LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

REAKSI UJI PROTEIN

NAMA NIM KELOMPOK ASISTEN

: RR.DYAH RORO ARIWULAN : H 411 10 272 : IV (EMPAT) : ASMAN KUMIK

HARI/TANGGAL : RABU/26 OKTOBER 2011

LABORATORIUM BIOKIMIA JURUSAN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 2011

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Protein merupakan salah satu unsur terpenting penyusun makhluk hidup. Seperti halnya unsur lainnya seperti karbohidrat, protein juga memiliki sifat dan fungsi. Sifat-sifat dan fungsi protein ditentukan oleh jenis dan urutan asam amino. Beberapa fungsi utama protein dalam organisme kehidupan antara lain; sebagai bahan penyusun selaput sel dan dinding sel, jaringan pengikat, pembentuk membran sel, mengangkut molekul-molekul lain (hemoglobin) dan sebagai zat antibodi. Di dalam kehidupan, protein memegang peranan yang penting pula. Proses kimia dalam tubuh dapat berlangsung dengan baik karena adanya enzim, suatu protein yang berfungsi sebagai biokatalisator. Kita dapat memperoleh protein dari bahan makanan yang banyak mengandung protein, misalnya pada hewan terkandung protein hewani, sedangkan pada tumbuhan terkandung protein nabati. Protein merupakan polipeptida berbobot molekul tinggi yang terdapat secara alami. Polipeptida yang memiliki hanya asam amino saja digolongkan sebagai protein sederhana. Protein terkonjugasi mengandung komponen bukan asam amino yang dikenal sebagai gugus prostetik di samping kerangka utama asam amino. Dalam ilmu Kimia, pencampuran atau penambahan suatu senyawa dengan senyawa yang lain dikatakan bereaksi bila menunjukkan adanya tanda

terjadinya reaksi, yaitu: adanya perubahan warna, timbul gas, bau, perubahan suhu, dan adanya endapan. Pencampuran yang tidak disertai dengan tanda demikian, dikatakan tidak terjadi reaksi kimia. Ada beberapa reaksi khas dari protein yang menunjukkan efek/tanda terjadinya reaksi kimia, yang berbeda-beda antara pereaksi yang satu dengan pereaksi yang lainnya. Semisal reaksi uji protein (albumin) dengan Biuret test yang menunjukkan perubahan warna, belum tentu sama dengan pereaksi uji lainnya. Untuk membuktikan kebenaran teori tersebut maka dianggap penting melakukan percobaan ini

1.2 Maksud dan Tujuan Percobaan 1.2.1 Maksud Percobaan Untuk mengetahui dan menguji kandungan protein dalam senyawa sampel. 1.2.2 Tujuan Percobaan 1. Untuk mengidentifikasi adanya protein dengan tes biuret. 2. Untuk mengidentifikasi adanya protein dengan tes pengendapan logam. 3. Untuk mengidentiikasi adanya protein dengan tes pengendapan dengan alkohol.

1.3 Prinsip Percobaan Reaksi Biuret Ikatan peptida yang menyusun protein dalam suasana basa akan berwarna ungu dengan Cu. Pengendapan dengan Logam Reaksi ion logam dengan protein mengakibatkan terjadinya endapan. Pengendapan dengan Alkohol menyebabkan penurunan kelarutan protein akibat penambahan pelarut organik.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

Protein adalah molekul raksasa yang terdiri dari satuan-satuan kecil penyusunnya yang disebut asam amino yang tersusun dalam urutan tertentu, dengan jumlah dan struktur tertentu. Molekul-molekul ini merupakan bahan pembangun sel hidup. Protein yang paling sederhana terdiri atas 50 asam amino, tetapi ada beberapa protein yang memiliki ribuan asam amino. Hal yang terpenting adalah ketidakhadiran, penambahan, atau penggantian satu saja asam amino pada sebuah struktur protein dapat menyebabkan protein tersebut menjadi gumpalan molekul yang tidak berguna. Setiap asam amino harus terletak pada urutan yang benar dan struktur yang tepat (Poedjiadi, 1994). Protein yang terdapat dalam makanan kita dicernakan dalam lambung dan usus menjadi asam-asam amino, yang diabsorsi dan dibawa oleh darah ke hati. Sebagian asam amino diambil oleh hati, sebagian lagi diedarkan ke dalam jaringan-jaringan di luar hati. Protein dalam sel-sel tubuh dibentuk dari asam amino. Bila ada kelebihan asam amino dari jumlah yang digunakan untuk biosintesis protein, kelebihan asam amino akan diubah menjadi asam keto yang dapat masuk kedalam siklus asam sitrat atau diubah menjadi urea. Hati merupakan organ tubuh dimana terjadi reaksi katabolisme maupun anabolisme. Asam amino yang dibuat dalam hati, maupun yang dihasilkan dari proses katabolisme protein dibawa oleh darah ke dalam jaringan untuk digunakan. Asam amino yang terdapat dalam darah berasal dari tiga sumber, yaitu absorpsi melalui dinding usus, hasil

