Universitatea ,,Lucian Blaga din Sibiu Facultatea de Medicin ,,Victor Papilian

Confereniar Dr. Med. Alexandra Criu Bota Asistent univ. Dr. Cezar Bologa

BIOLOGIE CELULAR
NDRUMTOR DE LUCRRI PRACTICE

2010

CUPRINS
MIJLOACELE TEHNICE DE STUDIERE A MATERIEI VII .................................................................. 5 TIPURI DE MICROSCOAPE ........................................................................................................................ 5 MICROSCOPUL OPTIC ....................................................................................................................................... 5 MICROSCOPUL CU CONTRAST DE FAZ ............................................................................................................ 8 MICROSCOPUL CU LUMIN FLUORESCENT ..................................................................................................... 9 MICROSCOPUL CU LUMIN POLARIZAT .......................................................................................................... 9 MICROSCOPUL ELECTRONIC .......................................................................................................................... 10 PLASMALEMA- MICROSCOPIE ELECTRONIC: .............................................................................. 12 MODELUL N MOZAIC FLUID AL LUI SINGER I NICOLSON AL MEMBRANEI CELULARE .................................... 12 ETAPELE DE OBINERE ALE UNUI PREPARAT MICROSCOPIC .................................................. 14 OBINEREA UNUI PREPARAT MICROSCOPIC PERMANENT ............................................................................... 14 OBINEREA UNUI PREPARAT MICROSCOPIC NATIV ......................................................................................... 17 FROTIU CU CELULE DIN EPITELIUL MUCOASEI BUCALE- PREPARAT PROASPT, NEFIXAT ................................ 17 FORME CELULARE .................................................................................................................................... 18 CELULA POLIEDRIC -FICATUL - CELULA HEPATIC- COLORAIE H E ............................................................ 18 CELULA CUBIC-RINICHIUL -TUBI URINIFERI-EPITELIUL - COL. H.E. .............................................................. 20 CELULA ROTUND- OVAR-FOLICUL OVARIAN- OVOCITUL- COL.H.E. ............................................................ 23 CELULA PAVIMENTOAS- MEZENTERUL - IMPREGNAIE ARGENTIC ............................................................. 25 CELULA STELAT-MADUVA SPINRII- NEURONUL MULTIPOLAR - COL. H.E................................................... 26 CELULA PRISMATIC- EPITELIUL VEZICII BILIARE- COL.H.E........................................................................... 28 CITOSCHELETUL - MICROSCOPIE ELECTRONIC: ........................................................................ 29 PRELUNGIRI PERMANENTE ALE CELULELOR................................................................................. 30 BORDURA STRIAT (CUTICULA-BORDURA N PERIE-MARGINEA N PERIE)......................... 30 CELULA PRISMATIC- EPITELIUL VEZICII BILIARE- COL.H.E........................................................................... 30 INTESTINUL SUBIRE- VILOZITI INTESTINALE- COL. H.E. ............................................................................ 31 INTESTINUL GROS - EPITELIUL MUCOASEI- COLORAIE ALBASTRU ALCIAN PENTRU MUCOPOLIZAHARIDE (MPZ) ........................................................................................................................................................... 32 ULTRASTRUCTURA BORDURII STRIATE- MICROSCOPIE ELECTRONIC: ............................ 34 MICROVILOZITTILE- MICROSCOPIE ELECTRONIC: ................................................................ 35 PRELUNGIRI PERMANENTE ALE CELULELOR................................................................................. 37 CILII ................................................................................................................................................................ 37 TRAHEE- EPITELIUL MUCOASEI -CILI VIBRATILI (MOBILI)- COL H.E. ............................................................... 38 MADUVA SPINRII- CANALUL EPENDIMAR- STEREOCILI- COL. H.E. ............................................................... 41 FROTIU CU SPERMATOZOIZI-CELULE FLAGELATE-COL. MAY-GRUNWALD GIEMSA (MGG) ........................... 43 CELULE EUCARIOTE UNICELULARE CU CILI SAU FLAGELI ............................................................................... 44 PREPARAT NATIV CU CELULE CILIATE SAU FLAGELATE .................................................................................. 44 ULTRASTRUCTURA CILULUI - MICROSCOPIE ELECTRONIC : ................................................. 48 JONCIUNILE INTERCELULARE- MICROSCOPIE ELECTRONIC: ............................................ 51 ULTRAFAGOCITOZA ................................................................................................................................. 54

MACROFAGUL DIN PLMN- COL H.E. I GRANULE DE PIGMENT ANTRACOTIC FAGOCITATE .......................... 54 MACROFAGUL DIN PIELE - HISTIOCITUL -COL KERNECHTROT (ROU NUCLEAR) I GRANULE DE ALBASTRU DE TRIPAN FAGOCITATE ...................................................................................................................................... 56 MACROFAGUL DIN FICAT( CELULA KUPFER)- COL H.E.I GRANULE DE TU DE CHINA FAGOCITATE .............. 58 FENOMENE DE TRANSPORT - TRANSPORTUL PRIN VEZICULE - MICROSCOPIE ELECTRONIC: ........................................................................................................................................... 60 FORME NUCLEARE .................................................................................................................................... 63 NUCLEUL ROTUND - NEURONUL - MADUVA SPINRII COL. H.E. ..................................................................... 63 NUCLEUL ROTUND - OVOCITUL - OVAR - COL.H.E. ...................................................................................... 64 CELULA BINUCLEAT - FICATUL,CELULA HEPATIC,COLORAIE H. E. ........................................................... 65 NUCLEUL TURTIT - FIBRA MUSCULAR STRIAT - CELULA MULTINUCLEAT - COL HEMATOXILIN FERIC ... 66 NUCLEUL OVALAR- EPITELIUL PRISMATIC AL VEZICII BILIARE COL.H.E. ........................................................ 69 NUCLEUL N PECETE-ESUTUL ADIPOS-ADIPOCITUL-COLORATIE HE.............................................................. 70 FROTIUL SANGUIN - COLORAIE MAY GRUNWALD GIEMSA (MGG) .............................................................. 71 FROTIU DE SNGE COL. ALBASTRU BRILLANT CREZIL .................................................................................... 75 FICAT - HEPATOCITE -COLORAIE VERDE METIL PIRONIN ............................................................................. 76 NUCLEUL -MICROSCOPIE ELECTRONIC:........................................................................................ 77 NUCLEOLUL .................................................................................................................................................. 80 FUSUL DE DIVIZUNE-MICROSCOPIE ELECTRONIC ..................................................................... 82 MITOZA ......................................................................................................................................................... 83 CELULE VEGETALE DE CEAP - COLORAIE HEMATOXILIN FERIC .............................................................. 83 CELULE N MITOZ DIN MERISTEMUL RADICULAR DE CEAP ......................................................................... 86 ETAPELE MITOZEI -MICROSCOPIE ELECTRONIC ....................................................................... 89 CARIOTIPUL UMAN ................................................................................................................................... 92 FENOMENUL DE BANDARE ..................................................................................................................... 93 RIBOZOMII I RETICULUL ENDOPLASMATIC RUGOS ................................................................... 97 HEPATOCITE -CORPUSCULII BERG - FICATUL - COLORAIE H. E. ................................................................... 97 NEURONUL - CORPUSCULII NISSL -MADUVA SPINRII- COL. H.E. ................................................................... 98 NEURONUL - CORPUSCULII NISSL -MADUVA SPINRII- COL. ALBASTRU DE TOLUIDIN................................... 99 PANCREASUL - ACINI PANCREATICI - COL. H.E. ........................................................................................... 100 RETICULUL ENDOPLASMATIC: RUGOS I NETED- MICROSCOPIE ELECTRONIC:.......... 102 RIBOZOMII-MICROSCOPIE ELECTRONIC..................................................................................... 103 COMPLEXUL GOLGI ................................................................................................................................ 104 TIROIDA - FOLICULI TIROIDIENI - COL H.E. .................................................................................................. 104 GANGLION VEGETATIV - NEURON VEGETATIV - IMPREGNAIE ARGENTIC CAJAL........................................ 106 COMPLEXUL GOLGI - MICROSCOPIE ELECTRONIC: ................................................................ 108 FENOMENUL DE SECREIE CELULAR- MICROSCOPIE ELECTRONIC: ............................. 111 LIZOZOMII.................................................................................................................................................. 112 MIOCARD DE PERSOANE N VRST - LIZOZOMI LLL (CORPI REZIDUALI) - COL. H.E. .................................... 112 MIOCARD ISCHEMIC - COL. L.I.E. ................................................................................................................ 113 LIZOZOMII - MICROSCOPIE ELECTRONIC: .................................................................................. 115 MITOCONDRIA .......................................................................................................................................... 117

RINICHI - TUBI URINIFERI - MITOCONDRII - COL. HEMATOXILIN FERIC ...................................................... 117 MITOCONDRIA - MICROSCOPIE ELECTRONIC: .......................................................................... 119 PEROXIZOMII-MICROSCOPIE ELECTRONIC ............................................................................... 120 IMAGINE DE ANSAMBLU A CELULEI ................................................................................................. 121 BIBLIOGRAFIE .......................................................................................................................................... 122

Mijloacele tehnice de studiere a materiei vii

Biologia celular i molecular studiaz unitatea morfofuncional a lumii vii -celula- cu toate aspectele ei, utiliznd o multitudine de mijloace tehnice caracteristice fie nivelului morfologic (metodele de microscopizare) fie nivelului funcional al acesteia,ajungnd pn la cele mai intime procese biochimice moleculare . .Metodele de microscopizare variaz funcie de scopul urmrit i nlesnesc cunoaterea celulei att ca o structur morfologic unitar ct i ca un adevrat microcosmos al ultrastructurilor ei .

