Prueba

Composicin

Indicadores

Reactivos de lectura

Fundamento La membrana de las bacterias contiene pptidoglicano. Cuando se adiciona el cristal violeta y lugol forman un complejo cristal violeta-yodo. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta-yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea. Se basa en la produccin bacteriana de una enzima oxidasa intracelular, esta reaccin de oxidasa se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidacin del citocromo reducido por el oxigeno molecular que a su vez, acta como un receptor de electrones en la parte terminal del sistema de transferencia de electrones. Reaccin qumica: Los colorantes de p-fenilendiamina son aminas aromticas primarias derivados, diamino del benceno, el citocromo oxidasa no reacciona directamente con el reactivo fenilendiamina pero oxida al citocromo C que a su vez oxida al reactivo, la fenilendiamina es metilada y cuantos mas grupos metilados se introducen en el radical amino el color es mas azul. Si se introducen tres grupos fenilos en lugar del metilo el color es aun ms oscuro. La catalasa actua como una enzima esencial de defensa biolgica contra la toxisidad del oxigeno. La catalasa es una enzima que descompone al perxido

Interpretacin

Tincin de Gram

Agua esteril Cristal violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina

Gram positivas: Moradas a azules Gram negativas: Rojas a rosas

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Oxidasa

Discos con N,N,N,N-tetrametil -p-fenilendiamina

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Positivo: coloracin azul marino Negativo: sin cambio de coloracin

Catalasa

Perxido de hidrogeno 30%

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Positivo: efervescencia burbujeo Negativo: sin cambios

O/F (oxidacion/fer mentacion)

Medio bsico de Hugh Leifson Peptona NaCl Fosfato de potasio Hidratos de carbono Agar Agua destilada

Azul de bromotimol Ph: verde a 7,0 amarillo a 6,0 azul a 7,6

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Gota suspendida

Agua esteril

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de hidrgeno en oxgeno y agua Se basa en la determinacin del metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono. Son necesarios dos tubos del medio para la prueba. El medio du un tipo se expone al aire y el otro se cubre con aceite mineral o parafina lquido. Las bacterias oxidativas producen acido solo en el tubo abierto expuesto al oxigeno atmosfrico; los microorganismos fermentadores producen cidos en ambos tubos; as bacterias no sacaroliticas son inertes en este medio y permanecen con un pH alcalino. Algunas bacterias son mviles por presentar flagelo, los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en nmero y posiciones variadas. La base de esta prueba es determinar si la bacteria es mvil o inmvil. En este medio se observa si la bacteria es capaz de fermentar glucosa y lactosa, si es as los carbohidratos forman cidos que hacen que vire el indicador del medio, adems si tiene produccin de acido sulfrico; el tiosulfato es un intermediario que reduce el sulfuro a H2S en el metabolismo de la bacteria, el tiosulfato remplaza al sulfato como fuente de azufre. El H 2S reacciona con el citrato de amonio ferrico, produciendo un precipitado insoluble negro. Tambin sirve para ver la produccin de gas, cualquier gas que produzca la bacteria. Medio empleado para la diferenciacin de la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y la produccin de cido sulfhdrico. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. Rojo de fenol es el indicador de pH, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se

O / F Amarillo/amarillo: fermentativo facultativo Amarillo/verde: oxidativo Verde/amarillo: fermentador extricto Azul/azul: no fermentador (usa peptonas) Positivo: Movimiento de un lado a otro del campo Negativo: sin movimiento o movimiento gausuano Gas: Positivo: cuarteado o botado el agar Negativo: sin cambios H2S: Positivo: coloracin negra Negativo: sin cambio Fermentacin de la sacarosa: Pico /flauta: Acido/acido fermentador Acido/alcalino no fermentador Alcalino/alcalino no sacarolitico Positivo para fermentacin: rojo Negativo: amarillo Gas: Positivo: cuarteado o botado el agar Negativo: sin cambios H2S: Positivo: coloracin negra Negativo: sin cambio

KiA (agar de hierro de Kinger)

