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BIOQUÍMICA - Doseamento das proteínas pelo método do bioreto (Relatório)

BIOQUÍMICA - Doseamento das proteínas pelo método do bioreto (Relatório)

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INSTITUTO POLITÉCNICO DE SANTARÉM
ESCOLA SUPERIOR AGRÁRIACURSO DE ENGENHARIA DA PRODUÇÃO ANIMALBIOQUÍMICA
 Doseamento das proteínaspelo método do bioreto(Relatório)
#2439
David Quintino#2466
Filipe Sampaio#2587
André Chucha
 
Resumo
 
Este trabalho teve como objectivo a determinação da quantidade de proteínanuma amostra. Para tal foi utilizada a espectroscopia de absorção molecular, maisconcretamente o método do Biureto. Esta reacção ocorre com todos os compostos quecontenham duas ou mais ligações peptídicas, formando-se um complexo azul púrpura.A concentração da proteína na amostra foi calculada a partir de uma curva decalibração feita usando uma solução proteica padrão, a solução de albumina de sorobovino (BSA) 2mg/mL.A equação da recta de calibração é y = 0,0371x + 0,0159 e através dela e dosvalores da absorvência para o tubo 6 e 7, podemos concluir que as suas concentraçõessão: 21,17 mg/mL e 8,277 mg/mL, respectivamente.Em relação à Lei de Lambert
Beer podemos concluir que existem desvios, poiso coeficiente de correlação (r) = 0,9878, quando deveria ser 0,9999.
 
Introdução Teórica
Os métodos espectroscópicos baseiam-se na absorção e/ ou emissão deradiação electromagnética por muitas moléculas, quando os seus electrões semovimentam entre níveis energéticos. A espectrofotometria baseia-se na absorção daradiação nos comprimentos de onda entre o ultra violeta e o infra vermelho.A chamada radiação luminosa corresponde a uma gama de comprimentos deonda que vai desde o ultra violeta ao infra vermelho no espectro da radiaçãoelectromagnética.O espectro do visível está contido essencialmente na zona entre 400 e 800 µm.Um espectrofotómetro é um aparelho que faz passar um feixe de luzmonocromática através de uma solução, e mede a quantidade de luz que foi absorvidapor essa solução. Usando um prisma o aparelho separa a luz em feixes com diferentescomprimentos de onda. Pode-se assim fazer passar através da amostra um feixe de luzmonocromática (de um único comprimento de onda, ou quase). O espectrofotómetropermite-nos saber que quantidade de luz é absorvida em cada comprimento de onda.O conjunto das absorvências dos vários comprimentos de onda para umcomposto chama-se espectro de absorção e varia de substância para substância, aespectrofotometria permite-nos, por exemplo, identificar substâncias com base no seuespectro como também quantificá-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida estárelacionada com a concentração da substância.Existe então princípios de absorção da luz:A absorção da luz é tanto maior quanto mais concentrada for a solução por elaatravessada;A absorção da luz é tanto maior quanto maior for a distância percorrida pelofeixe luminoso através das amostras.Juntando estes princípios temos a lei de Lambert
Beer: Abs = E. b. c

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