son palabras o preposiciones insertas entre dos conceptos y son tiles para producir nuevas proposiciones o enunciados con sentido 3.- enlaces cruzados.- son puentes entre proposiciones dentro de la arborizacin

4.- Jerarquizacin.- es el orden en ascendente-descendente en funcin de la complejidad de los conceptos o proposiciones tratados en la arborizacin del MMCC. El agar es un polisacrido obtenido de la pared celular de varias especies de algas rojas de los gneros Gelidium, Euchema y Gracilaria, la palabra agar viene del malayo agaragar, que significa jalea; es un elemento solidificante empleado frecuentemente para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse, no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l. http://www.slideshare.net/breid/pruebasbioqumicas-y-medios-de-cultivo-enbacterias
Agar La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin. Los medios de cultivo deben contener agua (H2O), carbono (C), nitrgeno (N), azufre (S), fsforo (P), calcio (Ca), sodio (Na), magnesio (Mg), molibdeno (Mo), cobre (Cu) y zinc (Zn); es decir como si quisiramos preparar un pastel necesitamos, leche, harina, huevo, mantequilla, saborizantes; entre otros, si alguno de estos faltara el paste no se podra terminar. Lo mismo sucede con los medios de cultivo, si falta algn nutriente no podr propiciar el crecimiento de los microorganismos. http://www.slideshare.net/guested7523/cre cimiento-microbiano
Ingredientes que debe contener un medio:
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos

que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. El oxgeno, como constituyente del agua, es esencial para todos los organismos. Sin embargo, el oxgeno molecular es requerido de diferentes maneras por los microorganismos. Microorganismos aerobios: Requieren de manera obligada del oxgeno necesariamente para llevar a cabo su metabolismo. Existen dos grupos los organismos aerobios estrictos que requieren oxgeno en concentraciones similares a la atmosfrica (20%) y los aerobios microaerfilos que requieren oxgeno en concentraciones inferiores a las de la atmsfera (5-10%). Microorganismos anaerobios: son aquellos organismos que no requieren de oxgeno para llevar a cabo sus funciones metablicas, pudiendo ser de tres tipos: anaerobios facultativos aquellos que crecen en ausencia y en presencia de oxgeno pero crecen mejor con oxgeno, anaerobios estrictos aquellos que no solo no requieren oxgeno, sino que su presencia los destruye y los anaerobios aerotolerantes son aquellos que no requieren oxgeno pero lo toleran; no mueren en su presencia. Medios de Cultivo: en funcin de su composicin, distinguimos dos grupos de medios de cultivo:
Medios sintticos o definidos: aquellos que contienen cantidades precisas de sustancias orgnicas e inorgnicas puras disueltas en agua destilada. Medios complejos o indefinidos: contienen sustancias altamente nutritivas, pero de composicin indefinida. Suelen llevar sustancias como extractos de carne, peptona, extractos de levadura, bovril; la ventaja de este medio de cultivo es que contiene muchos factores de crecimiento, por lo que podemos cultivar en l gran nmero de microorganismos. El inconveniente es que no conocemos lo que el microorganismo est consumiendo,ejemplos: Caldo nutritivo: extracto de carne + peptona + agua, Agar nutritivo: extracto de carne + peptona + agua + agar.
Clasificacin de los medios de cultivo Generales: son medios que requieren contenidos mnimos de C, N, S, P, energa, oligoelementos, pH adecuado. Enriquecidos: se le llama as porque algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en medios de cultivo generales; para lograrlo es necesario enriquecerlo con sustancias nutritivas como la sangre, el suero, extractos de tejidos animales, tales medios son enriquecidos, y los microorganismos que crecen en ellos son

microoorganismos exigentes o fastidiosos; un ejemplo de este tipo de medio de cultivo es el de agar-sangre. Selectivos: aquellos que contienen uno o varios compuestos que inhiben el crecimiento de un determinado tipo de microorganismos y no afectan a otros tipos; por ejemplo el cristal violeta inhibe las Gram +. Otra manera es modificar la fuente de carbono; si sustituimos la glucosa por maltosa, seleccionamos aquellos microorganismos capaces de digerirla. Diferenciales: son medios que contienen distintos compuestos qumicos o indicadores sobre los que determinados microorganismos adquiere coloraciones especficas o reaccionan de una manera determinada. Ejemplo: Agar levine tiene colorantes especiales (eosina y azul de metileno) que nos permiten diferenciar a las colonias que viven en el medio. Escherichia coli forma colonias de color verde claro, mientras que E. enterobacter forma colonias de color rosa salmn. De transporte: su nica funcin es mantener vivas a las bacterias desde la toma de la muestra hasta su llegada al laboratorio. Les proporciona humedad (agar) y elimina los productos txicos (carbono activo).
Actividad 3.T eres para m Discute acerca de la relacin de las condiciones naturales en donde se desarrollan los microorganismos (microambiente) en relacin con los medios de cultivo. Ejemplo: Agar sanguis. Imita algunas de las condiciones microambientales presentes dentro del torrente sanguneo. De acuerdo a los temas vistos en clase discute porque son importantes tener una serie de condiciones ambientales ptimas para la preparacin de medios de cultivo, menciona que pasara si se modificara una de tales condiciones.
Medios de Cultivo de uso Habitual Existen un sinfn de medios de cultivo, la mayora de ellos son especficos para que crezca una bacteria en comn, los ms importantes se enuncian en la siguiente tabla:
Caldo comn Caldo de extracto de carne bovina Caldo exento de azcares Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS) Prueba de Voges-Proskauer Caldo Suero Agar-hgado Agar-patata glicerinado Medio biliado-verde brillante Agar eosina azul de metileno (EMB) Agar verde brillante Caldo formiato-ricinoleato Medio SIM Medio cerebral de Hibler Medio al huevo de Dorset Medio al suero hemtico de Loeffler Agar huevo glicerinado Medio de Lowenstein-Jensen

Agua-suero de Hiss Solucin Dunham Caldo triptsa fosfatado Leche Caldo de enriquecimiento para PPLO Agar-nutritivo Agar-suero Agar-sangre Medio de Edwards Agar-sangre violeta-azidasdica Medio CIN para Yersinia Agar-chocolate Agar cetrimida Caldo con carbohidratos Agar-desoxicolato Caldo base tetrationato Agar citrato de Simmons Caldo urea Medio para la produccin de toxina por estafilococos Agar SS (Salmonella-Shigella) Agar-urea base Medio descarboxilasa base Agar fenilalanina Agar nitrato Agar acetato de plomo Agar hierro de Kliger Gelatina nutritiva Agar Mueller-Hinton Medio sinttico de Dorset Agar-sangre-glucosa-cistina Medio #110 para estafilococos Agar Bacto-Middlebrook 7H10 Agar Bacto-Middlebrook OADC Enrichment Agar oleico base Bacto-Dubos Agar de endo Medio al tioglicolato Patata Otros medios vegetales Agar soya tripticasa Agar marino Zobell Agar Mac Conkey Medio Campy
A continuacin se enuncian caractersticas de algunos medios: Agar Eosina y Azul de Metileno (EMB) Es un medio utilizado para el aislamiento y diferenciacin de bacilosentricos Gram negativos. Este medio tambin es conocido como Agar EMB por sus siglas en ingls. Permite la diferenciacin de las colonias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. Lasacarosa est incluida en el medio para detectar a los miembros del grupo coliforme que fermentan ms rpidamente la sacarosa que la lactosa. El envase donde viene el medio de cultivo contiene Digerido Pancretico de Gelatina 10.0 g/L, Lactosa 5.0 g/L, Sacarosa 5.0 g/L, Fosfato Dipotsico 2.0 g/L, EosinaY 0.4 g/L, Azul de Metileno 0.065 g/L, Agar Bacteriolgico 15.0 g/L a un pH de 7.2 0.2. Se prepara suspendiendo 36 g del medio en un litro de agua purificada, calentar con agitacin suave hasta su completadisolucin y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en placas de Petri estriles, recolectar las muestras y sembrarlas tan pronto lleguen al laboratorio, sembrar las placas por estra, incubar las placas a 35- 37C durante 18 a 24 horas y observar el crecimiento. Las colonias de Salmonella y Shigella son translcidas, de color mbar o incoloras. Los coliformes queutilizan la lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul a negro con centros obscuros y brillometlico. Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias mucosas de color rosa. Las cepas deEnterococcus faecalis son parcialmente inhibidas.

http://www.instrumentalm edico.com/productos/me dios-de-cultivodeshidratados/agareosina-azul-metilenoemb-levine500ghttp://archive.microb elibrary.org/ASMOnly/det ails.asp?id=2553&Lang
Medio de cultivo Agar EMB y colonias bacterianas de Enterobacter aerogenes
Agar Mueller Hinton: Es un medio utilizado para realizar las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana enmicroorganismos aerbicos por el mtodo de Bauer-Kirby. Este medio tambin es conocido como AgarM-H. Se llevan a cabo pruebas desusceptibilidad a antibiticos, con este medio se han llevado a cabo una gran cantidad de estudios sobre susceptibilidad antimicrobiana. En este medio la infusin de carne y la peptona de casena proveen la fuente de nitrgeno, vitaminas,carbn y aminocidos. El almidn es agregado para absorber cualquier metabolito txico y el agar esadicionado como agente solidificante. Contiene infusin de carne 300.0 g/L, almidn. 1.5 g/L, peptona de casena H 17.5 g/L, agar bacteriolgico 17.0 g/L a un pH de 7.4 0.2. Agitacin suave hasta su completadisolucin y hervir durante un minuto, esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50 C y vaciar en placas de Petri estriles. Para obtenerdesarrollo de Neisseria enfriar el medio a 45-50 C y agregar sangre de borrego desfibrinada estril al 5%calentada a 80 C. Para realizar pruebas de oxacilina y meticilina con estafilococcos el medio deber sersuplementado con 2% de cloruro de sodio. Editar de la web http://www.azuld iagnosticdb.com /upload/index.ph p?route=product /product&produc t_id=1366 y http://atlas.med micro.info/index. php?jazyk=en&s
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Agar Mueller-Hinton y una colonia de Pseudomonas aeruginoses ekce=1&podsek ce=8
Caldo nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto bacteriano. Puede ser utilizado adems, como pre-enriquecimiento en la bsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos, ya que permite recuperar clulas de carne que constituyen la fuente de carbono y nitrgeno necesarias para el adecuado desarrollo daadas, diluir metabolitos txicos y sustancias inhibitorias. Contiene pluripeptona 5.0g/L y extracto de carne 3.0g/L a pH final: 6.9 0.2. Se prepara empleando 8 g de polvo por cada litro de agua destilada, calentar hasta disolver, distribuir y esterilizar en autoclave 118-121 C durante 15 minutos, dejar enfriar y sembrar los microorganismos por inoculacin directa incubndose despus en aerobiosis a 35-37C durante 24 horas. http://www.jampar.com.pe/product/detalle/ 013010079.html
Envase de medio de cultivo de caldo nutritivo Agar Hierro de Kliger: Es un medio que se emplea para la diferenciacin de cultivos puros de bacilos Gramnegativos con base en su capacidad para fermentar la dextrosa y la lactosa y la produccin de sulfuro dehidrgeno. Presenta extracto de levadura y peptonas que fungen como fuentes de nitrgeno, vitaminas y minerales, el sulfato frrico y el tiosulfato son indicadores de la produccin desulfuro de hidrgeno.

Tambin tiene cloruro de sodio que ayuda a mantener la presin osmtica. Funciona comoagente solidificante. Contiene una mezcla de peptonas 20g/L, cloruro de sodio 5.0g/L, lactosa 10.0g/L, tiosulfato de sodio 0.5g/L, dextrosa 1.0g/L, citrato de hierro y amonio 0.5g/L, rojo de fenol 0.025g/L, agar bacteriolgico 15.0g/L, a un pH de 7.4 0.2 El mtodo de preparacin del medio, es suspender 52 g del medio en un litro de agua destilada, calentar con agitacin suave hasta su completadisolucin y hervir durante un minuto, dispensar en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a121C (15 libras de presin) durante 15 minutos, dejar enfriar en posicin inclinada, el color del medio preparado es rojo y se suele colocar en tubos para la siembra de microorganismos. Posteriormente para la siembra tomar una colonia bien aislada a partir de un medio slido, inocular los tubos inicialmente por picadura en el fondo del tubo (de 3 a 5 mm) y posteriormentepor estra en la superficie, incubar los tubos con las tapas flojas a 35- 37C durante 18 a 48 horas, leer los tubos para la produccin de cido en el fondo y la superficie, as como la produccin degas y sulfuro de hidrgeno. Los resultados se leen una superficie alcalina y un fondo cido (rojo/amarillo) indica fermentacin solo de la dextrosa, una superficie y fondo cido (amarillo/amarillo) indica la fermentacin de dextrosa y lactosa, una superficie y fondo alcalino (rojo/rojo) indica que no hubo fermentacin de ninguno de los carbohidratos, la presencia de burbujas o fracturas en el medio indica la produccin de gas, la presencia de un precipitado negro indica la produccin de sulfuro de hidrgeno. http://www.slideshare.net/roberch avez/medios-de-cultivo-ypruebas-bioquimica-presentation
Formas en las que se visualizan resultados de la siembra de microorganismos en agar Hierro de kliger

Caldo triptosa fosfatado: Medio que sirve para propsitos generales, til para el cultivo de bacterias nutricionalmente exigentes, especialmente Streptococcus spp., a partir de diversas muestras. En el medio de cultivo, la triptena aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo de microorganismos. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el fosfato disdico otorga capacidad buffer.Este medio de cultivo, es utilizado para el crecimiento de bacterias nutricionalmente exigentes. Tambin puede agregarse como adyuvante a cultivos celulares, y permite el agregado de agar, sangre o acida sdica para ser utilizado en determinados propsitos. Contiene triptosa 20 g/L, glucosa 2.0 g/L, cloruro de sodio 5.0 g/L, fosfato disdico 2.5 g/L a un pH 7.3 0.2. Se siembra directamente, a partir del material de estudio, incubndose en aerobiosis, a 35-37 C, durante 18-24 horas. Agar Salmonella-Shigella: Tambin conocido como Agar SS, es utilizado para el aislamiento de especiesde Salmonella y Shigella a partir de muestras clnicas y de alimentos.El Agar Salmonella Shigela tiene un desempeo superior a otros medios para el aislamiento de especies deSalmonella y Shigella. En este medio las sales biliares #3.3 y el verde brillante actan como inhibidores de bacilos Grampositivos, de la mayora de bacilos coliformes y del swarming en Proteus spp., mientras que permiten elcrecimiento de Salmonella spp. El tiosulfato de sodio y el citrato frico permiten la deteccin de laproduccin de H2S (sulfuro de hidrgeno). La lactosa proporciona la fuente de carbohidratos, el rojo neutro y el verde brillanteactan como indicadores de pH y el agar es agregado como agente solidificante, acta a un pH de 7.0 0.2C Para prepararlo se suspenden 60 g del medio en un litro de agua destilada, calentar con agitacin suave hasta su completadisolucin y hervir durante un minuto, enfriar a una temperatura entre 45-50 C y vaciar en placas Petriestriles. No esterilizar en autoclave. Para la siembra se recolectan las muestras en contenedores estriles o con hisopos estriles transportados en unmedio de transporte, sembrar las muestras por el mtodo de la estra para obtener colonias aisladas, incubar las placas a 35-37 C durante 24 a 48 horas y examinar el crecimiento. Algunas cepas de Shigella spp. son inhibidas en este medio por lo que es recomendable utilizarmedios adicionales.Las enterobacterias pueden ser diferenciadas en base a su capacidad de fermentar la lactosa. Lasespecies de Salmonella y Shigella son no fermentadoras de la lactosa y forman colonias incoloras en elAgar SS.

Las especies de Salmonella que son productoras de sulfuro de hidrgeno desarrollan colonias concentro obscuro. Los coliformes son parcialmente inhibidos. E. Coli produce colonias de color rosa a rojo y puedenpresentar una zona de precipitado. Las colonias de Enterobacter aerogenes son cremosas de color rosa.Citrobacter y Proteus spp. Pueden crecer produciendo colonias con centros de color gris o negro debido ala produccin de H2S. Enterobacter faecalis es parcialmente inhibido presentando colonias incoloras.
Medio de cultivo Agar SS y micrografa electrnica de colonias bacterianas de Salmonella spp. Como se preparan los medios Los medios de cultivo, siempre deben prepararse utilizando agua destilada (salvo el Marino). Es necesario ajustar siempre el pH. Todos los utensilios deben estar perfectamente limpios. Todos los medios deben esterilizarse. Los medios se preparan en matraces cnicos con tapa. Se pesa la cantidad de medio requerida, se disuelve o suspende en el agua. Se ajusta el pH. Se esteriliza a 121C por 20 min. Se espera a que enfri (42C) Servir 20 ml aprox. en cada caja de Petri en un rea estril para evitar contaminacin de los medios; de preferencia limpiar el rea con alcohol y tener cerca un mechero. http://ocwus.us.es /produccionvegetal/sanidadvegetal/tema_22/ page_09.htm
Pasos para elaborar un medio de cultivo en cajas petri y en tubos

Esterilizacin Hmeda, autoclave (como una olla de presin). Seca, horno Gaseosa: xido etileno, formaldehido o perxido (H2O2). Filtracin: membranas de 0.45 y 0.22 m.
http://www.figursa.com/autoclaves.php
Autoclaves para esterilizar medios de cultivo comnmente usadas Mtodo de siembra por agotamiento o en estra Se necesita una caja o placa petri en la cual se coloca el medio de cultivo y se procede a sembrar una muestra ya sea slida o lquida, se recomienda el uso de un asa de platino para realizar la siembra. La metodologa a seguir es como se esquematiza en la figura siguiente donde: (a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero hasta que tenga tonalidad del rojo vivo, (b) introducirla en la suspensin bacteriana u objeto para recoger una muestra, (c) sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una placa Petri, y (d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo grupo de estras en una regin nueva de la placa. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de clulas se diluyan y se separen clulas aisladas y (e) despus de la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estras una segunda placa. Para que los microorganismos crezcan se incuba a 37 C durante 24 horas y, en la primera zona, habr un amasijo de clulas. En la segunda, parte

de la primera zona estar mejor extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an. Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro.
Forma de sembrar en caja petri con medio de cultivo slido. Editar de la web http://bioservice77.obolog.com/esterilizacion-calorcultivo-luz-microrganismos-335412
Mtodo de siembra en tubo A diferencia del cultivo en placa se necesitan tubos bacteriolgicos estriles, los cuales pueden contener tanto medio de cultivo lquido como slido. El mtodo de siembra es tomando un asa de platino y esterilizarla por flameado en la llama de un mechero hasta que tenga tonalidad del rojo vivo, introducirla en la suspensin bacteriana u objeto para recoger una muestra, sembrar haciendo una picadura cuando el medio es slido, siembra en superficie diagonal y agitando el asa dentro del tubo cuando el medio es lquido. En los tubos con medio de cultivo lquido se pueden llevar a cabo diluciones sucesivas a tal grado de obtener un cultivo puro con pocas clulas que despus se sembraran en un medio slido.