Tipuri de microscoape
Microscoape fotonice Microscoape electronice Difracia cu raze X

Microscoape fotonice
1. 2. 3. 4. Microscopul optic obinuit Microcopul cu contrast de faz Microscopul cu lumin fluorescent microscopul cu lumin polarizat

Microscopul optic
a fost primul instrument studiat pentru studierea detaliilor celulelor. este constituit din 2 pri : 1. Partea mecanic se compune din : -picior sau talp- partea de sprijin pe mas -coloan susine tubul i sistemele de vize. -platina sau msua pe care se aeaz lama care se fixeaz cu ajutorul clreilor sau clemelor

-urub msuei

-superior pentru micri nainte i napoi ale

-inferior pentru micri laterale -macrovizele care apropie sau ndeprteaz obiectivele de msu -tubul microscopului susine sistemul obiectiv i ocular la partea inferioar prezint revolverul, iar la partea superioar tuburile oculare -revolverul are un disc mobil de care se fixeav obiectivele i un disc fix cu un pinten care oprete fiecare obiectiv n dreptul axului optic. 2. Partea optic -sistemul ocular cu lentila nferioar, de cmp, colimatoare i lentila superoar. -sistemul obiectiv compus dintr-un sistem de lentile, cu puteri de mrire de 6X, 10X, 20X, 40X, pentru obiectivele uscate i 90X.pentru obiectivul de imersie (obiectiv umed -sau citologic). -sistemul de transmis lumina, alctuit din condensor, oglind i sursa de lumin.

Puterea rezolutiv sau de separare Puterea rezolutiv sau de separare este distana minim la care mai pot fi vzute distinct 2 puncte alturate. Ochiul emetrop are puterea rezolutiv de 0,1-0,2 mm, iar microscopul fotonic ajunge pn la 0,2 microni. Calculul puterii rezolutive se face cu ajutorul formulei lui Abbe.

d= ---------------n sin = lungimea de und a luminii fotonice n=indicele de refracie al mediului, pentru aer=1 =jumtate din unghiul de deschidere ale celor mai laterale raze dintrun punct care mai ptrund n sistemul obiectiv. Pentru obiectivul de 90X , apertura unghiular maxim este 180 grade, deci este 90 grade., iar sin=0,95 aprox =1

Puterea de mrire a sistemului obiectiv 10 20 40 90

Apertura numeric 0,3 0,4 0,65 1,25

Puterea de rezoluie d 1,83 1,38 0,85 0,44

Reguli de microscopizare 1. Preparatele se aeaz cu lamela n sus i se prinde cu jutorul clemelor. Se pornete sursa de lumin, i se ridic condensorul la maxim pentru a obine un punct luminos pe lam. 2. Se deplaseaz msua prin rotirea uruburilor msuei pentru a aduce preparatul n axul optic (se suprapune preparatul pe punctul luminous de pe lam obinndu-se lumin colorat). 3. Se aduce n axulul optic cel mai mic obiectiv 10X i se coboar condensorul pentru a avea mai puin lumin pe lam . Se regleaz distana pupilar a ocularelor pentru a putea privi simultan cu ambii ochi fiind microscoape binoculare. 4. Se coboar tubul microscopului la maxim apoi se ridic prin rotirea cu ambele mini a macrovizei, privindu-se pentru prima dat n oculare pn se obine o imagine clar de esut i structure celulare. Se deplaseaz preparatul prin rotirea uruburilor msuei pn este recunoscut. 5. Numai cnd imaginea este clar i preparatul a fost recunoscut se trece la obiective mai mari. 6. Pe msur ce se trece la obiective mai mari se ridic condensorul pentru a adduce mai mult lumin pe lam. 7. Dac se pierde imaginea la un obiectiv mai puternic se revine la un obiectiv mai slab respectiv ob 10X, cnd se poate folosi i macroviza. 8. La obiectivele mai mari de 10X se folosete numai microviza pentru a obine o imagine mai clar, altfel se sparge lama port obiect. 9. Uleiul de imersie nu are voie s ating alte obiective dect cel de 90X. Pentru aceasta dup obinerea imaginii clare la obiectivul de 40X, se aplic pictura de ulei de imersie, dup ce a fost scos obiectivul 40X din axul optic, n dreptul luminii maxime pe frotiu, dup care se trece la obiectivul de 90X. 10.La examinarea n imersie condensorul este ridicat la maxim.

Microscopul cu contrast de faz

Mreste contrastul, dintre structurile preparatului microscopic, oferind posibilitatea examinrii n condiiile unei bune vizibiliti a celulelor vii.

Microscopul cu contrast de faz prezint un dispozitiv c are transform diferenele de faz la trecerea prin diverse structuri, n diferene de amplitudine, perceptibile vederii.

Microscopul cu lumin fluorescent

Microscopul cu lumin fluorescent este un microscop pbinuit la care se monteaz o surs de lumin ultraviolet- lamp tubular de cuar cu vapori de mercur, la o tensiune de 1000W, i filtre pentru oprirea radiaiilor vizibile i a celor infraroii, i filtre de protecie a ochilor. Tehnica se bazeaz pe proprietatea unor substane(fluorocromi) de a restitui o parte din energia primit, atunci cnd sunt iluminate cu radiaii cu lungime de und mic, sub form de radiaii cu lungime de und mare = fenomen de fluorescen. Diferii fluorocromi cunoscui se leag specific de unele structuri celulare care se evideniaz n microscopia cu fluorescen.

Microscopul cu lumin polarizat

Lumina polarizat este folosit n scopul urmririi fenomenului de birefringen. Se folosesc 2 prisme nicol una n portdiafragmul irisului, a 2-a n ocular. Birefringena se studiaz n poziia de dipoli ncruciai .Cnd cmpul cu preparatul rmne ntunecat, atunci obiectul examinat este monorefringent, izotrop. Dac n cmpul preparatului apar structuri intens luminate, obiectul examinat este anizogrup sau birefringent. Cu ajutorul microcopului polarizant se pot studia structuri macromoleculare de aspect liniar, fibre de colagen, mielina, fibre musculare striate,membrane plasmatice, granule proteice, lipidice, sau de colsterol.

Microscopul electronic

Folosete n locul fascicolului de lumin un fascicol de electroni i n locul lentilelor de sticl, lentile cu cmpuri electromagnetice. Se ajunge la rezoluii de 1,2 A i putere maxim de mrire de 800.000X , permind cercettorului s observe structura cea mai intim a materiei, ajungnd pn la atomul de hidrogen de 1 A, evideniind ultrastructura diferitelor tipuri de celule i a componentelor acestora n stare normal i patologic.

Microscoapele electronice sunt de transmisie, TEM (Transmition electron microscope) -imaginea fiind obinut prin traversarea electronilor prin preparat, i de baleiaj SEM ( Scanning electron microscope )- imaginea fiind obinut prin reflectarea electronilor de pe suprafaa preparatului pe un ecran fluorescent. In

10

ambele cazuri imaginile sunt nregistrate pe fotografii. Microscopul de baleiaj ofer o imagine tridimensiunal a structurilor studiate. Prin microscopia de baleiaj se obin date privind aspectul suprafeei unei structuri sau formei ei tridimensionale i date privind proprietile fizice i chimice ale preparatului. n hematologie se obin date privind proliferrile limfocitare de tip T sau B, diferenierii histiocitelor macrofage precum i a altor categorii de celule din seria mielomonocitar.

11

Plasmalema- Microscopie electronic:

Modelul n mozaic fluid al lui Singer i Nicolson al membranei celulare

Se observ un strat dublu lipidic (fosfolipide sau glicolipide) n care lipidele privesc fa n fa cu prile hidrofobe sau nepolare, iar prile polare sau hidrofile stau n afar. Din loc n loc apar integrate molecule uriae proteice- proteine foarte complexe- deseori mucopolizaharide n proporie de aproximativ o protein la 50 de lipide n acest mozaic. Intregul mozaic este extrem de fluid datorit mobilitii crescute a componentelor sale, modelul fiind comparat cu o mare n continu micare, valurile sunt reprezentate de fosfolipide sau glicolipide iar proteinele sunt iceberg-urile care ies din aceste valuri.

12

Analog lui din membrane artificiale se obtin lipozomii - structuri extrem de utile n terapia modern gelurile cu aplicare extern.

Imaginea de mai sus: Lipozomul

13

Etapele de obinere ale unui preparat microscopic

Obinerea unui preparat microscopic permanent
Recoltarea Const n obinerea de material biologic de la organisme vii cnd se numete bioptic sau de la organisme moarte persoane decedate sau animale de experien sacrificate numinduse recoltare necroptic. Tipuri de recoltare bioptic 1. Puncia bioptic se face prin absorbia celular cu un ac special din caviti, pleural, peritoneal, articulat, medular. Dac se aspir lichid biologic acesta va trebui centrifugat n prealabil, obinndu-se un sediment din care se realizeaz un frotiu. 2. Prin raclaj cu ajutorul unor chiurete sau tampoane speciale se obin celule de pe mucoase, bucal, faringian, esofagian, vaginal,uterin din care se prepar frotiuri. 3. Intraoperator se recolteaz fragmente mici de aprox. 1 cm cub care se plonjeaz n soluii fixatorii.

Fixarea Poate fi prin mijloace fizice, nclzire sau ngheare cu zpad carbonic, sau prin procese chimice, cu ajutorul soluiilor de fixatori. Rolul fixatorilor este de a opri brusc procesele biochimice intracelulare cu meninerea structurilior celulare. Tipuri de fixatori: Cel mai utilizat este formolul in diluie de 4-15%, dar se mai folosesc i metanolul, etanolul sau amestecuri de fixatori. Exist fixatori specifici care au o anumit electivitate pentru diverse structuri: Bouin pentru acizi nucleici, Regand pentu mitocondrii, Carnoz pentru cercetri biochimice sau Herovici utilizat n strinatate n locul formolului. Timpul de fixare difer funcie de fixator de exemplu pentru formol peste 48 ore. Fixatorul trebuie s fie n cantitate de 50 de ori mai mare dect piesa. Splarea Oprete procsul de fixare prin metode chimice i se realizeaz sub jet de ap timp de mai multe ore.

14

Includerea Are mai multe subetape: 1. Deshidratarea const n trecerea prin mai multe recipiente cu alcool etilic ce concentraii crescnde 70%, 90%, alcool absolut. 2. Clarificarea const n plonjarea piesei n solveni organici, xilen sau toluen. 3. Impregnarea propriuzis se realizeaz prin includerea piesei n parafin sau paraplast care se gsesc n stare lichid la 57 grade Celsius n forme de cuburi cu latura de 2 cm apoi se las la temperatura camerei solidificndu-se. Secionarea Cubul de parafin obtinut se fixeaz ntr-un aparat numit microtom care prin micri de culisare i naintare n faa unei lame foarte ascuite, realizeaz seciuni de 4-6 microni. Exist diferite tipuri de microtom: microtomul pentru preparate incluse (rotativ , cu mecanism de sanie ) i pentru preparate proaspete i ngheate (criotomul-utilizat n diagnosticul anatomopatologic extemporaneu ). Seciunile astfel obtinute se aplic pe o lam de sticl pe care s -a aplicat n prealabil albumin Meier. Se ntind ct mai bine pentru deplia seciunea apoi lama se nclzete pentru a se topi parafina dup care se las la termostat 24 ore pentru buna lipire a preparatului de lam.