Extracto de carne Peptona Glucosa Citrato frrico amnico Lactosa Cloruro sdico Tiosulfato sdico Extracto de levadura
Estracto de carne Polipeptona Cloruro de sodio lactosa Glucosa Sacarosa Sulfato de hierro Amonio Tiosulfato de sodio Agar

Rojo de fenol Ph: 6,8 amarillo 8,4 rojo

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TSI (hierro triple azucar)

Rojo de fenol Ph: 6,8 amarillo 8,4 rojo

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Urea (Stuart)

Fosfato monopotasico Fosfato disodico Extracto de levadura Urea Agua desionizada Peptona NaCl Fosfato monopotasico Glucosa Urea Agar agua destilada Sulfato de magnesio Fosfato monobsico Fosfato dipotasico Citrato de sodio NaCl Agar Agua desionizada Estearato de levadura Sulfato de amonio Fosfato di potsico Fosfato monopotasico NaDl Malonato de sodio Glucosa

Rojo de fenol Ph: 6,8 amarillo 8,4 rojo

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Urea (Cristensen)

Rojo de fenol Ph: 6,8 amarillo 8,4 rojo

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detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio. La hidrolisis de la urea es catalizada por la ureasa para dar dos molculas de amoniaco. La ureasa es una enzima microbiana vinculada con la descomposicin de los compuestos orgnicos. Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio. La hidrolisis de la urea es catalizada por la ureasa para dar dos molculas de amoniaco. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la descomposicin de los compuestos orgnicos.

Positivo: rojo rosado intenso en el pico de flauta Negativo: amarillo

Positivo: rojo rosado intenso en el pico de flauta Negativo: amarillo

Citratos

Azul de bromotimol Ph: verde a 7,0 amarillo a 6,0 azul a 7,6

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Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como nica fuente de carbono y compuesto amoniacales como nica fuente de nitrgeno

Medio sin inocular: color verde Positivo: azul de Prusia oscuro Negativo: sin cambios

Azul de bromotimol Ph: verde a 7,0 amarillo a 6,0 azul a 7,6 ----------------------

Malonatos

El malonato es un inhibidor enzimtico. El cido malnico se une a la enzima, ya que el cido malnico y el cido succnico son estructuralmente muy parecidos y ocupa los sitios activos; as, la enzima no puede combinarse con su sustrato, y bloquea la accin del acido succnico es necesario la activacin de la enzima-sustrato para la activacin del sustrato, para formar el cido fumrico. El cido succnico es el causante de la inhibicin de la succnico

Medio sin inocular: color verde Positivo: azul de Prusia oscuro Negativo: sin cambios

Agua desionizada

deshidrogenasa que interrumpe el ciclo de Krebs a menos que el microorganismo pueda utilizar al malonato como nica fuente de carbono. cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de levadura, peptona y triptena. Adems, la triptena aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio cido es amarillo. Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina decarboxilasa e indol La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculacin. La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo. La presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color prpura. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo La L-arginina sufre una descarboxilaciin para producir agmatina. La agmantina se degrada por dos vas, la accin de la enzima agmantasa rompe la molcula en dos compuestos: putresina y urea. Si la

MIO (motilidad indol ortinina)

Dextrosa Estracto de levadura Peptona Tripteina Clorhidrato de L-ornitina Agar Aceite mineral

purpura de bromocresol Ph: 6,3 purpura 5,2 amarillo 6,8 purpura

reactivo de Kovacs o de Erlich

Movilidad: -Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra. Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra. 2-Ornitina decarboxilasa: -Resultado positivo: color prpura. Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio. 3-Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloroamarillento

Arginina (Ar)

Peptona Extracto de carne Fosfato de piridoxal Glucosa

purpura de bromocresol Ph: 6,3 purpura

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Positivo: color purpura turbio-amarillopurpura apagado Negativo: sin cambios

Agua desionizada Acaeite mineral

5,2 amarillo 6,8 purpura

Peptona de gelatina

LIA (agar lisina)

Extracto de Glucosa Levadura Citrato de hierro y Amonio Tiosulfato de sodio Agar

Purpura de bromocresol Ph: 6,3 purpura 5,2 amarillo 6,8 purpura

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SIM (acido sulfhidrico, indol, motilidad)

