3.

METODOLOGIA DE MEDICIN
La metodologa utilizada fue por medio de anlisis de laboratorio, midiendo los resultados de recoleccin del agua apto para el consumo humano cuando entra al sistema de distribucin, puede contaminarse a travs de conexiones cruzadas, de las tuberas del sistema de distribucin, conexiones domiciliarias, cisternas y reservorios defectuosos, grifos contraincendios daados para determinar la remocin del parmetro especfico a analizar Coliformes fecales y totales Luego del muestreo se realizarn pruebas en laboratorio siguiendo la metodologa para la determinacin del Coliformes fecales y totales , llevando control de los resultados y tabulando datos. Se realiza el anlisis de las aguas. Como metodologa general, es necesaria la toma de muestras en forma directa para su posterior anlisis en el laboratorio, para ello deber existir coordinacin con la poblacin del lugar. El mtodo utilizado es la tcnica de tubos mltiples es aplicable tambin. Como metodologa a utilizar se seguir el procedimiento descrito en NORMAS SOBRE LA CALIDAD DEL AGUA PARA CONSUMO HUMANO EN EL PER ESTUDIO JURDICO-LEGAL
3.1 Grupos de estreptococos y enterococos 3.1.1 Grupo estreptococos fecales El grupo de estreptococos fecal consiste en un nmero de especies del gnero Estreptocos, tales como el estreptococcus fecalis, S. Faecium, S. Avium, S. Bovino, S. Equino y S. Gallinarum. Ellos dan una reaccin positiva al grupo D con antisera de Lancefied para animales de sangre ligeramente caliente. Adems, el S. Avium algunas veces reacciona con el grupo Q. El hbitat normal del estreptococo fecal es el tracto gastrointestinal de los animales de sangre ligeramente caliente. El estreptococo fecal puede proveer informacin acerca del grado de contaminacin existente, como un factor indirecto de contaminacin humana con relacin a recursos no humanos, ya que la relacin entre estos dos parmetros es de aproximadamente 0.7, sin embargo, este valor es cuestionado, ya que existen estreptococos animales que no sobreviven por mucho tiempo fuera de su hbitat. 3.1.2 Grupo enterococos El grupo de los enterococos es un subgrupo de los estreptococos fecales, su principal difere ncia es su habilidad para crecer en un ambiente con 6.5 % de cloruro de sodio, un pH de 9.6 y entre 10 y 45 C.
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79 La porcin del grupo de enterococos es un indicador bacterial que determina la contaminacin fecal en superficies de aguas recreacionales. 3.2 Seleccin del mtodo La tcnica de tubos mltiples es aplicable principalmente a aguas cloradas y con sedimentos. La tcnica de membranas filtrantes puede utilizarse tambin en muestras de agua salina, pero es inestable en aguas con alto grado de turbiedad. En este caso la tcnica a aplicar ser la de membranas filtrantes. 3.2.1 Tcnica de membranas filtrantes 3.2.1.1 Procedimientos Seleccionar una muestra y su filtro apropiado para volmenes hasta de 45 mm a travs de una membrana estril para dar de 20 a 60 colonias, sobre la superficie de la membrana. Se transfiere el filtro hacia una caja de Petri mediana, evitando turbulencias de aire debajo de la membrana. Incubacin- se invierten las cajas de Petri incubndose a 41 C 5 C, por 48 horas.
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80 Prueba del substrato- despus de 48 horas de incubacin, se transfiere cuidadosamente el filtro hacia un recipiente mediano, luego se incuba a 41 C 0.5 C por 20 minutos. Conteo- de rosa a rojo, las colonias de enterococos desarrollan una precipitacin negra o caf rojiza sobre la parte baja del filtro, luego se cuentan las colonias utilizando una lmpara fluorescente y lentes de aumento. 3.2.1.2 Clculo de densidad de estreptococos o enterococos fecales Se anota la densidad a partir de un ejemplo produciendo filtros con membranas contando hasta el rango deseado 20 a 60 colonias de estreptococos o enterococos fecales, luego se graban las densidades como estreptococos o enterococos fecales por 100 ml. 3.2.1.3 Prueba de verificacin Se recojen las colonias tpicas seleccionadas de una membrana y se aislan sobre la superficie de una caja de agar con una infusin de Cerebrocorazn. Incubndolas a 35 C 0.5 C por 24-48 horas. Posteriormente se transfiere este producto de una colonia bien aislada sobre el agar con la infusin de Cerebro Corazn hacia un tubo de ensayo con caldo nutritivo y hacia dos portaobjetos. Se incuba el caldo nutritivo a 35 0.54 C por 24 horas. Agregar unas cuantas gotas de perxido de hidrgeno fresco preparado al 3 % en la orilla de un portaobjeto.
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81 La apariencia de burbujas constituye un anlisis catalizador positivo e indica que la colonia no es miembro del grupo de los estreptococos fecales. Si el test catalizador es negativo, se hace una prueba de Gram. Los

