UCLA

UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL LISANDRO ALVARADO DECANATO DE CIENCIAS VETERINARIAS DEPARTAMENTO DE SALUD PBLICA REA DE AREA DE MICROBIOLOGA E INMUNOLOGA
3 de Febr er o de 1964

Unidad I. Tema N 3. VARIACIONES GENTICAS EN PROCARIONTES 1. Bases fsicas de la herencia La herencia est determinada por el genoma o genotipo, el cual en procariotas est constituido todas aquellas caractersticas codificadas en el cromosoma bacteriano y en los plsmidos; informacin sta que est organizada en genes integrados por DNA. El cromosoma bacteriano es la clsica doble hlice de DNA descrita por el modelo de Watson y Crick, pero circular y continua de aproximadamente 1 mm de largo. Esta masa se encuentra fuertemente enrollada alrededor de un pequeo segmento de RNA, formando una masa compacta de PM. aproximado de 2 3 x 109 constituida por 4 x 106 pares de bases.

2. Genoma en procariontes.

El genoma Procarionte est contenido en los genes del cromosoma bacteriano y en los genes extracromosomales de los plsmidos; a diferencia del genoma Eucariotico, cuyo genoma incluye: los cromosomas nucleares, el DNA mitocondrial, el DNA de los cloroplastos (en los microorganismos fotoauttrofos) y el DNA de los plsmidos.

3. Fenmenos bsicos de la herencia. La herencia est determinada por dos fenmenos bsicos:

3.1.Herencia o estabilidad de tipo: Esta presupone que durante la replicacin del cromosoma bacteriano no ocurra ningn cambio en la secuencia de nucletidos y estructura del DNA, el cual en consecuencia, determine cambios en el genoma; por tanto ste permanece estable y as es reproducido en la prxima generacin.

3.2.Variaciones hereditarias: Aqu se establecen cambios en secuencia y/o estructura del DNA, los cuales producen cambios en el genoma bacteriano, que a su vez, se traducen en una progenie de bacterias diferentes a aquellas que les dieron origen y; si este genoma mutado es estable y viable, se reproduce en las futuras generaciones. Las variaciones hereditarias en procariontes son producidas a consecuencia de mutaciones (espontneas e inducidas) y a travs de mecanismos de transferencia y recombinacin gentica en bacterias.

4. Estructura bioqumica de la molcula de DNA (Modelo de Watson y Crick)

Es una

doble

hlice

formada

por

dos tiras de polinucletidos

complementarios de bases pricas y pirimdicas dispuestas a lo largo de un espinazo de grupos alternantes de desoxirribosa fosfato. Las dos tiras se mantienen unidas por puentes de hidrgeno entre bases vecinas; la esteroqumica revela que los puentes de hidrgeno se forman solo entre: Adenina y Timina y; Citosina y Guanina. Aproximadamente cada diez residuos se completa una vuelta completa de la doble hlice de DNA. Las bases pricas son, Adenina y Guanina; y las pirimdicas son, Citosina, Timina y Uracilo.

5. Replicacin del DNA

En virus, procariontes y eucariontes, el mecanismo bsico de replicacin del ADN es similar. ste se replica por un mecanismo semiconservativo, en el cual las dos tiras complementarias se separan, para formar el pivote u horquilla de replicacin, actuando cada una como un molde, templete o plantilla, sobre cada una de las cuales, las polimerasas, ensamblan una tira complementaria por polimerizacin enzimatica de subunidades de nucletidos. El orden de las bases es dictado estrictamente por las posibilidades de formacin de puentes de hidrgeno entre pares de bases complementarias, formndose al final, dos nuevas dobles hlices; cada una idntica a la original que le sirvi de molde. Esta replicacin se lleva a cabo a la asombrosa velocidad de aproximadamente 750 pares de bases/seg/horquilla de replicacin.

6. Replicacin del cromosoma bacteriano (Modelo de Jacob y Brenner).

El cromosoma bacteriano se replica de manera secuencial a lo largo de toda la estructura, principiando por el origen de la replicacin uni o bidireccionalmente. El punto de origen de la replicacin se adhiere a un sitio especfico del Mesosoma en la membrana celular. La replicacin comienza y el cromosoma se va moviendo mas delante del sitio de adherencia, en la membrana, replicndose conforme avanza hasta completar una vuelta completa Ver imgenes 1 y 2). La separacin de los dos

cromosomas originados se realiza por sntesis localizada de membrana; luego se forma la pared transversal entre los sitios de adherencia del DNA.

