Normas e protocolos

Contedo
APRESENTAO _________________________________________________________________________________ 3 NO PERMITIDO AO USURIO: ___________________________________________________________________ 3 OBJETIVOS _____________________________________________________________________________________ 4 NORMAS DE UTILIZAO DO LABORATRIO _________________________________________________________ 5 MANUAL DE USO E MANUTENO PARCIAL DE MICROSCPIO __________________________________________ 5 INTRODUO ___________________________________________________________________________________ 5 USO DO MICROSCPIO ___________________________________________________________________________ 5 MICROSCPIO PTICO (MO) - PARTES ______________________________________________________________ 7 MECNICA _____________________________________________________________________________________ 7 OPERAO _____________________________________________________________________________________ 8 SISTEMA DE AUMENTO: ____________________________________________________________________________ 8 SISTEMA DE ILUMINAO: __________________________________________________________________________ 9 CAUSAS DE INSUCESSO NA PRTICA DA MICROSCOPIA: ________________________________________________ 9 REGULAGEM DA ILUMINAO ___________________________________________________________________ 9 LIMPEZA E LUBRIFICAO ______________________________________________________________________ 10 Parte ptica _______________________________________________________________________________ 10 Oculares __________________________________________________________________________________ 10 Objetivas _________________________________________________________________________________ 10 Condensador ______________________________________________________________________________ 10 Parte mecnica ____________________________________________________________________________ 10 Parte eltrica ______________________________________________________________________________ 11 Lmpadas _________________________________________________________________________________ 11 CUIDADOS IMPORTANTES PARA COM O MICROSCPIO _______________________________________________ 11 NORMAS ADOTADAS NO LABORATRIO DE HISTOLOGIA ______________________________________________ 12 INTRODUO A HISTOLOGIA _____________________________________________________________________ 12 OBJETIVO_____________________________________________________________________________________ 12 LAMINAS ______________________________________________________________________________________ 13 NORMAS ADOTADAS NO LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA __________________________________________ 14 1. LIMPEZA, MONTAGEM E ESTERILIZAO DE MATERIAL USADO EM MICROBIOLOGIA __________________ 15 LIMPEZA E MONTAGEM ___________________________________________________________________________ 15 Objetivos _________________________________________________________________________________ 15 Introduo ________________________________________________________________________________ 15 ESTERILIZAO _________________________________________________________________________________ 15 Objetivos _________________________________________________________________________________ 15 Introduo ________________________________________________________________________________ 15 2. TCNICAS ASSPTICAS E SEMEADURA DE MICRORGANISMOS ______________________________________ 15 Objetivos _________________________________________________________________________________ 15 Introduo ________________________________________________________________________________ 15

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3. PREPARAO, ACONDICIONAMENTO E CONTROLE DE QUALIDADE DE MEIOS DE CULTURA. 16

Objetivos _________________________________________________________________________________ 16 Introduo ________________________________________________________________________________ 16 4. ESTUDO MORFOLGICO DE COLNIAS BACTERIANAS ____________________________________________ 16 Introduo ________________________________________________________________________________ 16 Objetivo __________________________________________________________________________________ 17 5. TCNICA DE COLORAO DE GRAM ___________________________________________________________ 17 Introduo ________________________________________________________________________________ 17 Objetivo __________________________________________________________________________________ 18 6. MEIO DIFERENCIAL E SELETIVO _______________________________________________________________ 18 Introduo:________________________________________________________________________________ 18 Objetivo __________________________________________________________________________________ 18 MODELO DE RELATORIOS DE MICROBIOLOGIA _______________________________________________________ 19 1 Resumo ________________________________________________________________________________ 19 2 Introduo _____________________________________________________________________________ 19 3 Materiais e Mtodos _____________________________________________________________________ 19 4 Resultados _____________________________________________________________________________ 19 5 Discusso ______________________________________________________________________________ 19 6 Bibliografia _____________________________________________________________________________ 19 7 MATERIAIS NECESSRIOS (LEMBRETE)_______________________________________________________________ 19 ANEXO 01 _____________________________________________________________________________________ 20 ANEXO 02 _____________________________________________________________________________________ 21