Formas de sembrar en tubo Editar de la web http://mediateca.educa.madrid.org/imagen/tags.php?pag=3&tag=ensayo Despus de llevarse a cabo la siembra de los microorganismos, los medios de cultivo se ponen a incubar tal y como se especifica para cada bacteria que se desea obtener o aislar. http://uriel-93.over-blog.com/article32831322.html
Equipo usado para el crecimiento de microorganismos estufa incubadora o incubadora
2.3.2. Preservacin de Microorganismos

Antiguamente los microorganismos han sido empleados como materia prima esencial de trabajo en la obtencin de una variedad de medicamentos (antibiticos, vitaminas y aminocidos), elaboracin de alimentos (pan, queso, leche, bebidas y licores) y fabricacin de solventes y reactivos, entre otras aplicaciones. El creciente uso de estos materiales biolgicos en la biotecnologa y la proteccin medioambiental han fortalecido la necesidad de mantener los cultivos microbianos de manera que sus propiedades permanezcan estables. La preservacin de cepas (muestras) microbianasdebe garantizar la viabilidad, pureza y estabilidad gentica de los cultivos, caractersticas que coinciden con los objetivos de un buen mtodo de conservacin Con frecuencia la eleccin de la tcnica ms adecuada para conservar cultivos microbianos resulta difcil, pues deben tomarse en consideracin los criterios de viabilidad y pureza de las cepas, cambios poblacionales y genticos, nmero y valor de los cultivos, costo, suministro y transporte de cepas, as como la frecuencia del uso de los cultivos.

El mtodo de conservacin que se elija debe garantizar la supervivencia de al menos el 70 % de las clulas por un perodo considerable de tiempo, de forma tal que la poblacin sobreviviente se asemeje a la original como sea posible, conserve las propiedades de importancia de los cultivos y minimice la ocurrencia de los eventos genticos. De igual manera debe reducir al mnimo el riesgo de contaminacin y permitir que la pureza del cultivo permanezca inalterable. A esto se le suma la distribucin, para la cual se necesitarn rplicas conservadas y empaquetadas convenientemente que permitan la llegada al lugar de destino en las mejores condiciones. Los microorganismos son enviados por varios medios: correo areo, postal o a travs de las manos, de un laboratorio a otro dentro de un mismo pas y con frecuencia a travs de las fronteras o continentes.Su distribucin y manipulacin est regulada en el mbito internacional y nacional, y para su transportacin es necesario el uso del triple empaque para asegurar que todo el personal involucrado en este proceso est protegido de la exposicin a cualquier agente contenido en el envase. Algunos cultivos son empleados como cepas controles, cepas de ensayo, cepas de produccin industrial y pueden ser utilizadas frecuentemente en un laboratorio. En estos casos, la facilidad del recobrado y el riesgo de contaminacin de los cultivos necesitan ser considerados Existen dos formas ms importantes de conservacin: I. Congelacin (a 70 C y 196 C) y liofilizacin como tcnicas que minimizan al mximo el riesgo de cambio gentico en las clulas y las mantienen viables por 10 aos o ms, as se han podido conservar materiales biolgicos como cultivos de hongos, bacterias y levaduras, algas, suero, clulas sanguneas, entre otros. El elevado costo de los equipos que emplean estos mtodos dificulta su implementacin en muchas instituciones. Se necesitan mantener libres de humedad, por lo que se ocupan materiales extra para lograrlo como arena, slica gel, perlas de vidrio; donde cesa el crecimiento, as como el almacenamiento en tierra, parafina lquida y la suspensin en agua estril (destilada o de mar). http://www.lobov.com.ar/site/nte cnica_det.php?id=4
Izquierda un congelador y derecha un liofilizador

II. Se propone llevar a cabo la resiembra peridica, que es una tcnica que permite la supervivencia de los cultivos en cortos perodos de tiempo. De lo que se trata es de transferir el cultivo del medio seco a uno fresco proporcionndole las condiciones ptimas de crecimiento, lo que condiciona el elevado riesgo de contaminacin y variabilidad de las caractersticas de las cepas.
Cierre de la unidad
Con los temas vistos en esta unidad te pudiste dar cuenta como los microorganismos se pueden reproducir de manera muy rpida, colonizar diversos hbitats y sobre todo cuales son las condiciones y los requerimientos para dicho proceso. Pudiste constatar que los microorganismos se utilizan en muchos estudios tanto en el medio ambiente, la salud, industria entre otros. Ahora podrs integrar estos conocimientos junto con los de la unidad anterior donde tendrs un bosquejo mayor de cmo es el desarrollo cualitativo de las bacterias.
Para saber ms
Ver Video http://www.youtube.com/watch?v=pI3V5KPj5XQ&feature=relatedanaliza cmo fue que se lleg al conocimiento de los microorganismos y su impacto significativo en las ciencias biolgicas. Evidencia de Aprendizaje. Mundo microbitico Elabora un cartel para exposicin en congreso* especializado en un medio de cultivo que tu elijas, describe cmo es dicho medio de cultivo, las diferentes especies de organismos que pueden cultivarse, las condiciones necesarias para que subsistan y la importancia de la identificacin de dichas especies. 2.- apoya tu trabajo con imgenes y s cuidadoso con la ortografa 3.- guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U2_EA_XXYZ y envalo a tu facilitador (a) mediante la seccin de tareas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu facilitador (a) puede detectar esta situacin sin dificultad; tu formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
Fuentes de consulta
Bibliografa bsica Gonzlez,G. M. y C. A. M. (2007) Microbiologa ambiental. Corpus. 120 pp.

Pidello,A. (2011).Ecologa microbiana. Corpus Willey,J., Sherwood, L. M. y Woolverton, C. J. (2009).Microbiologa.7a ed. MGraw Hill-Interamericana. Bibliografa complementaria Atlas, M. R. y Bartha, R. (2002). Ecologa microbiana y Microbiologa ambiental. 4 ed. Pearson Addison Wesley. 677pp. Brock, D. T. y Madigan, T. M. (). Microbiologa. ed. Prentice Hall. 956 pp. Brooks, G. F., Butel, J. S. y Morse, S. A. (2011). Microbiologa Mdica. 25 ed. Mc Graw Hill. pp 815. Madigan, M. T., Martinko, J. M. y Parker, J. (2004). Brock. Biologa de los microorganismos. 10 a ed. Prentice Hall. 1089 pp. Prescott, L. M., Harley, J. P. y Klein, D. A. (2005). Microbiologa. 5a ed. McGrawHill Interamericana. 1236 pp. Solomon, P. E., Berg, R. L. y Martin, W. D. (2008). Biologa. 8a ed. Mc Graw Hill. 1338 pp. Trtora, G. J., Funke, B. R. y Case, C. L. (2007). Introduccin a la microbiologa. 9a ed.Mdica Panamericana. 956pp.

Unidad 3.Caracterizacin microbiana

Nos resulta muy sorprendente que, con muchos avances en conocimientos cientficos y tecnolgicos de los que se disponen en la actualidad, an miles de personas se vean afectadas por el ataque de una gama de bacterias. Hasta nuestros das el mundo oculto de los microorganismos no haba sido descubierto, puesto que su diminuto e inapreciable tamao los hace pasar por invisibles, salvo por las grandes consecuencias que estos ocasionan. El llevar a cabo la caracterizacin microbiana es de vital importancia y tiene el fin fundamental de poder conocer sus caractersticas morfolgicas y fisiolgicas y de esta manera diferenciar las principales tcnicas que existen para estudiar en particular a las diferentes especies, pudiendo estas participar dentro de los ciclos biogeoqumicos del agua, oxgeno, carbono, nitrgeno, azufre. Reaccionan muy diferentes ante agentes qumicos, positivamente con los nutrientes para el crecimiento bacteriano o de manera negativa como con los frmacos que atacan a las bacterias.
Propsitos
El alumno comprender de qu forma influyen en la vida cotidiana las caractersticas de las bacterias, a que se debe su importancia tanto a nivel industrial como ambiental, donde incorporar los conceptos fundamentales de la microbiologa, medios de cultivo, pruebas y tcnicas bioqumicas, as como caracteres genticos para comparar cualitativamente a las bacterias.
Analizar la caracterizacin microbiana mediante el estudio de tcnicas para determinar las caractersticas apropiadas, segn los propsitos del investigador.
3.1. Caracterizacinmicrobiana
Para poder realizar una identificacin microbiana es necesario identificar sus caracteres morfolgicos, fisiolgicos, serolgicos y qumicos que son los que nos van a dar pauta para poder diferenciar entre una especie y otra, o bien identificarlos si es que an no lo han sido. El estudio de tales propiedades conlleva a la realizacin de experimentos, pruebas y tcnicas para identificar a las bacterias. En la actualidad las tcnicas bioqumicas estn tomando auge como una nueva alternativa para resolver problemas que anteriormente se tenan, estas tcnicas permiten la caracterizacin genotpica bacteriana y proporcionan una posible base objetiva para la identificacin de las especies bacterianas. Una herramienta especifica muy til es como el uso del microscopio para

poder observar ms a detalle sus estructuras, ya que como sabemos son microorganismos tan diminutos que no pueden ser observados a simple vista. Cuando alguien se enferma y presenta variada sintomatologa (tos, dolor de cabeza, fiebre, estornudo, cuerpo cortado) se puede asociar a patologas de un catarro, gripe, resfriado, y en casos ms extremos una neumona, bronquitis y la muy conocida influenza, se acude por consiguiente al mdico para que recete un medicamente que solucione el problema, pero antes que nada l realiza una serie de cuestionamientos para poder llegar a un diagnstico y poder suministrar algn antibitico, ya que existen variadas especies de bacterias que causan los mismos sntomas y se tiene que hacer una serie de pruebas de identificacin para poder proporcionar un diagnstico de la enfermedad que se tiene.
3.1.1.Caracteres morfolgicos
Vamos a comenzar aclarando algunos conceptos biolgicos importantes, el trmino morfologa hace referencia a la forma de los microorganismos y con ayuda del microscopio electrnico se han podido estudiar y revelar detalles estructurales de las bacterias. Las bacterias son considerados organismos procariotasa nivel macroscpico, las encontramos en forma de colonias o filamentos que contienen clulas especializadas y de manera microscpica es que tienen dos formas comunes, ya sea la esfrica (cocos) o cilndrica (bacilos, espiroquetas) y dentro de cada una hay subvariedades de formas. Una de las caractersticas principales de estas clulas es que no presentan un ncleo verdadero como los eucariotas, ya que van almacenar su ADN (material gentico o informacin gentica) en una estructura denominada nucleoide, el cual solo es perceptible por microscopia de luz y de material teido con ayuda de un colorante conocido como Feulgen que es el que nos va a indicar la presencia de ADN (Brooks,et al. 2011). Editar de la web http://www.humanhealths.com/bacillus-cereus2/bacillus-cereus.php
Nucleoides de Bacillus cereus teidas con Feulgen.

Para poder observar la presencia de la membrana nucleoidal es necesario hacerlo a travs de una micrografa electrnica, a excepcin de los plantomicetos, que son un grupo de bacterias acuticas donde su nucleoide est rodeado por una cubierta nucleoidal formada por dos membranas compuestas de lpidos. Primero debes de saber que para poder diferenciar una clula procariota de una eucariota es que la primera no cuenta con un aparato similar al huso mittico, la regin nucleoidal est llena con fibrillas de ADN. El nucleoide de la mayor parte de las clulas bacterianas consiste en una molcula circular nica y continua, que vara en tamao de 0.58 a casi 10 millones de pares de bases, aunque como en todo hay sus excepciones ya que algunas bacterias poseen dos, tres o incluso cuatro cromosomas diferentes. Ahora bien el material gentico que es de forma circular (plsmidos que son pequeas molculas circulares de ADN capaces de existir de forma independiente respecto a los cromosomas del husped o sea que son insertados por los virus) hay dos excepciones que han mostrado poseer cromosomas lineales (op cit.). Brooks, et al. 2011
Corte delgado de clula de E. coli fijada con tetrxido de osmio y fijado ms tarde con acetato de uranilo acuoso, que muestra dos regiones nucleares ocupadas con fibrillas de ADN. Para las bacterias el nmero de nucleoides y tambin el nmero de cromosomas, depende de las condiciones de proliferacin. Con esto podemos ver que las bacterias con rpido crecimiento tienen nucleoides ms grandes por clula que los que tienen crecimiento lento, aunque cuando se presentan varias copias, todas son similares (haploides) (op cit.). Otra caracterstica morfolgica importante es la membrana plasmtica que es la que rodea al citoplasma, esta membrana es el punto de contacto de la clula con el ambiente por ello es la responsable de la relacin de la clula con el exterior. La membrana bacteriana difiere de otra debido a que esta carece de esteroles como el colesterol, aunque contienen molculas pentacclicas, similares al esterol, denominadas hopanoides, que los podemos encontrar en nuestro ecosistema. Estos hopanoides se sintetizan (derivan) a partir de los mismos precursores de los esteroides y estos hopanoides son los posibles encargados de la estabilizacin de la membrana (Prescott,et al. 2000).

Prescott, et al. 2000
Componentes qumicos de la membrana plasmtica El modelo de mosaico fluido (S. Jonathan Singer y Garth Nicholson) es la estructura de membrana ms aceptada donde diferencian dos tipos de protenas de membrana (op cit.): a) Protenas perifricas: estn dbilmente conectadas a la membrana y pueden eliminarse fcilmente, son solubles en soluciones acuosas y constituyen aproximadamente del 20 al 30% del total de las protenas de membrana. b) Protenas integrales: estn no se extraen fcilmente y son insolubles en soluciones acuosas cuando se eliminan los lpidos. El modelo de mosaico fluido de la estructura de la membrana bacteriana mostrado en la figura siguiente muestra a las protenas integrales (azules) flotando en una bicapa lipdica. Las protenas perifricas (morado) estn asociadas de forma poco firme con la superficie de la membrana interna. Las esferas pequeas representan los extremos hidrfilos de los fosfolpidos de membrana, y las colas onduladas son las cadenas de cidos grasos hidrfobos. Puede haber tambin otros lpidos de membrana, como hopanoides (amarillo). Para que quede ms claro, los fosfolpidos se muestran con un tamao proporcionalmente superior al que poseen en las membranas verdaderas.

Prescott,et al. 2000
Estructura de la membrana plasmtica. La membrana plasmtica retiene al citoplasma y lo separa del medio exterior, actuando como barrera selectivamente permeable que va a permitir el paso de iones y molculas particulares, tanto hacia dentro como fuera de la clula, mientras que evita el desplazamiento de otras, por ello no hay prdida de componentes es enciales por exudacin (evaporacin), mientras se facilita el movimiento de otras molculas (Brooks,et al. 2011). Podemos encontrar dentro de la clula algunas sustancias que no puedan atravesar la membrana plasmtica por lo que requieren emplear sistemas de transporte para dicha actividad, dentro de estos sistemas tenemos la absorcin de nutrientes, la excrecin de residuos y la secrecin de protenas. La membrana plasmtica es una estructura importante ya que en ella se desarrollan numerosos procesos metablicos como la respiracin, fotosntesis y sntesis de lpidos y de constituyentes de la pared celular. A su vez esta membrana ayuda a las bacterias a detectar y responder a sustancias qumicas del medio exterior (quimiotaxia), por lo que sin esta membrana no sobreviviran los microorganismos (Solomon,et al. 2008). Dentro de la membrana plasmtica encontramos estructuras comunes una de ellas es el mesosoma que son invaginaciones de la membrana plasmtica, para formar vesculas, tbulos o lamelas y los podemos observar tanto en bacterias gram positivas (ms prominentes) como gram negativas, aunque su funcin exacta se desconoce (Prescott,et al. 2000). La mayora de las estructuras de una bacteria gram positiva se muestran en la siguiente figura, solamente una pequea parte de las protenas de superficie se han incluido para simplificar el dibujo, cuando existen, estas protenas cubren la superficie. Las bacterias gram negativas tienen una morfologa similar.

Prescott,et al. 2000
Morfologa de una bacteria gram positiva. Estos mesosomas suelen situarse a continuacin de los septos o tabiques que dividen las bacterias y algunas veces parecieran estar unidas al cromosoma bacteriano, por lo que se cree que estn involucrados en la formacin de la pared celular durante su divisin o desempear un papel en la replicacin del cromosoma y su distribucin a las clulas hijas, o bien pueden participar tambin en procesos secretorios (op cit.). Como en todo, dentro de las bacterias tambin encontramos sistemas internos diferentes a los mesosomas, ya que los plegamientos de la membrana plasmtica pueden ser extensos y complejos en bacterias fotosintticas, como las cianobacterias y las bacterias prpura, o en bacterias con una intensa actividad oxidativa, como las nitrificantes (utilizan nitrgeno para su metabolismo y lo descomponen), ya que pueden construir agregados de vesculas esfricas, vesculas aplanadas, o membranas tubulares (op cit.). Prescott,et al. 2000
Membranas internas bacterianas. Membranas de bacterias nitrificantes y fotosintticas. a) Nitrocystis oceanus con membranas paralelas atravesando toda la clula. Obsrvese el nucleoplasma (n) con estructura fibrilar. b) Ectothiorhodospira mobilis con un sistema extenso de membranas intracitoplasmticas (x60000).

La pared celular bacteriana debe su resistencia a una capa compuesta de diversas sustancias conocidas como murena, mucopptidos o peptidoglucano (todos son sinnimos). La mayor parte de las bacterias se clasifican como gram positivas o gram negativas con base en su respuesta al procedimiento de tincin de gram (Brooks,et al. 2011). Madigan,et al. 2009
Diagramas esquemticos de pared celularde bacterias gram positivas y gram negativas. Las paredes celulares de bacterias presentan una capa rgida que es la responsable de la resistencia de la pared celular. En especies gram negativas existen capas adicionales que se sitan en el exterior de sta, dentro de estas especies de bacterias presentan puentes que se establecen por lo general mediante enlaces peptdicos directo entre el grupo amino del diaminopimlico de una cadena y el grupo carboxilo de la D-alanina terminal de otra cadena adyacente. En las bacterias gram positivas el entrecruzamiento se establece mediante un puente interpeptdico cuya composicin vara en cuanto a tipo y nmero de aminocidos de un organismo a otro. Por ejemplo, en una de las bacterias gram positivas (S. aureus), el puente interpeptdico est formado por cinco glicinas. La lisozima es una enzima que destruye al peptidoglucano originando la lisis celular. (Madigan,et al. 2009). Madigan,et al. 2009

Peptidoglucano en E. coli y en Staphylococcus aureus. a) en E. coli y otras bacterias gram negativas no se forma puente intermedio. b) el puente intermedio de pentaglicina en S. aureus bacteria gram positivo. Las bacterias gram negativas, adems de peptidoglucano, tienen una membrana externa compuesta por lipopolisacridos, protenas (porinas facilitan la permeabilidad a travs de la membrana externa) y lipoprotenas. El espacio entre la membrana citoplasmtica y la membrana externa se le denomina periplasma y contiene importantes protenas para las funciones celulares este espacio entre estas dos capas es de aproximadamente 15 nm de anchura y tiene un contenido gelatinoso (op cit.). Otra caracterstica morfolgica y de las ms importantes su movilidad mediante la natacin que es debida a una estructura llamada flagelo que funciona por rotacin (como si fuera la hlice de un helicptero), impulsando a las clulas a travs de un medio lquido (Madigan,et al. 2009). Los flagelos bacterianos son apndices largos y finos que se encuentran libres por un extremo y unidos a la clula por el otro. Como son tan finos (15-20 nm de grosor dependiendo de la especie), un flagelo individual solo es visible por microscopa ptica despus de una tincin especial (ayuda a aumentar su dimetro) (op cit.). De acuerdo a la posicin del o los flagelos que presente la clula, estos pueden ser: sin flagelo (atrico), un solo flagelo (monotrico), un flagelo en cada extremo (anfitrico), grupos de flagelos en uno o en los dos extremos (lofotrico) y flagelos distribuidos sobre toda la superficie de la clula (peritricos) como se esquematizan en las figuras siguientes.
Formas de flagelos de una bacteria Como pudimos observar en la figura anterior los flagelos tienen forma helicoidal y muestran una distancia constante entre cada dos vueltas o curvaturas adyacentes que se denomina longitud de onda y es constante para cada organismo. El filamento de los flagelos bacterianos se compone de subunidades de una protena llamada flagelina. Un flagelo est constituido por varios componentes. En la base del filamento se halla una regin ms ancha llamada gancho que es la que une el filamento a la parte motora, este motor se ancla a la membrana citoplasmtica y en la pared celular est constituido por un eje central que atraviesa una serie de anillos.

