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Identificación del transgen proteína CRY1AC endiferentes muestras de maíz, mediante PCRMayo 29, 20091
Identificación del transgen proteínaCRY1AC en diferentes muestras de maíz,mediante PCR
Universidad Nacional Autónoma de México.
Facultad de Estudios Superiores ZaragozaLaboratorio de Genética L-122, Campus IPérez Pérez José ManuelPérez Sevilla Alma BeatrizPérez Torres ViridianaEquipo 8, Grupo 2802
Introducción:
Un organismo transgénico es aquel que ha sido modificadogenéticamente (OMG). La modificación genética involucra launión de un gene de interés de un organismo donador y laadición de este dentro de un receptor para expresar dichacaracterística.Las técnicas de obtención de un transgénicos son:Químico: fosfato de calcioDirectoFísico: Microinyección,electroporacionIndirecto Virales: Retrovirus, adenovirusNo virales: Lipososmas
El maíz transgenico
El maíz resistente al ataque de insectos contiene ungen que codifica una proteína de
Bacillusthuringiensis
(proteina cry) que tiene accióninsecticida al ser capaz de unirse a receptoresespecíficos en el tubo digestivo de determinadosinsectos, interfiriendo con su proceso de alimentacióny causándoles la muerte
Bacillus thuringiensis
•
Bacilo gram positivo
•
Anaerobio facultativo, movil
•
Forma inclusiones cristalinas compuestas porprotoxinas, que contienen endotoxinas deactividad insecticida.
•
Es obtenida a partir de plasmidos de
B.Turingiensis
•
Produce un insecticida para el control deparacito
•
Se une a receptores específicos y la toxinaforma poros en la membrana apical delintestino de los insectos
•
Las proteínas Cry estan agrupadas en 28grupos y varios subgrupos Cada grupo muestrauna especificidad muy grande hacia ciertostipos de insectos.MECANISMO DE ACCION
•
Ingestión de inclusión
•
Protoxinas solubilizadas por el álcali delintestino
•
Proteólisis de la protoxina por proteasas delintestino
•
Unión de la toxina activada a receptores demembrana
•
Formación de poros en la membrana celularEn nueve muestras de maíz se realizo una extracciónde DNA, se cuantifico y mediante la técnica de PCRse aplifico la secuencia que codifica para la proteínaCry y mediante un corrimiento electroforetico sedemostró la presencia del trangen utilizando uncontrol positivo que contiene el plasmido para dichaproteínas esto se corroboro con un marcador de pesomolecular para el mismo.
Identificación del transgen proteína CRY1AC endiferentes muestras de maíz, mediante PCRMayo 29, 20092
Resultados:
Cuadro 1. Resultados de cuantificación de DNA(µg/µL) por equipo de las muestras de maíz.
Equipo 260 nm 280 nm Relación260/280ADNµg/µL
1
0.049 0.028 1.748 0.2425
2
0.173 0.093 1.851 0.8563
3
0.915 0.785 1.166 4.5292
4
0.333 0.332 1.073 1.6483
5
0.175 0.089 1.968 0.8662
6
0.254 0.132 1.917 1.2573
7
0.230 0.280 2.546 1.1385
8
-0.037 -0.047 0.782 -0.183*
9
0.137 0.095 1.445 0.67815
*: No se obtuvo presencia de DNA
Figura 1. Identificación de la toxina CRY1AC enmaiz en gel de acrilamida al 10%, muestras 1 al 5.
(+): Control positivo, MPM: Marcador de Peso Molecular.
Figura 2. Identificación de la toxina CRY1AC enmaiz en gel de acrilamida al 10%, muestras 6 al 9
(-): Control negativo, (+): Control positivo, MPM: Marcador dePeso Molecular.
Análisis de resultados:
Con base en la figura 1, El control positivo contiene elplasmido de que cofidica para dicha proteina, esto secorrobora con el marcador de peso molecular que seencuentra en el extremo derecho. Se observa que haypresencia de DNA que codifica para la toxinaCRY1AC en las muestras de los equipos 1 al 5 demaiz como se muestra en la Banda A. En laelectroforesis se observa que debajo de la banda Ahay una curva que puede corresponder a unacontaminación por alguna producto que posea menorpeso molecular, pero que no se puede identificarpuesto que no se tiene un marcador para dichoproducto.En la figura 2 se observa que los equipos 6, 7, 8, 9corresponden al marcador del gen CRY1AC, sinembargo no se puede verificar que realmente se poseaéste gen debido a que no se observa la banda en elcontrol positivo debido a una degradación del control.En cada una de las muestras se realizo una dilución1:100 y se cuantifico el DNA, para demostrar supresencia en el corrimiento electroforetico. Cabeseñalar que el equipo 8 en la cuantificación de DNAno se demostro la presencia de este Cuandro 1, sinembargo aparece la banda correspondiente al
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