penguraian protein dalam sel dan hasil sintesis asam amino dalam sel (Poedjiadi, 1994). Asam amino adalah monomer protein yang mempunyai dua gugus fungsi yaitu gugus amino dan gugus hidroksil. Jumlah asam amino yang terdapat di alam ada beratus ratus jumlahnya, namun yang diketahui ikut membangun protein hanya sekitar 20 macam. Sifat asam amino antara lain memiliki titik leleh di atas 200 C, larut dalam senyawa polar dan tidak larut dalam senyawa nonpolar serta memiliki momen dipol yang besar (Anonim a, 2011). Beberapa Reaksi Uji Protein (Page, 1989) : A. Percobaan berdasarkan reaksi warna: 1) Percobaan kadar-N Kapur natron, yaitu campuran NaOH dan Ca(OH)2 dalam tabung reaksi dengan larutan protein dipanaskan. Keluarlah Amoniak dan

Amina.Lakmus merah yang dibasahi menjadi biru. 2) Reaksi Xantoprotein Larutan asam nitrat pekat ditambahkan dengan hati-hati ke dalam larutan protein. Setelah dicampur terjadi pengendapan putih yang dapat berubah menjadikuning apabila dipanaskan.. reaksi yang terjadi ialah nitrasi pada inti Benzen yang terdapata pada molekul protein. Jadi, reaksi ini positif untuk protein, fenilalanin dan triptofan. Kulit kita bila kena asam nitrat berwarna kuning, itu juga karena terjadi reaksi xantoprotein ini. 3) Reaksi Millon Pereaksi Millon adalah larutan merkuro dan merkuri nitrat dalam asam nitrat, apabila pereaksi ini ditambahkan pada larutan protein, akan

menghasilkan endapan putih yang dapat berubah menjadi merah oleh pemanasan. Pada dasarnya reaksi ini positif untuk fenol-fenol, karena terbentuknya senyawa merkuri dengan gugus hidroksifenil yang berwarna. Protein yang mengandung tirosin akan memberikan reaksi positif. 4) Reaksi Biuret Larutan Protein + NaOH + CuSO4 lembayung

Berlaku untuk senyawaan yang mempunyai jumlah ikatan peptida > 1. Reaksi ini dapat dipakai untuk penentuan protein secara kualitatif dan kuantitatif. Beberapa reaksi uji terhadap protein, tes biuret merupakan salah satu cara untuk mengidentifikasi adanya protein, dalam larutan basa biuret memberikan warna violet dengan CuSO4 karena akan terbentuk kompleks Cu2+ dengan gugus CO dan gugus NH dari rantai peptida dalam suasana basa. Pengendapan dengan logam diketahui bahwa protein mempunyai daya untuk menawarkan racun. Salting out, apabila terdapat garam-garam anorganik alam presentase tinggi dalam larutan protein, maka kelarutan protein akan berkurang, sehingga mengakibatkan pengendapan. Pengendapan dengan alkohol, penambahan pelarut organik seperti aseton atau alkohol akan menurunkan kelarutan protein pada kedudukan dan distribusi dari gugus hidrofil polar dan hidrofob polar di dalam molekul hingga menghasilkan protein yang dipol (Tim Dosen Kimia, 2011). Fungsi protein di dalam tubuh kita sangat banyak, bahkan banyak dari proses pertumbuhan tubuh manusia dipengaruhi oleh protein yang terkandung di dalam tubuh kita. Di bawah ini beberapa fungsi protein yaitu (Anonim b, 2011): a. Sebagai enzim