Morfologa de anclaje de los flagelos a una bacteria Gram negativa izq y gram positiva der.
3.1.2.Caracteresfisiolgicos
La versatilidad metablica de las bacterias les confiere el gran xito evolutivo, ya que todos los mecanismos posibles de obtencin de materia y energa se encuentran en las bacterias, es como si fuese un coche, es decir cmo se lleva a cabo su funcionamiento, es a lo que se llama fisiologa. Comenzaremos con la funcin de la membrana citoplasmtica que es: a. Da permeabilidad selectiva y transporte de solutos: la membrana citoplasmtica forma una barrera hidrfoba impermeable a la mayor parte de las molculas hidroflicas, aunque existen varios sistemas de transporte de nutrientes que trabajan contra un gradiente de concentracin hacia el interior de la misma y productos de desecho hacia el exterior. Este gradiente de concentracin va a permitir el incremento de la concentracin de nutrientes en el interior de la clula. Existen 3 mecanismos de transporte a travs de la membrana y uno especial: Transporte pasivo no utiliza energa y funciona solo cuando el soluto se encuentra en concentraciones ms elevadas fuera de la clula, sus variantes son la osmosis que es el paso del agua a travs de membrana semipermeable desde una regin de mayor concentracin a otra de menor concentracin y la otra es difusin es el movimiento neto de partculas como tomos, molculas e iones desde una regin de mayor concentracin hacia otra de menor concentracin. Transporte activo es el transporte de una sustancia a travs de una membrana que no depende de la energa potencial de un gradiente de concentracin, requiere ATP como fuente de energa. Muchos nutrientes se concentran ms de 1000 veces como

consecuencia del transporte activo, lo que depende de la fuente de energa utilizada: transporte acoplado con iones y transporte con casete unido a ATP. http://recursos.cnice. mec.es/biologia/bachil lerato/segundo/biologi a/ud03/02_03_04_02_ 031.html
Transporte pasivo y activo Translocacin de grupo: dicho proceso permite que las bacterias utilicen sus fuentes energticas de manera eficiente al acoplar el transporte con el metabolismo. En este proceso, una protena transportadora de membrana sufre fosforilacin (ruta metablica) en el citoplasma a expensas del fosfoenolpiruvato, la protena transportadora fosforilada se une al azcar libre en la cara exterior de la membrana, es transportada hacia el citoplasma y liberada en forma de carbohidrato unida a un fosfato. Imagina que tu estas en una fiesta y quieres salir pero no sabes cmo as que ves a una chica (o) solo cerca de la salida y le haces la pltica y poco a poco la empiezas a rodear hasta que tu estas ya en la puerta y entonces ah te encuentras a un amigo que va a entrar y corres a saludarlo y te sales junto l.
b. Transporte de electrones y fosforilacin oxidativa que es un proceso de la ruta metablica en el cual se utiliza energa liberada por la oxidacin de nutrientes y fin es la produccin de ATP. Los citocromos y otras enzimas y componentes de la cadena respiratoria incluyen ciertas deshidrogenasas que se ubican en la membrana citoplasmtica. La membrana citoplasmtica bacteriano es un anlogo funcional a la membrana mitocondrial de las clulas eucariotas. c. Excrecin de exoenzimas hidrolticas y patogenia de las protenas.- todos los organismos que dependen de polmeros orgnicos macromoleculares como fuente energtica excretan enzimas hidrolticas que desdoblan los polmeros hasta subunidades lo suficientemente pequeas para penetrar la membrana citoplasmtica. Las bacterias secretan las enzimas directamente al medio externo o en el espacio periplasmtico entre la capa de peptidoglucano y la membrana externa de la pared celular en el caso de las bacterias gram negativas.

d. Transporte de enzimas y molculas que participan en la biosntesis de ADN, polmeros de la pared celular y lpidos de la membrana, portar receptores y otras protenas quimiotacticas y otros sistemas sensoriales de transduccin. e. Funciones de biosntesis: la membrana citoplasmtica es el sitio de los lpidos transportadores sobre los cuales se ensamblan las subunidades de la pared celular as como de la biosntesis de las enzimas de la pared celular. f. Sistemas quimiotcticos: las sustancias con capacidad de atraccin y repulsin se unen a receptores especficos en la membrana bacteriana. Hay al menos 20 quimiorreceptores diferentes en la membrana de E. coli, algunos de los cuales tambin actan como el primer paso en el proceso de transporte (Brooks,et al. 2011).
La pared celular brinda proteccin osmtica y desempea una funcin esencial en la divisin celular, tambin sirve como preparador para su propia biosntesis. Varias capas de la pared son sitios de determinantes antignicos mayores de la superficie celular y uno de sus componentes lipopolisacridos (LPS) de las paredes celulares de bacterias gram negativas) son causantes de la actividad endotxica inespecfica de las bacterias gram negativas. La pared celular no muestra permeabilidad selectiva, sin embargo, una capa de la pared gram negativa que es la membrana externa evita el paso de molculas relativamente grandes (Brooks,et al. 2011). Aunque la principal funcin de la membrana externa es estructural, una importante propiedad biolgica es que resulta txica para los animales. Estas propiedades txicas se asocian con la capa de lipopolisacridos y en particular con el lpido A. Como ya se mencion anteriormente las bacterias cuentan con un flagelo ahora vamos a ver cmo funciona este en una bacteria gram negativa: el anillo L se inserta en la capa de LPS y el anillo P en el peptidoglucano. El anillo MS se ancla en la membrana citoplasmtica y el anillo C en el citoplasma. En el filamento existe un estrecho canal a travs del cual la flagelina alcanza su destino durante la sntesis del flagelo. Las protenas Mot funcionan como motor flagelar y las protenas Fli constituyen el conmutador del motor. El motor flagelar determina el giro del filamento para propulsar a la clula a travs del medio. Para explicar la rotacin del flagelo se ha propuesto un modelo de turbina de protones. El flujo de protones a travs de la protena Mot puede ejercer fuerza sobre las cargas presentes en los anillos C y MS, haciendo girar el rotor (Madigan,et al. 2009). Ahora de manera general el movimiento flagelar se da de la siguiente manera: los motores rotatorios tienen tpicamente dos componentes principales el rotor y el estator. El motor flagelar, el rotor est compuesto por el eje central y los anillos L, P, C y MS. En conjunto, estos elementos componen el cuero basal. El estator est representado por las protenas Mot que rodean al cuerpo basal y que funcionan generando un par de torsin.

El movimiento rotatorio del flagelo lo proporciona el cuerpo basal. La energa requerida para la rotacin procede de la fuerza motriz de protones. El flujo de protones a travs de la membrana citoplasmtica se realiza por el complejo Mot que impulsa la rotacin del flagelo se translocan aproximadamente 1000 protones. Se desconoce en realidad como ocurre esto por ello se propuso el modelo de turbina de protones en donde los protones que fluyen por canales a travs del estator ejercen fuerzas electrostticas sobre cargas de las protenas del rotor que estn dispuestas helicoidalmente. Las atracciones entre las cargas positivas y negativas originan que el cuerpo basal rote a medida que los protones pasan por el estator (Madigan,et al. 2009). Otro tipo de movimiento es por deslizamiento en superficies slidas y se da en procariotas mviles carentes de flagelos. Este movimiento se da en bacterias como alguna gram negativas (Myxococcus sp) y otras mixobacterias. Se cree que esto lo hace por medio de la excrecin de un polisacrido que se va adhiriendo a la superficie y la clula se desplaza por traccin.
3.2 Caracteres Quimiotxicos

El hablar de quimiotaxis que es un fenmeno que experimentan los microorganismos, en especial las bacterias, van a dar una respuesta dirigiendo sus movimientos de acuerdo a la concentracin de agentes qumicos y nutritivos que hay en el ambiente donde se encuentran. Para entender mejor la quimiotaxia recordemos cuando de nio se asista a la primaria, al escuchar los diferentes timbres reaccionbamos dependiendo de cual fuese la situacin, as los timbrados ms importantes eran la hora de entrada, la hora del recreo y la hora de salida, y por consiguiente se experimentaba una respuesta para cada uno. Si era la hora de entrada se apuraba uno para no llegar tarde y que le pusiesen retardo, si era la hora del recreo se saba que era momento de jugar, comer golosinas y por ltimo el timbre que anunciaba la salida indicando el trmino de jornada escolar.
http://www.pintodibujos.com/ 2010/11/recreo-paracolorear.html
Por fin la hora del recreo es una analoga a la quimiotaxia.

3.2.1 Fundamentos de la caracterizacin quimiotxica

Las bacterias como sabes las podemos encontrar en casi todas partes desde lugares donde se presentan gradientes de agentes fsicos y qumicos lo cual los ha hecho evolucionar para responder de modo positivo o negativo a estas variables, lo cual har que la molcula realice movimientos dirigidos denominados tactismos. Dentro de estos tactismos tenemos a uno que es la quimiotaxis que es la respuesta a agentes qumicos y otra no menos importante la fototaxis que es la respuesta a la luz. La quimiotaxis se ha estudiado con detalle en bacterias flageladas y se conoce bastante a nivel gentico acerca de cmo se transmite el estado del medio ambiental externo al conjunto flagelar. Por lo que respecta a este tema nos enfocaremos en la quimiotaxia en bacterias flageladas, aunque tambin se presentan en bacterias deslizantes. http://www.sciencephoto.c om/media/297239/view
Bacteria E. coli La quimiotaxia ha sido estudiada en gran parte en E. coli que tiene flagelacin peritrica (flagelos distribuidos por varios lugares de la pared celular). Para poder comprender como afecta la quimiotaxis a E. coli debemos centrarnos en el comportamiento de una clula enfrentada a un gradiente qumico de una sustancia. En ausencia de un gradiente, las clulas de E. coli se mueven al azar y realizan carreras mediante las cuales se desplazan hacia delante de una forma suave, y tambin tumbos, mediante los cuales la clula se para y cambia de direccin girando al azar. Durante el movimiento hacia delante en una carrera, el motor flagelar rota en el sentido contrario a las agujas del reloj, el movimiento hacia delante cesa y tiene lugar un tumbo (Madigan,et al. 2009).

Madigan,et al. 2009
Quimiotaxis en una bacteria con flagelacin peritrica como E. coli. a) En ausencia de una sustancia atrayente, la clula se desplaza al azar mediante carreras y cambia de direccin mediante tumbos. b) En presencia de un atrayente, las carreras se favorecen y la clula se mueve en la direccin del gradiente positivo de la sustancia atrayente. Tras un tumbo, la direccin de la siguiente carrera ocurre al azar. De este modo, mediante sucesivas carreras y tumbos, la clula se desplaza aleatoriamente por su entorno sin ir a una parte concreta. Sin embargo, la presencia de un gradiente de una sustancia atrayente cambia este comportamiento de movimiento sin sentido. A medida que el organismo capta concentraciones ms altas de la sustancia quimiotactica, las carreras son ms frecuentes y los tumbos ms escasos. El resultado neto de este comportamiento es que el organismo se desplaza por el gradiente hacia concentraciones ms elevadas de la sustancia atrayente. Si lo que el organismo detecta es una sustancia repelente opera el mismo mecanismo, pero en este caso es la disminucin de la concentracin del repelente lo que estimula la frecuencia de las carreras y favorece su alejamiento. Madigan,et al. 2009
Movimiento flagelar en procariotas con flagelacin peritrica. En la figura anterior se muestra el movimiento hacia delante se debe a la rotacin de los flagelos en sentido contrario a las agujas del reloj. La rotacin inversa, en sentido de las agujas del reloj, origina una voltereta, y luego, cuando vuelve a producirse una nueva

rotacin contraria a las agujas del reloj, la clula se desplaza en una nueva direccin. Por lo mismo que las clulas procariotas son muy pequeas ellas se guan solamente por una comparacin del estado fsico o qumico de su entorno que ocuparon segundos atrs utilizando una serie de protenas denominadas quimioreceptores las cuales se ubican en la membrana. Por lo que dice que las bacterias son capaces de responder a gradientes temporales ms que a espaciales, por lo que podra considerarse como un sistema de respuesta sensorial anlogo al de las respuestas del sistema nervioso de los animales. En bacterias con flagelacin polar (los flagelos se localizan en uno o ambos extremos de la clula) pueden invertir la direccin de rotacin de sus flagelos e invertir as el sentido de movimiento, aunque algunas giran solamente en el sentido de las del reloj. Aunque este ltimo tiene la facilidad de reorientarse por medio de un flagelo que es de tipo insercin subpolar detiene peridicamente su rotacin y durante ese breve momento reorienta al azar por movimiento browniano (movimiento aleatorio sin razn aparente). Madigan,et al. 2009
Movimiento flagelar procariota con flagelacin polar. Las clulas cambian de sentido invirtiendo la rotacin flagelar o bien, en el caso de los flagelos unidireccionales, mediante paradas peridicas que permiten la reorientacin. La flecha amarilla indica la direccin del desplazamiento de la clula.
3.2.2 Principales tcnicas

La demostracin de la quimiotaxis bacteriana puede llevarse a cabo sumergiendo un pequeo capilar de vidrio, que contenga una sustancia quimiotactica, en una suspensin de bacterias mviles que no contengan dicha sustancia. A partir de la punta del capilar se establece un gradiente en el medio, de tal modo que la concentracin disminuye gradualmente a medida que se aumenta la distancia a la punta del capilar. Cuando el capilar contiene una sustancia atrayente, las bacterias se movern hacia el capilar formando un enjambre alrededor del extremo abierto y, posteriormente, muchas de las

bacterias mviles se introducirn en el capilar incluso si contuviera una solucin de la misma composicin que el medio, debido a movimientos al azar. Madigan,et al. 2009
Medida de la quimiotaxis mediante ensayo en tubo capilar a) Insercin de un capilar en la suspensin bacteriana. Cuando se inserta el capilar comienza la formacin del gradiente. b) Capilar control que contiene una solucin salina que ni atrae ni repele c) Acumulacin de bacterias en el capilar que contiene una sustancia atrayente. d) Repulsin de bacterias por una sustancia repelente. Sin embargo, si se trata de un compuesto atrayente, la concentracin de bacterias dentro del capilar ser varias veces mayor que la de fuera. Cuando se extrae el capilar despus de un cierto perodo de tiempo, se cuentan las clulas y se compara el resultado con el de un control, se pueden identificar fcilmente sustancias atrayentes y repelentes. Madigan,et al. 2009
Cintica de la acumulacin de bacterias en capilares con varias sustancias. Si el capilar que se inserta contiene una sustancia repelente, la concentracin de bacterias en el capilar ser considerablemente menor que la del control. En este caso, las clulas perciben un aumento en la concentracin del repelente y los quimioreceptores correspondientes influyen sobre el motor flagelar para que la rotacin permita el

alejamiento del repelente. Utilizando el mtodo del capilar, es posible analizar si las sustancias son atractivas o repelentes para una bacteria determinada. La quimiotaxis tambin puede estudiarse microscpicamente. Utilizando una cmara de video que capte la posicin de las bacterias a distintos tiempos y marque la trayectoria de cada clula, es posible visualizar este fenmeno. Este mtodo ha sido adaptado a estudios de bacterias quimiotcticas en medios naturales. Se piensa que en la naturaleza los principales agentes quimiotacticos para las bacterias son los nutrientes secretados por clulas microbianas de mayor tamao o por otros microorganismos vivos o muertos. La siguiente figura muestra huellas de bacterias mviles en agua marina al desplazarse por las proximidades de una clula de un alga (mancha blanca en el centro) que fueron detectadas mediante un sistema de videocmara acoplado a un microscopio. Advirtase que las clulas responden positivamente al oxgeno (aerotaxis) que el alga produce por fotosntesis. La velocidad media de las clulas fue de 25 m/segundo. El alga tiene unos 60 m de dimetro. Madigan,et al. 2009
Huellas de bacterias mviles en agua marina Otros tipos de tcnicas utilizadas es por medio de preparacin de medios de cultivo con diferentes gradientes de concentracin.
3.2.3. Desventajas
Entre las desventajas de esta quimiotaxia es que por ejemplo existen algunos derivados como el Eugenol que es utilizado como agente bactericida en enfermedades infecciosas bucales que cuando las bacterias estn en contacto con esta sustancia mueren. Algunos ensayos para la medicin de quimiotaxis no estn disponibles por lo que no es confiable su reproducibilidad. Actividad 1. Huella gentica En esta actividad leers el artculo La huella gentica de la seleccin natural que puedes descargar desde el aula, te servir como detonador para entablar una charla en

el foro que lleva el nombre de esta actividad. Discute acerca de cmo la caracterizacin bacteriana contribuy al conocimiento de la evolucin de los microorganismos. Esto te permitir diferenciar los linajes aunque procedan de un antepasado en comn. Una vez que hayas ledo el artculo dirgete al foro y participa a partir de las preguntas que se te plantean
Para participar en el foro: 1. Dirgete al aula. 2. Ingresa al foro con el nombre de esta actividad y realiza lo que en l se teindica. *Es recomendable que previo a tu ingreso al foro consultes la Rbrica de participacin en foros que se encuentra en la pestaa Material de apoyo. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que el facilitador(a) puede detectar esta situacin sin dificultad. Tenpresente que tu formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea quereportes sea de tu iniciativa y creatividad, con la intensin de que en lo sucesivo estaactitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
La extrema diversidad que existe entre las bacterias se ve reflejada ms intensamente en sus propiedades fisiolgicas y bioqumicas que en la forma que estas presentan. Aunque parece sencillo explicar la morfologa bacteriana, las caractersticas bioqumicas y fisiolgicas estn basadas en la qumica de los componentes estructurales de la clula bacteriana, por lo que se consideran de gran utilidad en la descripcin de los microorganismos. Se necesita conocer detalladamente que cambios sufren las bacterias durante los procesos metablicos, como es que se llevan a cabo las reacciones bioqumicas, que enzimas intervienen y cules son los productos intermedios que se generan.