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APRESENTAO Define-se como usurio, todo e qualquer indivduo que far uso das instalaes dos Laboratrios, com a finalidade de desenvolver atividades de Ensino Pesquisa e Extenso. Os laboratrios de I (Zoologia, Histologia e de Paleontologia) II (Microbiologia e Parasitologia e III de Botnica. Esses laboratrios multidisciplinares ajudam na complementao terica, constam-se: As normas e regulamento para a utilizao de todos os equipamentos, dos trs laboratrios seguemse adiante, porm, necessrio saber, antes de tudo, que qualquer atividade desenvolvida nos laboratrios, devem ser acompanhada na presena de um professor responsvel, que supervisionar todas as atividades dos alunos. o Orientar o destino final para os resduos produzidos durante a realizao da aula prtica, no permitindo a liberao de substncias agressivas ao meio ambiente para locais inadequados, devendo encaminh-los para catalogao e acondicionamento, de acordo com normas tcnicas; Utilizar e exigir dos alunos o uso de Equipamentos de Proteo Individual - EPls e dos Equipamentos de Proteo Coletiva EPCs; Os alunos devero estar devidamente paramentados para a prtica laboratorial e devero ajudar o professor no final da aula, deixando o laboratrio mais limpo e organizado possvel. Os laboratrios so utilizados para as aulas prticas, isto , como rea de integrao entre teoria e prtica, permitindo a vivncia aos alunos dos conhecimentos tericos bem como o

No permitido ao usurio: o Alterar configurao e/ou calibrao de equipamentos sem a prvia consulta ao Servidor Tcnico Especializado responsvel pelo Laboratrio; o Retirar equipamentos e material de consumo das dependncias do laboratrio sem a autorizao do Servidor Tcnico Especializado responsvel. o Remover equipamentos do local de utilizao, dentro do prprio laboratrio sem prvia autorizao do Servidor Tcnico Especializado responsvel. o Manusear de forma inadequada os equipamentos, sob o risco de penalidades, desde que comprovada sua responsabilidade.

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OBJETIVOS Proporcionar as condies necessrias para os estudos prticos, com materiais e equipamentos adequados. Criar competncia, habilidade e responsabilidade na utilizao dos equipamentos dos laboratrios. Estudos prticos necessrios para a formao do Bilogo e Educador

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NORMAS DE UTILIZAO DOS LABORATRIOS Para que um laboratrio atenda os seus objetivos, importante que todos colaborem, buscando seguir As instrues abaixo: 1. A entrada de alunos somente permitida na presena de um professor ou responsvel. 2. Os utilitrios dos laboratrios devem utilizar vestimenta adequada e demais utenslios de proteo para a atividade a ser realizada 3. No permitida a entrada de alimentos e material escolar no relacionado com a atividade. 4. Materiais descartveis devem ser colocados no lixo, as vidrarias lavadas e as bancadas limpas.

MANUAL DE USO E MANUTENO PARCIAL DE MICROSCPIO Introduo As regras mais elementares de utilizao so freqentemente ignoradas, at mesmo por usurios experientes, comprometendo assim no s a durabilidade do equipamento, mas tambm a no utilizao de possveis recursos. Muitas vezes os microscpios que so enviados para conserto esto apenas com as lentes sujas e podem ser restaurados rapidamente. No entanto recomendvel uma manuteno preventiva por ano. O presente visa, portanto, mostrar o uso apropriado, tcnicas de regulagem da iluminao e de manuteno parcial.

USO DO MICROSCPIO 1. Em primeiro lugar essencial que voc conhea as partes pticas e mecnicas dos microscpios, 2. Mantenha o microscpio livre de poeira, vapores cidos e do contato com reagentes. 3. Para mant-lo seco, cubra com capa de flanela, 4. No manusear o equipamento com as mos sujas ou molhadas. a. Motivo: Evita o p e a proliferao de fungos 5. Jamais comer ou beber prximo ao equipamento. a. Motivo: Evita a proliferao de fungos 6. Na remoo do equipamento, segure-o firmemente com uma das mos no brao e outra na base 7. Coloque-o bem apoiado sobre a mesa de trabalho de superfcie plana, evitando qualquer movimentao brusca. 8. Nunca desloque o aparelho com a lmpada acesa ou logo aps ter sido apagada. a. Motivo: Evite o arrastamento do equipamento, arrastar o MO as lentes saem de sua conformao original e com isso perde a qualidade de foco. 9. No permitir que os alunos deixem o microscpio com a objetiva de maior aumento encaixada e a mesa levantada. a. Motivo - os prximos alunos podem mexer na mesa (levantar) e quebrar a lmina e objetiva. 10. No permitir que os alunos deixem o microscpio com o Diafragma fechado e condensador abaixado. a. Motivo os prximos alunos podero ter dificuldades de descobrir o motivo da falta de luz. 11. Ateno quando se observa uma preparao em meio lquido, pois h sempre o risco de molhar a lente frontal da objetiva; portanto o conselho retirar o excesso de lquido com papel de filtro, antes de colocar a lmina sobre a platina;

