CROMATOGRAFA DE GASES.

Slida. Crom. Gas-slido. Fase estacionaria. Cromatografa de Gases. Fase mvil. Gas. Lquida. Crom. Gas-lquido.

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1940

CGS rudimentaria CGL propuesta (Martin y Synge) Separacin de cidos orgnicos por CGL: primer cromatgrafo (Martin y James)

1950

Primer equipo comercial (Griffin & George) Detector por Densidad de Gas (Martin y James) Detector por Ionizacin de llama (McWillian y Dewar) Detector por Captura de Eletrones (Lovelock y Lipsky)

1960

Columnas Capilares (Golay)

Premio Nobel en 1952ProfJLS-UMSNH-FQFB a A. J. P. Martin y R. L. M. Synge.

Direction of mobile-phase flow

A+ B Concentration of solute in mobile phase B Concentration of solute in stationary phase A A B

Detector Chromatogram

Time

Inject

Fraction of bed length

Fig. 1.3. Schematic representation of the chromatografic process. From Miller, J. M., Chromatography: concepts and Contrasts, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1987, p. 7. Reproduced courtesy of John WileyProfJLS-UMSNH-FQFB & Sons, Inc.

Cromatgrafo de Gases. 2 6

1 5 3 4

1 - Reservorio de Gas y Controles de Vaco / Presin. 2 - Inyector (Vaporizador) de muestra. 3 - Columna Cromatogrfica y horno cromatgrafico. 4 - Detector. 5 - Eletrnica de Tratamiento (Amplificador) de Seal. ProfJLS-UMSNH-FQFB 6 - Registro de la Seal (Registrador o Computador).

FASE MVIL EN CROMATOGRAFA DE GASES. La fase mvil en CG, NO interacciona con la muestra apenas la acarrea atravs de la columna. Usualmente es referida como GAS DE ARRASTE O ACARREADOR. Requisitos: INERTE: No debe reaccionar con la muestra, fase estacionria o con la superfcies del instrumento. PURO: Debe estar exento de impurezas que puedan degradar la fase estacionaria.
Impurezas tpicas en gases y sus efectos:

H2O, O2 Hidrocarburos

oxida / hidroliza algunas FE incompatibles con DCE. Rudo, algunos derivados no ProfJLS-UMSNH-FQFB presentan seal en FID.

Gas acarreador (Fase mvil): Helio. Argn. Nitrgeno. Hidrgeno.

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Especificaciones y precios del Helio. Calidad. Grado investigacin. Ultrapuro. Alta pureza. Pureza. 99.9999 %. 99.999 %. 99.995 %. Precio ($, US). 280. 140. 55.

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Requisitos:
COSTO: Gases de elevada pureza pueden ser muy caros. A = 99,995 % (4.5) B = 99,999 % (5.0) C = 99,9999 % (6.0)
COSTO

C A B

PUREZA

COMPATIBLE CON EL DETECTOR Cada detector demanda un gas de arraste especfico para un mejor funcionamiento. Seleccin de Gases de Arrastre en Funcin del Detector: TCD He , H2 FID ECD N2 , H2 N2, Ar + 5% CH4
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Alimentacin del Gas de Arraste (Fase mvil): Componentes necesarios de una lnea de gas: Controladores de vaco / presin de gas.

Dispositivos para purificacin de gas (traps).

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Medidores de Flujo.

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Cromatgrafo de Gases.
3 4 2 1 6

5 1 - Cilindro de Gas. 2 - Regulador de Presin Primario. 3 - Traps para eliminar impurezas de gas. 4 - Regulador de Presin Secundario. 5 - Regulador de Vaco (Controlador Diferencial de Flujo). 6 - Medidor de Vaco (Rotmetro) .

Nota: Tubos y Conexiones: Acero Inox o Cobre.

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Dispositivos de Inyeccin de muestra:

Los dispositivos para inyeccin (INYECTORES o VAPORIZADORES) deben proveer medios de introduccin INSTANTNEA de muestra a la columna cromatogrfica.

t=0 Inyeccin instantnea: t=x

t=0 Inyeccin lenta: t=x

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Partes del inyector:

Septa evita la perdida y descomposicin de muestra, reduce fugas.
(estndar, tefln, multicapa, gris, blanco, azul).

Linner (inserto de vidrio), vaporizacin de la muestra, no reacciona

con los compuestos. El volumen inyectado es determinado por el volumen del puerto de inyeccin. Diferentes capacidades y usos (250-1000 L).

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Liner

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Partes del inyector:

Lana de vidrio, filtra (septa, compuestos pesados), volatiliza compuestos homogneamente.

Ferrula, asla el sistema contra las fugas, grafito (libera sustancias), vespel (muy duro).

Sello de oro y washer, sellan el sistema.