Hampir semua reaksi biologis dipercepat atau dibantu oleh suatu senyawa makromolekul spesifik yang disebut enzim, dari reaksi yang

sangat sederhana seperti reaksi transportasi karbon dioksida sampai yang sangat rumit seperti replikasi kromosom. Protein besar peranannya terhadap perubahanperubahan kimia dalam sistem biologis. b. Alat pengangkut dan penyimpan Banyak molekul dengan MB kecil serta beberapa ion dapat diangkut atau dipindahkan oleh protein-protein tertentu. Misalnya hemoglobin mengangkut oksigen dalam eritrosit, sedangkan mioglobin mengangkut oksigen dalam otot. Pengatur pergerakan Protein merupakan komponen utama daging, gerakan otot terjadi karena adanya dua molekul protein yang saling bergeseran. c. Penunjang mekanis Kekuatan dan daya tahan robek kulit dan tulang disebabkan adanya kolagen, suatu protein berbentuk bulat panjang dan mudah membentuk serabut. Pertahanan tubuh atau imunisasi Pertahanan tubuh biasanya dalam bentuk antibodi, yaitu suatu protein khusus yang dapat mengenal dan menempel atau mengikat bendabenda asing yang masuk ke dalam tubuh seperti virus, bakteri, dan sel- sel asing lain. d. Media perambatan impuls syaraf Protein yang mempunyai fungsi ini biasanya berbentuk reseptor, misalnya rodopsin, suatu protein yang bertindak sebagai reseptor

penerima warna atau cahaya pada sel-sel mata. e. Pengendalian pertumbuhan

Protein

ini

bekerja

sebagai

reseptor

(dalam

bakteri)

yang

dapat

mempengaruhi fungsi bagian-bagian DNA yang mengatur sifat dan karakter bahan Struktur asam amino secara umum adalah satu atom C yang mengikat empat gugus: gugus amina (NH2), gugus karboksil (COOH), atom hidrogen (H), dan satu gugus sisa (R, dari residue) atau disebut juga gugus atau rantai samping yang membedakan satu asam amino dengan asam amino lainnya. Atom C pusat tersebut dinamai atom C ("C-alfa") sesuai dengan penamaan senyawa bergugus karboksil, yaitu atom C yang berikatan langsung dengan gugus karboksil. Oleh karena gugus amina juga terikat pada atom C ini, senyawa tersebut merupakan asam -amino. Asam amino biasanya diklasifikasikan berdasarkan sifat kimia rantai samping tersebut menjadi empat kelompok. Rantai samping dapat membuat asam amino bersifat asam lemah, basa lemah, hidrofilik jika polar, dan hidrofobik jika nonpolar (Anonim a, 2010). Dari struktur umumnya, asam amino mempunyai dua gugus pada tiap molekulnya, yaitu gugus amino dan gugus karboksil, yang digambarkan sebagai struktur ion dipolar. Gugus amino dan gugus karboksil pada asam amino menunjukkan sifat-sifat spesifiknya. Karena asam amino mengandung kedua gugus tersebut, senyawa ini akan memberikan reaksi kimia yang yang mencirikan gugus-gugusnya. Sebagai contoh adalah reaksi asetilasi dan esterifikasi. Asam amino juga bersifat amfoter, yaitu dapat bersifat sebagai asam dan memberikan proton kepada basa kuat, atau dapat bersifat sebagai basa dan menerima proton dari basa kuat (Girindra, 1986).

Semua asam amino yang ditemukan pada protein mempunyai ciri yang sama, gugus karboksil dan amino diikat pada atom karbon yang sama. Masingmasing berbeda satu dengan yang lain pada gugus R-nya, yang bervariasi dalam struktur, ukuran, muatan listrik, dan kelarutan dalam air. Beberapa asam amino mempunyai reaksi yang spesifik yang melibatkan gugus R-nya (Girindra, 1986). Melalui reaksi hidrolisis protein telah didapatkan 20 macam asam amino yang dibagi berdasarkan gugus R-nya, berikut dijabarkan penggolongan tersebut : asam amino non-polar dengan gugus R yang hidrofobik, antara lain Alanin, Valin, Leusin, Isoleusin, Prolin, Fenilalanin, Triptofan dan Metionin. Golongan kedua yaitu asam amino polar tanpa muatan pada gugus R yang beranggotakan Lisin, Serin, Treonin, Sistein, Tirosin, Asparagin dan Glutamin. Golongan ketiga yaitu asam amino yang bermuatan positif pada gugus R dan golongan keempat yaitu asam amino yang bermuatan negatif pada gugus R. Dari ke-20 asam amino yang ada, dijumpai delapan macam asam amino esensial yaitu valin, leusin, Isoleusin, metionin, Fenilalanin, Triptofan, Treonin, dan Lisin. Asam amino essensial ini tidak bisa disintesis sendiri oleh tubuh manusia sehingga harus didapatkan dari luar seperti makanan dan zat nutrisi lainnya (Girindra, 1986).