Tripteina Peptona Sulfato de amonio y hierro Tiosulfato de sodio Agar

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reactivo de Kovacs o de Erlich

enzima ureasa esta presente, la urea es catabolizada formando dos molculas de amoniaco y CO 2. En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8. Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro. Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio. El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovac s o de Erlich,

Descarboxilacion de la lisina Positivo: color purpura turbio-amarillopurpura apagado Negativo: sin cambios H2S: Positivo: coloracin negra Negativo: sin cambio

H2S: Positivo: coloracin negra Negativo: sin cambio Movilidad: -Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la

Gelatina

Gelatina nutriente Carbono activado Agua corriente

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para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2 La mayora de los polmeros son demasiado grandes para ser transportados dentro de las clulas. Las bacterias excretan enzimas extracelulares que hidrolizan esos polmeros transportando al interior de la clula en monmeros que les sirven para crecer. La produccin de proteasas es evaluada por incorporacin de una protena (gelatina o casena) en un medio slido en placa. La placa se inunda con cido que precipita la proteina no hidrolizada. Algunas bacteris pueden usar nitratos como aceptor final de e- en la respiracin. el nitrato puede ser reducido a nitrito o en un paso ms a gases (xidos de nitrgeno).

lnea de siembra. Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra. Indol Positivo; anillo color rojo en la superficie Negativo: sin cambio

Positivo hay licuefaccin Negativo medio solido

Nitratos (reduccin de nitritos)

Peptona extracto de carne nitrato de potasio agua destilada

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alfanalfilami na y cido sulfanlico zinc

Hidrlisis del hipurato

Infusin de carne de corazn Casena Peptona de levadura NaCl Hipurato de sodio Agua destilada

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Ninhidrina Cloruro frrico

Las bacterias se inoculan en medios conteniendo nitrato potsico. El nitrito procedente de la reduccin de clulas puede detectarse aadiendo alfanalfilamina y cido sulfanlico produciendose un color rojo. Se puede saber si el nitrato puede haberse reducido a ms que a nitritos produciendose gas. Si al aadir zinc en polvo no hay color rojo es que no hay nitrato porque se ha reducido a gas (desnitrificacin) En el medio de prueba se usa una sal de hipurato que forma benzoato de sodio y lisinato de sodio por hidrolisis. Los productos finales del cido hipurico, cido benzoico y lisina son insolubles en agua; sus sales son solubles. La hipuricasa produce hidrolisis en la unin peptidica del acido hiprico. La hidrlisis del hipurato es detectada detectando cualquier producto final, el acido benzoico en el medio agregando una solucin de cloruro frrico acidificada ya que es

Positivo al agregar alfanalfilamina y cido sulfanlico Positivo Rojo Negativo: sin cambio Al agregar zinc Positivo: sin cambio Negativo: color rojo

Positiva: Precipitado que perdure por ms de 10 minutos Negativo sin cambios o que el precipitado desaparezca

sensible al mtodo y la lisina es detectada por el mtodo de ninhidrina

MR-VP: (Rojo de metilo y VogesProskauer)

Polipeptona Digerido pancretico de casena Dextrosa Fosfato de potasio Agua destilada

MR: Rojo de fenol ----------------------VP: KOH alfa-naftol

La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos finales cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol, acatoina). MR: ES una prueba cualitativa basada en el uso de indicador rojo de metilo que nos indica por que va metablica se fermento la glucosa. La coloracin roja nos indica que la glucosa es metabolizada va cidos mixtos. VP: Se basa en la deteccin de acetoina un producto final neutro derivado de la glucosa. En la prueba el primer reactivo de lectura agregado es el catalizador .naftol que acta como un intensificador de color, lo que aumenta la especificidad de la reaccin, el .naftol se combina con el producto de la reaccin del diacetilo y con el compuesto de tipo guanidina presente en la peptona, el KOH el 40% ayuda a los absorcin de CO2, estos dos reactivos ayuda a la reaccin para que produzca el diacetilo que es una sustancia reactante activa. La prueba de VP esta basada en la reaccin de diacetilo y el ncleo de guanidina aqu presente en la argunina. Es necesario un grupo amino libre disponibleen la molcula de guanidina proveniente de la arginina en la peptona para el desarrollo de color. Cundo se mezclan en proporciones correctas diacetilo peptona y .naftol, se desarrolla de manera casi instantnea una coloracin roja en la superficie del medio. La fermentacin es un proceso metablico, las bacterias que fermentan hidratos de carbono son por lo general anaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentacin de un hifrato de carbono es