Imagen 1

Imagen 2

7. Cdigo gentico 8. Trascripcin 9. Traduccin 10. Sntesis proteica y sus fases: Iniciacin, elongacin y terminacin. Consultar la fuente siguiente en internet:
www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/16mutacion.htm - 196k y resumir una definicin y

ejms de: 11. Definicin de mutaciones y tipos: 11.1. Mutaciones espontneas e inducidas 11.2. Mutaciones puntuales, base molecular, consecuencias y ejm. 11.3. Mutaciones de desplazamiento de la pauta de lectura 11.4. Grandes delecciones o borraduras 11.5. Inversiones y translocaciones 11.6. Duplicaciones en tndem 11.7. Mutaciones originadas por elementos genticos transponibles 11.8. Agentes mutagnicos e induccin de mutaciones 11.8.1. Agentes fsicos y ejms 11.8.2. Agentes qumicos y ejms

MECANISMOS DE TRANSFERENCIA Y RECOMBINACIN INTRACELULARES EN LA GENTICA BACTERIANA. Es muy comn la transferencia de material gentico entre cepas procariotas y contribuye en forma importante a la notable biodiversidad gentica de las bacterias. El intercambio gentico bacteriano se caracteriza por la transferencia de un fragmento relativamente pequeo, del genoma de un donador a una clula receptora. La recombinacin gentica entre bacterias es diferente a la fusin de cigotos de las clulas Eucariotas, en donde dos clulas haploides (gametos) se fusionan completamente para originar un Cigoto (diploide). En procariotas no hay fusin real, en su lugar, hay transferencia de parte del material gentico de una clula donante a una receptora. El ADN del donador, el cual no contiene la informacin para su propia replicacin, debe recombinarse con el ADN del receptor para establecerse en una clula receptora. El segmento transferido se llama Exogenoto ; a su complemento en la clula receptora, se le llama Endogenoto; y al cromosoma recombinante, se le denomina Merocigoto. El Endogenoto y el Exogenoto se recombinan despus de la transferencia, por rotura y reunin de los genotos, y el Merocigoto o cromosoma recombinante se transmite por divisin celular al interior de una clula haploide nica. Los 3 mecanismos mediante los cuales ocurre la recombinacin difieren bsicamente en el mecanismo de transferencia. Estos son: 1. Transformacin 2. Transduccin 3. Conjugacin

Mecanismos de transferencia y recombinacin gentica en bacterias

1.

Transformacin: Es la captacin del ADN del donador ( exogenoto) por una receptora (endogenoto), mediante la intervencin de Protenas de

clula

Competencia; originando un cromosoma recombinante y; si hay integracin del DNA donado, el merocigoto se reproducir por fisin binaria en la prxima generacin hetero-duplex recombinante. La clula donadora y receptora deben estar ntimamente relacionadas, pues se requiere homologa estructural en la secuencia de nucletidos del ADN para permitir el apareamiento del endogenoto y el exogenoto. 1.1. Etapas del mecanismo de transformacin: 1.1.1. Fijacin: Comprende la unin o adherencia del ADN de gran peso molecular a la superficie de la clula receptora. 1.1.2. Captacin: Es la penetracin del ADN ligado, a la membrana celular de la clula receptora. 1.1.3. Integracin: Comporta la unin del ADN del donador al genoma de la clula receptora.

En la transformacin por plsmidos, nicamente se suceden la fijacin y captacin, y el plsmido se establece en la clula receptora como un replicador autnomo. Este proceso implica la participacin de protenas de especficas (Protenas de Competencia) cuya funcin es encargarse de fijar el ADN donado, al cido hidroxibutirato a la membrana de la clula receptora.