15

Colorarea Se realizeaz cu colorani naturali sau sintetici care sunt cromofori cu predilecie acidofil, bazofil sau neutr de ex. Col.May Grunwald Giemsa( MGG), sau colorani indifereni Sudan lll pentru trigliceride sau Sudan lV pentru fosfolipide. Hematoxilina coloreaz componentele bazice ale celulelor nucleul, nucleolul n mov, iar eozina coloreaz componentele acide ale celulelor respectiv citoplasma i unele organite n roz. Coloraia Hematoxilin Eozin prescurtat HE este cea mai des folosit i prezint urmtoarele subetape: Clarificarea const n trecerea prin mai multe bi de benzen sau xilen. Hidratarea prin trecerea succesiv prin mai multe recipiente cu concentraii descrescnde de alcool etilic absolut, 90%, 70% apoi ap distilat. Colorarea cu hematoxilin prin introducerea n recipientul cu colorant ntre 1 i 4 minute n funcie de tipul de esut i prospeimea preparatului prin tatonare. Cltirea cu ap ce conine sruri de Litiu. Tamponare Colorarea cu eozin prin introducerea n recipientul cu colorant Cltirea cu ap distilat

Deshidratarea const n trecerea prin mai multe recipiente cu alcool etilic ce concentraii crescnde 70%, 90%, alcool absolut. Clarificarea Cu benzen, toluen sau xilen dup care se las s se usuce cteva minute

16

Montarea Se face cu rini sintetice sau naturale de ex. Balsam de Canada cu rol n creterea transluciditii i protecia preparatului. Se pune o picrur pe preparat dup care se aplic lamela i se pune la termostat la 37 grade 24 ore pentru uscare. Etichetarea Este ultima etap a obtinerii unui preparat permanent.

Obinerea unui preparat microscopic nativ

Frotiu cu celule din epiteliul mucoasei bucale- preparat proaspt, nefixat

Se racleaz mucoasa bucal i materialul astfel obinut se ntinde n strat ct mai subire i uniform pe suprafaa lamei port obiect . n stare proaspt se microscopizeaz trecnd succesiv de la obiectivul 10x la 20x i la 40x. Se observ placarde de celule epiteliale , necolorate, de form poliedric. Ele prezint un nucleu rotund situat central i diferite mici vacuole i granule corespunztoare microorganitelor sau diverselor incluzii celulare. Pe msur ce se deshidrateaz, aceste celule se ratatineaz, piezndu-i caracteristicile prezentate.ntre celule apare apar diverse componente din cavitatea bucal (resturi alimentare i flor microbian).

17

Forme celulare
Celula poliedric -Ficatul - celula hepatic- coloraie H E
Se caut vena centrolobular pe seciune transversal i numai pe aceste seciuni se vede c pornesc de la ea ca nite raze trabeculele, cordoanele hepatice ale lui Remack, care prezint un traiect sinuos i cu celulele destul de apropiate ntre ele, nct nu se observ bine spaiul dintre ele .Cordoanele sunt formate din niruiri de celule hepatice , de form poliedric iar spaiile dintre cordoane numesc capilare sinusoide i n ele se afl din loc n loc macrofagele ficatului, care se vor studia la alt lucrare. Coloraia hepatocitelor: citoplasma n roz, cu eozin iar nucleul n mov, cu hematoxilin. Nucleul este rotund situat central i prezint unul sau mai muli nucleoli. Pot exista celule cu doi nuclei din loc n loc , pentru c este organul cu cea mai mare putere de regenerare . Vena centolobular prezint hematii n lumen care au culoarea ocrului i ajut la recunoaterea ei.

18

19

Celula cubic-Rinichiul -tubi uriniferi-epiteliul - col. H.E.

Organul se recunoate dup glomerulii renali, corpusculi ai lui Bowman, care apar ca nite formaiuni rotunde ncapsulate, care apar ici i colo pe preparat,( ca nite mingi sau gheme). In jurul lor se gsesc tubii uriniferi n diverse incidene, transversale, oblice sau longitudinale. Se studiaz celula cubic pe seciunile transversale ale tubilor uriniferi care prezint n zona central lumenul tubului urinifer, n jurul lui gsindu-se celulele cubice situate n cerc. Mai uor de observat sunt nucleii situai i ei n cerc. Lumenul tubilor uriniferi poate fi umplut cu urin primar - o substant eozinofil. Detaliile tubilor uriniferi se pot observa mai bine doar la obiectivul 20 i 40. In mod normal un tub urinifer este alctuit din 5-7 celule dispuse n cerc. Din loc n loc se observ n seciuni transversale i tubi cu diametrul mai mare- tubii colectori. La obiectivele de 20x, 40x se vd nucleii rotunzi cu nucleoli .

20

21

22

Celula rotund- Ovar-Folicul ovarian- Ovocitul- col.H.E.

Ovocitul este celula cea mai mare din organism -la om 250 microni cu forma adaptat perfect la funcie, plin cu principii nutritive, substane de rezerv glucidice, lipidice,protidice plus diferite substane ionice care se observ la obiectivul maxim sub form de granulaii n citoplasm. Citoplasma este eozinofil, iar nucleul, i el foarte mare, este situat central, colorat n mov cu hematoxilin, i deschis la culoare nct se observ foarte bine nucleolul , care este mai nchis la culoare i voluminos.In jur se vede conturul celulei pentru c peste membrana citoplasmatic se suprapune o membran translucid- membrana pellucida cu rol de protecie a ovocitului ce i confer un contur intens eozinofil . In jurul ovocitului se observ n rnduri concentrice celule ca o coroan radiar- corona radiata cu rol trofic i de susinere. Tot acest complex ovocitul, membrana pelucida i corona radiata formeaz foliculul matur de Graaf.n preparatul prezentat se pot ntlni foliculi n diferite stadii de dezvoltare. Cu ct prezint mai puine straturi de celule n corona radiata cu att foliculul este mai imatur. Foliculii se situeaz n zona marginal a ovarului.

23

24

Celula pavimentoas- mezenterul - impregnaie argentic

Mezenterul de broasc este ca i la om o foi uniepitelial format dintr-un singur strat de celule foarte subire. Celulele au forma de pietre de pavaj, de paviment, neregulate, poliedrice. Metoda Ranvier nu este o coloraie ci o impregnaie argentic- i const din precipitarea srurilor de nitrat de argint pe membrana citoplasmatic i n spaiul dintre celule. Astfel vor fi puse n eviden numai contururile celulelor nu i nucleul . Se observ numai conturul celulelor n negru pentru c aa precipit sarurile de nitrat de argint, dar datorit balsamului de Canada cu care se fixeaz lamela de preparat fondul va avea o nuan maron.

25

Celula stelat-maduva spinrii- neuronul multipolar col. H.E.

Macroscopic se poate observa substana cenuie dispus in coarnele anterioare i posterioare, sub forma literei H. La microscop apar zone mai intens eozinofile unde se gsete substana cenuie i zone mai deschise la culoare i mai laxe corespunztoaresubstanei albe. Se caut n substana cenuie motoneuronii din coarnele anterioarecelule multipolare dispuse n grupuri . Neuronii au form stelat i dup cum trece sectiunea aceasta poate s taie prelungirile lor sau poate s treac deasupra nucleului i acesta se va observa, rezultnd cele mai diferite forme. Nucleul este rotund , situat de cele mai multe ori central i prezint un nucleol colorat intens n hematoxilin i o citoplasm eozinofil in care se gsesc corpusculii Nissl (la care se reveni la alt lucrare). In jurul neuronilor apar punctiforme, o multitudine de nuclee ale celulelor gliale la care nu se observ bine citoplasma. Celulele gliale sunt n numr foarte mare i sunt reprezentate de diferite categorii de astrocite. (Componentele din jurul neuronului se retract la preparare ca un halou alb n jurul neuronului, acestea fiind arte facte).

26

27

Celula prismatic- Epiteliul vezicii biliare- col.H.E.

Vezica biliar prezint un epiteliu unistratificat format din celule columnare sau prismatice situat spre lumenul vezicii biliare i care constituie primul strat al mucoasei. Sub stratul de celule epiteliale se gsete membrana bazal care le desparte de esutul conjunctiv, toate la un loc formnd mucoasa . Prin intermediul membranei bazale se leag celulele epiteliale de esutul conjunctiv subiacent. Pe seciune mucoasa are un aspect ondulat, iar celulele au forma dreptunghiular. Nucleul acestor celule are form alungit, ovalar i este situat la polul bazal. La polul apical al celulei se observ o dung eozinofil- bordura striat care se va studia n cadrul altei lucrri.

28

Citoscheletul - Microscopie electronic:

Se observ mai bine dup extragerea citoplasmei sub forma unei reele care mpnzete celula i care are rol i de osatur percum i n mobilizarea diferitelor componente de unde i denumirea de motoschelet, toate filamentele care intr n componena lui sunt intr -o continu micare i transformare prin polimerizare i depolimerizare se formeaz aceste filamente, se scurteaz i trimit organitele sau macromoleculele necesare hrnirii celulei n diferite direcii. n imunofluorescent anticorpii marcai se fixeaz pe filamentele proteice de un anumit tip, actin, intermediare sau microtubuli. Cnd filamentele se grupeaz n fascicule tot mai groase acestea poart denumirea de fibre de stress. Mai multe filamente intemediare se rsucesc n alfa helix pe anumite poriuni i formeaz fascicule- fenomenul de fasciculare i defasciculare. Ele la rndul lor se leag ntre ele cu proteine accesorii i formeaz reeaua, fenomenul de reticulare sau dereticulare.

29

Prelungiri permanente ale celulelor Bordura striat (Cuticula-Bordura n perie-Marginea n perie)

Se evidentiaz ca o dung eozinofil cu striaiuni transversale la microscopul optic. Se gsete la suprafaa epiteliilor mucoasei tubului digestiv, la polul apical al celulelor. Rolul bordurii striate este de mrire a suprafeei de absorbtie a celulelor mucoasei tubului digestiv.

Celula prismatic- Epiteliul vezicii biliare- col.H.E.