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12. Em de acidente, enxugar imediatamente com papel absorvente macio. ATENO: Portanto todos os alunos devem seguir os seguintes procedimentos ao final da aula, ou seja, deixar o MO da seguinte forma: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Encaixar a menor objetiva. Abaixar a mesa. Deixar diafragma aberto. Deixar condensador levantado. Desligar o MO (na tomada tambm) Cobrir o MO

No permitir que o aluno afrouxe o parafuso do condensador. Explique para que serve e ensine a usar. o Motivo - Tem aluno deixando o parafuso solto e os seguintes, ao mexer, deixam o condensador cair. No permitir que os alunos deixem o MO ligado sem estar usando ou quando se ausentar por muito tempo. o Motivo as lmpadas queimam com muita facilidade e o calor intenso estraga o MO No permitir que os alunos mudem de objetivas pegando nelas, sempre pelo revlver. o Motivo ao tocar nas objetivas pode afrouxar e, futuramente, elas podem cair. No permitir que os alunos, quando estiverem utilizando leo de imerso, passem a objetiva de 40X pelo material. Deve sair do aumento de 10X e ir para de 100X sem passar pela de 40X. o Motivo a objetiva de 40X pode encostar-se ao leo e ela no pode ser limpa, portanto com o tempo ela vai estragando. Limpar adequadamente a objetiva de 100x quando utilizar, com soluo e papel adequado. Jamais papel higinico. o Motivo se o leo ficar por muito tempo estraga a objetiva e papel higinico arranha. Deixar televiso, vdeo e MO sempre com a capa e desligado. o Motivo a poeira estraga os equipamentos. No permitir entrada de bebidas e comidas. o Motivo permite a proliferao de fungo. No permitir movimentar o macromtrico com as objetivas de 40x e 100x. o Motivo pode quebrar a lmina e arranhar a objetivo. OBS.: Alguns MO esto com objetivas inadequadas e por isso nem sempre possvel dar o foco sem mexer no macromtrico, Ensinar que no preciso abaixar a mesa para mudar de objetiva, basta fazer o ajuste no foco utilizando o micromtrico. o Motivo muitos alunos tm medo de quebrar a objetiva e por isso abaixam a mesa.

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MICROSCPIO PTICO (MO) - PARTES

Mecnica 1. P ou base serve de apoio para os componentes do microscpio. 2. Brao ou coluna - fixo base, serve de suporte a outros elementos. 3. Tubo, canho ou cabeote - suporta a ocular na extremidade superior 4. Revlver ou ptica - pea giratria portadora de objetivas de diferentes ampliaes que podem ser de 20x, 40x e 100x 5. Platina ou mesa - onde se fixa a preparao a observar; tem uma janela por onde passam os raios luminosos e tambm parafusos dentados que permitem deslocar a preparao. 6. Charriot e pinas As platinas fixas geralmente compensam sua Imobilidade por meio de peas deslizantes, chamadas " charriot" que coloca a lamina no campo desejado 7. Parafuso macromtrico a sua rotao responsvel por movimentos verticais da platina, rpidos e de grande amplitude. 8. Parafuso micromtrico a sua rotao responsvel por movimentos verticais da platina, lentos e de pequena amplitude, permitem aperfeioar a focagem.

