Blastocystis spp y su papel patognico

Jorge Ivn Zapata Valencia, MSc, MSc, DSc Docente de Parasitologa Escuela de Bacteriologa y Laboratorio Clnico Universidad del Valle

Generalidades
Distribucin cosmopolita Reportado en humanos, otros mamferos (perro, gato, cerdo, vaca, orangutn, chimpanc, macacos, mandriles, lmures, cobayos, ratas y otros), aves (gallinas, codornices, faisanes, pavos, gansos y patos, entre otros) y reptiles Su pleomorfismo y carecer de tcnicas estandarizadas han generado confusin e interpretacin errnea de los datos obtenidos y complica el Diagnstico

Zonas grises en discusin

Mecanismo de reproduccin Ciclo de vida Prevalencia por subtipos Papel patognico

Datos epidemiolgicos, in vivo e in vitro indican que es un patgeno Genotipos patgenos y no-patgenos (variacin inter e intra subtipos)

Clasificacin actual
Reino Chromista
Sub-reino Chromobiota

Infra-reino Heterokonta (Stramenopiles) - protistos botnicos hetertrofos y auttrofos.

Sub-filo Opalinata
Clase Blastocystea Blastocystis sp

Estudios filogenticos usando genes homlogos muestran que, por distancia gentica, Blastocystis sp. de humanos y animales podra separarse en 12 o ms especies

Prevalencia

Variacin entre regiones Pases en desarrollo con mayor prevalencia - hasta >60% Pases desarrollados - hasta >20% Asociado a:
pobre higiene exposicin a animales consumo de agua o alimentos contaminados

Algunas prevalencias
Indonesia (60%) Tailandia (0.19 a 45.2%) Brasil (40.9%) Cuba (38.5%) Egipto (33.3%) China (1.9 a 32.6%) Venezuela (29,2%) Argentina (27.2%) Malasia (257%) Turquia (1.04 a 18.3%) Singapur (3.3%)

Japn (0.5 to 1%) USA 2.6% 1989 23% 2000 11% 2004
Armenia 6.1% Medellin 41.8% Calarc 36.4%
Turistas en Nepal: 30%

Al menos 13 Genotipos

PCR-RFLP (ssrRNA) - (riboprints) - (ribodemes) PCR + secuenciacin didesoxi PCR + primers subtipo-especficos (STS) PCR-SSCP PCR con primers arbitrarios Cariotipificacin

Genotipos en diferentes regiones

Subtipos 10 (primates y artiodactilos), 11 a 13 (animales de zoolgico)

Mecanismo de transmisin

Modo de Transmisin: Fecal-Oral Agua Alimentos Manos

Sntomas: Dx Sintmatico muy difcil por la inespecificidad y el amplio de los Sx.

Caractersticas observables de las formas de Blastocystis

Morfologa: forma de vacuola central o cuerpo central la ms frecuente en cultivo y materia fecal Usualmente hasta 4 ncleos

MET

Vacuolar: 2 a 200 m (media 4 a 15 m)

Morfologa: forma granular parecida a la vacuolar pero contiene granulos en su citoplasma o con mayor frecuencia en la vacuola central. Usualmente hasta 4 ncleos

MET

Morfologa: ameboide raramente reportada patogenesis - 2.6 a 7.8 m

MET

Morfologa: Quiste ltima descrita por su pequeo tamao (2 a 5 m) 1 o 2 ncleos

Sobreviven en agua un mes a 25 y 2 meses a 4 Susceptibles a T extremas y a los desinfectantes comunes

Morfologa: avacuolar y multivacuolar - MET de materia fecal fresca - 5 a 8 m

El pequeo tamao y su morfologa pueden deberse a variaciones en las cepas o son estadios intermedios en el proceso de formacin de los quistes o de su desenquistamiento

Mecanismos de reproduccin
Varios observados en cultivo

Fisin binaria observada adems en materia fecal

Algunos solo aceptan est ltima como el mecanismo de reproduccin de Blastocystis

Fisin binaria y mltiple

Endodiogenia y Plasmotomia

Ciclo de vida

Genotipos y hospederos principales

Mamferos y cerdos: Primates y cerdos: Humanos: Roedores: Ganado y cerdos: Aves: Monos, faisanes y humanos: Humanos:

Subtipo 1 Subtipo 2 Subtipo 3 (ms frecuente) Subtipo 4 Subtipo 5 Subtipos 6 y 7 Subtipo 8 Subtipo 9

Subtipos 8 y 9 ms cerca de los subtipos 4 y 6, respectivamente

Genotipos hallados en humanos

Mamferos: subtipo 1 Sinto y Asintomtico Primates y cerdos: subtipo 2 Sinto y Asintomtico Humanos: subtipo 3 (ms frecuente) Sinto y Asintomtico Roedores: subtipo 4 Sintomtico Ganado y cerdos: subtipo 5 Aves: subtipos 6 y 7 Sinto y Asintomtico Subtipos 8 y 9 (cercanos a subtipos 4 y 6, respectivamente) Un caso de Sx con el 8

Genotipos y patogenicidad

 Sub-tipos 3 y 1: SCI, EIC y diarrea crnica Sub-tipo 3: rash y urticaria Sub-tipo 2: urticaria