Vezica biliar prezint un epiteliu unistratificat format din celule columnare sau prismatice spre cavitatea vezicii biliare i care constituie primul strat al mucoasei. Sub stratul de celule epiteliale se gsete membrana bazal care le desparte de esutul conjunctiv, toate la un loc formnd mucoasa . Prin intermediul membranei bazale se leag celulele epiteliale de esutul conjunctiv subiacent. Pe seciune mucoasa are un aspect ondulat, ca nite valuri, iar celulele au forma dreptunghiular. Nucleul acestor celule are form alungit, ovalar i este situat la polul bazal. La polul apical al celulei se observ - bordura striat - o dung intens eozinofil .

30

Intestinul subire- viloziti intestinale- col. H.E.

Vilozitile intestinale apar ca nite limbi, ca nite ferigi nalte, formate din epiteliul cu celule cilindrice, cu nucleii situai la polul bazal al celulelor, iar la polul apical apare pordura striat ca o dung foarte fin,mai puin exprimat dect la vezica biliar. Axul fiecrei viloziti este format din esut conjuctiv i se gsete sub polul bazal al celulelor epiteliale. Dac dou viloziti sunt foarte apropiate se observ dou borduri striate una lng alta. Se vor urmri numai vilozitile pe seciune lungitudinal.

31

Intestinul gros - epiteliul mucoasei- coloraie albastru alcian pentru mucopolizaharide (MPZ)
Coloraia albastru alcian este specific pentru mucopolizaharide pe care le coloreaz n albastru. Epiteliul este format tot dintr-un strat de celule cilindrice, dar se observ i formaiuni glandulare, criptele sau glandele Lieberkuhn care secret mucus colorat n albastru. Glandele Lieberkuhn sunt cptuite cu celule rotunde cu rol de rezervor care secret mucusul, celule ca nite calice, se numesc celule caliciforme. Mucusul este bobat n mucopolizaharide i de aceea se vor colora n albastru, i care se acumuleaz in gland i apoi este trimis la suprafaa intestinal. De asemenea la suprafaa intestinului se gsete i glicocalixul ( component a bordurii striate),bogat n mucopolizaharide, care se coloreaz i el in albastru. Seciunile transversale prin glandele Lieberkuhn apar ca formaiuni circulare care sunt i ele cptuite de celule caliciforme,i ntre ele se pot gsi celule epiteliale obinuite cu rol de susinere.

32

33

Ultrastructura bordurii striate- Microscopie electronic:

La polul apical al celulelor epiteliale se observ prelungiri permanente n deget de mnu numite microviloziti sau microvili. Se prelungete citoplasma, plasmalema i glicocalixul mrind mult suprafaa de absorbie a fiecrei celule, toate la un loc formnd bordura striat.

34

Microvilozittile- Microscopie electronic:

Prelungiri permanente ale membranei celulare ca i cilii care se observ doar la microscopul electronic ca nite degete de mnu la polul apical al celulelor epiteliale din mucoasa tubului digestiv, dar i la alte organe. n aceste microviloziti (microvili- a nu se confunda cu noiunea de viloziti intestinale) ptrunde citoplasma i ectoplasma (stratul superior al citoplasmei), deci vor conine i din citoschelet filamentele de actin, acoperite de plasmalem i glicocalix (inveliul dulce sau paltonaul celular). Toate la un loc se observ ca bordur striat la microscopul fotonic. Se observ o sectiune transversal i o seciune longitudinal prin microviloziti.

Sectiune longitudinala

Sectiune transversala

35

36

Prelungiri permanente ale celulelor Cilii

Cilii sunt de dou feluri: mobili (vibratili) - de-a lungul mucoaselor arborelui traheo-bronic, de la cavitatea nazal, laringe, trahee, bronhii, i bronhiole pecum i n mucoasa oviductelor (trompele uterine)i imobili (stereocili)- n urechea intern i n canalul ependimar (considerai mai recent potrivit funciei lor a fi microviloziti . Cilii sunt totdeauna acoperii cu un covor de mucus pe care prin micrile lor l ruleaz i astfel epureaz acest tub respirator. Prin micrile permanente de btaie ale cililor se primenete epiteliul respirator, pentru c n covorul de mucus pe care l vehiculeaz rmn cantonate toate impuritile pe care organismul vrea s le elimine, fie c sunt bacterii sau virui, fie c sunt diferite celule necrozate, fie c sunt alte impuriti din aer care au ptruns - corpusculi mici care trebuie eliminai. Uneori se vor observa pe suprafaa cililor resturi de mucozitate eozinofil . La trompele uterine micrile permanente ale cililor dinspre ovar spre uter ajut la coborrea ovulului. Cellalt tip de cili sunt numii imobili sau stereocili pentru c sunt cili spaiali i ntruct apar lipii, aglutinai se mai numesc i cili aglutinai.

37

Trahee- epiteliul mucoasei -cili vibratili (mobili)- col H.E.

Seciunea transversal prin acest organ se recunoate mai uor dup esutul cartilaginos care se va studia la histologie, i este un esut gri albstrui n care se gsesc celulele n csue numite condroplaste .Se microscopizeaz doar mucoasa traheei, i anume epiteliul mucoasei, format din celule cilindrice sau prismatice, cu nucleii ovalari situai in spre 1/3 inferioar a celulei, colorai cu hematoxilin, iar citoplasma cu eozin. Deosebit este faptul c nucleii se gsesc la diiferite nlimi i n plus exist i celule de rezerv la baza acestui epiteliu care vor s nlocuiasc epiteliul, nct dau senzatia de fals stratificare - motiv pentu care se numete epiteliu pseudostratificat. Din loc n loc se observ celule rotunjite i mai puin colorate-celule caliciforme care secret mucus (se vor studia la histologie). Cilii colorai roz -eozinofil, se observ foarte bine la obiectivul 20 sau 40, ca firioare separate, nu aglutinate i cteodat la suprafaa lor apar resturi din covorul de mucus.

38

39

40

Maduva spinrii- canalul ependimar- stereocili- col. H.E.

Macroscopic se poate observa substana cenuie dispus in coarnele anterioare i posterioare sub forma literei H. La microscop apar zone mai intens eozinofile unde se gsete substana cenuie i zone mai deschise la culoare i mai laxe corespunztoare substanei albe. In mijlocul substanei cenuii se gsete canalul ependimar format dintr-un epiteliu tot pseudostratificat, iar la polul apical al celuleor din loc n loc se observ cilii aglutinai sub forma unor smocuri.Dup noile teorii histologice se presupune c ar avea un rol resorbtiv i c deci pot fi considerai microviloziti. In lumenul canalului ependimar se gsete o substan eozinofil-lichidul cefalorahidian (LCR) Motoneuronii din coarnele anterioare- celule multipolare dispuse n grupuri au form stelat i dup cum trece sectiunea aceasta poate s taie prelungirile lor sau poate s treac deasupra nucleului i acesta se va observa, rezultnd cele mai diferite forme. Nucleul este rotund , situat de cele mai multe ori central i prezint un nucleol colorat intens n hematoxilin i o citoplasm eozinofil in care se gsesc corpusculii Nissl (la care se reveni la alt lucrare). In jurul neuronilor apar punctiforme, o multitudine de nuclee ale celulelor gliale la care nu se observ bine citoplasma. Celulele gliale sunt n numr foarte mare i sunt reprezentate de diferite categorii de astrocite.

41

42

Frotiu cu spermatozoizi-celule flagelate-col. MayGrunwald Giemsa (MGG)

Coloraia May Grunwald Giemsa (MGG) este o coloraie compus n care apar nucleele ntr-o nuan special de violet . Spermatozoizii sunt formai din cap, pies intermediar(col) i flagel (coad) . La nivelul capului se gsete nucleul colorat n violet. La microscopul electronic structura flagelului este identic cu structura cilului, doar c n jurul axului central de microtubuli se afl foarte multe mitocondrii, care furnizeaz energia necesar micrii.

43

Celule eucariote unicelulare cu cili sau flageli Preparat nativ cu celule ciliate sau flagelate -Se obine din ap de balt inut la temperatura camerei. Dup 2
sptmni se dezvolt eucariotele . unicelulare prevzute cu cili sau flageli cu deplaseze n diferite zone unde i caut verzi sau brune. Organitele celulare sunt excepia nucleului sau diferitelor vacuole. Acestea sunt organisme rol n micare i pot s s e hrana care const n alge mai dificil de observat, cu

Clasa ciliate : Parameciul i Vorticela Parameciul Cel mai des se ntlnete parameciul care prezint cili vibratili de jur mprejur cu ajutorul crora se mic extrem de rapid. Se observ adevrate colonii de parameci aduli i mai ales tineri.

44

Vorticela este mai rar, eman un peduncul pe care i-l poate contracta i are rol de prindere n plajele de alge. Are cili doar n jurul stomei numii cili peritrihi cu ajutorul crora dirijeaz prin curenii de ap creai microorganismele ce urmeaz a fi digerate.

Clasa flagelatelor : Euglena i Clamidomonas Euglena prezint un flagel cu care se mobilizeaz, i organite greu de observat, cloroplaste, stigm, vacuole pulsatile i digestive.

45

Amoeba Se deplaseaza ca i leucocitele prin micri lente ameboidale prin emiterea de pseudopode care sunt trimise n spaiu i cu care se fixeaz de structurile nvecinate.

46

Alge Apar n colonii mici, verzi , multe, sau alge brune care au striaiuni aproape geometrice.

47

Ultrastructura cilului - Microscopie electronic :

Sectiune longitudinal prin cil
Partea liber a cililor - prelungiri permanente ale suprafeei celulare (a nu se confunda cu microvilozitile) se numete axonem i n ea se observ filamente foarte groase - microtubulii. n citoplasm se gsesc corpusculii bazali care prezint fiecare n partea inferioar rdcina.

48

Seciune transversal prin cil

n axonem se gsesc 9 perechi de microtubuli, situate n cerc i o pereche central care prezint n jurul ei o teac. Intotdeauna microtubulul A trimite brae de dinein spre microtubulul B cu care vine n contact, de asemenea microtubulul A trimite i nite brae radiare spre perechea central de microtubuli. Prin scurtarea bratelor de dinein se produce glisarea lor n spaiu i cilul se ncovoaie sau se ndreapt, rezultnd micrile vibratorii ale cilului (zeci pe secund) care fac s se mite covorul de mucus. Fiecare microtubul e format din 13 protofilamente. n corpusculul bazal se gsesc 9 triplete de microtubuli, situate n cerc fr pereche central. Pe seciune transversal corpusculul bazal seamn cu centriolul. (Acesta se va studia n cadrul mitozei cnd apare al doilea centrozom. Centozomul este format din 2 centrioli si apare n timpul diviziunii celulare.) Flagelii au ultrastructura asemntoare cu a cilului.