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Operao A intensidade luminosa regulvel: aumenta-se a intensidade luminosa subindo-se o condensador e abre-se o diafragma ou diminui-se a intensidade luminosa descendo o condensador e baixa-se o diafragma. A ampliao consiste no grau de aumento da imagem em relao ao objeto. A ampliao total obtida com o microscpio ptico consiste no produto da ampliao da objetiva pela ampliao da ocular. Esta, sem distoro, no ultrapassa as 1200x. O fator mais significativo para a obteno de uma boa imagem , contudo, o poder de resoluo, que corresponde distncia mnima que necessrio existir entre dois pontos para que possam ser distinguidos ao microscpio. Para o microscpio ptico essa distncia de 0,2 m devido ao comprimento de onda das radiaes visveis. Com efeito, a propriedade da ampliao s tem interesse prtico se for acompanhada de um aumento do poder de resoluo. No que diz respeito microscopia ptica existem dois mtodos fundamentais de observao, de acordo com o tipo de preparao que se quer observar: Se a lmina no est corada (exame a fresco): a observao feita com objetivas secas, do seguinte modo: 1. Desce-se o condensador e sobe-se o diafragma para que a iluminao no seja muito intensa, j que as lminas no esto coradas. 2. Com o parafuso macromtrico foca-se com a objetiva menor. 3. Passe para objetiva de 10x escolhe-se o campo que se quer observar. a. A partir dessa objetiva no se foca mais com mais com o macromtrico b. USA-SE SOMENTE O MICROMETRICO 4. Seguidamente foca-se com a objetiva de 40x, fazendo aproximao da objetiva lmina, tambm, SOMENTE COM O MICROMETRICO. Se a lmina est corada: a observao feita com objetivas de imerso, procedendo do seguinte modo. 1. Sobe-se o condensador, abre-se o diafragma e regula-se a iluminao da fonte luminosa no mximo, de modo a conseguir-se uma iluminao intensa, apropriada observao de lminas coradas. 2. Coloca-se na lmina uma gota de leo de imerso e procede-se focagem. Primeiro aproximando a objetiva lmina com controlo visual externa, seguidamente a focagem propriamente dita com o parafuso macromtrico e finalmente o aperfeioamento da focagem com o parafuso micromtrico. Sistema de aumento: 1. Oculares- sistemas de lentes que permitem ampliar a imagem real fornecida pela objetiva, formando uma imagem virtual que se situa a aproximadamente 25 cm dos olhos do observador 2. Objetivas - permitem ampliar a imagem do objecto 10x, 40x, 50x, 90x ou 100x. o As objetivas de 10x, 40x e 50x so designadas objetivas secas pois entre a preparao e a objetiva existe somente ar. o As objetivas de imerso, uma vez que, para as utilizar, necessrio colocar uma gota de leo de imerso entre elas e a preparao, o qual, por ter um ndice de refraco semelhante ao do vidro, evita o desvio do feixe luminoso para fora da objetiva.

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Sistema de iluminao: Condensador - conjunto de duas ou mais lentes convergentes que orientam e espalham regularmente a luz emitida pela fonte luminosa sobre o campo de viso do microscpio. Diafragma - constitudo por palhetas que podem ser aproximadas ou afastadas do centro atravs de uma alavanca ou parafuso, permitindo regular a intensidade da luz que incide no campo de viso do microscpio. Filtro Seletor de intensidade luminosa - Fonte luminosa a mais utilizada actualmente a luz artificial, fornecida por uma lmpada de tungstnio ou de halogneo, includa no aparelho juntamente com um interruptor com restato, que permite regular a intensidade da luz emitida.

1. 2.

3. 4.

CAUSAS DE INSUCESSO NA PRTICA DA MICROSCOPIA: Campo escuro: resultante de m centralizao de iluminao; veja as instrues no item "regulagem da iluminao"; Falta de nitidez da imagem: se persistir aps a regulagem da iluminao e de uma focalizao cuidadosa, a causa deve ser buscada metodicamente: 1. Preparao pode estar suja em uma das faces e isto pode ser reconhecido pela movimentao de estrias e sombras, 2. Deve-se limp-la com um leno de papel extra macio, embebido em lcool ou ter; Ocular est suja: ao gir-la veremos corpos estranhos movimentando ao mesmo tempo; 1. Seguir a instruo de limpeza descrita no item "limpeza e lubrificao"; (abaixo) A objetiva pode estar com algum lquido na lente frontal ou com poeira na lente posterior; Ao usar a lente de imerso servir-se de leo de imerso suficientemente fludo e nunca deix-lo secar sobre a objetiva ou sobre as preparaes. REGULAGEM DA ILUMINAO Verificar a centralizao feche completamente o diafragma e examine a imagem com a objetiva de menor aumento focalizada numa preparao; em microscpios que possuem condensador de campo (por onde passam os feixes de luz), Este tambm deve ser fechado, reduzindo assim o cone de luz. A centralizao feita girando os parafusos laterais do condensador Abbe at que a ris do diafragma esteja exatamente no centro, ou seja, coincidindo com o eixo ptico do sistema de lentes. A imagem da ris do diafragma, uma vez centralizada, deve ser regulada movimentando o condensador, para cima ou para baixo, at que sua borda azulada esteja ntida; Abre-se ento o condensador de campo ou o diafragma para preencher todo o campo, obtendo-se assim um feixe luminoso exatamente centrado. Esta iluminao crtica ou de Khler , portanto, obtida quando o condensador focaliza a luz no objeto e a luz transmitida do objeto para a objetiva quase que preenche completamente as lentes.