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tipos de inyector:
Para columna. Para columna empacada con purga de septum. Capilar con/sin divisin de flujo. Capilar con divisin de flujo nicamente. Inyector on column con EPC. Columna empacada y purgada con EPC. Inyector capilar con/sin divisin de flujo con EPC.

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Corte transversal de un Inyector.

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Inyector on-column Convencional: 2

3 4

1 - Septa (silicona). 2 - Alimentacin de gs de arraste. 3 - Bloque metlico. ProfJLS-UMSNH-FQFB 4 - Punta de la columna cromatogrfica.

Inyeccin on-column de lquidos.

1 - Punta de aguja de microjeringa es introducida al incio de la columna. 2 - Muestra inyectada y vaporizada instantneamente al incio de la columna. ProfJLS-UMSNH-FQFB 3 - Plug de vapor de la muestra forzado por el gs de arraste a fluir por la columna.

Inyector SPLIT:
Anlisis de componentes mayoritarios, muestras sucias. Puede ser usada con columnas de slice fundida, vidrio, metlicas. Excelente resolucin y forma de los picos. Vaporizacin en el inyector muy rpida. Uso mnimo de volumen por inyeccin (1 L). Requiere vaporizacin gas acarreador-muestra, calibracin con estndares, inyeccin rpida. Split = 20-600:1. T inj = T col max + 20 C.
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Inyector SPLITLESS:
Anlisis de componentes diluidos compuestos trmicamente lbiles. Vaporizacin en el inyector lenta. T inj = PEB solvente + 40 C. Requiere septum purge (5 mL/min). Requiere dilucin: solvente/muestra 104:1. Volumen de muestra de 2-10 L. o trazas,

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Introduccin de la muestra:
Inyeccin con jeringa (manual automtica). Inyeccin a travs de vlvulas (Vlvulas de muestreo de gases, Vlvulas de muestreo de lquidos). Equipos auxiliares de muestreo (purga y trampa, headspace). Muestreo de gases. Dispositivos de muestreo.

Muestreo de lquidos.

Muestreo de slidos.
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Inyector Automtico con bandeja para 100 muestras.

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Headspace Sampler

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Microjeringas para Inyeccin. LQUIDOS Capacidades tpicas: 1 L, 5 L y 10 L. Microjeringa de 10 L:

cuerpo (pirex) mbolo aguja (inox 316)

Microjeringa de 1 L (seccin ampliada):

cuerpo aguja

gua Muestra ProfJLS-UMSNH-FQFB

Parmetros de Inyeccin.
TEMPERATURA DEL INYECTOR Debe ser suficientemente elevada para que la muestra se vaporize inmediatamente, sin descomposicin.

Regla General: Tinj = 20-50 C encima de la temperatura de ebullicin del componente menos voltil. VOLUMEN INYECTADO Depende del tipo de columna y del estado fsico de la muestra
COLUMNA

Muestras Lquidas
0,2 L ... 20 L 0,01 L ... 3 L

Muestras Gaseosas
0,1 ml ... 50 mL 0,001 ml ... 0,1 mL

empaquetada = 3,2 mm (1/4) capilar = 0,25 mm

Slidos: convencionalmente se disuelven en un solvente adecuado y se inyecta en ProfJLS-UMSNH-FQFB solucin.

Introduccin de la muestra: Equipos auxiliares de muestreo. Headspace. La muestra se coloca en un bao a temperatura constante hasta alcanzar el equilibrio trmico. Se toma una alcuota del gas headspace que est por encima de la muestra con una jeringa para gases u otro medio. La muestra del gas head space es analizada usando un GC estndar.

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Introduccin de la muestra: Equipos auxiliares de muestreo. Headspace. Una porcin de gas est en equilibrio con la muestra en un vial sellado, es calentado e inyectado al GC. Muestras contaminadas: benceno/yodo. benceno/agua residual,

Muestras slidas: voltiles en cartn, tela, etc. Muestras que contienen compuestos con alto puntos de ebullicin que no son de nuestro inters. Muestras con alto contenido de agua.

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Soporte: Empacadas: Metlicas, vidrio. (1-8 mm id; 2-20 m L. Fase lquida: Columnas. Lquido no voltil. Cromosorb P, C22. Sterchamol.

Capilares: SiO2 recub. Poliimida. (0.25-0.35 mm id; 5-300 m L.

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Fase lquida: Naturaleza polimrica.

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Fase lquida estacionaria: Selectividad (separacin eficiente. Estabilidad trmica. Baja volatilidad. Baja viscosidad. Inercia qumica (caractertica de disolvente).

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Soporte slido

Fase lquida

Columna capilar. Columna empacada.

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Columnas: Definiciones Bsicas.

