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DOSAGE PLASMATIQUE DU DARUNAVIR PAR CLHP : VALIDATION ANALYTIQUE ET SUIVI THERAPEUTIQUE PHARMACOLOGIQUE
M. Berge, E. Rose, A. Barrail-Tran, V. Furlan, AM. Taburet CHU Kremlin-Bictre, 78 rue du Gnral Leclerc, 94275 Le Kremlin Bictre

Introduction
Le darunavir (DRV, Prezista) , nouvel inhibiteur de protase est indiqu : en coadministration avec le ritonavir (r) la posologie (DRV/r) de 600mg/100 mg * 2 / jour chez des patients VIH lourdement prtraits en chec thrapeutique Mtabolisme intestinal et hpatique par les CYP450 3A4 Substrat de la PgP Interactions mdicamenteuses Variabilits pharmacocintiques Lobjectif de ce travail est la mise au point du dosage plasmatique du DRV afin dassurer son suivi thrapeutique chez les patients infects par le VIH.
Fidlit n=6
C1 C2 C3 500 2500 5000

Rsultats
Validation analytique de la mthode
Slectivit

Mthode spcifique ! amprnavir : mme temps de rtention que l e darunavir

Linarit n=6

0-8000 ng / mL

Rptabilit
concentrations cibles moyenne n=6 435 2418 5065 erreur type 23 60 412 CV % 5,34 2,48 8,14

Reproductibilit
concentrations cibles C1 C2 C3 500 2500 5000 moyenne n=6 484 2499 5617 erreur Type 33 238 710 CV % 6,78 9,54 12,6

Matriel et mthodes
Dosage du DRV par CLHP en phase inverse
- talon interne utilis : quinoxaline (25 mg/L) - extraction liquide/liquide - 3 contrles de qualit internes (CQI) 500, 2500 et 5000 Matriel ng /mL
Chane CLHP avec dtecteur UV injecteur automatique WATERS avec

Concentrations cibles

moyenne 483 2499 5617

erreur type 33 238 710

erreur relative -3.37 -0.02 12.35

Exactitude n=6

C1 C2 C3

500 2500 5000

LQ

30 ng / mL (n=6, CV=14 %, exactitude : -0,6 %)

temprature ambiante sur 2 jours + 4 C sur 5 jours 3 cycles de conglation / dconglation en cours dextraction et aprs extraction solutions filles plasmatiques gamme 6 mois

Stabilit

Stable

Colonne : Phase inverse RP18e Type : Lichhrocart 250-4 mm avec phase Lichrospher 100 RP-18 endcapped 5 m Prcolonne Conditions chromatographiques Phase mobile Longueur donde Dbit de la phase mobile Run time Eau / Actonitrile (630 / 370 mL)
pH 7,5

Chromatogramme du DRV

Point de gamme 6 : [DRV] 8000 ng/mL

210 nm 1,2 mL / min 23 minutes

Concentrations plasmatiques de DRV observes

8000

Concentration de darunavir (ng/mL)

Critres de validation de la mthode - slectivit

- linarit - fidlit (rptabilit, reproductibilit) - exactitude - limite de quantification (LQ) - stabilit du DRV

7000

Pic
6000 5000 4000 3000 2000 1000 0

Phase dabsorption

Caractristiques des patients tudis

- n=10 patients - sexe ratio quilibr - ge moyen 45 ans - posologie de DRV/r : 600/100 mg 2fois/j - inhibiteurs de protase prcdemment prescrits :
100 80 60 % 40 20 0 lopinavir fosamprnavir 50 40 10 atazanavir

Rsiduel

Concentrations efficaces EC 50 = 550 ng/mL sur virus rsistant EC 90 = 200 ng/mL sur virus sauvage

Chez ces patients, les concentrations rsiduelles observes sont suprieures aux concentrations efficaces dtermines in vitro.

Conclusion
mthode permettant un dosage en routine du DRV concentrations obtenues cohrentes avec les donnes PK des essais cliniques marge thrapeutique du DRV tablir

XXIXmes Journes dEtude de Pharmacie Hospitalire APHIF- 22 et 23 octobre 2007