49

50

Jonciunile intercelulare- Microscopie electronic:

Sunt dispozitive speciale care menin aderena celular necesar pentru a realiza o barier de separare a 2 medii structuralizate diferit. Se clasific n : 1) Dispozitive joncionale de adezivitate -desmozomii- care asigur aderarea mecanic i solidaritatea necesar tesuturilor supuse solicitrilor mecanice intense: epitelii, miocard, mucoasa colului uterin . Desmozomii n band sau centur (belt) - zonula adherens- sunt alctuii din mnunchiuri de filamente de actin care nconjur celulele epiteliale la polul lor apical i un material fibrilar care ocup spaiul de 10-15 nm dintre celule. Desmozomii n pat (spot) -macula adherens- menine coeziunea n puncte de contact ca nite nituri. Citoplasma prezint condensri numite discuri citoplasmatice, precum i filamente de keratin. Hemidesmozomii au structur asemntoare cu desmozomii n spot care leag celula de membrana bazal subiacent. Structur format jumtate din desmozom n pat i jumtate din membrana bazal.

51

2) Jonciunile impermeabile (tight junctions) -zonula occludensSe gsesc n epiteliul tubilor contori, epiteliul vezicii urinare i biliare i la nivelul barierei hematoencefalice. Sunt alctuite din iruri de proteine integrale gemene care se ntreptrund ca dinii unui fermoar. Permeabilitatea lor este modificat de nivelul calcemiei, presiunea osmotic i inflamaie.

3) Jonciuni de comunicare

- Sinapse - Deschise ( gap junctions )

Gap junctions - macula comunicans permit traversarea moleculelor mici solubile n ap (ioni, glucide, aminoacizi, hormoni, vitamine, medicamente) prin canale formate din 6 proteine care trec de la o celul la alta i care n funcie de structura spaial pot fi nchise sau deschise. Se gsesc ntre celulele endocrine, nervoase, musculare, hepatice care sunt cuplate metabolic i electrochimic- legate n cultur-. La nivelul unei celule se gsesc multiple gap jonctions, acestea fiind alctuite din mii de conexoni. Conexonii sunt prevzui cu mecanisme de nchidere n cazul apariiei unui agresor, substan toxic sau virus, izolndu-se cele afectate de cele neafectate.

52

Complexele joncionale apar la nivelul celulelor epiteliale cu rol de transport i de absorbie i sunt alctuite din jonciuni strnse, jonctiuni n band i jonctiuni n spot.

53

Ultrafagocitoza
Ultrafagocitoza const n fagocitarea unor pulberi foarte fine de ctre celule numite macrofage. Macrofagele (fagocitele) din esuturi poart de obicei numele esutului respectiv: macrofagul din ficat, macrofagul din plmn, macrofagul esutului osos etc..

Macrofagul din plmn- col H.E. i granule de pigment antracotic fagocitate

Plmn de fumtor apare macroscopic absolut negru,ntruct microscopic se observ intraalveolar ct i n interstiiu-esutul din spaiul interalveolar alveole extrem de multe macrofage ncrcate cu pigment antracotic, care d o culoare brun nchis sau neagr celulelor. (Datorit balsamului de Canada de culoare galben prin suprapunere cu negru apar nuane de brun). Macrofagele sunt mult hipertrofiate prin fagocitoz i formeaz adevrate plaje de celule .

54

55

Macrofagul din piele - histiocitul -col Kernechtrot (rou nuclear) i granule de albastru de tripan fagocitate
Pielea este format din 3 straturi, epiderm, derm i hipoderm. La obolan s-a injectat un colorant numit albastru de tripan care a fost fagocitat de macrofage . Histiocitul are o form alungit, nucleu situat excentric colorat cu alt colorant rou nuclear. Exist posibilitatea de a vedea numai nucleele precum i fibre de colagen i elastin care formeaz o reea de esut conjuctiv. Macrofagele care au fagocitat albastru de tripan vor prezenta granulaii albastre n jurul nucleului colorat n rou.

56

57

Macrofagul din ficat( celula Kupfer)- col H.E.i granule de tu de China fagocitate
Se caut vena centrolobular pe seciune transversal i numai pe aceste seciuni se vede c pornesc de la ea ca nite raze trabeculele, cordoanele hepatice ale lui Remack, care prezint un traiect sinuos i au celulele destul de apropiate ntre ele, nct nu se observ bine spaiul dintre ele . Intre cordoanele hepatice spaiile se numesc capilare sinusoide i n ele se afl din loc n loc macrofagele ficatului - celulele Kupfer. In cazul injectrii de tu de China la animalul de experien n vena port, acesta va fi fagocitat de celulele Kupfer punndu-le mai bine n eviden sub form de celule negre mult hipertrofiate.. La obiective mari se pot observa granulaile negre de tu de China. Celula Kupfer prezint un nucleu excentric care n cazul fagocitrii de tu de China poate s nu se vad fiind acoperit de granulaii negre.

58

59

Fenomene de transport - Transportul prin vezicule Microscopie electronic:

Endocitoza : Pinocitoza sau Fagocitoza Pinocitoza: simpl sau mediat de receptori

Endocitoza este fenomenul de transport prin vezicule prin care ptrund din exterior diferite substane care trebuie s fie nglobate i de care are nevoie celula. nglobarea de substane solide se numete fagocitoz, iar de substane n stare solubil se numete pinocitoz. La pinocitoza mediat de receptori se observ c n zona n care se va produce fenomenul de endocitoz are loc creterea numrului de receptori precum i acumularea de clatrin, o protein special care va mbrca vezicula ca un paltona. Are loc nvaginarea membranei i se formeaz o caveol cu nveli de clatrin- coated pit - care se adnceste pn cnd se rup pereii plasmalemei i se formeaz vezicule mbrcate n clatrin - coated vesicles(endozomi), care contin substana de care are nevoie celula. Clatrina este format din proteine-trimere numite triskelion care se vor grupa n spaiu formnd hexagoane, care vor mbrca vezicula.

60

61

Exocitoza
Este fenomenul prin care sunt transportate prin vezicule la exterior substanele secretate de celul- de exemplu substane hormonale. Mai nti plasmalema ncepe s nmugureasc i n aceast zon se acumuleaz substanele care trebuie exocitate, zona se subiaz treptat i apoi se va rupe. Vezicula va conine n membrana ei fragmente din structura plasmalemei. Sute de astfel de vezicule se rup de pe suprafaa celulei n fiecare secund -de exemplu veziculele ncrcate cu material de secreie provenite din aparatul Golgi. n cazul mastocitului veziculele formate sunt eliberate prin degranularea mastocitului la contactul cu alergenul, provocnd astfel eliberarea de substane histaminice responsabile de strile alergice.

62

Forme nucleare
Nucleul rotund - neuronul - maduva spinrii col. H.E.
Macroscopic se poate observa substana cenuie dispus in co arnele anterioare i posterioare sub forma literei H. La microscop apar zone mai intens eozinofile unde se gsete substana cenuie i zone mai deschise la culoare i mai laxe corespunztoaresubstanei albe. Se caut n substana cenuie motoneuronii din coarnele anterioarecelule multipolare dispuse n grupuri . Neuronii au form stelat i dup cum trece sectiunea aceasta poate s taie prelungirile lor sau poate s treac deasupra nucleului i acesta se va observa, rezultnd cele mai diferite forme. Nucleul este rotund globulos situat de cele mai multe ori central bogat n eucromatin dar prezint i heterocromatin i prezint un nucleol situat central i ntunecat la culoare fa de restul nucleului. Citoplasma este eozinofil i in ea se gsesc corpusculii Nissl (la care se reveni la alt lucrare). In jurul neuronilor apar punctiforme, o multitudine de nuclee ale celulelor gliale la care nu se observ bine citoplasma. Celulele gliale sunt n numr foarte mare i sunt reprezentate de diferite categorii de astrocite.

63

Nucleul rotund - Ovocitul - Ovar - col.H.E.

Ovocitul este celula cea mai mare din organism -la om 250 microni cu forma adaptat perfect la funcie, plin cu principii nutritive, substane de rezerv glucidice, lipidice,protidice plus diferite substane ionice care se observ la obiectivul maxim sub form de granulaii n citoplasm. Citoplasma este eozinofil, iar nucleul, i el foarte mare, este situat central, colorat n mov cu hematoxilin, i deschis la culoare nct se observ foarte bine nucleolul , care este mai nchis la culoare i voluminos.In jur se vede conturul celulei pentru c peste membrana citoplasmatic se suprapune o membran translucid- membrana pellucida cu rol de protecie a ovocitului ce i confer un cont ur intens eozinofil . In jurul ovocitului se observ n rnduri concentrice celule ca o coroan radiar- corona radiata cu rol trofic i de susinere. Tot acest complex ovocitul, membrana pelucida i corona radiata formeaz foliculul matur de Graaf.n preparatul prezentat se pot ntlni foliculi n diferite stadii de dezvoltare. Cu ct prezint mai puine straturi de celule n corona radiata cu att foliculul este mai imatur. Foliculii se situeaz n zona marginal a ovarului.

64

Celula binucleat - ficatul,celula hepatic,coloraie H. E.

Se caut vena centrolobular pe seciune transversal i numai pe aceste seciuni se vede c pornesc de la ea ca nite raze trabeculele, cordoanele hepatice ale lui Remack, care prezint un traiect sinuos i au celulele destul de apropiate ntre ele, nct nu se observ bine spaiul dintre ele . Intre cordoanele hepatice spaiile se numesc capilare sinusoide i n ele se afl din loc n loc macrofagele ficatului care se vor studia la alt lucrare. Coloraia hepatocitelor: citoplasma n roz, cu eozin iar nucleul n mov, cu hematoxilin. Nucleul este rotund situat central i prezint unul sau mai muli nucleoli. Pot exista celule cu doi nuclei din loc n loc , pentru c este organul cu cea mai mare putere de regenerare . Vena centolobular prezint hematii n lumen care au culoarea ocrului i ajut la recunoaterea ei. Postoperator pot apare zone cu zeci de celule binucleate aceasta fiind semnul de regenerare rapid.