MR: Positivo: Negativo: sin cambios VP: Positivo: anillo rojo en la superficie que aparesca y persista en 10 minutos Negativo: sin cambios o desaparece el anillo en el transcurso de 10 minutos

Fermentacin de carbohidratos generalmente

Caldo bsico Peptona..10g carbohidrato al 1% Extracto de carne1g

Rojo de fenol Ph: 6,8 amarillo 8,4 rojo

Medio sin inocular: naranja rojizo Positivo: amarillo

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son: salicina manitol maltosa.

NaCl....5g Agua destilada..1L

Hidrlisis de Bilis Esculina

Peptona de casena Peptona de carne Extracto de levadura Esculina Oxgall (bilis) NaCl Citrato de hierro y amonio Citrato de sodio Azida sdica Agar Agua deshionizada

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Factor CAMP (son las siglas de los descubridores de dicho factor)

Agar sangre:

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degradada y descompuesto en dos molculas de carbono triosas que son nuevamente degradadas. Los productos finales varan con cada especie bacteriana, del carbohidrato y del sistema enzimtico de la especie. Los acetales se hidrolizan con facilidad por la accin de los cidos la base de la prueba de la esculina es la hidrlisis en la ligadura de la esculina a esculetina, por una -glucosidasa constitutiva la cual libera una molcula de glucosa La esculetina reacciona con una sal de hierro 3 para formar un complejo fenolico de color castao oscuro o negro. El citrato frrico y de amonio es incorporado al medio de bilis y esculina de 0.05% como indicador de hidrlisis de la esculina y produce la formacin de esculetina, la hidrlisis se produce en 2 pasos: a) Crecer en presencia de una concentracin particular de bilis. b) Producir esculinasa para hidrolizar la esculina. Una protena denominada factor K que interactua con la -hemolisina, producida secretada por Staphylococos aerus, produce aumento sinergico de la hemolisis, y se ve una zona en forma de punta de fleha , donde se observa una mayor hemolisis cerca de la unin de las dos estrias de desarrollo.

Negativo: sin cambios o rojo

Positivo: Presipitado negro Negativa: sin cambios

Positiva: punta de flecha Negativo: no hay sinergismo

Antibiograma

Discos con: Bacitracina Vancomisina Optoquina Penicilina Amikasina Clorafenicol

Medio de cultivo: Muller Hinton

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Observar la resistencia a los antibiticos de la cepas, observando si hay o no crecimiento bacteriano al rededor de los discos.

Sensible: halo de inhibicin de acuerdo con el antibitico. Resistente: sin halo o halo menor de acuerdo al antibiotico.

Coagulasa

Plasma de humano o de conejo

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Detectan ambas coagulasas la libre y la ligada siendo la nica distincin entre ambas la antignica. La coagulasa libre extra celular reacciona con una sustancia libre en el plasma (factor del suero), denominado tambin factor de reaccin de la coagulasa (CRF), una sustancia termoestable similar a

Positivo: formacin de un coagulo Negativo: sin cambios

Agar TCBS (tiosulfato citrato bilis sacarosa)

Extracto de Levadura Sacarosa Peptona de Casena Cloruro de Sodio Peptona de Carne Tiosulfato de Sodio Citrato de Sodio Bilis disecada Colato de Sodio Citrato de Hierro Agar Bacteriolgico

Azul de Timol. Azul de Bromotimol. (Ph. 7,0 verde., 6,0 amarillo., 7,6 azul)