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LIMPEZA E LUBRIFICAO Parte ptica Vimos que a falta de nitidez das imagens depende diretamente do estado de limpeza das lentes. Isto pode ser evitado pelo hbito de limpeza peridica. Oculares Com a objetiva de menor aumento focalizada em uma preparao, Gire as oculares e verifique se existem partculas que acompanham o movimento; o Caso existam elas, podem estar nas duas superfcies e neste caso Ambas devem ser limpas com um bulbo de borracha e cotonete. Para retirar eventuais manchas de leo, dedos; umedecer um cotonete com solvente apropriado (lcool a 70%GL ou ter), tomando cuidado para no inundar as lentes, Secar imediatamente com um leno de papel. o Freqentemente basta projetar o hlito na superfcie das lentes e limp-las. Limpe freqentemente as oculares com leno de papel fino; pois o contato com os clios e mesmo poeira podem suj-las. Nunca toque as lentes com os dedos, pois gordura atrai poeira. o Uma precauo especial requerida no uso de solventes hidrocarbonetos, como o xilol, pois podem Penetrar na rea de fixao das lentes dissolvendo a cola, bem como produzir pelcula sobre as lentes. Objetivas Cada objetiva deve ser desatarraxada cuidadosamente do revolver e aps a limpeza recolocada na posio original, para tanto, usar o mesmo mtodo descrito para as oculares. No entanto, como as superfcies das lentes so menores que as das oculares, recomendamos inspecion-las com uma pequena lupa manual. Para retirar poeira da face posterior da objetiva, usa-se um pincel de plo muito macio. Aps o uso da objetiva de imerso, retirar o excesso de leo com um papel de filtro e terminar a limpeza com um cotonete levemente embebido de ter. o JAMAIS USAR LCOOL NA LIMPEZA DO LEO DE IMERSO, POIS ESTE NO DISSOLVIDO PELO LCOOL , MAS FORMA COM ELE UM PRECIPITADO BRANCO . Nunca tente desmontar as objetivas ou oculares, pois poder desalinhar as lentes ou coloc-las na ordem ou posio erradas. o SE HOUVER NECESSIDADE DE LIMP-LAS INTERNAMENTE, DEVE-SE ENVI-LAS AO SERVIO ESPECIALIZADO. Condensador Tanto o condensador de campo como o que contm o diafragma devem ser limpos com lcool ou ter. Cuidadosamente limpe as lentes, primeiro retirando a poeira, em seguida aplicando o lquido de limpeza e enxugando com papel macio. Parte mecnica A lubrificao tambm deve ser regular, especialmente do macromtrico, que a parte mecnica mais vulnervel, evitando assim o acmulo de poeira e areia.

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Antes de proceder lubrificao, as sujeiras das partes metlicas devem ser eliminadas com lcool, enxugadas com tecido de algodo macio e relubrificadas, Nunca force um macro ou micromtrico que esteja emperrado ou duro. Evite deixar o equipamento em locais que recebam luz solar ou calor por muito tempo, pois estes podem derreter as graxas, danificando o mecanismo, ou descolar as lentes. til reservar uma pina para limpar detritos ou fragmentos acumulados em reentrncias, bem como dispor de alicates e chaves de fenda (fendas, estrela, Philips), para apertar ou folgar alguma pea deslocada. Para as partes expostas, suficiente limp-las com tecido umedecido com gua e sabo neutro, mas, pode-se aplicar platina uma diminuta quantidade de vaselina neutra.

Parte eltrica Se o equipamento apresenta problemas na hora de acender a lmpada pode-se verificar a tomada, o fusvel e a lmpada do mesmo. o Tomadas: devem estar inteiras, com os fios bem firmes a ela, caso contrrio, aconselha-se a sua substituio. o Fusveis: Desligue e retire o equipamento da tomada e procure o fusvel geralmente localizado na parte inferior ou posterior do equipamento. So constitudos por um tubo de vidro com duas extremidades de metal (uma de cada lado) com um diminuto fio no meio. Este fio deve estar inteiro. Caso contrrio, o fusvel dever ser trocado por outro do mesmo tipo. A sua identificao fica em uma das partes de metal (caso no tenha identificao, consulte o manual do equipamento). Lmpadas Verifique se ela est bem atarraxada no bocal e se seus "filamentos" encontram-se inteiros. Evite pegar na lmpada com os dedos, faa-o com um leno de papel, pois existem lmpadas algenas, que ao serem tocadas com os dedos, queimam.

CUIDADOS IMPORTANTES PARA COM O MICROSCPIO 1. NO coma ou beba no laboratrio; 2. NO deixe material sobre a bancada onde esto os microscpios; 3. NO arraste o microscpio; 4. NO movimente o macromtrico com as objetivas de 40x e 100x; 5. NO limpe as oculares e objetivas com papel higinico; 6. NO toque nas objetivas; 7. NO utilize a objetiva de 40x quando estiver utilizando leo de imerso; 8. NO abaixe a mesa para mudana de objetiva.