TRANSFORMACIN

1.2. Transformacin en bacterias Gram positivas.

Comienza con la excrecin de protenas de bajo peso molecular ( Protenas de Competencia) durante la fase exponencial de crecimiento. stas protenas de competencia inducen a otras bacterias del cultivo en fase exponencial, a producir otras 8 10 protenas de competencia; una de las cuales es una autolisina, la cual desenmascara o descubre a la protena fijadora de ADN unida a la membrana. Las bacterias Gram positivas fijan ADN homlogo y heterlogo por medio de una endonucleasa, la cual es capaz de hendir, mellar o romper ADN a intervalo de 6 a 8 Kilobases para fijarse (Fase de Fijacin) a la protena receptora de ADN. Posteriormente se inicia el acceso del ADN ( Fase de Captacin) y se hacen muescas o mellas que separan las dos tiras de ADN. Al final si existe homologa estructural en (la secuencia de nucletidos, entre el ADN de la clula donadora Exogenoto) y el ADN de la clula receptora (Endogenoto), se cumple la ltima fase (Fase de integracin) de la transformacin para originar el Merocigoto o un cromosoma bacteriano heteroduplex recombinante.

1.3. Transformacin en bacterias Gram negativas.

Difiere de la anterior en los siguientes aspectos: El ADN homlogo es captado a una velocidad mayor que el ADN heterlogo. El ADN de doble banda queda secuestrado en estructuras de la superficie membranosa llamados transformasomas, y la transferencia de ellos al interior de la

clula se acompaa de la degradacin de una de las bandas de ADN; continundose a partir de aqu con la misma secuencia de eventos que en el caso de las bacterias Gram positivas.

2. Transduccin. Consiste en la transferencia de un fragmento de ADN ( Exogenoto) de una bacteria donante, el cual es acarreado o transferido a la bacteria receptora por un bacterifago, producido en la clula donadora. Luego, al igual que en el caso de la transformacin, el acople por homologa estructural del Exogenoto y su complemento en la clula receptora (Endogenoto), originar el Merocigoto o cromosoma recombinante.

Con la finalidad de poder comprender este mecanismo de transferencia y recombinacin gentica en bacterias, es necesario hacer a continuacin un aparte para conocer que es un bacterifago y su ciclo de replicacin. Un fago o bacterifago es un virus que ataca bacterias. Los virus son parsitos estrictos, es decir no cuentan con autonoma para poder replicarse, por tanto, necesitan una clula hospedera (Bacteria, en este caso) para utilizar su aparato sintetizador de protenas y cidos nucleicos, con la finalidad de sintetizar y ensamblar los diferentes componentes del fago, y as reproducirse en el interior de la bacteria y liberar las partculas virales por lisis bacteriana.

El bacterifago consta de una estructura bsica, muy elemental compuesta de: Cabeza o cpside viral de forma icosaedrica, constituida por unidades estructurales llamadas capsmeros; el material gentico (ADN) contenido en l; un cuello o vaina; y la cola, constituida por la placa basal, las fibras de la cola y espculas.

Partes de un Fago:
Cabeza (Cpside) Cuello (Vaina) Cola: Fibras de la cola Placa basal Espculas

El ciclo de infeccin de un fago comprende dos variantes; el ciclo ltico y lisognico

Protena represora

CICLO LISOGNICO EN FAGOS: Adsorcin Fijacin Inyeccin del material gentico Profago integrado Bacteria Lisognica

Cuando durante la infeccin viral, el fago induce la produccin las protenas represoras en la bacteria, el bacterifago entra en un ciclo particular llamado ciclo lisognico, el cual comprende las siguientes fases o etapas: Adsorcin o fijacin Inyeccin del material gentico. Profago integrado Bacteria lisgena. Durante este ciclo el fago no se replica en el interior de la bacteria, sino que permanece en forma de profago integrado al cromosoma bacteriano y ser reproducido durante cada ciclo de replicacin del cromosoma bacteriano cada vez que la bacteria se reproduzca por fisin binaria, originando toda una progenie de bacterias lisgenas infectadas con el fago. Cuando cesa la produccin de la protena represora, el fago integrado sufre una excisin, separndose del cromosoma bacteriano, se recirculariza y puede entrar a su ciclo vegetativo o Ciclo Ltico, durante el cual el bacterifago

replica su DNA, sintetiza cada una de sus partes y las ensambla, para reproducirse en el interior de la bacteria y liberarse por lisis bacteriana. No es necesario que el bacterifago pase previamente por un ciclo lisgnico para entrar en su ciclo ltico, este fenmeno est condicionado por la produccin o no de la protena represora, por tanto, el fago puede inmediatamente despus de la infeccin viral, entrar en ciclo ltico, si no se produce la protena represora.