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la trombina. El CFR es en activador, una molcula derivada o modificada de la trombina. La coagulasa libre extracelular reacciona con el CRF formando un complejo. Este complejo acta de manera indirecta para convertir el fibringeno en fibrina, durante la coagulacin se liberan pptidos similares a partir del fibringeno y del complejo coagulasa-CRF, la diferencia principal es que el CRF que reacciona con la coagulasa no requiere iones de calcio para formar el coagulo y es inestable a la heparina. El Agar TCBS, por las iniciales de Tiosulfato-CitratoBilis-Sacarosa, es preparado de acuerdo con la frmula de Kobayashi y col. siendo una modificacin del medio de Nakanishi. En el Agar TCBS crecen todas las especies de Vibrio patgenas para el humano excepto V. hollisae. Las muestras pueden ser de materiales tanto clnicos como no clnicos. El Agar TCBS es altamente selectivo para las especies de Vibrio debido a sus componentes nutricionales y a la alta concentracin de sales y es ampliamente utilizado en placa para el primoaislamiento. Este medio junto en el Agua Peptonada Alcalina es utilizado para el aislamiento de V.cholerae y otras especies a partir de muestras fecales. En este mediio el extracto de levadura y las peptonas proporcionan la fuente de nitrgeno, vitaminas y aminocidos. El citrato de sodio, el tiosulfato de sodio y la bilis actan como agentes inhibidores de microorganismos Gram positivos y coliformes dando alcalinidad al medio. La sacarosa es el carbohidrato fermentable. El cloruro de sodio promueve el crecimiento. El tiosulfato de sodio es la fuente de sulfuro y el citrato de hierro es un indicador para detectar la produccin de H2S. El azul de timol y de bromotimol acta como indicadores de pH. El agar bacteriolgico es agregado como agente solidificante. En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la

Despus de 18 a 24 horas de incubacin, la sacarosa es fermentada por los vibrios que dan colonias de tamao mediano, lisas, opacas, de color amarillo. V.vulnifucus no fermenta la sacarosa presentando una coloracin verde.

Agar MC (Mac Conkey)

Peptona Pluripeptona

Rojo neutro

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MicroorganismosColonias Escherichia coli Rojas con halo turbio

Lactosa Mezcla de sales biliares Cloruro de sodio Agar Rojo neutro Cristal violeta

lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Klebsiella pneumoniae Rosadas mucosas Salmonella typhimurium Incoloras, transparentes Shigella flexneri Incoloras, transparentes Proteus mirabilis Incoloras, transparentes Enterococcus faecalis Diminutas, incoloras, opacas

Microorganismos

Caractersticas de las colonias Amarillo-verdosas sobre fondo amarillento Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo Crecimiento inhibido Rosas, blancas o transparentes sobre fondo rojo Crecimiento inhibido Crecimiento inhibido

Agar VB (Verde brillante)

Plurepetona Extracto de levadura Cloruro de sodio Lactosa Sacarosa Rojo de fenol Verde brillante agar

Rojo de fenol

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En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrgeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay produccin de cido a partir de la fermentacin de azcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el verde brillante acta como agente selectivo

Escherichia coli ATCC 25922 Salmonella enteritidis ATCC 13076 Salmonella typhi Salmonella typhimurium ATCC 14028 Shigella flexneri. ATCC 12022 Staphylococcus aureus ATCC 25923

Agar SS (SanmonelaShigella)

Pluripeptona extracto de carne lactosa mezcla de sales biliares citrato de sodio agar verde brillante rojo neutro

Rojo neutro

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Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.