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NORMAS ADOTADAS NO LABORATRIO DE HISTOLOGIA No permitir que os alunos deixem bolsas sobre a mesa. No mximo um caderno e lpis. o Motivo o material pode esbarrar no MO e mov-lo de lugar, alm de tumultuar a bancada. Jamais deixar lminas soltas sobre a bancada. o Motivo Outro aluno ou ele prprio pode derrubar a lmina e quebr-la. Jamais deixar lminas soltas no armrio. o Motivo: Outro professor ou monitor pode derrub-la ao pegar as caixas. Na troca de laminas, guarde a anterior na respectiva caixa e pegue outra o Motivo lmina na bancada ou na base do microscpio pode quebrar

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Introduo a Histologia O aprendizado da Histologia depende da anlise e compreenso de lminas histolgicas, o que ocorre em aulas prticas, ministradas nos laboratrios de microscopia. Objetivo o O aluno dever entender e esquematizar o tecido em questo. o Fazer desenho esquemtico em pranchas (PRANCHA_ANEXO 02)

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Laminas

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NORMAS ADOTADAS NO LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA As aulas prticas de microbiologia tm como objetivo ensinar ao estudante os princpios e os mtodos utilizados em um laboratrio de microbiologia. Nessas aulas trabalharemos com uma variedade de bactrias, algumas patognicas para o homem. Portanto, essencial seguir as normas de segurana estabelecidas para um laboratrio de microbiologia, a fim de se evitar contaminao dos estudantes, professores e funcionrios. 1 - Desinfetar a bancada de trabalho no incio e trmino de cada aula prtica. Para essa finalidade, utiliza-se lcool comercial. Com este procedimento, os microrganismos que poderiam contaminar as culturas na rea de trabalho so removidos. 2 - No comer ou fumar no laboratrio. Se a bancada, equipamentos ou instrumentos tiverem sido contaminados acidentalmente com qualquer microrganismo, comer ou fumar meio eficiente para uma auto contaminao. 3 - Usar sempre avental. No utiliz-lo fora do laboratrio, caso tenha sido contaminado acidentalmente. 4 - Lavar as mos ao sair do laboratrio e sempre que suspeitar de contaminao. 5 - Avisar ao professor em caso de contaminao acidental. 6 - No colocar materiais contaminados (pipetas, lminas etc.) sobre a bancada. Estes materiais devem ser colocados em recipientes apropriados que sero dispostos em cada bancada. 7 - Cada aluno responsvel pelo material que receber. 8 - Seguir as normas de uso dos aparelhos. O microscpio um instrumento de trabalho valioso e deve ser manipulado cuidadosamente. So tidos como pr-requisitos conhecimentos sobre microscpios pticos comuns. 9 - Cuidado ao acender o bico de gs (bico de Bunsen). Verificar se no existem substncias inflamveis por perto. 10 - Flambar alas, agulhas e pinas antes e aps o uso.

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1. LIMPEZA, MONTAGEM E ESTERILIZAO DE MATERIAL USADO EM MICROBIOLOGIA Aps ter estudado esta unidade e ter preparado o experimento prtico, voc estar apto a: Limpeza e Montagem Objetivos Caracterizar a estrutura e o funcionamento de um laboratrio de Microbiologia Executar tcnicas de preparo e montagem de matria para esterilizao. Introduo um laboratrio de Microbiologia destina-se ao estudo de microrganismos, compreendendo entre outras atividades, seu isolamento, identificao, caracterizao, quantificao e conservao. A este estudo aplicam-se "tcnicas microbiolgicas", que envolvem uma srie de operaes e normas padronizadas, instalaes e instrumental prprios. No estudo de microrganismos so imprescindveis as seguintes operaes: execuo de preparaes microscpicas, esterilizao de vidrarias, preparo de meios de cultura e materiais diversos, tcnicas de cultivo, isolamento e outros ensaios microbiolgicos. Esterilizao Objetivos Caracterizar os diversos mtodos de esterilizao. Executar O preocesso de esterilizao em calor umido e conhecer outros metodos. Introduo Vrios procedimentos de esterilizao so usados para destruir microganismos. A escolha do mtodo depende principalmente de natureza do material a ser esterilizado. O objetivo da esterilizao destruir ou remover todos os organisr patognicos ou no, incluindo os esporos bacterianos. No existe a expresso meio termo como "quase estril", o termo estril ou esterilizao no deve ser usado com sentido relativo. As bactrias nas suas formas vegetativas, so destrudas com certa facilidade pelos mtodos comuns de esterilizao. O mesmo comportamen observado para as clulas vegetativas e esporos de leveduras e bolores esporos bacterianos, no entanto, constituem um grupo de organismos apresentam a maior resistncia a ao dos agentes fsicos, especialmente a temperatura. A maioria dos esporos bacterianos exige, para a sua eliminao temperaturas superiores a 100C por perodo de tempo prolongado. A relao temperatura e tempo de exposio que deve ser usada para tornar material estril baseada no grau de resistncia ao calor dos esporos bacterianos.