65

Nucleul turtit - fibra muscular striat - celula multinucleat - col hematoxilin feric
Fibra muscular striat sau celula muscular prezint striaiuni longitudinale care sunt miofibrilele i striaiunile transversale mai fine, vizibile doar la obiectivele mari care dau alternana de ntunecat sau deschis,- discuri clare sau ntunecate. Fibra muscular striat prezint muli nuclei ( zeci de nuclei ) situai sub plasmalem care se numete sarcolem i care sunt alungii, uneori chiar turtii. Celulele sunt situate ntr-un sinciiu, sau reea, imtotdeauna alungite, continundu-se una cu cealalt. Cu ajutorul srurilor de fier se coloreaz n negru toate structurile celulare .

66

67

68

Nucleul ovalar- epiteliul prismatic al vezicii biliare col.H.E.

Vezica biliar prezint un epiteliu unistratificat format din celule columnare sau prismatice situat spre lumenul vezicii biliare i care constituie primul strat al mucoasei. Nucleul acestor celule are form alungit, ovalar i este situat la polul bazal. La polul apical al celulei se observ o dung eozinofil- bordura striat care se va studia n cadrul altei lucrri. Sub stratul de celule epiteliale se gsete membrana bazal care le desparte de esutul conjunctiv, toate la un loc formnd mucoasa . Prin intermediul membranei bazale se leag celulele epiteliale de esutul conjunctiv subiacent. Pe seciune mucoasa are un aspect ondulat, iar celulele au forma dreptunghiular.

69

Nucleul n pecete-esutul adipos-adipocitul-coloratie HE.

Se gsete deobicei la periferia majoritii organelor, i este format dintr-o multitudine de celule numite adipocite care au rolul de a stoca lipidele i colesterolul. In timpul preparrii lamele fiind trecute prin solveni organici (xilen, toluen sau benzen,) lipidele vor fi dizolvate de acetia i celulele vor aprea optic goale. Lipidele acumulate mping citoplasma la periferia celulei mpreun cu nucleul i se va observa un uor contur citoplasmatic care dubleaz plasmalema i nucleul caracteristic adipocitului- turtit ca o piatr de inel colorat cu hematoxilin. Adipocitul se descrie ca o celul avnd aspect de inel cu pecete. Celula poate avea form rotund- ovoidal.

70

Frotiul sanguin - coloraie May Grunwald Giemsa (MGG)

Hematiile ocup intregul cmp microscopic i apar sub forma unor celule rotunde, sub form de disc biconcav, de culoare roie crmizie, uneori dispuse n fiicuri. Printre hematii din loc n loc apar celule cu nuclee colorate n mov numite leucocite clasificate dup forma nucleului n polimorfonucleare, pentru c nucleii lor au mai muli lobi i mononucleare. Polimorfonuclearele sau granulocitele au fost numite n trecut polinucleare, deoarece sa crezut c ar avea mai muli nuclei, astzi denumirea fiind evitat . Granulocitele se clasific dup tipul de granulaii secundare : Neutrofilele prezint granulaii secundare care nu se coloreaz nici cu coloranii acizi i nici bazici. Granulaiile granulocitului eozinofil reacioneaz numai cu coloranii acizi de unde i denumirrea de granlocit acidofil, iar culoarea acestor granule este un rou crmiziu ca i icrele de Manciuria. Granulaiile bazofilului se coloreaz cu coloranii bazici . Neutrofilul prezint un nucleu care poate avea 2 sau mai muli lobi, pn la 5 lobi, precum i uneori o prelungire fin, ca un b de toboar - drum stik leucocitar- un filament de cromatil care reprezint corpusculul Barr, sau al 2-lea cromozom X inactivat la femei. Acesta apare doar la 3% dintre neutrofilele acestora. Neutrofilele sunt primele celule care fagociteaz, ele merg la focarul de infecie unde atac microbii i ncepe necroza esuturilor, elibereaz acolo echipamentul enzimatic pe care l conin n lizozomi, o mulime de enzime antimicrobiene de tipul lizozimului, mieloperoxidazei, daminioxidazei,care ajut la digerarea acestor microbi. Mai conin i alte substane n granulele lor secundare cum este fosfataza alcalin care pot fi evideniate cu ajutorul coloraiilor speciale, i fagocitine cu aciune important n aciunea lor antibacterian. PMN rmn la locul de invazie i mpreun cu esuturile necrozate formeaz puroiul. n mod normal apar n proporie de 40 pn la 75% n sngele circulant, fiind fagocitele din prima linie de atac.

71

Eozinofilele care dei se gsesc n cantitate redus de 1-6%au un rol important n reaciile imune de tip alergic la diferii alergeni : polenuri (febra de fn pn la astm alergic), la persoanele care prezint parazitoze (oxiuri sau helmini ) .Dac ptrund n organism duc la creterea numrului acestor eozinofile. Granulele lor specifice rou crmizii, ca icrele de Manciuria, pot s acopere nucleul care este bilobat, cu form de desag.Eozinofilele conin i: enzime cu ajutorul crora diger complexele antigen - anticorp, precum i histaminaze ( substane care inactiveaz histamina) i alte substane vasoactive secretate de bazofile . De aceea la alergici unde histamina se elibereaz n cantitate mare trebuie s creasc i numrul de eozinofile. La microscopie electronic spre deosebire de neutrofile unde se gseste un bogat echipament lizozomal la eozinofile se observ un bogat echipament granular, cu granulele mbrcate n membrane proprii, cu un centru cristaloid, bogate n histaminaze. i mai puin n alte tipuri de organite.

Bazofilele au nucleul n desag iar granulele lor se coloreaz cu coloranii bazici ntr-un albastru mov nchis acoperind uneori cei 2 lobi
72

ai nucleului. Granulele lor mari, bogate n histamin, mpreun cu alte tipuri de amine cum ar fi slow reactive substances of anafilaxy (SRSA) i heparina se elibereaz n sngele alergicilor cnd acetia vin n contact cu alergenii. Aminele cresc permeabilitatea capilar i dau fenomenele de exudat la nivelul bronhiilor, cavitii nazale, sau eriteme la nivel tegumentar datorit congestiei vasculare i toate reaciile caracteristice alergicilor . Se gsesc n sngele circulant n cantitate mic,normal sub 1%.

Mononuclearele- a 2-a clas de leucocite se submpart n limfocite i monocite i prezint un singur nucleu nelobat . Limfocitele se gsesc ntr-un numr de 20-40% n sngele circulant i dup dimensiunea lor se clasific n mici, mijlocii sau mari. Limfocitele mici se aseamn ca dimensiuni cu hematia, ntreaga celul este ocupat de nucleu i rar se observ la periferie puin citoplasm. Limfocitele mijlocii i mari prezint mai mult citoplasm care ia o nuan azurofil, un cenuiu albstrui, ca fumul de igar. Ele nu au echipament bogat lizozomal dar au rol de a secreta substanele implicate n reaciile imune de tip l, ll, lll, inclusiv reacile de tip anafilactic. Limfocitele de tip T secret limfokine, interleukine, iar limfocitele de tip B, (care la microscopul electronic prezint periori limfocite proase,) dup transformarea lor n plasmocite (prin diviziune de ntinerire), secret imunoglobulinele, anticorpii ,IgA, IgG, IgM, IgE, care intervin n toate reacile imune. In microscopia electronic se descrie un nucleu foarte puin lobat , mitocondrii, aparat Golgi i alte tipuri de organite mai puin lizozomi.

73

Monocitul a doua categorie de mononucleare, este un macrofag. Dup ce neutrofilele merg primele la focarul de invazie, se apropie prin micri ameboidale lente se apropie monocitele care vor digera resturile celulare mari rmase n zona de agresiune inclusiv corpurile neutrofilelor, i microbiene care se gsesc n acea zon. Monocitele sunt prevzute cu un bogat echipament enzimatic lizozomal, pe care l elibereaz n momentul atacului i eman pseudopode. Nucleul lor este uor incizat reniform, asemnat i cu o boab de fasole se gseste uor excentric i e inconjurat de citoplasm azurofil bazofil. Se gsesc n cantitate de 2-10% i pe msur ce migreaz n esuturi se transform n macrofagele din respectivele esuturi cunoscute, celule Kupffer, histiocite, sau alte tipuri de macrofage. Monocitele din snge mpreun cu macrofagele din esuturi formeaz marele sistem monocito - macrofagic de aprare n invaziile microbiene. Tot n sngele circulant se pot observa mici fragmente, plachetele sangvine, trombocitele care se gsesc ntre 150.000 - 400.000/ mm cub, care provin dintr-o celul mare numit megacariocit din mduva hematogen, din care se desprind. Prin aglomerare formeaz trombul alb, i realizeaz coagularea sngelui.

74

Frotiu de snge col. Albastru brillant crezil

Aceast coloraie se face pentru evidenierea reticulocitelor. n mod normal hematiile se formeaz n mduva hematogen ca celule nucleate, dar pe msur ce se matureaz i pierd nucleul i ptrund n torentul circulator. n forma lor de hematii tinere se mai numesc i reticulocite i mai prezint resturi nucleare, respectiv ARN-ul din nucleu, care se evideniaz cu aceast coloraie. Eritrocitele se matureaz i dup 1 -2 zile n sngele circulant se transform n hematii adulte, care au o via de pn la 120 de zile. Numrtoarea lor este important deoarece la persoanele anemice numrul lor crete, ajutnd la diagnosticarea respectivelor afeciuni. Hematiile adulte se coloreaz ntr-un verde cenuiu, iar reticulocitele (hematiile tinere, care sunt i uor mai mari) se recunosc dup granulele violet pe care le prezint n citoplasm.

75

Ficat - hepatocite -coloraie verde metil pironin

Aceast coloraie este utilizat pentru diferenierea acizilor nucleici . Ea evideniaz cu verde metil A.D.N.-ul din nucleu, care va conferi nucleului o nuan verde cenuiu deschis, iar A.R.N.-ul din toar celula se va colora ntr-o nuan crmizie cu pironin. n nucleol se gsesc precursorii ribozomali care constau din ARN i deci nucleolul (sau nucleolii) se va colora n rou in mijlocul nucleului, iar n citoplasm se evideniaz ribozomii ataai reticulului endoplasmatic rugos sub forma unor granule roii.