http://aexbe.es.tl/Nuevo-.-Pruebas-bioqu%EDmicas.htm
Tubos de ensaye con cultivo microbiano y su reaccin ante las pruebas bioqumicas La figura anterior muestra la forma de expresar una respuesta ante las pruebas bioqumicas o medios de cultivo especiales para obtener alguna especie en particular de bacteria. El cambio o vire de color significa que reaccionan positivamente o favorable a la produccin de una enzima, fermentacin de lactosa, produccin de indol, entre otras. Fundamentos de la caracterizacin por pruebas bioqumicas Los microorganismos se suelen cultivar en medios que generalmente contienen sustancias nutritivas especficas o sustratos los cuales se incuban y despus de cierto tiempo el cultivo se examina para ver los cambios bioqumicos que han ocurrido. Al observar en el microscopio los cultivos microbianos solamente permite visualizar como estn distribuidos en varios grupos los microorganismos basados exclusivamente en su forma, sin embargo cada grupo presenta una extrema diversidad de tipos basndose en su actividad bioqumica, serolgica y su poder patgeno. Para poder estudiar a fondo los microorganismos es fundamental la obtencin de un cultivo puro y despus realizarle una serie de pruebas bioqumicas, ya que las bacterias reaccionan de modo distinto a los diversos mtodos que existen y tales reacciones son tiles para clasificarlas. http://estructurayfuncio ncelularbacteriana.wiki spaces.com/Tinciones+ de+microorganismos
Ejemplos de bacterias teidas vistas al microscopio electrnico

En la unidad anterior se estudi la forma de obtener cultivos puros a partir de una serie de cultivos bacterianos y de materiales que se suponen contaminados por grmenes patgenos, mediante una serie de resiembras con ayuda de un asa bacteriolgica que tiene un alambre de platino, la cual es pasada al fuego para esterilizarla y as evitar la contaminacin de cepas.
3.3.2.Principales tcnicas
En la actualidad al convivir con una gran mayora de microorganismos, es de gran utilidad el poder identificar que especies intervienen negativamente en una actividad o de manera benfica, ya que es de gran importancia para entender de qu forma atacarla o explotarla. Para llevar a cabo la identificacin bacteriana es necesario procesarlas a nivel de laboratorio conocer tanto sus caractersticas morfolgicas, la reaccin que presentan a la tincin de Gram, agrupacin y morfologa de las colonias, reacciones metablicas como la produccin de enzimas, entre otras. Uno de los mtodos ms usados es la utilizacin de colorantes para teir a las clulas y facilitar su observacin. Los colorantes son compuestos orgnicos y cada tipo de colorante tiene afinidad por determinados componentes celulares. Muchos colorantes que se utilizan qumicamente sus molculas estn cargadas positivamente, es decir son bsicos o catinicos, por ejemplo el jugo de limn o la coca-cola son cido y por lo tanto estn cargados negativamente a diferencia del sudor o la sal de mesa que son salados (bsico) y tienen carga positiva. Para llevar a cabo las tinciones de muestras bacterianas se requiere llevar los siguientes procesos: 1. Realizar un frotis y fijarlo 2. Aplicar un colorante 3. Decolorarlo con alcohol puro (96%) 4. Lavarlo con agua. 5. Aplicar otro colorante de contraste. 6. Observarlo al microscopio electrnico.
Metodologa de tincin de bacterias Para la preparacin de los frotis se necesita un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, en donde se va a colocar una gota de la muestra bacteriana que se va a teir en el caso de

que sea lquida o toma un hisopo hacindolo pasar sobre el cultivo, el hisopo se parece a un cotonete con los que usualmente se limpian los odos. La muestra se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad. El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul de una flama hasta que el vidrio est tan caliente que moleste al tacto pero no queme, de esta forma se evita contaminacin de la muestra. Posteriormente se realizan los pasos siguientes que corresponden para cada tincin que se va a llevar a cabo. A continuacin se muestra una serie de tinciones y pruebas bioqumicas que se emplean en los test rutinarios para la descripcin e identificacin de las bacterias. Tincin de Gram: este tipo de tincin revela la forma de la clula bacteriana, su agrupacin y grupo taxonmico al que pertenece ya sea Gram positivo o Gram negativo. La tincin de Gram fue introducida en el ao de 1884 por el dans Christian Gram, para teir a las bacterias. En la actualidad es una tcnica comnmente utilizada que consiste en teir la muestra bacteriana (frotis) con el colorante violeta de genciana, someterla a la accin mordiente de lugol, lavar con alcohol puro (96%) hasta eliminar el exceso de colorante y teir luego con un colorante de contraste, como la fucsina bsica o safranina. Las bacterias que retienen la violeta de genciana se llaman Gram positivas (Gram +) y las que se decoloran y se tien en rojo por el colorante de contraste son Gram negativa (Gram -). http://pathmicro.med.sc. edu/fox/gram-st.jpg
Tincin de Gram en bacterias bacilares La figura anterior muestra la reaccin ante la tincin de gram de las bacterias bacilares. Las gram positivas aparecen teidas de color morado mientras que las gram negativas de color rosa. Esta diferencia en respuesta a la tincin de Gram se debe a la estructura de su pared celular como ya se especific anteriormente. Despus de la tincin con el colorante bsico (cristal violeta o violeta de genciana), se le agreg el alcohol el cual decolora a las clulas gram negativas pero no a las gram positivas y por ltimo antes de observarlas al microscopio se tien con un colorante de contraste (safranina) para que se pueda visualizar perfectamente.

Algunos ejemplos de bacterias que reaccionan a la tincin de Gram positivo son: S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s , S t r e p t o c o c c u s p n e u m o n i a e , M i c r o c o c c u s s p , C l o s t r i d i u m p e r f r i n g e n s ,C . s e p t i c u m , L i s t e r i a s p , A c t i n o m y c e t e s i s r a e l i i , N o c a r d i a s p .
Ejemplos de bacterias que reaccionan a la tincin de Gram negativo son: N e i s M o r a A c i n C o l i i n f l c h o l j e j u s p . e r x e e t , u e e r n i a m e n l l a s p o b a c t e H a e m o p n z a e , a e ,C a m , F u s o i i , r h V p b n g i t i d E i . s ,
s p , i l u s i b r i o y l o b a a c t e r
c t i u
e m
Tincin de Ziehl-Neelsen: este tipo de tincin es esencialmente para aquellas bacterias cido-resistentes como el bacilo que causa la tuberculosis. Resulta difcil teirlas, pero una vez que el colorante ha penetrado en la bacteria, las cuales lo conservan despus del tratamiento con cido diluido. La propiedad de resistencia se debe tanto que en la capa de su membrana celular y dentro de la clula (citosol) poseen lpidos.
Se lleva a cabo realizando el frotis habitual, salvo que este se fija por calor, se cubre la preparacin con fucsina fenicada, se calienta hasta producir vapores (aprox. 3 minutos), se decolora con alcohol-clorhdrico hasta que las partes ms finas no tengan colorante y las ms gruesas tomen un color rojizo. Despus se le coloca una tincin de contraste con azul de metileno (1minuto), se lava con agua y seca para por ultimo observarlas al microscopio. Las bacterias cido-resistentes se tien en rojo y las clulas y otras bacterias en azul.

http://www.auxiliare senfermeria.net/20 11/07/la-tincionparamicobacterias.html
Bacilo causante de la tuberculosis Mycobacterium tuberculosis Tincin de azul de metileno: para teir a las bacterias se emplea una mezcla de azul de metileno, alcohol etlico e hidrxido de potasio (KOH), la cual se vierte sobre la muestra bacteriana y se deja actuar de 3 a 5 minutos lavndola posteriormente con agua y se observa al microscopio electrnico. Tincin de capsulas: las capsulas de las bacterias son frgiles, por lo que nos se tien con los mtodos corrientes, se utiliza una solucin de colorante cristal violeta que se calienta y despus se realiza un lavado con sulfato de cobre. La capsula bacteriana se tie de color azul plido, mientras que la clula y su interior aparecen teidas de color azul obscuro. Tincin de Esporas: algunas especies de bacterias producen intracelularmente estructuras especiales llamadas endosporas, que son clulas diferenciadas resistentes al calor, agentes qumicos y radiacin. Funcionan como estructuras de supervivencia para proporcionar al organismo resistencia a condiciones adversas como temperaturas extremas, desecacin, limitacin de nutrientes. Los gneros ms estudiados con esta tcnica son Bacillus y Clostridium.
El mtodo de Schaeffer y Fulton es habitual para teir esporos, se cubre el frotis con verde malaquita en solucin acuosa dejndolo reposar media hora, despus se calienta hasta observar vapores durante medio minuto, eliminar con agua el exceso de colorante y por ltimo aplicar safranina. Los esporos retienen el color verde y las partes vegetativas se tien de rojo. http://bacillus8.blogspot.com/
Bacillus subtilis, observe los esporos teidos de verde

Tincin de flagelos: los flagelos de las bacterias son invisibles en las preparaciones corrientes, por lo que solo pueden visualizarse con tinciones especiales. Los flagelos se observan en cultivos bacterianos recientes (12-18 horas), en un tubo con 5 ml de caldo nutritivo, se cultiva la muestra procedente de la placa de agar hasta que se observe una ligera turbidez, se coloca en la estufa a 37C durante 1 hr. Posteriormente se colocan 2 o 3 gotas de la muestra sin mezclarlas ni extenderlas, se flamea en la parte azul de la llama y se deja secar al aire. Para la tincin se ocupa una mezcla homognea en agua destilada de fucsina bsica, alcohol etlico, cido tnico y cloruro de sodio. Se coloca el colorante a la muestra dejndolo actuar de 5 a 15 minutos hasta observar un precipitado y se lava para finalmente observarse al microscopio electrnico. Observndose los flagelos de color rosa o rojo y el resto de la clula es de color rosa tenue o bien sin color. La tincin de Feulgen es una tcnica para teir nucletidos, fue descubierta por Robert Feulgen, se basa en la hidrolizacin del DNA por medio de una solucin diluida de cido clorhdrico (HCl) donde se van a liberar las bases puricas del ADN. Prueba de Catalasa: este tipo de prueba bioqumica es muy til para observar la presencia de la enzima catalasa que se encarga de descomponer el perxido (H2O2) en oxgeno y agua, se localiza en las bacterias que son aerobias y anaerobias facultativas. El mtodo usual es realizar un frotis, agregarle una gota de perxido, si se visualiza la formacin de burbujas el resultado es positivo, mientras que si no sucede de lo contrario el resultado es negativo. Una especie que reacciona positivamente a la catalasa es Penicillium simplicissimum. Prueba de Oxidasa: esta prueba comnmente se utiliza para determinar la enzima citocromo-C-oxidasa, entre algunos gneros que resultan positivos a esta prueba destacan Pseudomonas sp, Neisseria sp, Moraxella sp, Vibrio sp, Aeromonas sp. Se lleva a cabo para determinar la oxidacin en presencia del citocromo C. Usualmente se ocupan discos de papel de filtro, una caja petri, reactivo de oxidasa (solucin de NNN'N', tetrametil, 1-4 fenilendiamina). Se coloca un disco inmerso de reactivo oxidasa que se pone sobre la muestra bacteriana, inmediatamente si la reaccin se hace positiva indica un color azul-violeta intenso, de lo contrario la prueba ser negativa. Prueba de Indol: se prepara utilizando usando caldo triptfano y se observa la produccin de indol. Se inocula el medio y se incuba durante 2 das y pasado el tiempo se utiliza el reactivo de Kovac para evidenciar la prueba. Se lleva a cabo cubriendo el medio con 2 ml de cloroformo, seguido de 2 ml del reactivo de kovac, una reaccin positiva denota la aparicin de color rosa o rojo intenso en la capa de cloroformo, de lo contario la prueba es negativa.

http://www.joseacortes.com/galeriaimag/ microorganismos/indol.jpg
Forma de observarse la prueba de Indol Voges-Proskauer y Rojo de Metilo: se basan principalmente en la determinacin de acetoina que es un producto final de la sntesis de la glucosa. La acetona es tambin conocida como butanodiol o acetil-metil-carbinol. Estas pruebas se asocian, ya que permiten la identificacin de enterobacterias que son microorganismos anaerobios facultativos. Para llevar a cabo estas pruebas se necesita de un medio de cultivo caldo de Clark y Lubs que tenga 3 das de inoculacin, pasado el tiempo se separa en dos muestras, una para cada ensayo correspondiente.
Rojo de metilo al tubo se le aaden de 4-5 gotas de reactivo indicador Rojo de Metilo, se agita para homogeneizar y se observa la coloracin que se obtuvo, ser positiva si cambia a un color rojo y negativa si permanece amarillo. Voges-Proskauer a la otra muestra del tubo de cultivo se le aade una mezcla del reactivo A Voges-Proskauer que contiene alfa-naftol 5% en etlico absoluto observando que el medio adquiere un aspecto lechoso y reactivo B de Voges-Proskauer hidrxido de potasio (KOH), se observara que desaparece el aspecto lechoso y se agita fuertemente. La prueba se torna positiva cuando en menos de cinco minutos aparece un color rosadoviolceo que inicia en la parte superior del tubo y si no hay coloracin alguna la pruebas es negativa.

Visualizacin de la prueba rojo de metilo. Adems de las tinciones y las pruebas antes mencionadas existen medios de cultivo que van a funcionar como evidencia de crecimiento de alguna especie bacteriana muy en particular, entre los que destacan: Citrato de Simmons: este tipo de medio se emplea para la diferenciacin de cepas de E. coli fecal de las del grupo aerogenes las cuales crecen tambin en este medio ya que se utiliza citrato. Tambin existen otras especies como las del gnero Salmonella, en especial S. typhimurium, S. typhosa y S. paratyphi que utilizan citrato como nutriente para crecer. El agar Nitrato: sirve para identificar bacterias que realizan la reduccin de los nitratos a nitrito, se aade una solucin al tubo con cultivo microbiano, esta es una mezcla de cido actico ms cido sulfanlico y cido actico con alfa-amidonaftaleno. Si al observar el tubo de color rojo-rosado indica la presencia de nitritos. Medio SIM: este medio tiene tres finalidades en las muestras bacterianas, sirve para comprobar hidrgeno sulfurado, Indol y motilidad. Se lleva a cabo una siembra por picadura, donde la aparicin de una ligera zona negra a lo largo del trayecto de la siembra, se considera una produccin positiva de hidrgeno sulfurado. La motilidad se nota por el crecimiento en forma de limpia tubos alrededor del trayecto central de la picadura., las bacterias inmviles no penetran en el agar semislido y por ultimo para comprobar la formacin de Indol se utilizan tiras de papel empapadas de solucin saturada de cido oxlico y se corrobora con el reactivo de Kovac. Actividad 2. Pruebas bioqumicas En esta actividad comparars entre las principales pruebas bioqumicas utilizadas para la identificacin de bacterias, lo que te permitir poder hacer uso en un caso necesario de anlisis ya sea ambiental, de salud, farmacutico, industrial entre otros. Realiza lo siguiente:

1.- En un documento de textoelabora un cuadro comparativo de las principales pruebas y tinciones bioqumicas haciendo nfasis en la importancia de cada prueba. 2.- Apoya tu trabajo con imgenes y s cuidadoso con la ortografa 3.- Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U3_A2_XXYZ y envalo a tu facilitador (a) mediante la seccin de tareas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu facilitador (a) puede detectar esta situacin sin dificultad, tu formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
3.4. Caracteres Genticos

Habrs escuchado hablar de la ingeniera gentica, te preguntaras a que se refiere, es una ciencia auxiliar de la gentica que se encarga del uso y aplicacin de tcnicas in vitro para modificar el material gentico de los microorganismos en el laboratorio, dicho material gentico (ADN) puede despus reinsertarse en el microorganismo de donde se extrajo o bien en otra especie de inters. Recientemente han tenido gran auge los anlisis moleculares genticos. Ha pasado por tu mente hacerte la pregunta del por qu no tienes algn rasgo que te identifique con tus progenitores y has encontrado respuesta alguna. He aqu donde acta la gentica que es una ciencia auxiliar de la biologa que se encarga del estudio de la herencia, de cmo es que las caractersticas fenotpicas y genotpicas se van a transmitir de una generacin a otra (herencia gentica). Esta ciencia se inici con el monje austriaco John Gregor Mendel (1822-1884), que es considerado el padre de la Gentica, experiment con guisantes (chicharos) con los cuales llevo a cabo una serie de experimentos respecto a su apariencia fsica cruz organismos con caractersticas fsicas diferentes con los que demostr la transmisin de los caracteres genticos. Aunque sus experimentos no fueron tomados en serio, fue hasta 1900 que sus trabajos se volvieron a retomar y posteriormente durante las dcadas siguientes sirvieron de base para los genetistas que se dedican a estudiar la transmisin de los caracteres y la expresin de la informacin gentica. En la actualidad son de gran utilidad, por ejemplo sabrs que en criminologa son esenciales para esclarecer crmenes, muy importantes en pleitos de paternidad, para erradicar y combatir enfermedades, mejoramientos de semillas y de especies animales y la ms importante dentro del estudio de los microorganismos para su identificacin.

3.2.1. Fundamentos de la caracterizacin gentica

Las estructuras que son esenciales para la gentica microbiana, se encuentran dentro de la clula, especficamente estamos hablando del cromosoma bacteriano, donde se localiza el cido desoxirribonucleico (ADN o DNA). El ADN es el material gentico que se utiliza para guardar la informacin gentica, supongamos que es el disco duro de una computadora, sabes pues que en l puedes guardar toda la informacin que se genera al trabajar. Una secuencia de ADN es simplemente la unin de miles de nucletidos. Un nucletido est formado por una azcar de 5 carbonos (pentosa) llamada desoxirribosa, un grupo fosfatado y una base nitrogenada, que en este caso se dividen en bases puricas como la adenina (A) y guanina (G) y en bases pirimidicas que son timina (T) y citosina (C) (Solomon, et al. 2008). Cada especie microbiana tiene una secuencia gentica diferente, lo cual le confiere caractersticas que las diferencian y son de suma importancia para la identificacin bacteriana. Se tiene conocimiento de la secuencia gentica de algunas bacterias, pero en general la mayora contienen entre 500 a 6000 genes. En 1949 Edwin Chargaff y sus colegas de la Universidad de Colombia llegaron a determinar la composicin de bases de ADN de diversos organismos y tejidos, entre los que destacan el de la bacteria E. coli que contiene 26.1 % de adenina, 23.9 % de timina, 24.9 de guanina y 25.1 % de citosina (Solomon, et al. 2008).