2. TCNICAS ASSPTICAS E SEMEADURA DE MICRORGANISMOS Objetivos Treinar o aluno na manipulao de meios e culturas em condies de assepsia; Executar tcnicas de semeadura de microrganismos em meios slidos e lquidos. Introduo O isolamento, cultivo e identificao de microrganismos requerem tcnicas adequadas de inoculao destes microrganismos em meios de cultura que possibilitem o seu rpido crescimento, livre de

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contaminaes. Estas so as chamadas "tcnicas asspticas". Para sua execuo, certas precaues especiais devem ser observadas pelo manipulador na ocasio da prtica de tcnicas de semeadura, com o fim de preservar a pureza do cultivo e minimizar os riscos de infeco ou intoxicao no laboratrio. Assim, o estabelecimento de uma zona de esterilidade garantida pela regulao do bico de gs (Bunsen). somente nesta zona, estril, que os tubos ou recipientes com meios de cultura, estreis ou com material a ser inoculado, devero ser abertos ou manipulados. Qualquer outro material dever ser mantido nesta rea, para ser preservada a sua esterilidade. As manipulaes deve ser feitas, preferencialmente, por trs da chama do bico de gs. As alas ou agulhas, de platina ou nquel-cromo, devem ser flambadas imediatamente antes e depois de qualquer transferncia. Elas devem ser flambadas em todo seu comprimento, a partir de alguns centmetros do cabo de Kolle, at ao rubro, mantendo-as em posio vertical chama do bico de Bunsen. Nunca iniciar a flambagem pela extremidade livre da ala ou agulha. Deixar esfriar nas proximidades da chama.

3. PREPARAO, ACONDICIONAMENTO E CONTROLE DE QUALIDADE DE MEIOS DE CULTURA. Objetivos Realizar a preparao de meios de cultura. Realizar a armazenagem correta dos meios de cultura. Descrever os fatores que podem interferir na preparao dos meios que influenciam um resultado satisfatrio de crescimento bacteriano. Efetuar as normas que regem o controle de qualidade dos meios de cultura. Introduo Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial dos microrganismos. Estes meios fornecem os princpios nutritivos indispensveis ao seu crescimento. As exigncias nutritivas esto relacionadas a uma fonte de carbono, de nitrognio, de energia e de sais minerais. Alguns microrganismos tambm necessitam de fatores de crescimento que so substncias que eles no podem sintetizar, tais como vitaminas, aminocidos etc. Outras condies inerentes ao meio de cultura necessrio ao desenvolvimento so as condies de pH, presso osmtica e grau de umidade.

4. ESTUDO MORFOLGICO DE COLNIAS BACTERIANAS Introduo Os microrganismos so encontrados em praticamente todos os ambientes naturais, tais como solo, ar, gua, plantas, animais, corpo humano, alimentos e esgoto. Apresentam-se sob a forma de comunidades (conjunto de populao de espcies), e para que possamos estud-los no laboratrio, necessitamos separ-los individualmente, para que, em cultura formem populaes clonadas (iguais, puras), conhecidas como culturas puras (colnias). As bactrias so extremamente variveis quanto ao tamanho e formas que apresentam. Em relao s formas, a maioria das bactrias estudadas segue um padro menos varivel, embora existam vrios tipos morfolgicos distintos. De maneira geral, as bactrias podem ser agrupadas em quatro tipos morfolgicos gerais: cocos, bacilos, espiralados e vibries.

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Objetivo Treinar o aluno a pratica de semeadura e isolamento de colnias bactrias Diferenciar as diferentes formas, tamanho, cores, etc. das colnias bacterianas Aprender a classificar as diferentes colnias bacterianas

Avaliao das formas morfolgicas das colnias cultivadas em placa de Petri. Tamanho Colnia: pequena, media ou grande Forma

Elevao

Bordos

Cromognese Pigmentada ou sem pigmento (cor: amarela, preta, vermelha, etc.) Detalhe ptico (transparente, translcida, opaca ou brilhante) Superfcie (lisa, rugosa, mucide, seca, pulverulenta)

5. TCNICA DE COLORAO DE GRAM Introduo O mtodo da colorao de Gram baseado na capacidade das paredes celulares de bactrias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactrias Gram-negativas no o fazem. A colorao de Gram um dos mais importantes mtodos de colorao utilizados em laboratrios de microbiologia e de anlises clnicas, sendo quase sempre o primeiro passo para a caracterizao de amostras de bactrias. A tcnica tem importncia clnica uma vez que muitas das bactrias associadas a infeces so prontamente observadas e caracterizadas como Gram-positivas ou Gram-negativas em esfregaos de pus ou de fluidos orgnicos. Essa informao permite ao clnico monitorar a infeco at que dados de cultura estejam disponveis. possvel a anlise de vrios esfregaos por lmina, o que facilita a comparao de espcimes clnicos. As lminas podem ser montadas de forma permanente e preservadas como documentao.