BAB III METODE PERCOBAAN

3.1 Bahan Bahan yang digunakan dalam percobaan ini adalah NaOH 2,5 M, CuSO4 0,01 M, HgCL2 0,2 M, (CH3COO)2Pb 0,2 M, Larutan albumin, HCl 0,1 M, NaOH 0,1 M, Etanol 95 % dan buffer pH 4,7, larutan asam amino (glisin, asam aspartat, alanin, albumin).

3.2 Alat Alat yang digunakan dalam percobaan ini adalah tabung reaksi, rak tabung, pipet tetes, pipet skala, sikat tabung.

3.3 Prosedur Kerja 3.3.1 Tes Biuret 3 ml larutan protein ditambah dengan 1 ml NaOH 2,5 M, dicampurkan dengan baik, ditambahkan dengan setetes CuSO4 0,01 M kemudian dicampurkan, jika timbul warna, ditambahkan lagi setetes atau lebih CuSO4, diulangi percobaan ini dengan menggunakan larutan asam amino. 3.3.2 Pengendapan dengan Logam 3 ml larutan protein ditambahkan dengan 5 tetes HgCl2 0,2 M. Ulangi percobaan dengan menggunakan (CH3COO)2Pb. 3.3.3 Pengendapan dengan Alkohol Tabung I diisi dengan 2,5 ml larutan albumin lalu ditambahkan dengan 0,5 ml HCl 0,1 M dan3 ml etanol 95 %. Tabung II diisi dengan 2,5 ml larutan albumin

lalu ditambahkan dengan 0,5 ml NaOH 0,1 M kemudian ditambahkan dengan 3 ml Etanol 95 %. Tabung III diisi dengan 2,5 ml larutan albumin lalu ditambahkan dengan 0,5 ml buffer asetat pH 4,7 kemudian ditambahkan dengan 3 ml etanol 95 %.

BAB V PENUTUP

5.1 Kesimpulan Adapun kesimpulan dari percobaan ini adalah sebagai berikut: 1. Pada reaksi uji protein dengan tes Biuret bereaksi positif dengan menghasilkan larutan yang berwarna violet/ungu. 2. Pada reaksi uji protein dengan penambahan logam berat seperti logam Hg dan Pb bereaksi positif dengan adanya pengendapan. 3. Pada reaksi uji protein dengan pengendapan alkohol bereaksi positif pada suasana asam dan basa serta tergantung pada pH reaksi.

5.2 Saran Untuk asisten dan laboratorium sudah baik, sedang untuk percobaan mungkin bisa ditambahkan asam amino lain sebagai pembanding.

DAFTAR PUSTAKA

Anonim a, 2011, Asam Amino. http://id.wikipedia.org/wiki/asam_amino, diakses tanggal 21 oktober 2011,pukul 18.00 WITA. Anonim b, 2011, Fingsi protein. http://chem-is-try.org/fungsi_protein , diakses tanggal 28 oktober 2011,pukul 20.15 WITA. Fessenden, Ralph J., Joan S. Fessenden, 1997, Dasar-dasar Kimia Organik, Binarupa Aksara, Jakarta. Girindra, A., 1986, Biokimia I, Gramedia, Jakarta. Page, D., S., 1998, Prinsip-prinsip Biokimia, Erlangga, Jakarta. Poedjiadi, A., 1994, Dasar-dasar Biokimia, Universitas Indonesia Press, Jakarta. Tim Dosen Kimia., 2011, Penuntun Praktikum Biokimia Umum, Laboratorium Biokimia, Universitas Hasanuddin, Makassar. Winarno, F., G., 1991, Kimia Pangan dan Gizi, Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.

LEMBAR PENGESAHAN

Makassar, 26 Oktober 2011

Asisten

Praktikan

ASMAN KUMIK

RR.DYAH RORO ARIWULAN

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil 4.1.1 Tes Biuret CuSO4 0,01 M berlebih Biru Biru tua bening Ungu muda(violet)

Larutan contoh Glisin Alanin Asam aspartat Albumin

NaOH 2,5 M Bening Bening Bening Bening

CuSO4 0,01 M Biru Biru Bening Bening keunguan

4.1.2 Pengendapan dengan Logam No 1. 2. 3. Larutan contoh Glisin Alanin Albumin HgCl2 0,2 M Bening Bening (CH3COO)2Pb Bening Bening kekuningan, pekat,

Putih pekat + endapan Putih putih

endapan Bening

4.