Editar del Solomon et al. 2008
Estructura de un nucletido que forma parte del DNA
3.2.2.Principales tcnicas
En la actualidad se han secuenciado completamente los genomas de muchas bacterias, lo que ha revelado el nmero y la disposicin de los genes que poseen. La clonacin y la secuenciacin han revolucionado el estudio de la estructura y la funcin del genoma en todos los organismos. Los procesos de transformacin, transduccin y conjugacin se han utilizado para mapear la localizacin de los genes en un cromosoma bacteriano (Madigan,et al. 2009). Se han desarrollado y mejorado tcnicas para auxiliar a la ingeniera gentica, dichas tcnicas se basan en la capacidad para cortar el ADN de inters en fragmentos especficos y purificar dichos fragmentos para su posterior manipulacin. Entre las herramientas bsicas destacan: enzimas de restriccin, separacin de cidos nucleicos por electroforesis, hibridacin de cidos nucleicos, las sondas de cido nucleico, clonacin molecular y vectores de clonacin.

http://betbettybea.blogspot .com/2011/11/electroforesi s.html
Electroforesis en gel Las imgenes anteriores muestran cmo es que se lleva a cabo una electroforesis en gel. La figura de la izquierda ejemplifica como el investigador coloca con mucho cuidado y con ayuda de una micropipeta la muestra de ADN en los posos del gel de agarosa, se sumerge en bromuro de etidio y se aplica corriente elctrica y posteriormente la imagen derecha es la observacin final de la tcnica con la ayuda de una cmara de luz ultravioleta, donde las marcas son el ADN. Despus de aislado y purificado el DNA se siembra la muestra en una placa porosa de gel de agarosa o poliacrilamida, la cual es sometida aplicndole corriente elctrica. Al aplicarse la corriente lo que va a provocar es que las molculas se van a mover a travs del gel impulsadas por la corriente. Esta tcnica nos permite separar molculas de acuerdo a su peso molecular y carga (positiva o negativa), debido a esto provoca que las molculas pequeas o las de cierta carga se van a mover con mucha mayor velocidad que las molculas grandes. Los cidos nucleicos por naturaleza estn cargados negativamente, por lo tanto se van a dirigir hacia el polo positivo. Durante el siglo pasado se han llevado a cabo experimentos para encontrar la secuencia completa del genoma de varias especies bacterianas, esto implica una serie de trabajo excesivo llevadas a cabo en laboratorios dotados de nuevas tecnologas de obtencin, procesamiento y visualizacin de los microorganismos. Cada organismo tiene una secuencia nica de DNA genmico, excepto los gemelos idnticos. A diferencia de los organismos superiores cuyo material gentico contiene cadenas repetitivas de ADN, las cuales varan en nmero y disposicin respecto a cada especie. El DNA se puede sintetizar in vitro mediante un mtodo en fase slida, donde se obtienen copias de secuencias especficas de ADN y son necesarias para muchas tcnicas moleculares, un mtodo por el cual se sintetizan estas copias in vitro de ADN es la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) fue inventada por Kary Mullis, el cual recibi el premio nobel por su invento (Madigan,et al. 2009).

La PCR puede copiar segmentos de ADN hasta mil millones de veces en un tubo de ensayo, un proceso llamado amplificacin, que genera grandes cantidades de genes especficos u otros segmentos de ADN para toda una serie de aplicaciones en la biologa molecular. Imaginemos pues que es una fotocopiadora a la cual manipulamos y programamos para que nos de cmo resultado una cantidad especfica de copias de algn documento, al final tendremos pues copias idnticas a la original y bsicamente eso es lo que hace la tcnica de PCR. Utiliza una DNA-polimerasa que copia molculas de ADN de manera natural, no las copia de manera completa, sino que amplifica fragmentos de hasta algunos miles de pares de bases de una molcula de ADN ms grande. La tcnica bsica para el estudio molecular de las bacterias es: i. Cultivar la muestra bacteriana en un medio general. ii. Llevar a cabo un aislamiento para purificar la bacteria. iii. Si es necesario volver a resembrar el microorganismo en un medio especial para evitar contaminacin de cepas. iv. Aplicar una serie de pruebas y tinciones mencionadas en el tema anterior que sirven para identificar la especie bacteriana. v. Teniendo el cultivo puro, seguir incubando hasta obtener varias generaciones. vi. Tomar una masa de microorganismos y centrifugarlos para obtener por diferencia de peso molecular el ADN. vii. Aplicar tcnicas especficas para lo que se requiere conocer cmo, la secuencia de nucletidos, las protenas, los genes. Una herramienta que auxilia para el estudio del material gentico son los microscopios, que con los grandes avances tecnolgicos han ido especializndose ms respecta a los intereses particulares del investigador, entre los cuales destacan los microscopios pticos de campo brillante, de campo obscuro, de fluorescencia, con focal, de contraste de fases, de interferencia, tambin microscopios electrnicos de transmisin, de barrido. Csmidos:son vectores plasmdicos que contienen el sitio cos del genoma lambda (), que genera extremos cohesivos cuando se cortan, son muy tiles en la tecnologa del DNA recombinante, con estos es posible clonar fragmentos de ADN ms grandes, se utilizan para fabricar genotecas de cDNA y son estudiados cuando el gen se expande de 30 a 40 kilobases (kb), es decir miles de bases que componen el ADN. La ventaja que tienen los csmidos, es que es posible clonar fragmentos de DNA forneo ms grandes que los originales.

http://geneticamoderna.blogspot.com/2010/08/man ipulacion-genetica.html
Esquema de un csmido Plsmidos:son elementos genticos que se replican independientemente del cromosoma, forman parte de otro elemento gentico. Existe una inmensa cantidad de plsmidos de ADN de doble cadena molculas de material gentico que la mayora son circulares, no obstante hay algunos que son lineales. Los plsmidos difieren de los virus ya que no causan dao alguno a la clula husped y no presentan formas extracelulares. Los plsmidos se diferencian de un cromosoma bacteriano, ya que los primeros portan solo genes no esenciales y los cromosomas genes que son muy esenciales. En cepas de E. coli se han asilado ms de 300 plsmidos naturales. El DNA de los plsmidos es bicatenario y contienen de 1 Kbp hasta 1 Mbp. http://caibco.ucv.ve/caibc o/vitae/VitaeDos/Articulo s/BiologiaCelular/carcter. htm
Localizacin de un plsmido bacteriano

3.2.3.Desventajas
Pero los investigadores se han topado con un gran problema, el cual es que agentes qumico, condiciones del medio ambiente hacen que los genes sufran mutaciones. Una mutacin es aquella que produce cambios en la secuencia nucletida del DNA, no obstante el ndice de mutacin global es mayor que la frecuencia de daos en el DNA, puesto que todos los organismos tienen complejos enzimticos que reparan algunas lesiones que llegase a sufrir el ADN. Otro problema al que suelen enfrentarse es que al momento de cultivar la cepa, esta no se pueda obtener pura, ya que existen especies bacterianas que comparten genticamente secuencias de nucletidos, las cuales con los mtodos de tincin o pruebas no se puedan diferenciar. Evidencia de Aprendizaje. Plsmidos y Csmidos Esta actividad es un gran reto ya que implica crear un mapa conceptual (MMCC) en el cual reflejars tu dominio del tema anterior, al construirlo describirs las aplicaciones biotecnolgicas de plsmidos respecto a la forma del ADN. Elaborar un mapa conceptual donde apliques la biotecnologa de plsmidos respecto a la forma de ADN. En un documento de texto o archivo de imagen plasma un mapa conceptual que contenga las siguientes caractersticas: El mapa conceptual debe presentar una estructura arborescente que incluya los siguientes aspectos: 1.- concepto o idea original 2.- palabras clave 3.- conectores 4.- conectivos y palabras de conexin 5.- conceptos en diferentes niveles en este caso puedes desarrollarlo mnimo entres niveles De esta manera a partir del concepto o idea de origen ocurre: 1.- desprendimiento de conceptos secundarios 2.- conectores y proposiciones.- conectores son palabras o preposiciones insertas entre dos conceptos y son tiles para producir nuevas proposiciones o enunciados con sentido 3.- enlaces cruzados.- son puentes entre proposiciones dentro de la arborizacin 4.- Jerarquizacin.- es el orden en ascendente-descendente en funcin de la complejidad de los conceptos o proposiciones tratados en la arborizacin del MMCC. Realiza lo siguiente: 1. En un documento de Word elabora un mapa conceptual siguiendo las indicaciones

anteriores. Eres libre de profundizar tanto como deseas.
2.- S cuidadoso con la ortografa 3.- Guarda tu documento con la nomenclatura BIC_U3_EA_XXYZ y envalo a tu facilitador (a) mediante la seccin de tareas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, el facilitador puede detectar esta situacin sin dificultad, tu formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, para que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional. Nota 2: No olvides revisar/consultar la Escala de evaluacin para que puedas guiarte correctamente en el diseo de estructura de tu ensayo y en el proceso de solucin o respuesta de tu Evidencia de Aprendizaje (EA). O. A. Relacionar columnas sobre los diferentes tipos de caracterizacin microbiolgica, ventajas y desventajas de cada una de ellas. 1. En esta actividad realizars un formato de relacin de columnas donde debers incluir: Los tipos de caracterizacin microbiolgica Las ventajas y desventajas del uso de estas caracterizaciones. 2.- S cuidadoso con la ortografa 3.- Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U3_OA_XXYZ y envalo a tu facilitador (a) mediante la seccin de tareas. Esto te permitir utilizar adecuadamente las terminologas vistas en el tema, as como identificar la ms adecuada respecto a las ventajas y desventajas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu facilitador (a) puede detectar esta situacin sin dificultad, tu formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
Cierre de Unidad
Como te habrs dado cuenta con los temas vistos en esta unidad, la gran capacidad metablica que tienen los microorganismos para reaccionar a las diferentes pruebas y tinciones, as como est involucrado el material gentico para poder estudiar los caracteres del genoma para determinar especficamente la huella dactilar de cada especie

y que tan importante son en la actualidad las diversas tcnicas para llegar a la obtencin de ADN purificado y de esta forma conocer ms acerca de estos microorganismos para poder aplicarla en experimentos de gran utilidad para poder erradicar enfermedades, mejoramiento de cepas para produccin de vinos o lcteos e incluso remediar nuestro medio ambiente haciendo en las bacterias que intervienen en los procesos de fijacin del nitrgeno, el tratamiento de aguas residuales.
Para saber ms
Para corroborar lo aprendido sobre la tcnica de tincin de Gram observar el siguiente video http://www.gefor.4t.com/bacteriologia/tinciondegram.html. Para entender mejor la tcnica de electroforesis en gel ver los siguientes videos http://www.youtube.com/watch?v=sbCusDyYoi0 y http://www.youtube.com/watch?v=WeRwsr5JUwA Para comprender como se lleva a cabo la PCR observar el siguiente video http://www.youtube.com/watch?v=i1o4jYepdxs. Para comprender que son los plsmidos ver el siguiente video http://www.youtube.com/watch?v=RfMTv1km0RU.
Fuentes de consulta
Bibliografa bsica Gonzlez,G. M. y C. A. M. (2007) Microbiologa ambiental. Corpus. 120 pp. Pidello,A. (2011). Ecologa microbiana. Corpus Willey, J., Sherwood, L. M. y Woolverton, C. J. (2009). Microbiologa. 7a ed. MGraw Hill-Interamericana. Bibliografa complementaria Brooks, G. F., Butel, J. S. y Morse, S. A. (2011). Microbiologa Mdica. 25 ed. Mc Graw Hill. Madigan, M. T., Martinko, J. M. y Parker, J. (2009). Brock. Biologa de los microorganismos. 12 a ed. Pearson Adison-Wesley. Prescott, L. M., Harley, J. P. y Klein, D. A. (2005). Microbiologa. 5a ed. McGrawHill Interamericana. Solomon, P. E., Berg, R. L. y Martin, W. D. (2008). Biologa. 8a ed. Mc Graw Hill. Trtora, G. J., Funke, B. R. y Case, C. L. (2007). Introduccin a la microbiologa. 9a ed.Mdica Panamericana.

Unidad 4.Ecologa microbiana

La ecologa microbiana es una ciencia que recientemente comenz a tener importancia, pues est estrechamente relacionada con problemas de contaminacin y la interaccin que el hombre tiene con su ambiente, pero aborda su contenido temtico mezclando temas de biologa con las ciencias auxiliares ecologa y microbiologa que abordan el estudio fundamental de como los microorganismos juegan un papel importante en la biosfera. Es imposible concebir la vida en el planeta Tierra sin la gran diversidad de seres vivos y las actividades que estos llevan a cabo en conjunto. Forman pues un factor importante dentro de las cadenas trficas de los ecosistemas, la funcin que desempean en los ciclos biogeoqumicos (oxgeno, carbono, nitrgeno, agua), las interacciones con el resto de los organismos vivos; las cuales llevan a definir su papel importante para mantener la salud de los ecosistemas. Por ejemplo te habrs dado cuenta que si no realizas la limpieza de una pecera se forma una pelcula que recubre las paredes y obviamente los peces empiezan a presentar problemas puesto que el exceso de microorganismos hace que compitan por nutrientes bsicos, otro muy comn es la placa dental que se forma diariamente de manera normal ayudando a la proteccin del esmalte; mientras que si se presenta en forma excesiva esta puede provocar el deterioro del mismo. Tambin habrs notado que en un rio las piedras tienen una textura resbaladiza que hace peligroso el cruce puesto que puedes caer y lastimarte, pues son los microorganismos que hacen posible esto al igual que recubren las superficies de las tuberas, los cascos de los barcos.
Propsitos
En esta unidad comprenders los conceptos importantes de cmo los microorganismos se relacionan con otros y el medio ambiente que le rodea para llevar a cabo actividades importantes, que variedad de especies intervienen en procesos de la industria alimenticia, farmacutica, agropecuarios y en la medicina (salud); por ejemplo la importancia de la flora bacteriana de los organismos que ayuda a protegerlos contra agentes patgenos. Adems analizaras por qu son importantes los biofilms en la vida cotidiana y de cmo se lleva a cabo el qurum sensing. Competencia especfica Relacionar los distintos conceptos de la ecologa microbiana mediante el estudio de su

fundamentacin ecolgica para comprender el comportamiento de diferentes microorganismos empleados en las tcnicas y procesos biotecnolgicos.
4.1. Concepto de hbitat y biodiversidad

Actualmente el impacto de las actividades humanas (urbano-industrial-agropecuarias y recreacionales) en los componentes del Sistema Tierra ha generado una crisis ambiental, la cual ha despertado gran preocupacin no slo en la comunidad cientfica sino en la sociedad en general. En trminos de la ecologa microbiana el hablar de hbitat es pues el entorno natural en el que vive un organismo, poblacin o especie. Los factores que lo componen son dos: De tipo bitico, es decir que tienen vida como las plantas, microorganismos, los animales, los hongos y De tipo abitico que son aquellos que no tienen vida pero son vitales como el agua, el aire, la luz solar, el suelo, la presin atmosfrica.
Relacionemos el tema de hbitat con tu casa, que est conformada por varias habitaciones y en cada una de ellas se realizan diferentes actividades, ubicas entonces la cocina, la sala, el comedor, el bao y las recamaras como habitaciones primordiales. La funcin de cada una de las habitaciones es contribuir a la vida cotidiana, tenemos pues una habitacin donde dormimos, descansamos, baamos, comemos. Por otro lado la biodiversidad es la variedad de organismos vivos considerada a nivel de diversidad gentica, diversidad de especie y diversidad de ecosistema. Estamos hablando de sumar la proporcin de cada especie que existe y cuantas especies hay en nmero de cada una de ellas dentro del ecosistema; es decir riqueza ms abundancia.

http://biodi versidadmexicofanny.blog spot.com/
Biodiversidad biolgica de Mxico Por ejemplo la diversidad humana (Homo sapiens) del planeta Tierra es muy variada, as sabes que existen razas humanas que se pueden distinguir genticamente por el tono de piel, los rasgos fsicos, y por el lugar donde habitan debido a sus costumbres, vestimenta, idioma. Tambin en los animales podemos observar diferencias entre las especies de perros, gatos, mariposas, peces, bacterias, hongos y en las plantas se denominan variedad de especie como el maz, frijol, chile, manzana, uva; y seguiramos hablando de un sinfn de especies que t ya conoces.
http://recursosnaturalesd echiapas.blogspot.com/2 011/05/dia-mundial-dela-biodiversidad.html
Biodiversidad Biolgica del planeta Tierra

En el planeta Tierra la poblacin de seres vivos que conviven se esquematiza en el siguiente grfico, donde a pesar de que las bacterias ocupan un porcentaje menor comparado por ejemplo con los insectos son de gran utilidad a nivel industrial para la elaboracin de productos alimenticios, farmacuticos, para el tratamiento de aguas residuales, en el medio ambiente con la fijacin del nitrgeno atmosfrico, en medicina para creacin de nuevos antibiticos, entre otras cosas.
Porcentaje de la biodiversidad en la Tierra Sabes pues que la ecologa microbiana va a estudiar las interacciones de los microorganismos con su entorno, los estudios han tomado su auge despus de la mitad del siglo pasado (XX), pero desde el origen de la vida en la Tierra hace 3,600 millones de aos en el En Arcaico, antes de la Era Paleozoica cuando aparecieron los primeros organismos procariotas; estas relaciones comenzaron a llevarse a cabo, pero no fue sino hasta que apareci el gnero Homo sapiens (humano) no se poda explicar cientficamente en ese entonces como es que se llevaban a cabo dichas relaciones con los organismos y el medio ambiente. Como se observa en la figura siguiente en el En Arcaico fue donde empez la vida, con los primeros microorganismos procariotas que eran bacterias termfilas puesto que haba grandes erupciones volcnicas que dieron origen a la formacin de los continentes.

Editar de la web http://histori ageologicad emexico.blo gspot.com/2 011/04/eras geologicas. html
Eras geolgicas El planeta Tierra en sus inicios no era como lo conocemos actualmente con 5 continentes (frica, Amrica, Asia, Europa, Oceana) rodeados de grandes masas de agua (mares); sino que era solo una gran masa de tierra llamada Pangea, la cual se estableci durante la Era Paleozoica y con el paso de los aos evoluciono hasta lo que hoy conocemos. As como se fueron formando los continentes fue apareciendo la vida. Cuesta trabajo entender el pasado evolutivo de la vida en la Tierra, ya que se requiere entender su naturaleza propia, los procesos que se han llevado a cabo y como es que evolucionaron dentro del ambiente utilizando tanto los componentes biticos como abiticos.
4.1.1.Nicho ecolgico desde el punto de vista bacteriano

La incgnita que se plantean los microbilogos respecto a las relaciones que existen entre las bacterias y su medio ambiente, es tratar de explicar por qu los microorganismos se encuentran en sitios especficos, con ciertos rasgos que los distinguen y en un cierto espacio temporal; por lo cual su tarea fundamental es la de evaluar la diversidad, abundancia y distribucin de los microorganismos dentro de ambientes como los ecosistemas, comunidades, poblaciones y de manera individual para poder entender el papel fundamental que desempean en la biosfera.

Editar de la web http://www.encuentos.com/educacionambiental-2/dia-internacional-de-ladiversidad-biologica-22-de-mayo/
Diversidad de microorganismos Un nicho ecolgico es bsicamente un hbitat de uno o varios microorganismos en el que influyen los factores biticos y abiticos. Estas relaciones que se forman pueden ser de manera positiva como la simbiosis que se define como la relacin que existe entre dos o ms microorganismos que comparten un ecosistema determinado, presenta variantes como: Parasitismo: una forma de simbiosis en la que un miembro (microorganismo) de la relacin resulta perjudicado, ya que es un organismo que obtiene sus nutrientes de otro organismo, que se denomina hospedador. Algunos patgenos que causan enfermedades presentan este tipo de relacin, entre ellas tenemos a la bacteria E. coli que causa infecciones intestinales si sobre pasa la forma normal de la flora bacteriana, la Chlamydia trachomatis que causa clamidiosis (provoca secrecin y escozor al orinar, genera esterilidad en el varn), Neisseria gonorrhoeae bacteria que causa la gonorrea, la causante de la sfilis Treponema pallidum.

