PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL ECUADOR ESCUELA DE BIOANALISIS Bioqumica Clnica MICROBIOLOGA Mgtr. Elena Granda M.

TEMA 3: Cultivos microbianos y coloracin GRAM Objetivo: El estudiante aprenda a: Utilizar cepas mantenidas en caldo BHI Realizar cultivos de estas muestras Diferenciar macroscpicamente y microscpicamente las caractersticas de cada una basndose en una coloracin GRAM. Introduccin
Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un medio slido. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias.

Materiales: Agar Nutritivo Caldo BHI (inoculado con diferentes cepas) Asas bacteriolgicas Placas preparadas Equipos Incubadora

Mecheros Procedimiento: Paso 1 1. A partir del caldo inoculado con un hisopo estril introducirlo en el tubo y remojarlo 2. Sacarlo quitando el exceso de lquido por las paredes del tubo Paso2: 1. La caja con el medio de cultivo debe ser rotulada con el mismo cdigo del tubo con el caldo. 2. Con el hisopo del paso 1, realizar un inculo en uno de los extremos centrales de la caja. 3. Desechar el hisopo en un frasco con desinfectante luego de quemarlo parcialmente en el mechero. 4. Con el asa estril realizar un estriamiento por agotamiento. Procedimiento de estra por agotamiento: 1. Sobre el inculo realizar estres seguidas 2. Esterilizar el asa 3. A partir de las dos ltimas estras realizar unas 4 estras empezando por un borde del trmino de las del inculo. 4. Esterilizar el asa, realizar el mismo paso anterior. 5. Realizar el ltimo paso en la cuarta estriacin. Paso 3 1. Incubar la caja sembrada en una incubadora a 35 grados centgrados por 24 a 48 horas 2. Observar morfologa macroscpica de las colonias y realizar coloracin GRAM Paso 4

Observar placas fijas con coloraciones.

Consulta: 1. Tipos de siembra microbiolgica. Fundamento de cada una 2. Tipos de asa para siembras de microorganismos en general. Funcin de cada una. 3. Coloracin GRAM. Historia y fundamentacin. 4. Medios: BHI y AGAR Nutritivo. Fundamentacin, ingredientes y uso. Bibliografa correspondiente