EMPAQUETADA = 3 a 6 mm L = 0,5 m a 5 m Rellena con slido pulverizado (FE slida o FE lquida depositada sobre las partculas de relleno)

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CAPILAR = 0,1 a 0,5 mm L = 5 m a 100 m Paredes internas recubiertas con un filme fino (fraccin de m) de FE lquida o slida

Seleccin de la columna. Tipo de muestra (mezcla, cantidad, etc.). Tipo de columna. Fase estacionaria (segn tipo de muestra). Dimetro interno de la columna (segn tipo de muestra). Espesor de la fase estacionaria (segn tipo de muestra). Longitud.

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Seleccionar la mejor columna capilar para un anlisis puede ser una tarea incierta y algunas veces difcil. Hay una gran variedad de columnas (fases estacionarias) que se pueden conseguir de diferente caractersticas (longitud, diferente dimetro, etc.) y de diferentes fabricantes. Para darse una idea ms clara del nmero de columnas o fases estacionarias que existen en el mercado, se enlistaran en las aplicaciones.

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Temperatura de la Columna.
Adems del intercambio con la FE, el tiempo que un analito demora para recorrer la columna depende de su PRESIN DE VAPOR (p0). Estructura qumica del analito. p0 = func.

Temperatura de la columna.

Temperatura De la columna

Presin de vapor

Velocidad de migracin

ANALITO ELUYE MS RAPIDA-MENTE (MENOR RETENCIN).

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Temperatura de la columna.

Control confiable de temperatura de la columna es esencial para obtener uma buena separacin em GC.
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TEMPERATURA DE COLUMNA

Horno del Cromatgrafo de Gases.

Caractersticas Deseables de un Horno:

AMPLIA RANGO DE TEMPERATURA DE USO Por lo menos de Tambiente a 400 C. Sistemas criognicos (T < Tambiente) pueden ser necesrios en casos especiales. TEMPERATURA INDEPENDIENTE DE LOS DEMAS MDULOS No deBe ser afectado por la temperatura del inyector y detector. TEMPERATURA UNIFORME EN SU INTERIOR Sistemas de ventilacin interna muy eficientes para manter la temperatura homognea en todo horno.
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Caractersticas Deseables de un Horno: FCIL ACCESO DE LA COLUMNA Debe tener un soporte para esta. CALENTAMIENTO Y ENFRIAMENTO RPIDO Importante tanto en anlisis de rutina y durante un desenvolvimento de metodologas analticas nuevas. TEMPERATURA ESTABLE Y REPRODUCIBLE La temperatura debe ser mantenida con exactitud y presicin de 0,1C. En cromatgrafos modernos (despus de 1980), el control de temperatura del horno es totalmente operado por microprocessadores.
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Separacin isotrmica en GC. La temperatura isotrmica ms baja est determinada por: La paciencia del operador. Excesivo ensanchamiento de los picos ms tardos. El lmite de temperatura ms bajo de la fase lquida. La temperatura isotrmica ms alta est determinada por: El lmite de temperatura mximo de la fase estacionaria. La estabilidad de la muestra. El tiempo de retencin de los primeros componenetes.

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La temperatura isotrmica nos permitir: Establecer la temperatura de inyeccin. Establecer la temperatura del detector. Establecer el tiempo inicial para determinar el tiempo de corrida para un anlisis. Establecer la velocidad de calentamiento en cero. Establecer la temperatura del horno deseada.

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Programacin de la Temperatura.
Mezclas complejas (constituyentes con volatilidades muy diferentes) separadas ISOTERMICAMENTE:

TCOL BAJA:
Componentes ms voltiles son separados. Componentes menos voltiles demoran al eluir, saliendo como picos mal definidos.

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TCOL ALTA:
Componentes ms voltiles no son separados. Componentes menos voltiles eluyen ms rapidamente.

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Programacin Linear de Temperatura.

La temperatura del horno pode ser variada linearmente durante una separacin:

Se consigue buena separacin de los componentes de la muestra en menor tiempo.

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Operacin programada de temperatura: Hay mayor separacin de los compuestos, sobre todo para mezclas complejas. Reduce el tiempo de anlisis. Produce picos ms definidos. Pruduce mejor precisin cuantitativa. Aumenta la cantidad de sangrado de la columna (deriva en la lnea base). Disminucucin de la velocidad lineal con aumento de la temperatura en sistemas de inyeccin capilar.

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Problemas con la temperatura del horno. La viscosidad de un gas aumenta con la temperatura lo que ocasiona desviacin de la lnea base. Debido a un aumento de la volatilizacin de la FE lquida.

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Parmetros de una programacin de temperatura:

TEMPERATURA

TINI Temperatura Inicial TFIN Temperatura Final tINI TIempo Isotrmico Inicial tFIN TIempo Final do Programa R Velocidade de Aquecimento

TFIN R TINI

tINI TIEMPO

tFIN

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Detectores en cromatografa de gases.