estreptococos fecales y los enterococos son grampositivos, clulas ovoides, de 0.5 a 1.0 mm de dimetro, generalmente en pares de pequeas cadenas. Se transfiere el producto del caldo hacia cada uno de los siguientes medios: agar de bilis Esculina (incbese a 35 0.5 C por 48 horas); el caldo nutritivo (incubar a 45 0.5 C por 48 horas); caldo nutritivo con 6.5 % de NaCl (incubado a 35 0.5 C por 48 horas). El producto catalizado negativo grampositivo, cocos en el agar de bilis y a 45 C en caldo nutritivo verifica que la colonia es del grupo de los estreptococos fecales. El producto a 45 C y en un caldo al 6.5 % de NaCl indica que la colonia pertenece al grupo de enterococos.
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82 3.2.2 Tcnica de tubos mltiples Materiales y medio de cultivo a. Caldo nutritivo cido dextrosado para prueba presuntiva El pH debe ser de 7.2 0.2 a 25 C despus de la esterilizacin Contenido Extracto de carne 4.5 g Polypeptona 15.0 g Glucosa 7.5 g Cloruro de sodio (NaCl) 7.5 g NaN3 0.2 g Agua para reactivo 1 L
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83 b. Agar nutritivo selectivo de estreptococos El pH puede ser de 7.1 0.2 despus de esterilizado, manteniendo el medio no ms de 24 horas de 45 C a 50 C, luego de pesadas las taras. 3.2.2.1 Procedimiento para la prueba presuntiva En una serie de tubos de ensayo inoculados deber agregarse caldo cido dextrozado con una apropiada cantidad de muestra. Usar porciones de 10 ml., o menos, luego deber agregarse el caldo segn las instrucciones del proveedor. Contenido Peptona C 17.0 g Peptona B 3.0 g Extracto de levadura 5.0 g Bilis bacteriolgica 10.0 g Cloruro de sodio 5.0 g Citrato de sodio 1.0 g Esculin 1.0 g Citrato frrico de onio 0.5 g NaN3 0.25 g Agar 15.0 g Agua para reactivo 1 L
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Para la determinacin de la cantidad de estreptococos en este caso se utilizaron diluciones de la siguiente manera: Se utilizaron series de 3 tubos con las cantidades abajo indicadas. 1er tubo: 10.0 ml 2 tubo: 1.0 ml 3er tubo: 0.1 ml 4 tubo: 0.01 ml 5 tubo: 0.001 ml 6 tubo: 0.0001 ml 7 tubo: 0.00001 ml 8 tubo: 0.000001 ml 9 tubo: 0.0000001 ml Por lo cual se agrega 1 cm 3 de muestra en el primer tubo y sucesivamente se realizan diluciones a los siguientes tubos. Luego de ello se incuba en medio inculo a 35 C 0.5 C por 24 2 horas. Si no se observa turbidez presente, deber reincubarse y observarlo nuevamente al finalizar las 48 3 horas.
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85 3.2.2.2 Procedimiento para la prueba confirmativa Todos los tubos sujetos a caldo cido dextrozado muestran turbidez luego de 24 48 horas de incubacin para proceder a la prueba confirmativa. La porcin de muestra positiva se agrega al agar nutritivo PSE. Se incuba en caja de Petri invertida a 35 0.5 C. por 24 2 horas. Las colonias caf-negro con halos cafs confirman la presencia de estreptococos fecales. 3.3 Tabulacin de datos de NMP La estimacin de densidad de estreptococos fecales para el nmero de tubos en cada serie de dilucin con agar positivo se estima de manera similar que la utilizada para enterococos, segn la seccin 9221 D del Standard Methods. 3.4 Recursos utilizados 3.4.1 Humanos Es necesaria la colaboracin de la totalidad de los empleados que laboran actualmente en la planta de tratamiento de aguas residuales Aurora II.
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86 La realizacin de entrevistas ser en forma directa con el personal relacionado con el manejo, operacin, mantenimiento y diseo de esta planta u otras similares. La Universidad de San Carlos por medio de la Escuela Regional de Ingeniera Sanitaria ERIS - aportar la asesora al presente trabajo el cual ser efectuado por el Ing. Max Fernando Schwartz Guzmn y el personal del laboratorio. 3.4.2 Econmicos

Se han efectuado anlisis de laboratorio, tanto fsico-qumicos, como bacteriolgicos. Otros aportes son costos de alimentacin, combustible, transporte y manejo de muestras de la planta de tratamiento. Elaboracin de cuestionarios y formularios de control de procesos, lo cual es una parte realizada en el presente estudio especial. 3.4.3 Fsicos Vehculo Laboratorio de Qumica y Microbiologa Sanitaria Planta de tratamiento de aguas residuales Equipos de medicin, transporte y toma de muestras Documentacin de control de datos Tubo de ensayo Caja de Petri
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87 Soporte Biker Pipeta Reactivos Balanza Termmetro Altmetro Hielera G.P.S. Cmara fotogrfica
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88 Figura 21. Puntos de muestreo

Fuente del mapa esquemtico: Hernndez Rivera, Max Adalberto. Diagnstico de la planta de tratamiento de aguas residuales Aurora II. Estudio especial ERIS, USAC. 1995. Entrada al sedimentador primario(punto de muestreo 1)
R.A.F.A.

Salida del filtro de arena pmez (punto de muestreo 2)

Laguna de jacintos Sedimentador tipo Dortmund Filtro percolador 1 Filtro percolador 2 Filtro percolador 3 Filtro percolador Nmero 4 de mediana altura Filtro torre de duroport (fuera de uso ) Filtro torre de escoria volcnica (fuer a de uso)

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