2.1 Tipos de transduccin.

2.1.1. Transduccin generalizada. Este mecanismo de transferencia y recombinacin gentica en bacterias ocurre durante el ciclo ltico de un bacterifago y, especficamente mientras ocurre la fase de ensamblaje del virus. En esta fase, no se requiere una secuencia especfica de ADN para llevarse a cabo el llenado de la cpside del fago; por tanto durante la fase de ensamblaje del virus, cualquier secuencia de ADN (inclusive el de la bacteria parasitada) puede introducirse en la cpside viral. De esta manera, se liberan partculas fgicas portadoras de parte del ADN de la bacteria. Es as como parte del ADN de la bacteria hospedadora del fago (ahora bacteria donadora de ADN) es acarreado por el fago al infectar otra bacteria, la cual acta como receptora del ADN perteneciente a la primera bacteria infectada por el fago.

Luego, si existe homologa estructural en la secuencia de nucletidos entre el ADN acarreado por el fago desde la bacteria donante (Exogenoto) y en su complemento en el cromosoma bacteriano de la receptora (Endogenoto), ambos se combinarn para originar un cromosoma heteroduplex recombinante.

Fijacin del fago a la clula

Inyeccin del material gentico viral

Degradacin del DNA bacteriano y replicacin del genoma viral Sntesis de las cpsides y empaquetamiento del material gentico y viral

Lisis celular y liberacin de partculas

2.1.2. Transduccin restringida o especializada. Ocurre cuando durante el ciclo lsognico de fagos, no hay una escisin o separacin exacta del profago integrado antes de entrar al ciclo ltico . Durante esta fase hay una separacin anormal en la que parte del ADN bacteriano adyacente al fago es captada a expensas de una fraccin del ADN fgico. Es una separacin aberrante en la que el fago arrastra su ADN y parte del ADN de la bacteria; ya estas partculas virales son fagos defectivos, los cuales no pueden iniciar un proceso de infeccin normal por cambios en el genoma de la partcula fgica liberada, al haber perdido parte de del genoma fgico, el cual puede codificar la parte estructural de cabeza, cuello, cola etc. A diferencia de la transduccin generalizada, la cpside viral contiene ADN, tanto del fago, como de la bacteria que actu como donadora de parte de su genoma y ste ltimo se vuelve parte estable del genoma viral.

Transduccin restringida o especializada.

Clula lisognica: el DNA del fago se encuentra insertado en el DNA bacteriano Circularizacin y escisin del DNA del fago Escisin anormal que produce la prdida de algunos genes del fago, los que se mantienen insertados en el cromosoma bacteriano. En cambio, algunos genes bacterianos han sido tomados junto al DNA del fago

Degradacin del DNA bacteriano y replicacin del genoma viral

Sntesis de las cpsides y empaquetamiento del material gentico y viral

Aclaratoria: A veces sucede que durante la transduccin, el segmento de ADN Lisis celular yla liberacin de partculas transportado, no se integra al cromosoma de clula receptora (endogenoto) por falta fgicas de homologa estructural del ADN (complementaridad de las bases nitrogenadas) o porque el fragmento sigue siendo bicatenario. En este caso particular, no se producen cambios en el genoma de la clula receptora; y por lo tanto, tampoco cambios fenotpicos. Tambin puede que el exogenoto transferido aun siendo bicatenario, se integre al cromosoma bacteriano (endogenoto), y s se produzcan cambios del genoma de la clula receptora, los cuales expresen cambios fenotpicos, pero sta no puede transmitirlos a su progenie, puesto que el ADN bicatenario no se replica. En todos los casos anteriores se produce una Transduccin Abortada.