Asam Aspartat

Bening

4.1.3 Pengendapan dengan Alkohol Larutan Contoh Tabung I Putih keruh Tabung II Terbentuk 2 lapisan Tabung III Terbentuk 2 Lapisan, endapan

4.2 Reaksi 4.2.1 Tes Biuret Albumin O ll O ll

2 H2N - CH-C - NH-CH - C - OH + 2 NaOH + CuSO4 R R n

CH - C o

NH - CH

Cu2+ O CH - NH C - Cu

Serin 2 CH - CH-COOH + 2 NaOH + CuSO4 l l

OH NH2 Glisin O H-CH-C-OH + NaOH NH2 O H-CH-C-ONa + H2O + CuSO4 NH2

Alanin H3C - CH-COOH + 2 NaOH + CuSO4 l NH2

4.2.2 Pengendapan dengan Logam HgCl2 O O O

2H2N-CH-C - NH-CH-C - NH-CH- C -OH + HgCl2 R O R O n R O

2H2N-CH-C - NH-CH-C - NH-CH- C- O R R n R Hg2+ O O O + 2 HCl

2H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C - O R Serin CH2 CH - COOH + l l HgCl2 R n R

OH NH2

Glisin H - CH-COOH + HgCl2 l NH2

Alanin H3C-CH COOH + HgCl2 l NH2

(CH3COO)2 Pb O ll O ll

2 H2N - CH-C - NH-CH - C - OH + (CH3COO)2 Pb R R n

O ll

O ll

H2N - CH-C NHCH - C - O R n Pb6+ + H+ + CH3COO -

O ll

O ll

H2N - CH-C N CH - C - O R R n

Glisin H - CH-COOH l NH2 + (CH3COO)2 Pb

Alanin H3C-CH COOH + (CH3COO)2 Pb l NH2

4.2.3 Pengendapan dengan Alkohol NaOH O O O

H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C OH + OHR O R O n R O

H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C O- + C2H5OH R R n R

H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C OC2H5 + OH- + H2O R R n R

HCl O O O

H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C OH + H+ R O R O n R O

H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C +OH2 + C2H5OH R O R O n R O

H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C OC2H5 + H+ + H2O R Buffer pH 4,7 O O O R n R

H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C OH + C2H5 OH R O R O n R O

H2N-CH-C - NH-CH-C - NH- CH- C OC2H5 + H2O R R n R

4.3 Pembahasan 4.3.1 Tes Biuret Tes biuret merupakan salah satu tes uji protein, bekerja pada suasana basa, dan akan memberikan perubahan warna pada larutan yang diuji menjadi berwarna violet dengan CuSO4 , karena terbentuk kimpleks Cu2+ dengan gugus CO dan gugus NH dari rantai peptida dalam suasana basa. Pada tes biuret ini, penambahan NaOH 2,5 M akan mengendapkan protein pada larutan Albumin, hal ini ditandai dengan bertambah jernihnya larutan albumin yang keruh. Pada larutan asam amino, penambahan NaOH 2,5 M tidak menyebabkan perubahan yang berarti. Pada penambahan CuSO4 0,01 M sebanyak 1 tetes menyebabkan larutan albumin mengalami perubahan yaitu larutan ini tidak tercampur dengan baik dan perubahan warna menjadi ungu muda atau violet hanya pada permukaan saja, sedangkan pada larutan asam amino glisin dan alanin terjadi perubahan warna pada permukaanya yaitu berwarna biru, sedangkan pada serin tidak terjadi perubahan warna. Hal ini disebabkan karena glisin dan alanin mengandung gugus hidroksil yang dapat membentuk kompleks dengan Cu2+. Warna biru makin pekat dengan penambahan CuSO4 berlebih. Setelah dilakukan penambahan CuSO4 0,01 M berlebih, terjadi perubahan pada semua larutan, baik pada larutan albumin maupun larutan asam amino. Larutan albumin berwarna ungu muda, dan asam amino yang lain (Serin, Glisin, Alanin,) berwarna biru muda.