Dispositivos que examinan continuamente el material eluido, generando una seal con el paso de substancias que no son gas de arraste.

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Detectores en cromatografa de gases.

TCD. Densidad de gas. FID. Ionizacin de rayos-: A) B) C) , D) E) Seccin transversal. Argn. Helio. ECD. EMD.

Foto-ionizacin. Emisin de microondas. Emisin de flama. Conductividad de flama. Rpido escaneo de UV, IR. Constante dielctrica. Calor de absorcin.
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MS.

APLICACIONES DE CROMATOGRAFA DE GASES. Las aplicaciones son muy amplias, algunas determinaciones son: Anlisis en la industria qumica. Anlisis ambientales (hidrocarburos, pesticidas, herbicidas, voltiles, semivoltiles, anlisis del aire). Anlisis alimenticios y sabores, fragancias. Compuestos quirales en aceites esenciales. Drogas de abuso. Industria farmacutica. Industria petroqumica. Investigacin.

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VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE CROMATOGRAFA DE GASES. VENTAJAS: Anlisis rpidos, tpicamente en minutos. Eficiente, proporciona alta resolucin. Sensibilidad, fcilmente detecta ppm, ppb y en ocasiones ppt (GC-MS). No destructiva (depende del detector), hace posible el acoplamiento MS, UV, IR. Alta exactitud en anlisis cuantitativo. Requiere poca, muestra tpicamente mL, mL, mg. Rentable y relativamente simple. Barato.
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DESVENTAJAS: Limitado a muestras voltiles. No conveniente para muestras trmicamente lbiles. Regularmente difcil para muestras grandes o muestras preparativas. Requiere espectroscopa, generalmente MS, para confirmacin de la identidad del pico.

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T IC :R A F A E S T A .D A b u n d a n ce 1 e + 0 7 9 0 0 0 0 0 0 8 0 0 0 0 0 0 7 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 5 0 0 0 0 0 0 4 0 0 0 0 0 0 6 .5 8 3 0 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 5 .1 9 5 .2 4 0 T im e > 4 .0 0 6 .0 0 6 .8 8 8 .0 0 7 .9 9 9 .2 7 1 .4 2 1 0 .3 8 1 1 0 .3 4 1 4 .5 4 1 3 .3 1 1 2 .9 1 1 3 .8 6 1 2 .4 9 1 4 .8 2 1 6 .0 3

1 5 .6 7

1 0 .0 0

1 2 .0 0

1 4 .0 0

S c a n 6 1 7 ( 6 . 6 0 6 m i n ) : R A F A E S T A . D( * ) A b u n d a n c e 5 7 9 5 9 0 8 5 8 0 7 5 7 0 6 5 6 0 5 5 5 0 4 5 4 0 3 5 3 0 2 5 2 0 1 5 1 0 5 0 m /z > 5 2 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 9 9 1 1 3 1 1 2 2 6 7 1 4 1 1 5 5 1 6 9 1 8 3 1 8 0 1 9 8 2 0 7 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 5 3 2 6 0 8 5 7 1

1 6 0

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TIC :R A F A E S TA .D A bundance 1e+ 07 9000000 8000000 7000000 6000000 5000000 4000000 6.58 3000000 2000000 1000000 5.19 5.24 0 Tim e--> 4.00 6.00 6.88 8.00 7.99 9.27 14.54 13.31 12.91 13.86 10.38 11.42 12.49 10.34 12.00 14.82 16.03

15.67

10.00

14.00

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S ca n6 1 7( 6 .6 0 6m i n ) : R A F A E S T A .D ( * ) A b u n d a n ce 5 7 9 5 9 0 8 5 8 0 7 5 7 0 6 5 6 0 5 5 5 0 4 5 4 0 3 5 3 0 2 5 2 0 1 5 1 0 5 0 m /z > 5 2 6 0 8 0 1 0 0 1 2 0 1 4 0 9 9 1 1 3 1 1 2 2 6 7 1 4 1 1 5 5 1 6 9 1 8 3 1 8 0 1 9 8 2 0 7 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 5 3 2 6 0 8 5 7 1

1 6 0

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Bibliografa Adicional para Mtodos de separacin.

Experimentos de Qumica Orgnica. Louis F. Fieser. Edit. Revert. (Reimp-Oct-2004). Basic Gas Chromatography. Harold M. McNair and James M. Miller. Wiley Inter-Science. (1997). Phytochemical Methods. J. B. Harborne. Chapman-Hall (Third Edition-1998). Basics of LC-MS. Agilent Technologies. (2001). Chromatographic Methods. R. Stock and C. B. F. Rice.

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