Editar de la web http://ww w.urolog osdemex ico.com/t ransmisi on_sexu al.html y
Bacteria Chlamydia trachomatisizq. y cocos de Neisseria gonorrhoeae der.
Mutualismo: relacin simbitica en la que ambas especies resultan beneficiadas, como las que estn asociadas a la flora bacteriana del tracto digestivo y convierten las protenas que consumimos al ingerir leche en cido lctico Lactobacillu ssp, otra relacin es la que existe entre las bacterias fijadoras de nitrgeno (gneros Azotobacter, Nitrobacteres una bacteria gram negativa, Rhizobiumes de tipo gram negativa bacteria que origina los ndulos)y las leguminosas presentan ndulos donde se alojan dichas bacterias, existen otras bacterias en los tanques donde se almacena el petrleo crudo y la gasolina se acumula humedad la cual hace posible un hbitat ideal para ellas que van a oxidar los hidrocarburos en condiciones anxicas ya que consumen sulfuro (H2S) que es muy corrosivo y puede agujerar los tanques con el constante goteo de agua y acidificacin del combustible.
Lactobacillus sakeizq. yRhizobium bacteria fijadora de nitrgeno der. http://archive.microbelibrary.org/ASMOnly/Details.asp?ID=1471 y http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_24.asp?cuaderno= 24

Comensalismo: relacin simbitica donde una especie resulta beneficiada, mientras que la otra no sale ni beneficiada ni perjudicada. Son ejemplo las bacterias que habitan en el intestino animal, se desarrollan debido al consumo de los nutrientes que se librean despus del metabolismo del animal, ejemplos tpicos son Nitrosomonas (bacteria que se alimenta de compuestos inorgnicos, son auttrofas necesitan de oxgeno para vivir y de amoniaco como fuente de energa)yBacillus sp que se asocia con los hongos micorrzicos para obtener compuestos orgnicos que son secretados por las races de las plantas.
Bacteria Nitrosomona sp izq y Colonias de Bacilluscereus der. http://www.teamaquafix.com/ammoniainwastewater.aspx y http://www.health-healths.com/wp-content/uploads/2011/07/Background2.jpg
4.1.2.Concepto de especie
El trmino de especie de manera microbiolgico es muy ambiguo, porque no existe un concepto aceptado universalmente para los organismos procariotas; pero puede definirse como la coleccin de cepas que comparten un gran nmero de caractersticas importantes, pero difieren en una o ms propiedades significativas de otras colecciones de cepas. La especie es considerada como la unidad fundamental de la diversidad biolgica, tomando en cuenta datos fenotpicos, genotpicos y de filogenia. Las cepas (conjunto de microorganismos) presentan para clasificarlas en nica especie, una hibridacin de su ADN-ADNde un 70 %, y parecerse a la secuencia del gen 16S rARN en un 97 %. Basndose en estos criterio se han reconocido 7,00 especies de bacterias y arqueas. La siguiente tabla muestra un ejemplo de cmo es que se llega a definir al microorganismo fototrfico Allochromatium warmingii tomando en cuenta los rasgos relevantes para su clasificacin jerrquica (Madigan et al; 2009). El gnero Allochromatium normalmente se localiza en lugares anxicos iluminados de lagos, manantiales sulfurosos y otros hbitats acuticos donde se acumula sulfuro de hidrgeno (H2S) el cual reduce el bixido de carbono (CO2); la forma que presentan son ovaladas o como bacilos con flagelos y el azufre esta contenido dentro de las clulas.

Editar de Madigan et al; 2009
Bacterias rojas del azufre Taxonoma Nombre Dominio Bacteria Propiedades Clulas bacterianas; secuencias de RNA ribosmico tpicas de bacterias Mtodo de confirmacin Microscopa; anlisis de la secuencia de RNA ribosmico 16S; presencia de biomarcadores nicos, por ejemplo el peptidoglicano Anlisis de la secuencia del RNA ribosmico 16S Tincin de Gram, microscopia
Filum
Proteobacteria
Clase
Orden
Secuencias de RNA ribosmico tpicas de Proteobacterias Gammaproteobacteria Bacterias gram negativas; secuencias de ARN ribosmico tpicas de Gammaproteobacteria Chromatiales Bacterias fottrofas purpura Allochromatium Bacterias prpura del azufre con forma de bastn Clulas de 3,5-4,0 m X 5-11 m; almacenan azufre principalmente en los polos de la clula
Gnero
Pigmentos caractersticos bacterioclorofila a Microscopia
Especie
Warmingii
Medida de las clulas en el microscopio usando un micrmetro; determinando la posicin de los glbulos de S0 dentro de la clula

Editar de Madigan et al; 2009
Fotografa al microscopio ptico de clulas de la bacteria purpura del azufre Allochromatium warmingii El pigmento caracterstico de las plantas superiores encargada de realizar la fotosntesis en organismos fottrofos oxignicos es la molcula de clorofila a, a diferencia de las bacterias que presentan bacterioclorofila en organismos fottrofos anoxignicos. Editar de Madigan et al; 2009
Molculas de clorofila izq. y bacterioclorofila der. Para entender mejor el concepto de especie piensa en tu persona, t eres muy diferente a los dems ni siquiera te pareces a tus hermanos e inclusive aquellos que son gemelos tienen algn rasgo que los diferencia, entonces estars de acuerdo que la especie es en esencia especial y nica.
4.1.3. Concepto de poblacin

En microbiologa la poblacin se refiere al grupo de clulas microbianas de una misma especie (colonia o cepa) que conviven al mismo tiempo en un lugar especfico. Las

poblaciones presentan caractersticas diferentes a las que tienen los individuos que las componen. Comparten caracteres genticos iguales. Las colonias son la forma en la que se representa el crecimiento en un medio de cultivo de poblaciones que se han originado a partir de una clula que es macroscpicamente visible. Al conjunto de poblaciones bacterianas tambin se le denomina gremios. Por ejemplo las personas que forman parte de tu familia son un grupo de individuos que comparten caractersticas genticas que viven en cierto lugar, las cuales son muy diferentes con las otras familias que son sus vecinos y por lo tanto el conjunto total de diferentes familias forma entonces una poblacin.
4.1.4. Concepto de comunidad

En un hbitat microbiano raramente las poblaciones de clulas viven aisladas, las cuales se van a relacionar con otras poblaciones en conjuntos que se denominan comunidad. Las comunidades estn compuestas por todas las poblaciones de todas las especies diferentes que conviven juntas en un lugar determinado y por consiguiente tienen caracteres genotpicos distintos. Hablemos pues de ti que como individuo que perteneces a una familia, el conjunto de familias forma poblaciones y varias poblaciones van a formar una comunidad.
4.1.5. Concepto de ecosistema

Dentro de una comunidad microbiana la diversidad y abundancia de microorganismos est controlada por los recursos (nutrimentos) y por las condiciones que presentan como temperatura, pH, concentracin de oxgeno que existe en el medio. Las caractersticas que presentan los hbitats es muy diferente y pueden existir factores que favorezcan el crecimiento de un microorganismo en especfico, pero que a su vez es daino para otro. Bsicamente el ecosistema incluye a los organismos vivos y las condiciones fsicas y qumicas de su entorno. Tales comunidades microbianas van a interaccionar con macroorganismos y factores abiticos en donde el funcionamiento constituye el ecosistema. Continuemos hablando de ti que como individuo perteneces a una familia, el conjunto de familias forma poblaciones, varias poblaciones forman una comunidad y todas las comunidades forman el ecosistema. Estamos partiendo pues de lo particular a lo general de manera macroscpica porque tenemos entonces al organismo (especie nica), varios organismos de la misma especie forman poblaciones, muchas poblaciones forman comunidades y todas las comunidades van a comprender el ecosistema. Si hablsemos de manera microscpica de lo particular a la general a un organismo (especie) lo componen partculas, las cuales forman tomos,

estos constituyen molculas que forman organelos, varios organelos constituyen la clula, varias clulas forma tejidos, el conjunto de tejidos forma rganos y la unin de varios rganos sistemas que van a constituir a un individuo como tal. Editar del Solomon et al; 2008

Organizacin jerrquica de la vida Como se esquematiza en la figura de arriba el nivel de organizacin de la vida es como si estuviramos hablando de la taxonoma de un organismo que de lo simple va a constituir algo ms complejo. Existen tanto ecosistemas terrestres como acuticos, y estos a su vez se subdividen en naturales y artificiales. Los naturales son aquellos que se crean sin que el hombre intervenga por ejemplo los bosques, selvas, desiertos, tundra, praderas, mares y ocanos; y los artificiales son aquellos creados por la mano del hombre como los campos de cultivo, jardines, zoolgicos, acuarios, presas. En ambos casos se establecen condiciones ptimas para la formacin de micro-hbitats o micro-ambientes en donde los microorganismos intervienen para regular procesos, llevara a cabo actividades importantes para la vida diaria.
4.2. Sucesin ecolgica en comunidades bacterianas

La sucesin de las colonias bacterianas viene marcada por el crecimiento de las colonias, poblaciones o gremios. El proceso de desarrollo secuencial de una comunidad respecto al tiempo implica la sustitucin de especies de una etapa por diferentes especies en la etapa siguiente es a lo que se denomina sucesin de especies bacterianas donde influye el tiempo que puede ser desde segundos, minutos, horas hasta das; a diferencia de la sucesin que presentan los ecosistemas acuticos (mar, ro, lago) o terrestres (selva, bosque, desierto, pradera, tundra) en los que pueden pasar decenas, cientos o miles de aos para que se establezcan las comunidades. Editar del Prescott et al, 2000
Papel ecolgico de los microorganismos Entre los ecosistemas microbianos destacan aquellos que se forman tanto en el suelo, agua dulce como los lagos, charcos, ros y corrientes, agua salada como los mares; as como en los vegetales. Aunque tambin son importantes aquellos que se forman en el

humano y otros animales. Estos ecosistemas pueden variar respecto a la estructura fsica, la composicin de nutrientes y la temperatura que conjuntamente van a influir en la diversidad y abundancia de los microorganismos ah presentes. Suelo: comnmente denominamos tierra a la capa sobre la que nos paramos, pero ese trmino est mal dicho pues debe de llamarse suelo, se forma por la interaccin de la roca, topografa, el clima y los seres vivos. Los suelos pueden ser de tipo mineral y orgnico del cual el mineral es que ms abunda en ecosistemas terrestres, el cual est formado de minerales inorgnicos, materia orgnica, aire-agua y organismos vivos tanto microorganismos como macroorganismos.
En el suelo estn presentes partculas (limo, arena y arcilla) en las cuales se van adherir las bacterias formando microcolonias y estas se van asociar con la rizosfera y dichos microorganismos se pueden analizar mediante microscopia de fluorescencia. La actividad de los microorganismos en el suelo viene regulada por la cantidad de agua disponible y los nutrientes presentes como el carbono, el fosforo y el nitrgeno que forman parte de las molculas de la vida. Editar de Madigan et al; 2009
Hbitat microbiano del suelo Agua dulce: en el agua existen microorganismos productores y consumidores de oxgeno, los cuales llevan a cabo los procesos de fotosntesis y respiracin y son muy importantes en la naturaleza de los ciclos del oxgeno y del carbono. Los microorganismos que habitan en los lagos, ros y agua encharcada estn en forma suspendida y se denominan fottrofos oxignicos, conformados por cianobacterias y algas que reducen el CO2 a materia orgnica a partir de la luz solar. El oxgeno es hidrosoluble en los hbitats acuticos; se va degradando lentamente por los

microorganismos que habitan en la superficie y al disminuir se convierte en un ambiente anxico, entrando a escena los microorganismos quimioorgantrofos anaerobios y aquellos que fermentan y respiran anaerbicamente. Por ejemplo te habrs dado cuenta que en una pecera al contener mucha materia orgnica (alimento para peces), se va a degradar lentamente propiciando as el crecimiento de microorganismos que encuentran las condiciones ptimas y van a tapizar las paredes de la pecera hacindola que se torne de color verdosa, esto tambin ocurre en los ros y lagos limpios y cristalinos, que reciben descargas de agua y desechos despus de un tiempo las caractersticas son diferentes y presentan olor desagradable. Editar de http://todosloscaminos haciati.blogspot.com/2 010/11/mundo-vibriocholerae-javierflores.html y http://fundacionio.org/i mg/bacteriology/cont/v ibrio_cholerae.html La bacteria Vibrio cholerae habita en el agua
Plantas:estos organismos van a presentar caractersticas variadas durante su ciclo de vida que van a influir en la vida de los microorganismos, los vegetales son organismos fotosintticos que convierten el CO2a oxgeno. Los microorganismos que conviven en estos micro-hbitats estn muy expuestos a los materiales que la planta produce (exudados, savia), as como a la radiacin ultravioleta que les provoca alteraciones genticas.
Tenemos pues bacterias que van a estar en diferentes rganos de la planta como la raz (denominada rizosfera que es la regin que rodea la raz y el rizoplano que es la superficie real de la raz), se van a excretar azucares, aminocidos, hormonas y vitaminas; las bacterias y hongos forman microcolonias y se relacionan de manera simbitica con las bacterias para llevar a cabo la fijacin del nitrgeno. En la superficie de las hojas (filosfera) tambin se van a localizar bacterias encargadas de la fijacin del nitrgeno. Algunas bacterias proporcionan beneficios a la planta, pero existen otras que van a resultar malignas como el caso de los patgenos (fitopatgenos) que causan enfermedades a las plantas, entre los gneros ms comunes estn Pseudomonas, Xanthomonas, Xylella y Erwinia. Tambin existen bacterias que se alojan en los tallos, semillas, flores y frutos de la planta.

Una planta que crece en buenas condiciones no va a experimentar estrs a diferencia de aquellas que experimentan periodos de sequias, temperaturas elevadas, la limitacin de nutrientes, la alimentacin de insectos u otros factores que intervienen para aumentar su estrs y provocarle susceptibilidad a infecciones bacterianas. Editar de la web http://biologia.laguia2000.c om/monera/relaciones-delos-microorganismos-conotros-seres-vivossimbiosis-y-decomensalismo Bacterias en races de plantas para la fijacin de nitrgeno Agua salada:a diferencia del agua dulce, los mares (ocanos) presentan caractersticas diferentes que varan como la salinidad, temperatura media, profundidad y el estado nutricional. Se pueden encontrar dos tipos de microorganismos aquellos que se encuentran en la superficie del mar abierto y los de las grandes profundidades marinas.
Al igual que en el agua dulce, las zonas costeras estn en contacto con descargas de desechos y por lo tanto van a presentar grandes cantidades de nutrientes que son ptimos para el crecimiento de microorganismos fottrofos, y estos a su vez son de gran importancia en las cadenas trficas para las bacterias hetertrofas y animales acuticos (peces y crustceos). Prochlorococcus es un organismo fottrofo oxignico abunda en los mares tropicales y subtropicales. En los ocanos tropicales y subtropicales abundan las cianobacterias fottroficas Trichodesmiumcuyas clulas fijan nitrgeno y se observan en forma de penachos filamentosos y constituyen la biomasa de los ocanos como se observa en la figura siguiente el mar se torna verdoso por la presencia de esta bacteria http://archiv.ethlife.ethz. ch/images/trichodesmiu m-l.jpg y http://www.coas.oregon state.edu/index.cfm?fus eaction=content.display &pageID=589 Trichodesmiumbacteria que habita en los mares y fija nitrgeno El humano y los animales: en este tipo de micro-hbitats las bacterias encuentran

condiciones ptimas para desarrollarse, la forma de expresar la sintomatologa en el humano como en los animales en algunos casos es muy similar. En la mayora de los casos para evitar contraer alguna enfermedad bacteriana se recomienda vacunarse para prevenir, pero cuando la enfermedad ataca lo que se debe realizar es aplicar antibiticos para contrarrestar la enfermedad. La tabla que a continuacin se presenta, enuncia algunas bacterias importantes que atacan tanto a humanos como a los animales (Brooks et al; 2011): Nombre de la bacteria Bacillus anthracis Bordetella pertussis Brucella spp Chlamydia trachomatis Clostridium perfringens Clostridium tetani Clostridium botulinum Corynebacterium diphtheriae Coxiella burnetii Escherichia coli Legionella pneumophila Listeria monocytogenes Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium leprae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Salmonella sp Salmonella typhi, S. paratyphi Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Mycoplasma spp, Chlamydia spp. Streptococcus spp Streptococcus pyogenes Treponema pallidum Vibrio cholerae Yersiniaenterocolitica Yersinia pestis Enfermedad que causa Carbunco o ntrax Tos ferina Brucelosis Conjuntivitis Gangrena gaseosa Ttanos Botulismo Difteria Fiebre Q Diarrea Enfermedad del Legionario Encefalitis Tuberculosis Lepra Gonorrea Meningitis Salmonelosis Fiebre tifoidea Neumona Erisipela Escarlatina Sfilis Clera Gastroenteritis Peste
Algunas de las enfermedades bacterianas que se pueden prevenir mediante la aplicacin de vacunas son: difteria, ttanos, tos ferina, neumona, meningitis, otitis, septicemia, osteomielitis, faringitis, celulitis, epiglotitis, infecciones de la piel, odo, urinarias, entre otras.