Colombia: ST1, ST2 y ST3

Italia: pacientes sintomticos ST3 (47.1%) ST2 (20.6%) ST4 (17.7%) *Espaa ST1 (8.8%) **Tailandia ST7 (2.9%) ***Japn, China, Egipto ST8 (2.9%) ST5

Francia ST1 (25.6%) ST2 (9.3%) ST3 (53,3%) ST4 (9.3%) ST7 (2.3%)

Es probable que 2-15% infecciones sean mixtas

Presentacin clnica de la infeccin con Blastocystis spp

Usualmente asintomticos Depende genotipo del parsito, carga parasitaria y estado inmune del hospedero En sintomticos: auto-limitada, dura entre 1 y 14 das

Signos y Sntomas
Diarrea acuosa (meses) Dolor abdominal/clicos Prurito perianal (picazn) Exceso de flatulencia Leucocitos fecales Prdida de peso Nauseas Anorexia Distencin Urticaria Eosinofilia

Diarrea crnica leve o gastroenteritis aguda

Corrisis alcohlica y hepatitis B crnica Proctosigmoidoitis hemorrgica (VIH) y artritis sptica (artritis reumatoidea)

Sndrome de Colon Irritable

Asociacin con Sndrome de colon irritable

Cada vez hay ms reportes Propensin a ser colonizados por Blastocystis Mayor carga parasitaria Aislado con mayor frecuencia en ptes con SCI que en controles
mayor nivel de IgG2 vs. Blastocystis en SCI positivos, comparados con controles Positivos y negativos para Blastocystis en heces

Serolgicamente:

Paquistn: SCI con ST1 Turqua: SCI y EIC con ST3

Otras manifestaciones extraintestinales

Neurolgicas: Fatiga, Depresin, cefalea Lesiones cutneas: urticaria crnica, aguda (asociada a formas ameboides del subtipo 3) y tarda por presin, Prurito palmoplantar Inflamatorias: Rash cutneo, dolor articular Angioedema

Patologa
No invasivo No toxinas In vitro:
Modulacin de la RI produccin de IL-8 Efecto apopttico por contacto

Casos y controles Tratamiento = mejora y erradicacin

Metronidazol
35 of 40 (88%) con Tx Curacin clnical y negativos parasitolgicamente Un caso sin Tx (3%)

Cistein y aspartil proteasas que degradan IgA (subtipos 7 y 4)

Potencial patgeno emergente

Nitazoxanida TMP-SMX

Resultado del tratamiento

Modelos animales
Ratas
Aislados de pacientes sintomtico patologa severa Aislados de asintomticos patologa leve Subtipo 1: patgeno Subtipos 3 y 4: patgenos y no patgenos

10 a 100 quistes dan inicio a infeccin Diarrea Hiperemia cecal Inflamacin colnica Desprendimiento de mucosa Mortalidad en ratas (ST1)

Pollos Ratones Cobayos

Modelo de patogenicidad para Blastocystis

Clulas inflamatorias

Diagnstico MICROSCPICO
Cultivo de corto trmino (24 a 72 horas) Cultivo Xnico o monoxnico
Jones Solucin de Locke-huevo-suero de caballo (Boeck y Drbohlav) Agar difsico Medio de Robinson

Cultivo axnico
Medio Dulbecco modif. Por Iscove Medium esencial mnimo Medio bifsico de huevo y sln de Locke

6 a 23 h 50 h para los de origen aviar 4 das a 2 semanas para medio slido Axenizacin (estudios moleculares y bioqumicos) - de 3 semanas a meses

Comportamiento de aislados en cultivo:

Aislados de ptes asintomticos

Menor rango de tamao Abundantes formas granularres Tiempo de duplicacin menor

Aislados de ptes sintomticos

Mayor rango de tamao Abundantes formas ameboides Multiplicacin ms lenta

Otras tcnicas para Dx directo

Tricrmica y Hematoxilina Frrica (Giemsa)
Seriado en salina y lugol Gradiente de densidad Ficoll

Formol ter

Tinta china modificada

Tinta China: cpsula, 8 m

Forma vacuolada encapsulada, tamao 12 m.

Diagnstico SEROLGICO, MOLECULAR Y REPORTE

ELISA e IFA IgG e IgA
Ttulos altos asociados a cuadro clnico No recomendado por variacin antignica
DOT-ELISA Pirosecuenciacin de alto rendimiento RAPD STS PCR-SSCP PCR en tiempo real
Informar
Blastocystis spp Blastocystis spp subtipo n [carga parasitaria
>5 parsitos/campo 400X o 1000X]

PCR
PCR secuenciacin didesoxi Anidada para regiones intragnicas PCR-RFLP ssu-rDNA

Tratamiento

Emetina, arsenicales Stovarsol (acetarsona) y Narsonal

Vacuola central en salina y lugol

http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/html/Blastocystis.htm http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/html/Blastocystis.htm

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#1

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#2

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#3

Vacuola central en lugol y Giemsa

Granular en salina

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#8

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#7

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#9 http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/html/Blastocystis.htm

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#4

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#5

http://www.atlas-protozoa.com/gallery.php?SOT_CAP=F_BLAST&link=blastocystis.php#6

Quiste en cultivo

Blastocystis sp estructuras teidas con tricrmica

Las vacuolas tien de rojo a azul.