76

Nucleul -Microscopie electronic:

Nucleul este alctuit din : nveliul nuclear -Membrana extern- prevzut cu ribozomi, se continu cu RE rugos pe faa sa extern -Membrana intern- formeaz cu cea extern spaiul intermembranar -Lamina nuclear (Lamina dens intern) format dintr-un strat fin fibros, ader la memebrana intern

Cromatin- Se clasific n : Eucromatin, metabolic activ, slab colorat, care poate fi trascris. Ea formeaz o reea foarte fin n interiorul nucleului. Heterocromatin, metabolic inactiv, condensat, mai nchis la culoare .Din ea se formeaz la sexul feminin corpusculul Barr. Se dispune frecvent periferic, sau n jurul nucleolului sau poate forma grunji mari (cariozomi) .

77

* -Porii nucleari- formai din 8 proteine dispuse octogonal care delimiteaz un spaiu liber sau opturat de un diafragm fin.Strbat nveliul nuclear n vederea transportului transmambranar.

78

Forme de nuclee :

-rotund -ovalar -polilobat

79

Nucleolul
Nucleolul este cea mai dens structur corpuscular din interiorul nucleului, prezent n interfaz. Prezint mai multe zone:

* Zona granular- format din granulaii de 15-20 nm, care reprezint

precursori ribozomali. * Zona fibrilar- mai ntunecat format din filamentele de cromatin ale celor 5 perechi de cromozomi (organizatori nucleolari) reprezentate prin fragmentele de A.D.N. cromozomial dup modelul crora se sintetizeaz r A.R.N. * Zona lacunar (interstiial)- deschis la culoare -cu aspect de lacune.

80

81

Fusul de divizune-Microscopie electronic

Apare n profaz i este alctuit din zecile de microtubuli (polari i cinerocorici ) de care se prind cromozomii

-sectiune longitudinal

-seciune transversal

82

Mitoza

Mitoza este tipul de diviziune caracteristic celulelor somatice spre deosebire de meioz(diviziune reducional) care se ntlnete doar la celulele sexuale .

Celule vegetale de ceap - coloraie Hematoxilin feric

Celulele de ceap au form dreptunghiular, cu o structur foarte simpl, i la nivelul meristemului de cretere au o rat de diviziune foarte accelerat, evideniindu-se diferitele etape ale mitozei: profaza, metafaza, anafaza i telofaza.Acestea apar colorate n negru. * Profaza este cea mai lung ca durat- la om 30 minute . * Metafaza, este cea mai important i dureaz numai 8 minute. * Anafaza 18 minute * Telofaza 4 minute Ciclul celular este perioada cuprins ntre sfritul unei diviziuni care a dat natere unei celule i terminarea diviziunii acestei celule. Normal ciclul celular dureaz 25 ore, din care mitoza ocup numai o or. 1. Profaza se caracterizeaz prin apariia celui de al 2-lea centru celular sau centrozom, organit specific diviziunii celulare format din 2 centrioli. Pe seciune transversal centriolul este format din 9 triplete de microtubuli,(structura se aseamn cu a corpusculului bazal). Intre centozomi apar microtubulii care se alungesc i formeaz fusul de divizune. Cromatina se condenseaz formnd un ghem numit spirem, apoi prin condensare apar ca nite bastonae de cromatin, cromozomii care se vor fixa mai trziu de filamentele fusului de diviziune. Dispare nucleolul .Pe preparat cromozomii apar ca nite grunji, fr a putea distinge dispariia nveliului nuclear. 2. Prometafaza este o etap de trecere n care dispare nveliul nuclear i cromozomii se prind de filamentele fusului de diviziune cu ajutorul cinetocorilor. Fiecare cromozom are 2 cinetocori ca nite cleti cu care se fixeaz de filamente fusului, care sunt microtubulii (cinetocorici), i vor executa o serie de micri oscilatorii n trec erea spre metafaz.

83

3. Metafaza Are loc clivarea longitudinal a fiecrui cromozom n 2 cromatide, fiecare prevzut cu cinetocorul ei, i din cei 46 cromozomi se ajunge la 92 cromozomi i deci dedublarea genomul. Toi cromozomii stau n aceast etap la mijlocul fusului de diviziune la ecuatorul su, motiv pentru care formaiunea se numete plac ecuatorial sau plac metafazic. Pe preparat se poate observa placa ecuatorial dar nu se poate distinge fiecare cromozom n parte.

4. Anafaza Cromatidele formate n metafaz se ndeprteaz ntre ele cnd 46 pornesc spre un pol al celulei iar 46 vor porni spre cellalt pol al celulei. Cromatidele se vor numi de acum cromozomi care se vor deplasa datorit scurtrii i alungirii microtubulilor. Exist o anafaz A cnd se scurteaz microtubulii cinetocorici, i o anafaz B cnd se alungesc microtubulii polari, asigurndu-se naintarea cromozomilor n drumul lor spre poli. Pe preparat cromozomii se observ la diferite distane . 5. Telofaza In aceast faz cromozomii au ajuns la cei 2 poli ai celulei i se grupeaz n mase ordonate n jurul acelui centrozom. Microtubulii continu s se alungeasc ndeprtnd i mai mult cei doi poli celulari. La sfritul telofazei se formeaz nucleolul i reapare nveliul nuclear, dispar cromozomii pentru a remodela cromatina sub form de eucromatin.

84

6. Citodiereza sau citochineza const n clivarea citoplasmei mpreun cu nucleul corespunztor ei, astfel nct dintr-o celul mam s apar 2 celule fiice care vor avea acelai material genetic cu celula mam, i vor semna mai mult sau mai puin cu aceasta. n citochinez se formeaz la mijlocul celulei sub plasmalem un inel contractil n care apar filamente de actin care se scurteaz, trag i astfel ngusteaz inelul de la mijlocul celulei i n final citoplasma se va fragmenta n 2 celule fiice.

85

Celule n mitoz din meristemul radicular de ceap

Vrful germinativ al rdcinii de ceap ( meristemul ) furnizeaz un sistem adecvat studiului mitozei, deoarece aici se pot surprinde un numr mare de celule aflate n diferite faze ale mitozei. Mitoza se desfoar asemntor la celulele animale i vegetale,iar materialul de studiu este uor de preparat. * Recoltarea se preleveaz vrfurile rdcinii de ceap, avnd dimensiuni de 5-10 mm. * Fixarea se introduc n soluie de fixator 3:1 alcool etilic, acid acetic glacial, timp de 24-48 ore. * Colorarea cu colorant carmin acetic care se prepar astfel: -Se dizolv 1 g carmin ntr-un amestec de 45 ml acid acetic glaciali 55ml ap distilat -Se fierbe cteva minute dup care se las s se rceasc -Se filtreaz -Se pstreaz la frigider n sticle colorate Carminul acetic coloreaz nucleul i cromozomii. Se scot rdcinuele din fixator i se introduc ntr-o eprubet, peste care se toarn carmin acetic. Se nclzeste pn la fierbere cteva secunde. Se toarn ntr-o plac Petri de unde se scoate cte o rdcinu i se aplic pe o lam . Se secioneaz cu un bisturiu la 3 mm de vrf, lsnd pe lam numai vrful. Se aplic o lamel care se bate delicat cu un b de chibrit pentru etalarea straturilor celulare. Se urmresc fazele mitozei la microscop.

86

87

88

Etapele mitozei -Microscopie electronic

89

90

91

Cariotipul uman
Se stabileste la cromozomii n metafaz i se ordoneaz n funcie de mrime i morfologie, n ordine descrescnd pe perechi. Se formeaz 7 grupe notate de la A la G n ordine descresctoare a dimensiunilor lor i cromozomul Y separat. Grupa A B C D E F G Numrul cromozomului 1,2,3 4,5 6,7,8,9,10,11 12,13,14 16,17,18 19,20 21,22

92

Fenomenul de bandare
Ansele de cromatin sunt alctuite din molecule de A.D.N. i proteine cromozomiale, predominant histone. Nucleozomul este unitatea de mpachetare a genomului,fiind alctuit din filamente de cromatin nfurate ca pe un mosor format din 8 histone.Nucleozomul const din 200 de perechi de baze din care 140 sunt dispuse n jurul unui octamer de histone numit i miez, iar 60 perechi formeaz partea liber sau linker(A.D.N. de legtur). Repetarea ordonat a acestor uniti de mpachetare a cromozomului a fost comparat cu niruirea mrgelelor pe a.

93

Solenoidul este unitatea urmtoare de mpachetare a cromatinei fiind alctuit din 6 nucleozomi i avnd o grosime de 30 nm. n continuare filamentul prezint bucle care contribuie i ele la condensarea cromatinei care la rndul lor se rsucesc ducnd la dispoziia n benzi clare i ntunecate vizibile la nivelul cromozomilor.

94

95

Fenomenul de bandare ajut la cartografierea genelor. Se poate studia pe cromozomii uriai de Drosophila melanogaster.

96

Ribozomii i Reticulul endoplasmatic rugos

Hepatocite -corpusculii Berg - Ficatul - coloraie H. E.
Se caut vena centrolobular pe seciune transversal i numai pe aceste seciuni se vede c pornesc de la ea ca nite raze trabecule, cordoanele hepatice ale lui Remack, care nu sunt drepte , sunt sinuase i cu celulele destul de apropiate ntre ele nct nu se observ spaiul dintre ele . Coloraia hepatocitelor, citoplasma n roz, cu eozin iar nucleul n mov, cu hematoxilin. Nucleul este rotund situat central i prezint unul sau mai muli nucleoli. n jurul nucleului n citoplasm, la obiectivul 40 i cu condensorul ridicat se observ corpusculii Berg, granulaii bazofile care sunt conglomerate de RER i ribozomii ataai lor. n general o celul prezint citoplasm cu att mai bazofil cu ct are o sintez proteic mai intens (celulele tinere, celulele glandulare etc.).

97

Neuronul - corpusculii Nissl -maduva spinrii- col. H.E.

Se caut n substana cenuie motoneuronii din coarnele anterioarecelule multipolare dispuse n grupuri . Neuronii au form stelat i dup cum trece sectiunea aceasta poate s taie prelungirile lor sau poate s treac deasupra nucleului i acesta se va observa, rezultnd cele mai diferite forme. Nucleul este rotund i prezint un nucleol colorat n hematoxilin i o citoplasm eozinofil in care se gsesc corpusculii Nissl, granulai i bazofile (corespondenii corpusculilor Berg de la ficat). Ei reprezint conglomerate de RER i ribozomii ataai lor, care dau un aspect de tigru sau de panter i se numesc i corpii tigroizi.