4.2.1. Fases
En ecologa la sucesin implica la transformacin de un ecosistema desde su origen hasta su establecimiento, la cual no se podra llevar sino es mediante una serie de fases intermedias. La sucesin entonces se suele describircomo los cambios en la composicin de especies en un cierto tiempo. Se entiende por ejemplo cmo es que un campo con el paso del tiempo se convierte en un hermoso bosque. Existen dos tipos de sucesin: Primaria que se va a establecer en una zona que no presenta algn tipo de comunidad por ejemplo la que ocurre en las dunas, las nuevas islas (coralinas, deltas), es una zona virgen por ejemplo es lo que sucedi cuando aparecieron las primeras especies en el planeta Tierra a las cuales se les denomina pioneras o colonizadoras por ser las primeras en establecerse.
Sucesin ecolgica primaria establecimiento de un bosque
http://galeria s.educ.ar/m ain.php?g2_ view=keyalb um.Keywor dAlbum&g2 _keyword=e squema&g2 _itemId=952 8
Secundaria que es aquella que se establece sobre una zona donde anteriormente ya haba vida, es lo que ocurre despus de un incendio, inundacin, derrumbe, deslave, plagas, enfermedades, tala de bosques, establecimiento de cultivos, lo que lleva a la perdida de la mayora de las especies que habitaban anteriormente.

http://cbta85salvemoselplanet a.blogspot.com/2009/06/suce sion-ecologica.html
Sucesin ecolgica secundaria despus de un incendio Sabes pues como se lleva a cabo la sucesin de manera macroscpica en los ecosistemas, pero en el micro-hbitat de las bacterias como se lleva a cabo este proceso. a. Primero debe de establecerse la colonizacin de una bacteria en un lugar adecuado del ambiente (agua, suelo, plantas, animales y el humano).
b. Despus se lleva a cabo el crecimiento de la o las bacterias como se sabe este presenta varias etapas o de adaptacin o lag, exponencial, estacionaria y de declinacin o muerte, van a formar micro-colonias individuales que se van a unir unas con otras formando una red en donde el poder activo ya sea benfico o patgeno de la bacteria an no tiene la capacidad para desarrollarse totalmente y c. Finalmente la sucesin bacteriana que se caracteriza por un aumento en la complejidad de la composicin microbiana la cual va a tomar mayor fuerza respecto a su poder patgeno o en beneficio en algn proceso. En una infeccin estomacal causada por la ingesta de alimentos contaminados con la bacteria E. colia pesar de que forma parte de la flora normal del cuerpo humano, al consumir alimentos mal cocidos, leche y jugos sin pasteurizar se desencadena la colonizacin de la bacteria en el intestino y causa la diarrea. No se percata uno de la enfermedad hasta que se presentasintomatologa caracterstica y por consiguiente se tiene que suministrar un antibitico para evitar la proliferacin bacteriana y acabar con su poblacin; esto dura aprox. de 5 a 10 das. Otro ejemplo muy comn es la placa que se forma sobre los dientes llamada placa dental, consta de una masa de bacterias pudindose encontrar en 1mm de rea que pesa 1 mg unos 250 millones de bacterias y en la cavidad bucal existen unas 350 Clases ms de bacterias que pueden contribuir a la formacin de la placa; por eso es recomendable lavarse los dientes despus de cada alimento para evitar tener un exceso de material

nutritivo que es ideal para el crecimiento de bacterias. Si no se llevase la limpieza dental y bucal adecuadamente puede contraerse inflamacin de encas, periodontitis, caries. Por eso, si quieres tener una gran sonrisa lvate los dientes tres veces al da, o quieres verte como la imagen de abajo.
Importancia de la limpieza dental http://www.tenersalud.com/2010/07/30/la-placa-dental/ http://revista-tareaweb.blogspot.com/ http://ligasensalud.blogspot.com/2010/09/calculo-dental.html
Actividad 1. Mi vecino me vigila

En esta actividad comprenders y analizars como la ecologa estudia a los microorganismos en forma de conjuntos e individualmente. Destaca ejemplos cuando las bacterias estn en grupos haciendo nfasis en cmo se les denomina a cada conjunto. Explica cmo es ms fcil estudiar a las bacterias de forma grupal o individual y porque. Realiza lo siguiente: 1. En un documento de Power Point elabora una presentacin de 10 diapositivas mximo siguiendo las indicaciones anteriores. Eres libre de profundizar tanto como deseas. 2. Apoya con imgenes el trabajo de informacin que realizaste. 3.- S cuidadoso con la ortografa 4.- Guarda tu documento con la nomenclaturaMTM_U4_A1_XXYZ y envalo a tu facilitador (a) mediante la seccin de tareas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, el facilitador puede detectar esta situacin sin dificultad, tu formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, para que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.

Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu facilitador (a) puede detectar esta situacin sin dificultad; tu formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
4.2.2. Competencia y evolucin

En la vida cotidiana entre el hombre siempre ha existido competencia ya sea por trabajo, dinero, quien viste mejor, quien trae el mejor auto, el o la mejor pareja y con los animales y plantas es casi parecido ya que existe competencia por luz, nutrientes, para aparearse, quien es el que domina ms. Entonces te imaginaras cmo ser la competencia entre los microorganismos, ellos han tenido que desarrollar estrategias de adaptacin que les permiten mejorar las oportunidades de sobrevivencia y su reproduccin, as como sus caractersticas genticas han ido cambiando de generacin en generacin, lo que les ha permitido presentar diferencias entre las poblaciones de bacterias y de esta manera poder explicar su origen y antepasado. Entonces, al ser organismos microscpicos tienen que desarrollar estrategias que les permitan prevalecer en el medio ambiente. Hay bacterias que compiten por un mismo sustrato, cantidad de luz, temperatura, humedad, pH, nutrientes (alimento), oxigeno, nitrgeno, azufre. Otros factores que influyen para que un microorganismos prevalezca es la dominancia que presenta respecto a otras especies, que tan longevo es (viejo), las interacciones que presenta con el medio que le rodea, entre ms adaptado este ms ventajas tendr para seguir con vida.
http://graficas .explora.cl/otr os/Xsemana/ yogur.html http://vancom icinaala.blogs pot.com/
Competencia entre bacterias Por ejemplo la bacteria Vibrio cholerae compite con Escherichia coli, ambas son bacilos gram negativos E. coli forman parte de la flora normal y habita en el intestino del ser humano y de los animales, mientras que V. choleraese encuentra en aguas marinas y superficiales.

E. colies una bacteria aerobia o anaerobia facultativa, puede ser mvil por tener flagelos peritricos o no ser mvil, fermenta glucosa en lugar de oxidarla, produce un gas, catalasa positiva, oxidasa negativa, reduce nitrato a nitritos, positiva en indol, lisina descarboxilasa y fermentacin de manitol. Produce diarrea frecuentemente en el mundo, por la ingesta de alimentos contaminados. Vibrio cholerae es una bacteria aerobia, presenta un flagelo polar, son oxidasa positiva, crecen a pH 8.5 a 9.5, fermenta sacarosa y manosa, produce la enterotoxina termolbil que causa el clera, una diarrea liquida abundante que rpidamente puede desencadenar deshidratacin y la muerte del paciente al ingerir agua contaminada. De la misma especie se derivan los siguientes serogrupos que se mencionan a continuacin: Vibrio cholerae serogrupos O1 y O139: causa clera epidmico y pandmico. Vibrio cholerae serogrupos no O1 y no O139: causa diarrea coleriforme, diarrea leve y raras veces infecciones extraintestinales.
Por lo tanto en el intestino donde al ingerir por descuido alimentos y agua contaminados con bacterias Vibrio cholerae y Escherichia coli provoca una competencia de ambas por sustrato (intestino), nutrientes, luz, humedad, temperatura; y lleva consiguientemente a desencadenar una lucha campal entre dichas bacterias, pero oh! sorpresa la que resiste mejor y como quien dice resulta vencedora es Vibrio choleraesobre E. coli.
http://microgaia.blogspot.co m/2010/12/vibrio-choleraeel-rambo-de-las.html
Se observa aVibrio choleraecombatiendo contraE. coli El que existan por ejemplo diferentes serogrupos de V. cholerae significa que se ha ido adaptando lentamente a los diferentes factores que la interfieren en su crecimiento desde que se origin, estos procesos han sido clave para determinar su historia de vida (como han ido evolucionando paulatinamente) y se han reforzado para responder a sus necesidades.

4.2.3. Comunidad clmax

El conjunto de poblaciones conforma pues una comunidad, la cual alcanza su equilibrio (clmax) al finalizar el proceso de sucesin bacteriana. Tambin se considera lmite de madurez de un ecosistema donde no hay escases de nutrientes, temperatura, humedad, pH, es decir se concentran las condiciones ptimas para que el crecimiento se desarrolle adecuadamente. En un ecosistema terrestre por ejemplo conforme la biomasa aumenta, la respiracin por igual y llega un momento en el que se equilibran (igualan) la respiracin y la produccin ocasionando que se detenga la sucesin; pero difcilmente se llega al clmax ya que intervienen procesos de retroceso que frenan el equilibrio ecolgico como los incendios, un huracn, derrumbe, deslave, los cambios climticos, las inundaciones, sequias, las glaciaciones, la formacin o aparicin de nuevos volcanes y la deriva de las placas tectnicas.
4.3.Biofilms
Las superficies son hbitats microbianos importantes por dos razones: 1.- los nutrientes se adsorben a las superficies por lo que a menudo contienen ms recursos que los que estn disponibles para las clulas del plancton (clulas que llevan una existencia flotante). 2.- Las superficies son zonas a las que se adhieren las clulas microbianas. La adhesin es una manera de permanecer en un hbitat favorable y no ser arrastradas por el agua. Por lo tanto, en las superficies se suele detectar un nmero elevado de microorganismos y mucha actividad (Madigan et al., 2009). Las diferencias en los niveles de nutrientes se acentan a medida que se pasa de la columna de agua a las superficies donde los nutrientes y microorganismos tienden a acumularse. A medida que disminuyen los niveles de nutrientes, aumenta la ventaja de estar asociado a superficies. La importancia de las superficies para la colonizacin microbiana fue descubierta por muchos microbilogos del pasado, entre ellos N. L. Shngen (principios de 1900). Y C. E. Zobell (1940-1950). Zobell estableci el papel de la adhesin macromolecular dependiendo de la concentracin de los nutrientes, y observ tambin que la adhesin bacteriana es un proceso de dos pasos, que comprenden la adhesin reversible e irreversible (Prescott et al., 2000). A medida que las clulas bacterianas que crecen sobre superficies, tienden a formar biopelculas: agrupamiento de clulas bacterianas adheridas a una superficie y encerradas en una matriz adhesiva excretada por las clulas. La matriz consiste en una mezcla de polisacridos, pero pueden contener protenas e incluso cidos nucleicos. Las

biopelculas atrapan nutrientes para el crecimiento microbiano y ayudan a evitar que se desprendan las clulas superficiales expuestas a corrientes de lquidos (Madigan et al., 2009). Las biopelculas contienen regularmente varias capas porosas y las clulas de cada capa se pueden se pueden examinar mediante microscopia lser confocal de barrido. Dentro de estas biopelculas podemos encontrar desde una o dos especies hasta incluso una gran diversidad de bacterias. Un ejemplo de esta lo podemos ver en la superficie de los dientes donde podemos encontrar cientos de filotipos diferentes. Con esto podemos decir que las biopelculas son comunidades microbianas funcionales y que no solo se encargar de atrapar nutrientes en una matriz adhesiva. Madigan et al., 2009 Ejemplos de biopelculas microbianas.
Ejemplos de Biofilms En la figura de arriba se describe: a. Seccin transversal de una biopelcula experimental de clulas de Pseudomonas aeruginosa. La capa amarilla (de unos 15 m de profundidad) contiene clulas y se tie mediante una reaccin que revela la actividad de la fosfatasa alcalina. b. Microscopa lser confocal de barrido de una biopelcula natural (vista superior) en una superficie de una hoja. El color de las clulas indica su profundidad en la biopelcula: rojo para las clulas sobre la superficie; verde, a 9 m de profundidad; azul, a 18 m de profundidad. c. Una biopelcula de procariotas oxidadores de hierro adheridas a rocas ricas en hierro de Ro Tinto (Espaa). Cuando el agua rica en Fe2+ pasa sobre y a travs de la biopelcula, los microorganismos oxidadores de hierro lo oxidan.
4.3.1. Propiedades
Como sabemos para poder identificar algo es necesario reconocer las caractersticas o propiedades que este presenta y las biopelculas no son la excepcin por lo que a continuacin se mencionarn y describirn las caractersticas fsicas y qumicas de estas, dentro de las Propiedades Fsicasdestacan: * Color y consistencia

* Biomasa * Densidad * Concentracin de oxgeno disuelto * Erosin * Espesor Al utilizar como ejemplo un aparato de biodiscos utilizado en el tratamiento de efluentes domsticos en sus etapas iniciales el color de la biopelcula es generalmente gris o gris amarronado y filamentoso, mientrasque en etapas posteriores es amarronado o rojizo amarronado, gelatinoso y menos filamentoso. Cuando la biomasa presenta un color grisindica la biomasa que preferentemente va a remover materia orgnicacarbonosa (con altas cantidades de carbono que los microorganismos utilizan para su alimentacin), mientras que la que presenta una coloracin amarronada rojiza es caracterstica de la predominancia demicroorganismos nitrificantes (son los microorganismos que se encargan de oxidar el amonio). La concentracin de oxgeno disuelto en el afluente (lo que concurre en abundancia) tiene una influencia directa en la densidadde la biopelcula al igual que la fracciones de exopolmeros (polisacridos), de materia orgnica, de protozoos, degusanos e insectos. La erosin se define como el proceso de remocin de partculas dentro o fuera de la biopelcula, en el biodisco quees altamente dependiente de las condiciones dinmicas del sistema da origen al bioslido sedimentado (remocin masiva de porciones de biopelcula que caen por gravedaddebido a la fuerza de corte). El espesor se puede medir esto es: el tamao de los flculos o el espesor de la pelcula en estosprocesos se miden en milmetros, mientras que los microorganismos individuales se miden enmicrones.Cuando el espesor de la biopelcula se incrementa, el oxgeno disuelto no es capaz de difundirsehasta el fondo del mismo, por lo tanto los microorganismos de la capa inferior, unidas al soporte, podran cambiar alternativamenteadaptndose a las nuevas condiciones ambientales (anaerobiosis, sin oxgeno). Por lo que el espesor de la biopelcula es inversamente proporcional a la velocidad de flujo del lquido, lo que va a disminuir exponencialmente con los aumentos de la velocidad de rotacin de los discos. Como todo tiene un principio y un final las biopelculas no son la excepcin por lo que el crecimiento de la biopelcula continua hasta que llega un momento en que no reciben ms oxgeno las capas profundas lo que va a producir el desprendimiento de la capa bacteriana. Este desprendimiento, se ve influenciado por diferentes factores como: la velocidad de giro de losdiscos y el dimetro de los mismos, entre otros. Despus de dicho acontecimiento comenzar la formacin deuna nueva pelcula, y as indefinidamente.

Ahora bien una vez descritas las propiedades fsicas ahora describiremos las propiedades qumicas dentro de estas destacan las siguientes: La biopelcula es generalmente viscosa e hidroflica (a fin al agua) debido a lapresencia de componentes polimricos extracelulares que estn constituidos por polisacridos con residuos hidroflicos y otros polmeros intracelulares. Por lo quela adsorcin bacteriana al soporte ocurre de la siguiente manera: Al inicio la clula bacteriana se mantiene unida a la superficie gracias a enlaces dbilesintermoleculares, que resultan de las fuerzas entre la clula y el soporte, incluyendo: fuerzas deLondon Van der Waals, interacciones electrostticas, interacciones estricas y puentes polimricos.
4.3.2. Desarrollo
La formacin de las biopelculas comienza con la adhesin de una clula a una superficie es como una seal que desencadena la expresin de los genes especficos para la biopelcula. Los genes van a codificar protenas que sintetizan las molculas de sealizacin intercelulares e inician la formacin de la matriz. Esto es el comienzo de una formacin de la pelcula por lo que la primer clula pierde su flagelo y se inmoviliza, aunque se desconoce el mecanismo, pero de alguna forma por decirlo as las bacterias sienten una superficie adecuada y realizan lo necesario para comenzar el crecimiento de la biopelcula. Madigan et al., 2009
Formacin de biopelculas.
La formacin de biopelculas comienza con la adhesin de unas pocas clulas que luego crecen y se comunican con otras clulas. Se forma la matriz y se extiende a medida que crece la biopelcula, como se esquematiza en la imagen de arriba Se est investigando activamente cmo se percibe la superficie, pero el cambio real del crecimiento de biopelcula lo desencadena la sntesis de guanosina-monofosfato dimrica cclico (c-di-GMP), un derivado del nucletido guanosina-trisfofato. El c-di-GMP lo sintetizan una serie de protenas relacionadas con las protenas perceptoras de membrana que, de algn modo, detectan la posibilidad de crecer adheridas a la superficie. Se piensa que el c-di-GMP funciona desencadenando la expresin de los genes especficos de la biopelcula y activando las enzimas celulares que sintetizan el material de la matriz (Madigan et al., 2009).

La comunicacin intercelular es decisiva para el desarrollo y mantenimiento de una biopelcula. En Pseudomonas aeruginosa, un notable formador de biopelculas, las molculas sealizadoras intercelulares principales son compuestos llamados de homoserina-lactonas acidas. A medida que se van acumulando, transmiten a otras clulas de P. aeruginosa adyacentes (un mecanismo llamado percepcin qurum) que la poblacin de esta especie est aumentando y entonces se desarrolla la biopelcula. Con el tiempo, se forman grandes hongos de P. aeruginosa que miden unos 100 m de alto y que contienen miles de millones de clulas atrapadas en una matriz de polisacridos pegajosa (op cit.). Madigan et al., 2009
En la figura de la izquierda se puede observar botones pequeas clulas de P. aeruginosa adheridos a una superficie en las primeras etapas de la formacin de la biopelcula. En la figura de al lado un hongo de biopelculas maduro. El hongo ms grande mide unos 120 m de altura. Pueden aparecer biopelculas de P. aeruginosa en la fibrosis qustica. Esta enfermedad gentica est relacionada a menudo con la formacin de una biopelcula tenaz de P. aeruginosa en los pulmones, que produce sntomas de neumona. Adems de la sealizacin intra-especie, en las biopelculas probablemente tambin se produzca la sealizacin inter-especies para coordinar las etapas necesarias para formar y mantener la estructura (op cit.). La mayor parte del tracto digestivo humano est colonizado por grupos especficos de microorganismos que dan lugar a biofilms naturales. Estos biofilms naturales protegen frente a especies patgenas (Prescottet al., 2000). La insercin de dispositivos protsicos (procedimiento mdico utilizados para diagnsticos tales como: neuropata hereditaria motora y sensorial 1-3, Sndrome de Mobius y atrofia hemifacial) en el cuerpo humano a menudo lleva a la formacin de biofilms sobre la superficie del dispositivo. Fundamentalmente, los grmenes implicados son Staphylococcus epidermis, otros estafilococos coagulasa negativos y bacterias gramnegativas. Estos habitantes de la piel poseen la capacidad de adherirse tenazmente a las superficies de los dispositivos

protsicos inanimados. En el interior de los biofilms, las bacterias estn protegidas de los mecanismos normales de defensa del cuerpo y tambin de los antibiticos; por lo tanto, el biofilm es una fuente de infeccin de otras partes del cuerpo cuando las bacterias se desprenden por la descamacin del biofilm. Algunos ejemplos de la importancia mdica de los biofilms son: Las muertes que siguen a las infecciones masivas de pacientes receptores de corazones artificiales Jarvik 7. Pacientes con fibrosis qustica que albergan gran cantidad de P. aeruginosa productoras de grandes cantidades de polmeros de alginato, que inhiben la difusin de antibiticos. Los dientes, donde los biofilms forman la placa dental que lleva a la caries. Los lentes de contacto, donde las bacterias pueden provocar intensa irritacin, inflamacin e infeccin ocular. Los sistemas de aire acondicionado y otros sistemas de retencin de agua, donde bacterias como especies de Legionella( bacteria gramnegativa con forma de bacilo que vive en aguas estancadas y que soporta un amplio rango de temperatura) pueden quedar protegidas por los biofilms de los efectos de la cloracin.
4.3.3. Dispersin
Durante su fase de dispersin las biopelculas liberan constantemente clulas planctnicas, las cuales pueden causar infeccin porque estn a merced de agentes antibacterianos y del sistema inmunitario, el cual genera una respuesta inflamatoria que produce un exudado altamente nutritivo, que se percola a travs de la biopelcula y proporciona nutrientes a la microbiota residente para abastecer las necesidades de sta, lo que ayuda a la seguridad, sustentabilidad y estabilidad de la comunidad microbiana; de esta forma, el sacrificio de pocas bacterias promueve la supervivencia de la comunidad (Castrilln et al., 2011). Actividad 2. En la oscuridad de la tubera. En esta actividad podrs reforzar tus conocimientos sobre los biolfilms compartiendo y discutiendo tus ideas sobre este tema en un foro titulado En la oscuridad de la tubera en donde debers discutir sobre el peligro de los casos de biofilm de Pseudomonas aeruginosa en tuberas de los lavabos dentro de quirfanos y proponer soluciones al respecto, considerando el comportamiento y etapas de los biofilms.
Para participar en el foro: 1. Dirgete al aula.