4.3.2 Pengendapan dengan Logam Diketahui bahwa protein mampu menawarkan racun karena asam amino yang merupakan penyusun suatu protein dapat mengikat logam seperti Hg

(merkuri klorida) dan Pb (timbal asetat), racun atau logam yang terikat dalam reaksi ini ditandai dengan adanya endapan putih. Pada reaksi ini, albumin ditambahkan dengan HgCl2 . Pada penambahan ini larutan berubah dari bening menjadi putih pekat. Hal ini disebabkan karena adanya kemampuan protein atau asam amino untuk berikatan dengan ion logam di atas titik isoelektriknya. Kemampuan ini disebabkan karena pada saat pH berada di atas titik isoelektrik protein atau asam amino, maka ia akan bermuatan negatif sehingga mampu mengikat ion logam yang bermuatan positif. Berdasarkan teori, titik isoelktrik albumin adalah : 4,55-4,90, alanin 6,00 , glisin 5,97 dan serin 5,68 (titik isoelektrik adalah keadaan pH dimana protein /asam amino memiliki jumlah muatan positif dan negatif yang sama). Adanya pertambahan ion logam menyebabkan putusnya jembatan disulfida dan ikatan kovalen S-S pada protein yang mengandung gugus sulfuhidril. Dengan adanya endapan saat penambahan albumin dan glisin dengan (CH3COO)2 Pb menunjukkan bahwa protein dan asam amino dapat bertindak sebagai antidotum/penawar racun pada keracunan logam berat seperti Hg dan Pb. Sedangkan untuk asam amino seperti asam aspartat, serin, dan alanin tidak membentuk endapan karena suasana larutan masih berada di bawah titik isoelektrik kedua asam amino tersebut, sehingga asam amino yang bermuatan positif tidak mampu berikatan dengan ion logam yang bermuatan positif pula. Selain itu, ketiga jenis asam amino tersebut tidak mengandung gugus sulfuhidril.

4.3.3 Pengendapan dengan Alkohol Penambahan alkohol yang merupakan pelarut organik akan menurunkan kelarutan protein, karena kelarutaan suatu protein tergantung dari kedudukan dan

distribusi dari gugus hidrofil polar dan hidrofob polar pada molekul. Mampu mengendapkan logam dalam suasan asam dan pada pH 4,7 yang merupakan titik isoelektrik. Pada reaksi pengendapan dengan alkohol, larutan albumin akan membentuk endapan yang disebabkan karena adanya gugus hidrofobik polar (yang menarik gugus non-polar) didalam molekul protein dan menghasilkan protein dipol. Menurut teori, albumin + HCl dan albumin + NaOH membentuk larutan bening sedangkan albumin + buffer asetat pH 4,7 agak keruh. Hal ini disebabkan karena pada pH 4,7 merupakan titik isoelektrik albumin. Titik isoelektrik merupakan pH dimana kelarutn protein minimum karena jumlah ion positif dan ion negatif sama sehingga penambahan senyawa organik seperti aseton dan alkohol yang bersifat nonpolar (muatan = 0) cenderung menurunkan kelarutan protein. Sedangkan dengan penambahan asam atau basa menyebabkan larutan albumin kelihatan agak bening, hal ini menandakan naiknya kelarutan albumin. Hal ini berdasarkan sifat protein yang amfoter (protein dalam suasana pelarut yang bersifat asam akan bertindak sebagai basa dan dalam suasana pelarut yang bersifat basa akan bertindak sebagai asam).

LAMPIRAN

Bagan Kerja Tes Biuret 3 ml larutan albumin

1 ml NaOH 2,5 M

Catat perubahan pada larutan

Setetes CuSO4 0,01 M

Catat perubahan pada larutan

Setetes atau labih CuSO4 0.01 M Catat perubahan yang terjadi ulangi percobaan di atas dengan menggunakan larutan asam amino. Pengendapan Dengan Logam 3 ml larutan albumin 5 tetes HgCl2 0,2 M ditambahkan

Catat perubahan yang terjadi pada larutan

Ulangi percobaan diatas dengan menggunakan (CH3COO)2Pb dan mengganti larutan albumin dengan larutan asam amino.

Pengendapan Dengan Alkohol Tabung I II III

Larutan Albumin HCL 0,1 M NaOH 0,1 M Buffer asetat pH 4,7 Etanol 95% 2,5 ml 0,5 ml 3 ml 2,5 ml 0,5 ml 3 ml 2,5 ml 0,5 ml 3 ml