98

Neuronul - corpusculii Nissl -maduva spinrii- col. albastru de toluidin

Asemntor cu preparatul anterior,neuronii au form stelat dup cum trece sectiunea poate s taie din coarnele lor, poate s treac deasupra nucleului . Nucleul este rotund i prezint un nucleol colorat n albastru mai intens, iar citoplasma are nuan albastru deschis i prezint corpusculii Nissl, granulaii bazofile (n albastru nchis). Ei sunt conglomerate de RER i ribozomii ataai lor, care dau un aspect de tigru sau de panter i se numesc corpii tigroizi. Se vizualizeaz mai bine dect n coloraia H.E.

99

Pancreasul - Acini pancreatici - col. H.E.

Acinii pancreatici constituie componenta exocrin a pancreasului care secrt complexul de enzimele digestive pancreatice i sunt mai greu de difereniat la obiectivele mici . La obiective mai mari se observ 6-7 celule situate n cerc cu un lumen care poate s fie liber sau umplut cu substana secretat de aceste celule (granulele de zimogen ).Celulele au o citoplasm colorat diferit: n jurul nucleului i la periferia lor spre polul bazal, datorit acumulrii de reticul endoplasmatic i ribozomi care sintetizeaz intens proteine, exist o citoplasm bazofil, iar spre lumenul acinului citoplasma este mai eozinofil, datorit maturrii materialului secretat sub form de granule de zimogen. Mai muli acini se unesc i i vars coninutul intr-un canalicul colector, mult mai mare dect acinul i mai deschis colorat dect acesta.

100

101

Reticulul endoplasmatic: rugos i netedMicroscopie electronic:

Reticulul endoplasmatic rugos este o form funcional implicat n sinteza substanelor proteice alctuit din tubi sau canalicule pe care se gsesc ataai ribozomii ca nite granule . Din loc n loc tubii sau canaliculele se lrgesc i formeaz cisterne sau saci.

Reticulul endoplasmatic neted este o alt form funcional a aceluia organit ,implicat n sinteza substanelor lipidice i se prezint ca o reea de canalicule cu membrane netede, lipsite de ribozomi. Se observ zone de trecere de la un tip de reticul la al alta.

102

Ribozomii-Microscopie electronic
Ribozomii - corpusculii lui Palade sunt organitele in care se realizeaz sinteza proteic propriuzis . Ei sunt alctuii din 2 corpusculi (subuniti) notai dup gradientul la care centrifugheaz : corpusculul mare (subunitatea 50S) i corpusculul mic (subunitatea 30S). Acetia sunt unii prim intermediul filamentului de m ARN ( aspect de mrgele nirate pe o a) alctuind uniti morfofuncionale numite ergozomi sau poliribozomi.Se observ poliribozomii existeni n citoplasm n 2 forme : fie ataai memebranelor RER, fie liberi.

103

Complexul Golgi
Tiroida - Foliculi tiroidieni - col H.E.
Diferitele tipuri de glande secret proteine-hormoni numai dup ce au fost preluate de la RE i prelucrate prin multiple transformri biochimice n aparatul Golgi. Acest organit este bine dezvoltat i la nivelul tiroidei. Ea face parte din glandele cu secreie endocrin, se recunoate foarte uor dup multitudinea de foliculi care sunt unitile morfofuncionale ale tiroidei. n lumenul prezint o substan eozinofil, numit substan coloidal, sau coloid, un amestec de proteine n care se gsete i complexul de hormoni tiroidieni. Epiteliul simplu care nconjur coloidul este format din celule cubice care secret hormonul care se va acumula n substana coloidal. Dac foliculii sunt mici, ei sunt hiperfuncionali (fenomen abundent de secreie) i au epiteliul format din celule cubice, bine vizibile, cu nucleul situat central i citoplasma eozinofil. Foliculii normofuncionali ceva mai mari, la care nc se mai observ celulele cubice. Foliculi hipofuncionali, de dimensiuni foarte mari, ce se transform n adevrate camere de rezerv pentru coloid, care turtete epiteliul .

104

105

Ganglion vegetativ - neuron vegetativ - impregnaie argentic Cajal

Impregnaie argentic Cajal este o combinaie de colorani pentru c pe lng nitratul de argint care precipit i d o culoare neagr aparatului Golgi propruzis, se coloreaz n rou nucleolul. n jurul nucleului se evideniaz n negru canalicule sau cisterne Golgi care vor fi secionate transversal. Impregnaia dei confer culoare neagr structurilor pe care precipit srurile de argint, datorit balsamului de Canada ce se suprapune, va aprea o nuan brun la nivelul citoplasmei. Ganglionul vegetativ este format din neuroni, celule mai puin stelate, i n jurul lor esutul conjunctiv care se retract formeaz un halou (artefact).

106

107

Complexul Golgi - Microscopie electronic:

Complexul Golgi (dichtiozomul) este situat frecvent n preajma nucleului i ntotdeauna n apropierea unui RER. Partea central a complexului, aparatului Golgi propriuzis, este format din saci sau cisterne turtite. La aparatul Golgi vine materialul sintetizat de RER sub form de mici vezicule (de ordinul Angstromilor),care vor ptrunde prin faa cis- partea convex (ce privete spre RE i deseori i spre nucleu) , vor fi mbogite, prelucrate, modificate biochimic i condensate n partea central i dup ce vor fi sortate i nvelite n membrane, vor iei prin partea trans sub form de vezicule de secreie(de exemplu granule de zimogen) mult mai mari (ordinul nanometrilor). Prin capetele laterale mult dilatate se desprind vezicule care sunt lizozomi primari ce rmn n citoplasm.

108

109

110

Fenomenul de secreie celular- Microscopie electronic:

Schema unei celule din acinul pancreatic. Nucleul este la periferie i n jurul nucleului se gsete RER unde sunt sintetizate proteinele care ajung la aparatul Golgi, de unde pleac sub form de vezicule mature prevzute cu membrane, coninnd materilul concentrat i mult mbogit prin diversele modificri biochimice La pancreas aceste vezicule de secreie se numesc granule de zimogen, care prin exocitoz prsesc celula.

111

Lizozomii
Miocard de persoane n vrst - lizozomi lll (corpi reziduali) - col. H.E.
Fibra miocardic se aseamn cu fibra muscular scheletic pentru c are striaiuni transversale, dar este prevzut cu un singur nucleu i desprirea n celule se vede mult mai bine. n aceste fibre miocardice (eozinofil colorate), se observ n jurul nucleului, (colorat cu hematoxilin) granule glbui cu nuan crmizie, granulele de lipofuscin sau pigmentul de mbtrnire care pe msur ce omul nainteaz n vrst se depoziteaz n lizozomii teriari(vezi M.E. lizozomii). Acelai fenomen se petrece i n neuroni, la vrstnici, accentund fenomenul de mbtrnire a celulelor nervoase din creer. ntre aceste celule se observ vase de snge cu hematii.

112

Miocard ischemic - col. L.I.E.

Coloraia L.I.E. este o coloraie special care pune n eviden fibrele miocardice ichemice la pacienii care au decedat prin moarte subit urmare a infarctului miocardic complicat cu fibrilatie ventricular. Acest preparat e foarte important n medicina legal, pentru c este singura dovad a cauzei de deces prin infarct miocardic la persoanele care au decedat subit. Zonele cu celule miocardice ischemice se coloreaz n galben, iar zonele neischemice, normale apar colorate in rou.

113

114

Lizozomii - Microscopie electronic:

Lizozomii se mpart n : * lizozomi primari, omogeni, bogai n echipament enzimatic dar nc nedigernd particule. a * lizozomi secundari, n care ncepe fagocitoza propriuzis, n momentul n care nglobeaz particule, i atunci se transform n fagolizozomi: heterofagolizozomi- care inglobeaz particule strine celulei pentru a le digera cu enzimele cu care sunt echipai. c autofagolizozomi- care fagociteaz organite proprii celulei, de exemplu mitocondrii, sau ntregi zone din citoplasma propriei celule, care sunt digerate de aceti autofagolizozomi. e * lizozomii teriari(telolizozomii), conin resturile care nu au fost digerate sub form de corpi reziduali. f Heterofagolizozom Autofagolizozom

115

116

Mitocondria
Rinichi - tubi uriniferi - mitocondrii - col. Hematoxilin feric
Organul se recunoate dup glomerulii renali, (corpusculi ai lui Bowman), care apar ca nite formaiuni rotunde capsulate, care apar ici i colo pe preparat, ca nite mici gheme. In jurul lor se gsesc tubii uriniferi n diverse incidene, transversale, oblice sau longitudinale colorai n negru. Se studiaz pe seciunile transversale ale tubilor uriniferi care prezint n zona central lumenul tubului urinifer, n jurul lui gsindu-se celulele aezate n cerc. Detaliile tubilor uriniferi sunt mai evidente doar la obiectivul 20 i 40. In mod normal un tub urinifer este alctuit din 5-7 celule . La obiective mai mari se vd nuclei rotunzi chiar i cu nucleoli, situai n cerc. nspre polul bazal al acestor celule i n jurul nucleului lor se vd ca nite bastonae paralele, des niruite, mitocondriile, care fiind organite mari pot fi demonstrate i n microscopia obinuit. Hematoxilina feric coloreaz conturul nuclelor, nucleolii i mitocondriile n negru .

117

118

Mitocondria - Microscopie electronic:

Mitocondria (condriomul) este cel mai mare organit dup nucleu.Are o membran extern i o membran intern care formeaz invaginaii numite creste mitocondriale. Spaiul din interiorul crestelor se continu cu spaiul dintre cele 2 membrane. ntre creste se gsete matricea granular. n organele n care este nevoie de mult energie crete numrul de mitocondrii i mrimea lor,observndu-se mitocondrii gigante, ovalare sau de alte forme.

119

Peroxizomii-Microscopie electronic
Sunt organite delimitate de o membran proprie cu diametrul de 0,15-1,5 microni bogai n echipamente enzimatice. Caracteristic e activitatea peroxidazelor cu rol de degradare a oxigenului activat i a agenilor oxidani, extrem de corozivi. Membrana peroxizomilor are o structur trilaminar. Ei prezint o matrice fin granular, uor opac la fluxul electronic care poate s conin n funcie de specie un miez - nucleoid n centru, sau o plac marginal.

120

Imagine de ansamblu a celulei

121

BIBLIOGRAFIE

122