2. Ingresa al foro con el nombre de esta actividad y realiza lo que en l se te indica. *Es recomendable que previo a tu ingreso al foro consultes la Rbrica de participacin en foros que se encuentra en la pestaa Material de apoyo. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que el facilitador(a) puede detectar esta situacin sin dificultad. Ten presente que tu formacin exige que desde esta etapa todo producto o tarea que reportes sea de tu iniciativa y creatividad, con la intensin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
4.3.4. Quorum-sensing
Las bacterias liberan seales qumicas que difunden entre las bacterias cercanas. Conforme aumenta la poblacin de bacterias, aumenta la concentracin de la seal qumica. A travs del proceso conocido como qurum sensing, las bacterias detectan cundo se alcanza una determinada concentracin crtica de una molcula seal. La bacteria responde activando un proceso biolgico especfico y forma una biopelcula. Los bilogos han descubierto que la sealizacin defectuosa puede causar o contribuir al desarrollo de diversas enfermedades, incluso el cncer y la diabetes (Solomon et al., 2008). Actividad 3. La sucesin bacteriana En esta actividad reforzaras lo aprendido acerca del qurum-sensing, para lo cual se te pide elaborar una grfica donde se ubique las fases de la sucesin microbiana y la importancia del qurum-sensing. 1. Disea una grfica en formato Excel donde identifiques las fases de la sucesin microbiana 2. En un apartado realiza la importancia del qurum-sensing dentro de la biotecnologa. 3. Apoya tu trabajo con imgenes y se cuidadoso con la ortografa. 4. Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U4_A3_XXYZ y envalo a tu Facilitador(a) mediante la Base de datos. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu Facilitador(a) puede detectar esta situacin sin dificultad; tu formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte

directamente en tu prctica profesional.
4.4. Biorremediacin
El potencial biogeoqumico de los microorganismos parece ilimitado y a menudo se ha dicho que son los mejores qumicos de la tierra. Y como tales se han utilizado para extraer metales valiosos de menas con poco mineral (lixiviado microbiano) y como agentes para adecentar el ambiente. El trmino biorremediacin se refiere a la eliminacin de aceites, sustancias qumicas txicas u otros contaminantes de un ambiente mediante microorganismos. La biorremediacin es una manera econmica de limpiar los contaminantes y, en algunos casos, es la nica manera prctica de hacerlo (Madigan et al., 2009).
4.4.1. Impacto
Para que la biorremediacin se considere una tecnologa aplicable para eliminar un contaminante especfico, es necesario demostrar que dicha sustancia o una mezcla qumica que la contenga, es biodegradable y que el proceso de biorremediacin no tendr efectos colaterales adversos sobre el ecosistema. Los productos finales de la biorremediacin eficaz, como el agua y el dixido de carbono, son inocuos y su presencia no presenta ningn peligro para el ambiente ni para los organismos vivos (Atlas y Bartha, 2006). La biorremediacin es barata en comparacin con los mtodos fsicos para descontaminar el medio ambiente, que pueden resultar extraordinariamente caros. Mientras que las tecnologas convencionales exigen el traslado de grandes cantidades de desechos txicos o suelo contaminado, una caracterstica de la biorremediacin es que puede efectuarse in situ y solo requiere un equipamiento sencillo. La biorremediacin, empero, no es la solucin para todos los problemas de contaminacin ambiental. Como otras tecnologas est limitada por las condiciones locales y por el tiempo disponible para llevar a cabo el tratamiento, y la gama de materiales que puede tratar es restringida. Tiene un gran potencial destructor de contaminantes, especialmente en los casos de suelo contaminado por combustibles o creosota (biocida fabricado a base del fraccionamiento de alquitranes para la proteccin de la madera).
4.4.2. Principales tcnicas

La biodegradacin de contaminantes en el ambiente es un proceso complejo cuyos aspectos cuantitativos (los que se pueden contar, medir) y cualitativos (los que se observan como el color, sabor entre otros) dependen de la naturaleza y cantidad del

contaminante, de las condiciones locales y estacionales, y de la composicin de la comunidad microbiana autctona (Atlas y Bartha, 2006). Las dos estrategias generales de la biorremediacin son la modificacin ambiental, como pueden ser la aplicacin de nutrientes y la aireacin, y la siembra de degradadores de xenobiticos apropiados. Para demostrar la utilidad potencial de una tcnica de biorremediacin es importante documentar la biodegradacin aumentada del contaminante en condiciones controladas. Dado que esto suele ser imposible in situ, se requieren ensayos de laboratorio. Las variables que se miden habitualmente en los ensayos de biorremediacin de laboratorio incluyen el recuento de poblaciones, la medida de respiracin microbiana (consumo de oxgeno o produccin de dixido de carbono) y la determinacin de la velocidad de degradacin (desaparicin de contaminantes individuales o totales) en comparacin con los controles que no se utiliza la biorremediacin. Las metodologas empleadas en estas medidas son fundamentales. Sin duda, la medida ms directa de la eficacia de biorremediacin es el registro de la desaparicin del contaminante. Los tratamientos de biorremediacin no deben tener efectos ecolgicos adversos. Por ejemplo si utilizamos algn abono o un aditivo qumico es necesario determinar la toxicidad inmediata por pruebas toxicolgicas estandarizadas, as como la toxicidad crnica y los efectos subletales.
4.5.Biofouling
El biofouling tambin conocido como bioincrustaciones se origina en las superficies metlicas como en las embarcaciones (pero tambin incluyen tomas de agua, anclas, entre otros)que se encuentran en contacto con aguas industriales o naturales, como una acumulacin no uniforme que resulta de los procesos fisicoqumicos (pH, salinidad, entre otros) y biolgicos (sustancias metablicas de los microorganismos) causantes de la corrosin microbiolgica. De manera ms detallada el origen de estas bioincrustaciones comienza con un proceso de adhesin de una gran variedad de micro y macroorganismos, los cuales buscan generar un ambiente adecuado para su proliferacin. Dentro de los organismos que podemos encontrar en las bioincrustaciones tenemos a moluscos, crustceos, algas, diatomeas y, en menor proporcin, a bacterias resistentes que hacen parte de la vida marina tpica de las aguas tropicales.

http://www.google.com.mx/imgres?imgurl=http://w oodshole.er.usgs.gov/operations/stg/Gear/biofouli ng.JPG&imgrefurl=http://woodshole.er.usgs.gov/o perations/stg/Gear/tripod.htm&usg=__qxdxnoX9g u0mg-SrGivCvEqSxs=&h=1536&w=2048&sz=965&hl=es& start=1&zoom=1&tbnid=9xY4PbnmiiH97M:&tbnh= 113&tbnw=150&ei=6ebfTubLNMqDsgKY49XmBg &prev=/search%3Fq%3Dbiofouling%26um%3D1 %26hl%3Des%26sa%3DN%26gbv%3D2%26tbm %3Disch%26prmd%3Divnsb&um=1&itbs=1
Ejemplo de biofouling en un tripoide.
4.5.1. Impacto
Las bioincrustaciones pueden alcanzar proporciones de hasta 150 Kg por metro cuadrado, lo que obliga a los buques, embarcaciones e incluso submarinos, entre otros a tener un mayor consumo de combustible, debido al incremento de la resistencia de la embarcacin al agua. Aunado a esto se presenta un aumento de la turbulencia de las embarcaciones lo que hace que se alteren las propiedades de reflexin del sonido, comprometiendo las operaciones basadas en el sonar. Otro riesgo que existe es de los buques, yates y maquinaria mantenida en puertos por largos perodos, que posteriormente son transportados a nuevas sitios sin haber sido limpiados previamente lo que origina un vector de transferencia de especies, lo que hace que las especies se vuelvan exticas y por lo tanto invasoras, a su vez estas especies pueden tambin ir acompaados de especies comensales, parasitas o patgenas. Algunos ejemplos son los siguientes: Las biopelculas desarrolladas por bacterias, cianobacterias y diatomeas Filamentos de alga verde (a menudo Enteromorphaspp.) y poblaciones de alga roja y marrn Organismos ssiles (organismos que no son capaces de moverse y permanecen adheridos), incluyendo esponjas, hidroides, corales, anmonas de mar, gusanos de tubo, percebes, moluscos bivalvos, briozoos y cordatos (todos los cuales se adhieren al sustrato adecuado y se propagan por desoves, con variaciones en la duracin de la vida larvaria). Organismos bentnicos mviles y epibentnicos, incluyendo anlidos poliquetos errantes, esqueletos de camarones, anfpodos, ispodos, cangrejos, nudibranquios, whelks (caracoles depredadores), crinoideos y peces territoriales (esp. Gobiidae y formas similares). Este grupo evita la remocin a travs cualquiera de las siguientes formas: - adherirse y agarrarse a otras especies incrustantes o a las partes del casco que pueden servirle de refugio

- acomodarse en espacios muy pequeos entre especies incrustadasestablecidas o muertas - refugiarse en aberturas del casco y de tuberas (incluye peces pequeos). http://www.google.com.mx/imgre s?imgurl=http://www.drillingcontr actor.org/dcpi/2009/julyaug/ahead/biofouling4.jpg&imgr efurl=http://www.drillingcontracto r.org/biofouling-is-tip-of-greeniceberg-1995&usg=__weFjB_fukw8JGPX_BRIogQFlik= &h=534&w=550&sz=64&hl=es& start=4&zoom=1&tbnid=jhFECs QThRKFM:&tbnh=129&tbnw=133&ei= 6ebfTubLNMqDsgKY49XmBg&p rev=/search%3Fq%3Dbiofouling %26um%3D1%26hl%3Des%26 sa%3DN%26gbv%3D2%26tbm %3Disch%26prmd%3Divnsb&u m=1&itbs=1
Ejemplo del impacto del biofouling en una embarcacin
4.5.2. Tcnicas anti-fouling

Debido a esta problemtica varias asociaciones han realizado un programa anti-fouling que se ha emprendido en los recientes aos por medio de grandes investigaciones para la bsqueda dealternativas sostenibles a las actuales estrategias de anti-fouling ms txicas. Estas estrategias incluyen, control biolgico (usando pastoreadores naturales); nuevos materiales tales comorevestimientos no-txicos de anti-fouling; mtodos elctricos (generando biocidas (CI-) o cambios depH), nuevas tcnicas de manejo de moluscos y tcnicas de inmersin. Existen tres principios fundamentales para el anti-fouling: Combatir asentamiento inicial, repeler o matar. Prevenir el desarrollo de fouling, inhibidores de crecimiento y Remover el biofouling, limpiar, reducir las fuerzas de adhesin o superficies liberadoras de fouling

http://www.crabp roject.com/client /files/CRAB_Bes t_Practice_Guid elinesSpanish.pdf Anti-fouling. Izquierda una larva de cirrpedo, en el centro uncirrpedo inmaduro y a la derecha un grupo de cirrpedos maduros.

Las tecnologas y las estrategias para combatir biofouling en superficies sumergidas http://www.crabproject.com/client/files/CRAB_Best_Practice_Guidelines-Spanish.pdf

Evidencia de aprendizaje. La comunicacin intercelular En esta actividad podrs integrar lo aprendido a lo largo de esta unidad con respecto a los biofilms o biopeliculas. Debers elaborar un ensayo sobre la comunicacin bacteriana dentro de un Biofilm en alguna mucosa humana durante algn proceso infeccioso. Realizaras un ensayo de cmo es que se da la comunicacin bacteriana dentro del biofilm tanto para su desarrollo como para preservacin. Realiza lo siguiente: 1.- En un documento de Word elabora un ensayo de al menos una cuartilla donde expongas la importancia de la comunicacin entre bacterias. 2.- Haz nfasis en como se lleva a cabo esta comunicacin en alguna mucosa humana durante el proceso de infeccin. 3.- S cuidadoso con la ortografa 4.- Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U4_EA_XXYZ y envalo a tu facilitador (a) mediante la seccin de tareas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu facilitador (a) puede detectar esta situacin sin dificultad, tu formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional. Nota 2: No olvides revisar/consultar la Escala de evaluacin para que puedas guiarte correctamente en el diseo de estructura de tu ensayo y en el proceso de solucin o respuesta de tu Evidencia de Aprendizaje (EA). Al finalizar tu evidencia de aprendizaje, es importante que lleves a cabo tu ejercicio de autorreflexin, para ello, ingresa al Foro de Preguntas de Autorreflexin y consulta las preguntas que tu Facilitador(a) publique ah para esta unidad, a partir de ellas, realiza tu ejercicio en un documento de texto y envalo mediante la herramienta Autorreflexiones.
O.A. En esta actividad pondrs a prueba tus conocimientos adquiridos durante la unidad, mediante un crucigrama acerca de los principales conceptos involucrados en ecologa microbiana.

1. Realiza un crucigrama con ayuda de los temas vistos en clase, o bien puedes apoyarte de literatura externa 2. Se cuidadoso con la ortografa 3. Recuerda que para realizar un crucigrama es necesario: a. Colocar un prrafo con la idea principal y la respuesta ir en el crucigrama ambas deben ser claras y concisas. 4. Guarda tu documento con la nomenclatura MTM_U4_OAU_XXYZ y envalo a tu facilitador mediante la seccin de tareas. Nota: Te exhortamos atentamente a abstenerte de cualquier accin de plagio o copia de contenidos, ya que tu facilitador puede detectar esta situacin sin dificultad, tu formacin exige que todo producto o tarea que reportes sea totalmente original y propio de tu iniciativa y creatividad, con el fin de que en lo sucesivo esta actitud se proyecte directamente en tu prctica profesional.
Cierre de Unidad
Como te habrs dado cuenta los microorganismos juegan un papel ecolgico muy importante dentro de los diferentes hbitats y esto te podr dar una idea de cmo es que se pueden comportar si se presenta alguna problemtica. A su vez tu tendrs la capacidad de poderlos resolver y sobre todo poder controlar cuando estos se vuelvan una plaga, siempre y cuando utilices criterios ecolgicos cuidando el ambiente.
Para saber ms
Para entender mejor el tema del origen de la vida en la Tierra ver el siguiente video http://www.youtube.com/watch?v=wIZCM7tqwwU Hemos estudiado todo lo relacionado con los microorganismos en especial las bacterias, pero existen otros microorganismos como los virus que no se consideran dentro de los tres Dominios (Bacteria, Archaea y Eukarya), por lo que se te recomienda ver el siguiente video para ver saber que es el VIH y sus caractersticas http://lacienciaysusdemonios.com/category/medicina/page/2/. Para comprender como es que se lleva a cabo la sucesin en ecosistemas terrestres ver el video http://www.youtube.com/watch?v=M1J1U3Hd7nA
Bibliografa bsica
Atlas, R. M. y Bartha, R. (2006). Ecologa microbiana y microbiologa ambiental. 4 ed. Pearson, Adison Wesley. Castrilln, R. L. E., Palma, R. A. y Padilla, D. M. del C. (2011). Interferencia de las biopelculas en el proceso de curacin de heridas. Dermatologa RevMex. 55(3):127-139. Consultado en lnea el 23 de noviembre del 2011 http://www.medigraphic.com/pdfs/derrevmex/rmd-2011/rmd113e.pdf

Gonzlez,G. M. y C. A. M. (2007) Microbiologa ambiental. Corpus. 120 pp. Pidello,A. (2011). Ecologa microbiana. Corpus WALEED, M. K. ZAID. (1993).Tesis doctoral: Physical Properties of Rotating Biological Contactor Biofilms. Copyright byWaleed M. K. Zahid, Willey, J., Sherwood, L. M. y Woolverton, C. J. (2009). Microbiologa.7a ed. MGrawHill-Interamericana. http://www.crabproject.com/client/files/CRAB_Best_Practice_Guidelines-Spanish.pdf
Bibliografa complementaria
Brooks, G. F., Butel, J. S. y Morse, S. A. (2011). Microbiologa Mdica. 25 ed. Mc Graw Hill. . Madigan, M. T., Martinko, J. M. y Parker, J. (2009). Brock. Biologa de los microorganismos. 12 a ed. Pearson Adison-Wesley. Prescott, L. M., Harley, J. P. y Klein, D. A. (2005). Microbiologa. 5a ed. McGraw-Hill Interamericana. Solomon, P. E., Berg, R. L. y Martin, W. D. (2008). Biologa. 8a ed. McGraw Hill. Trtora, G. J., Funke, B. R. y Case, C. L. (2007). Introduccin a la microbiologa. 9a ed.Mdica Panamericana.

04 - PD - BT - Microbiología y Taxonomía Microbiana

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Microbiologa y taxonoma microbiana

Ingeniera en: Biotecnologa

Programa de la asignatura: Microbiologa y taxonoma microbiana

Clave: 200920416 190920416

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Unidad 1. Taxonoma microbiana

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Actividad 1. Archivo evolutivo

1.4.1. rboles filogenticos

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rbol Polifiltico http://www.ual.es/GruposInv/myco-ual/galer13.htm

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Actividad 2. Bacterias fichadas

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1 m = 10 dm = 100 cm = 1 mm Conversiones para determinar las diferentes longitudes

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Etapas del crecimiento bacteriano (Trtora et al, 2007)

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Forma de contar clulas bacterianas en placas de agar

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1.2.5.Medida del nmero de individuos

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Evidencia de aprendizaje. Mi extincin

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Izquierda Robert Hooke y Derecha Antonie van Leeuwenhoek

2.1 Definicin de Microbiologa

Campo de estudio de la microbiologa

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+ + + ++ +/++ + + ++ +/+ + + + +/++

2.1.1. Microbiologa Ambiental

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Ciclo de nitrgeno donde intervienen las bacterias

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Ubicacin de las bacterias fijadoras de nitrgeno

2.1.2. Microbiologa Industrial

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http://luisita28.blogspot.com/, http://sociologiarural.skyrock.c om/,

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2.2. Crecimiento microbiano

Visualizacion del crecimiento en caja petri y en el microscopio

2.2.1. Crecimiento Individual

Microbiologa y taxonoma microbiana

http://es.wikipedia.org/wiki/ Archivo:Binary_fission_es. svg http://www.unavarra.es/ge nmic/microgral/Tema%200 2.kj%20Cultivo%20de%20mi croorganismos.pdf

Divisin celular de una bacteria mediante el proceso de fisin binaria

2.2.2. Crecimiento Poblacional

Microbiologa y taxonoma microbiana

2.3. Cultivo de Microorganismos

Medio muy ptimo el que crecen bacterias

2.3.1. Tipos de Cultivo