Microorganismo Caractersticas s de las colonias

Salmonella Transparente typhimurium s, centro ATCC 14028 negro Shigella Incoloras flexneri Shigella sonnei Incoloras Proteus Transparente mirabilis ATCC s, centro 43071 negro Escherichia coli Rosadas a ATCC 25922 rojas

La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de hierro XLD Agar es un medio selectivo y de diferenciacin. Contiene extracto de levadura como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los microorganismos gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prcticamente todos los entricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciacin de dicha especie. La lisina se incluye para permitir la diferenciacin del grupo Salmonella de los organismos no patgenos, dado que, sin lisina, Salmonella fermentara rpidamente la xilosa y no se distinguira de las especies no patgenas. Cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada por la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino que imita la reaccin de Shigella. Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes positivos a la lisina, se aaden lactosa y sacarosa para producir cido en exceso1. Para aumentar la capacidad de diferenciacin de la frmula, se incluye un sistema indicador de H2S, formado por tiosulfato sdico y citrato frrico amnico, para la visualizacin del cido sulfhdrico producido, lo que origina la formacin de colonias con centros de color negro. Los organismos no patgenos no productores de H2S no descarboxilan la lisina; por tanto, la reaccin cida producida por dichos organismos evita el oscurecimiento de las colonias, lo que sucede slo con pH alcalino o neutro

Klebsiella Rosadas pneumoniae cremosas y ATCC 700603 mucosas

Cepas Salmonella Typhimurium

Agar XLD (Xilosa, lisina, desoxicolato)

Xilosa L-lisina Lactosa Sacarosa NaCl Extracto de lavadura Desoxicolato de sodio Tiosulfato de sodio Citrato frrico amonio

Salmonella Abony

Shigella flexneri

Rojo de fenol

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Shigella sonnei

Enterococcus faecalis Escherichia coli

Proteus mirabilis

Resultados del crecimiento Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas con centros de color negro Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas con centros de color negro Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas Crecimiento de bueno a excelente; colonias rojas Inhibicin de parcial a completa Inhibicin de parcial a completa; colonias de amarillas a rojo amarillentas Crecimiento; colonias de color rojo carmes con centros negros, proliferacin inhibida

Microorganismos Escherichia coli

Agar EMB (Eosina asul

Peptona Lactosa

Azulde metileno

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La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces

Klebsiella pneumoniae

Tipo de Colonia Verdosas con brillo metlico y centro negro azulado Mucosas, rosa prpura, confluentes

de metileno)

Sacarosa Fosfato dipotasico Agar eosina

Agar AST (agar soya trpticaseina)

Peptona de Casena Peptona de Soya Cloruro de Sodio Agar Bacteriolgico

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de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. En este medio las peptonas proveen la fuente de nitrgeno y minirales. El azcar de la Peptona de Soya provee la fuente de carbohidratos. El Cloruro de Sodio tiene su funcin en el balance osmtico y el Agar es incorporado como agente solidificante. La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis. La frmula de este medio est desarrollada para favorecer la seleccin de P. aeruginosa y estimular la formacin de pigmentos. Es ste un medio muy semejante al King A, en el cual el cloruro de magnesio

Proteus mirabilis Enterococcus faecalis Shigella flexneri Salmonella typhimurium

Incoloras Incoloras, pequeas, puntiformes Incoloras Incoloras

crecimiento

Agar AS (agar sangre)

Infusin de musculo de corazn Peptona Nacl Agar Sangre de carnero

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Hemolisis Hemolisis Hemolisis

Agar cetrimida

Peptona de gelatina Cloruro de magnesio Sulfato de potasio

Microorganismos Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli

Crecimiento Bueno - excelente Inhibido

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Agar cetrimida

y el sulfato de potasio promueven la formacin de piocianina, pioverdina y piomelanina de P. aeruginosa. La cetrimida es un detergente catinico que acta como agente inhibidor, libera el nitrgeno y el fsforo de las clulas de casi toda la flora acompaante, aunque inhibe tambin algunas especies de Pseudomonas.

Staphylococcus aureus

Inhibido

Bibliografa: Mac FADDIN; 2003; Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de inters biolgico ; tercera edicin; editorial MEDICA PANAMERICANA: Montevideo, Uruguay; p 850. KONEMAN; 2003; diagnostico microbiolgico quinta edicin, editorial MEDICA PANAMERICANA, Madrid, Espaa, p 1691 NOTA: LAS PRUEBAS BIOQUIMICAS TIENEN MUCHAS VARIANTES E INTERPRETACIONES ESPECIALES EN ALGUNOS CASOS, AQUI SOLO SE MENCIONAN DE MANERA GENERAL LAS MA COMUNES.