3. Conjugacin.

Este mecanismo de transferencia y recombinacin gentica es mediado por plsmidos, los cuales son fragmentos genticos extracromosomales que transportan genes que codifican para determinados caracteres. Ejm: resistencia a los medicamentos antimicrobianos, produccin de toxinas, etc. El ADN plasmdico es de replicacin autnoma, uni, bidireccional y puede replicarse en estado superenrrollado. El mecanismo de conjugacin se lleva a cabo nicamente en bacterias Gram negativas mediante la transferencia del material gentico del plsmido a travs una fimbria especializada, llamada Pili sexual, producido por una clula bacteriana masculina portadora de los genes F+, los cuales codifican sta hebra proteica. El extremo libre del pili sexual se adhiere a un receptor especfico (Protena OmpA) de la pared de bacterias Gram negativas, las cuales actan como una clula femenina (F-); establecindose un contacto directo de pared bacteria donante a pared de bacteria receptora por retraccin del pelo sexual. Luego el plsmido sufre un tipo especial de replicacin llamada replicacin por transferencia, pasando una sola de las tiras de ADN (exogenoto) del plsmido de la bacteria donante a la bacteria receptora; a su vez, a partir de ambas tiras o plantillas de ADN (la de la clula donante y la de la receptora) se sintetizan sus respectivas tiras complementarias y son circularizadas por una ligasa, completndose la transferencia de la informacin gentica y las clulas copulantes se separan resultando dos clulas con plsmidos iguales.

Clula conjugativa (F+), con su pelo sexual, y otra no conjugativa (F-)

Contacto entre las dos clulas por medio del pelo sexual Contraccin del pelo sexual y contacto clula-clula. Se forma un poro por donde pasa el DNA simple cadena desde la clula dadora a la receptora Sntesis de las cadenas de DNA conjugativo: continua en la clula dadora y discontinua en la receptora

Sellado de los poros y separacin de las clulas. Cada una de ellas contiene una copia del Factor F

Existen plsmidos con la capacidad potencial de entrecruzarse e integrarse al cromosoma (endogenoto) de la clula receptora, dependiendo de la homologa de la secuencia de bases entre los genotos; stos plsmidos son llamados Episomas. El factor de fertilidad (F+), el cual contiene el grupo de genes que codifican el pili sexual, son transferidos a la clula receptora o femenina (F -), simultneamente con la transferencia del ADN plasmdico. Cuando esta clula receptora (F-) recibe el factor F+ de la clula donante, sta masculiniza a la primera, la cual ahora est en capacidad potencial de producir el pili sexual; y por tanto conjugarse con otras clulas receptoras.

3.1. Propiedades fenotpicas transmitidas por los plsmidos:

3.1.1 Resistencia a drogas antimicrobianas: Los plsmidos conocidos como Factores R de resistencia, son transferidos por diversas bacterias a travs de la conjugacin; estos plsmidos contienen la informacin gentica para inactivar antibiticos (neomicina, kanamicina, estreptomicina, penicilina, cloranfenicol, y sulfonamidas) mediante la inactivacin enzimtica del medicamento por acetilacin y fosforilacin (Plsmidos no conjugativos). Los plsmidos conjugativos median la sntesis de enzimas que causan cambios estructurales y funcionales, inactivando el medicamento. Ejm: las Lactamasas (penicilinasas y cefalosporinasas). La conjugacin plasmdica reviste especial importancia durante las infecciones bacterianas, al representar el mecanismo a travs del cual, al aparecer una pequea poblacin bacteriana resistente al antibitico de tratamiento, puede rpidamente extenderse este carcter de resistencia a toda la poblacin mediante la transferencia del factor R o de resistencia a ese antibitico, a travs del mecanismo de conjugacin bacteriana.

3.1.2. Resistencia a metales pesados (por ejemplo, resistencia a mercurio). 3.1.3. Plsmidos de virulencia: produccin de toxinas, factores de penetracin en tejidos, adherencia a tejidos del hospedador, etc., en ciertas bacterias patgenas. 3.1.4. Produccin de bacteriocinas (protenas txicas producidas por bacterias que matan a otras de la misma especie). 3.1.5. Produccin de siderforos (quelatos para secuestrar iones Fe 3+). 3.1.6. Utilizacin de determinados azcares. 3.1.7. Utilizacin de hidrocarburos, incluyendo algunos cclicos recalcitrantes (degradacin de tolueno, xileno, alcanfor, etc.) en Pseudomonas.

Consulta recomendada: www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/16mutacion.htm - 196k