Pengembangan metode ini didasarkan pada pengalaman metode sebelumnya yang menganalisis CF menggunakan kolom (Hypersil ODS C18

100 4,6 mm, Cosmosil C18 150 4,6 mm, Cosmosil C18 250 4,6 mm, Phenomenex, Luna 5 pM C8 150 4,6 mm, Phenomenex Luna 5 pM C8 250 4,6 mm, dan Zorbax Eclipse XDB-5 pM C8 kolom 150 4,6 mm). Hasil analisis menunjukan pemisahan yang baik untuk TB, TF, dan CF yaitu menggunakan kolom Zorbax Eclipse XDB-5 pM C8 kolom 150 4,6 mm. Hal ini dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya laju alir, komposisi, fase gerak, waktu retensi, lebar puncak, dan jumlah pelat teoritis. Volume standar yang diinject adalah 5L, temperatur kolom 25oC . hasil yang ditubjukan pada tabel 1 , dengan menggunakan laju alir 0,8 ml/menit dan fase geraknya THF-asetonitril 90:10 v/v. Tiga faktor yang dipertimbangkan untuk pemilihan fase gerak yaitu xanthines harus dalam bentuk stabil, fase diam kolom berkurang pada ph rendah, dan kemiripan sifat kimia dengan ketiga senyawa dengan analat. Ph sangat penting untuk pemisahan yang baik, nilai yang dipilih yaitu pada pH 8. Validasi metode HPLC digunakan prosedur yang dijelaskan USP 24 dan pedoman internasional. Literatur lain yang digunakan (22). Diteliti juga selektivitas dan linearitas dalam kisaran 0,5 sampai 300 ppm. Diteliti juga hasil uji, batas deteksi dan batas kuantitasi dari masing-masing senyawa ditunjukan pada tabel 2. Tidak ada gangguan dalam HPLC. Hasil Keakuratan metode ditentukan dengan menganalisis solusi dari konsentrasi yang diketahui (standar kerja solusi) dan membandingkan nilai diukur dan diketahui. Itu berarti pemulihan untuk semua senyawa berada di kisaran 100,20-100,42% (n = 6 untuk masing-masing disajikan konsentrasi yang), membuktikan akurasi yang baik dari metode ini. Sebuah tes pengulangan dilakukan untuk menentukan intra-hari variasi di daerah puncak dan waktu retensi. Tertinggi nilai standar deviasi relatif (RSD) adalah 0,84% (n = 6), yang menunjukkan bahwa pengulangan metode ini dapat diterima. Sebuah presisi menengah dievaluasi selama tiga hari (Pengulangan antar-hari) dengan menggunakan solusi kerja. Solusi ini (0,2-10,0 uL) disuntikkan setiap hari di bawah kondisi yang sama dan hasilnya digunakan untuk studi pengulangan. Solusinya disimpan pada suhu kamar (25 2 C) di bawah sinar matahari, penurunan nilai pemulihan kira-kira dari 100.42 ke 96,6% untuk semua senyawa. Bila disimpan dalam kulkas di gelap, pemulihan berkisar antara 100,42% sampai 98,7% selama tiga hari untuk semua senyawa. Nilai-nilai RSD (0,11-0,78% untuk migrasi waktu dan daerah puncak 0,80-2,06%) menunjukkan bahwa antara presisi dapat diterima. Parameter kondisi HPLC optimum sedikit diubah dalam rangka untuk mengevaluasi ketahanan (22). Itu pengaruh perbedaan konsentrasi THF ( 0,05%), serta Pengaruh pH fase gerak ( 0,06), suhu kolom ( 1 C), laju alir ( 0,05 mL / menit), dan deteksi panjang gelombang ( 3 nm) ditentukan. Tidak ada variasi yang signifikan dalam spesifisitas, akurasi, dan presisi yang ditemukan selama rentang diuji, yang menunjukkan ketahanan yang baik dari metode ini (yang RSDs yang lebih rendah dari 2,28% untuk waktu retensi dan luas puncak). Hasil pengukuran sampel Isi CF, TB, dan TF yang diperoleh dari pengukuran dari berbagai sampel yang berbeda dari makanan, minuman, dan produk alami ditunjukkan pada Tabel III. Hasil ini menunjukkan korelasi yang kuat antara nilai dinyatakan dan ditentukan

CF, TB, dan TF untuk semua sampel yang dianalisis, yang berarti tinggi efikasi dan selektivitas metode yang digunakan. Penggunaan kolom C8 packing menghasilkan resolusi yang lebih baik, intensitas, bentuk, dan simetri dari puncak yang diperoleh dibandingkan dengan C18 (1,2,7,8). Itu pemulihan untuk CF, TB, dan TF adalah 96,8 0,92%, 93,7 0,87%, dan 92.00 0,67%, masing-masing. Nilai-nilai tinggi untuk pemulihan menyiratkan metode ekstraksi yang efisien dan prosedur pembersihan. Itu Efisiensi prosedur ekstraksi yang digunakan juga dikonfirmasi oleh kromatogram, yang bersih dan tanpa kehadiran kotoran dari matriks, tidak peduli apa jenis sampel yang digunakan. The run time untuk analisis kurang dari 8 menit. Konsentrasi terendah yang dapat secara kuantitatif (LOQ) dengan diterima akurasi dan presisi adalah 0,5, 0,4, dan 0,2 mg / L untuk TB, TF, dan Masing CF. Selanjutnya, LOD didefinisikan sebagai S / N> 3 adalah 0,2 mg TB / L, 0,1 mg TF / L, dan 0,07 mg CF / L. Temuan ini berada dalam hubungan baik dengan literatur (8). Kesimpulan Metode ini diuji untuk secara bersamaan mengukur CF, TB, dan TF dalam makanan, minuman, dan produk-produk alami. Dalam hal ini bekerja metode yang cepat, akurat, dan sensitif dikembangkan untuk penentuan CF, TB, dan TF dalam makanan, minuman, dan alami produk. Penggunaan pretreatment SPE untuk sampel dan hasil pemulihan untuk prosedur ini menegaskan bahwa ada adalah ada efek matriks, sehingga ekstrak dapat dinilai dengan kalibrasi kurva set dari standar berair analit. Penggunaan Zorbax Eclipse kolom XDB-C8 diperbolehkan penentuan simultan dari turunan xantin dalam waktu singkat (5). Selama

pengembangan metode, sekitar 400 suntikan sampel dibuat, tidak menunjukkan tanda-tanda kerusakan. Akhirnya, Data untuk sensitivitas, akurasi, reproduktifitas, dan analisis yang tinggi frekuensi menunjukkan bahwa metode HPLC yang diusulkan bisa digunakan untuk kontrol kualitas rutin makanan, minuman, dan herbal produk. Pengakuan Karya ini didukung oleh Departemen Ilmu dan Perlindungan lingkungan, Belgrade, Serbia, Grant No 145060.