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Objetivo Conhecer os procedimentos empregados na metodologia colorao de bactria pelo mtodo de Gram Observar e identificar as bactrias pela morfologia e pela assimilao de corantes

6. MEIO DIFERENCIAL E SELETIVO Introduo: Meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial das bactrias. Esses meios fornecem os princpios nutritivos indispensveis, assim como outras condies necessrias ao crescimento bacteriano. Os primeiros meios de cultura usados foram lquidos, at que em 1880, Kock introduziu os meios slidos em bacteriologia, adicionando gar aos mesmos. Os meios podem ser lquidos, slidos e semi-slidos, quanto funo pode ser: simples, seletivo e diferencial. Geralmente so meios slidos, utilizados para isolamento e identificao presuntiva de bactrias. Permitem o desenvolvimento de grupos de microrganismo com caractersticas relativamente diferentes. Estas diferenas podem ser notadas atravs de uma analise visual nas formas e colorao das colnias ou colorao do meio de cultura. MEIO SELETIVO E DIFERENCIAL: Podem estar combinadas as duas caractersticas no mesmo meio, so utilizados para a fcil identificao da colnia da bactria de interesse. Objetivo Fornecer noes bsicas sobre os meios de cultura Aprender a classificao dos meios de cultura e qual sua finalidade Aprender tcnica de semeadura de bactrias Observar diferenas entre as colnias de microrganismo

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MODELO DE RELATORIOS DE MICROBIOLOGIA Como fazer um relatrio e apresentar os resultados (folha padro _ Anexo 01) 1 Resumo uma breve sntese que dar a um hipottico leitor do relatrio uma idia sumarizada do trabalho neste descrito. Deve conter o que se fez como se fez e as concluses e/ou resultados principais que foram obtidos. Nunca se devem utilizar tabelas ou grficos, nem abreviaturas, exceto aquelas j institucionalizadas entre a comunidade cientfica (e.g. DNA, CBO, CQO). No dever ocupar mais do que pgina. 2 Introduo A introduo, tal como o nome indica, introduz o leitor ao problema estudado, apresenta uma descrio sucinta do estado atual dos conhecimentos sobre a matria investigada e justifica o interesse do trabalho realizado luz da problemtica em que se insere. Geralmente no so utilizadas figuras e dever ocupar 1-2 pginas. 3 Materiais e Mtodos Neste item so descritos os principais materiais utilizados (e.g. microrganismos, reagentes), mtodos (e.g. espectrofotometria), condies experimentais (e.g. temperatura de incubao) e equipamento (e.g. estufa de incubao). Normalmente no contm figuras nem tabelas. 4 Resultados Neste item so descritos os resultados observados (sem os analisar ou avaliar, sem tirar concluses e sem repetir o que consta no item dos Materiais e Mtodos), recorrendo a tabelas e/ou grficos para complementar o texto apresentado, com vista sua total compreenso. Note-se que nas tabelas a legenda colocada por cima, enquanto que, nas figuras e grficos a legenda colocada por baixo. 5 Discusso Na discusso analisam-se os resultados obtidos luz dos conhecimentos atuais (do que deveria ser esperado), discute-se a qualidade dos resultados em funo das condies utilizadas (e.g. fraca preciso nas determinaes, nmero insuficiente de rplicas) e, com base na interpretao dos resultados obtidos, apontam-se as concluses possveis. 6 Bibliografia Contm a lista das principais fontes de informao (e.g. livros, artigos cientficos, comunicaes, pginas da Internet) utilizadas na elaborao dos pontos 2, 3, 5 e 6, devendo ser identificados por: autores, ano de publicao, ttulo do artigo ou captulo e revista ou livro onde foram publicados incluindo o volume e as pginas. 7 Materiais Necessrios (lembrete) Cada aluno dever trazer para as aulas prticas de Microbiologia o jaleco, caderno de laboratrio onde devem registrar a informao considerada importante relativamente a cada trabalho prtico a realizar (e.g. cuidados a ter no manuseamento de reagentes, detalhes da execuo experimental, resultados obtidos).

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Anexo 01

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Anexo 02

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