More From This User
Related Docuements
DNA Electrophoresis Protocol (in Thai)
This was the manual for DNA electrophoresis used in my laboratory section thi...
From somchais
บทที ่
3
การจําลองดีเอ็นเอ
(DNA replication)
คํานํา
การจําลองดีเอ็นเอในแตละโครโมโซม
(chromosome)
เกิดขึ ้นในระยะเอสเฟต
(S phase
หรือ
synthesis phase)
ของระยะอินเทอรเฟต
(interphase)
ในกระบวนการแบงเซลลแบบไมโตซีส
(mitosis)
และไมโอซีส
(meiosis)
ทําให
1
โครโมโซมมี
2
ซีสเตอรโครมาติด
(sisterchromatid)
ซึ ่งแตละโคร
มาติดประกอบดวยดีเอ็นเอ
1
โมเลกุล
ในป
ค
.
ศ
. 1953 Watson
และ
Crick
ไดตั ้งสมมติฐานเกี ่ยวกับการ
จําลองดีเอ็นเอสายคู
(double helix)
วามีการจําลองเปนแบบกึ ่งอนุรักษ
(semiconservative DNAreplication)
คือดีเอ็นเอสายคู มีการแยกออกจากกันเปนดีเอ็นเอสายเดี ่ยว
(single strand DNA) 2
สาย
ซึ ่งแตละสายทําหนาที ่เปนสายแมแบบ
(template strand)
ของดีเอ็นเอสายใหม
(daughter strand)
ที ่มีลําดับคู สมกัน
(base complementary)
กับดีเอ็นเอสายแมแบบทุกประการ
เมื ่อสิ ้นสุดการจําลองดีเอ็นเอ
จะได
ดีเอ็นเอ
2
สาย
ที ่แตละโมเลกุลของดีเอ็นเอประกอบดวยดีเอ็นเอสายแมแบบ
1
สาย
พันเกลียวกับ
ดีเอ็นเอสายใหมอีก
1
สาย
ดังมีรายงานการทดลองของ
Mesclson
และ
Stahl (1958)
คือทําการทดลองโดยเลี ้ยง
E. coli
ในอาหารที ่มีธาตุไนโตรเจนกัมตรังสี
(
15
N)
โดยใช
15
(NH
4
)
2
SO
4
ซึ ่งเปนองคประกอบ
หลักของไนโตจีนัสเบส
(nitrogenous base)
เพื ่อใหดีเอ็นเอของ
E. coli
ถูกติดฉลาก
(label)
ดวย
15
N
ทําใหได
ดีเอ็นเอที ่มีน้ ําหนักมากคือ
15
N/
15
N (heavy DNA)
จากนั ้นนําแบคทีเรียที ่มีดีเอ็นเอชนิด
15
N/
15
N
ดังกลาวไปเลี ้ยงในอาหารที ่มี
14
N
แลวปลอยใหเกิดการจําลองดีเอ็นเอผานไป
1
รุ น
(generation)
จึงทําการสกัดดีเอ็นเอจากแบคทีเรีย
จากนั ้นนํามาป นเหวี ่ยงใน
CsCl gradient
ไดแถบดีเอ็นเอ
1
แถบ
คือแถบที ่มีน้ ําหนักที ่
15
N /
14
N (hybrid DNA)
แลวเมื ่อมีการจําลองดีเอ็นเอในรุ นที ่
2
ไดแถบดีเอ็นเอ
2
แถบ
ที ่มีน้ ําหนักอยู ระหวาง
15
N /
14
N
กับแถบที ่มีน้ ําหนักเบา
14
N /
14
N (light DNA)
อยู ดานบน
จากนั ้นเมื ่อมีการจําลองดีเอ็นเอในรุ นที ่
3
พบวาจะไดดีเอ็นเอที ่น้ ําหนักเบา
14
N /
14
N
เพิ ่มมากขึ ้น
ซึ ่งเห็นเปนแถบหนา
จึงยืนยันไดวาการจําลองดีเอ็นเอของสิ ่งมีชีวิตเปนแบบกึ ่งอนุรักษ
(
รูปที ่
3.1)
รูปแบบของการจําลองดีเอ็นเอ
(DNA replication mode)
แบงไดเปน
3
รูปแบบ
คือ
1.
การจําลองดีเอ็นเอแบบทีตา
(Theta mode of DNA replication)2.
การจําลองดีเอ็นเอแบบซิกมา
(Rolling circle or sigma mode of DNA replication)
3.
การจําลองดีเอ็นเอแบบตัววาย
(Y-shaped mode of DNA replication)
รูปที ่
3.1
การจําลองดีเอ็นเอเปนแบบกึ ่งอนุรักษ
(semiconservative DNA replication)
ในการทดลองของ
Mesclson
และ
Stahl
(
ที ่มา
: Hartl
และ
Jones, 1998)
I.
การจําลองดีเอ็นแบบทีตา
(Theta mode of DNA replication)
Cairna (1963)
รายงานวา
การจําลองดีเอ็นรูปวงแหวนปลายปดของ
E. coli
เปนแบบ
thetamode
กลาวคือ
ที ่ตําแหนง
oriC
ของดีเอ็นเอวงแหวนเกลียวคู จะแยกเปนดีเอ็นเอสายเดี ่ยวโดยไมมีการ
ตัดสายดีเอ็นเอวงแหวนใหเปดออก
เรียกจุดแยกบนดีเอ็นเอนี ้วา
bubble
โดยบริเวณ
oriC
จะมีเพียง
1
จุดบนดีเอ็นเอวงแหวน
(ring DNA)
ของ
E. coli
จากนั ้นมีการการจําลองดีเอ็นแบบสองทิศทาง
(bidirectional replication)
(
รูปที ่
3.2)
ไปตามเสนดีเอ็นเอของ
E. coli
ซึ ่งทําหนาที ่เปนดีเอ็นเอแมแบบ
เมื ่อการจําลองดีเอ็นดําเนินไปครึ ่งกระบวนการ
จะเห็นดีเอ็นเอวงแหวนมีรูปรางคลาย
theta (
θ
)
และเมื ่อสิ ้นสุดกระบวนการการจําลองดีเอ็น
จะไดดีเอ็นเอวงแหวน
2
โมเลกุล
ซึ ่งแตละโมเลกุลประกอบดวย
ดีเอ็นเอ
2
สาย
สายหนึ ่งเปนสายแมแบบ
และอีกสายหนึ ่งเปนสายใหม
(
รูปที ่
3.3)
หมายเหตุ
จุด
oriC
ประกอบดวยเบสจํานวน
245
คู เบส
(base pairs)
โดยมีลําดับเบสจํานวน
9-13
เบส
เรียงซ้ ําๆ
กัน
ที ่เรียกวา
repeating sequences of 9 and 13 bases (9 mers
และ
13 mers)
รูปที ่
3.2
การจําลองดีเอ็นแบบสองทิศทาง
ของโปรคารีโอตและยูคารีโอต
(
ที ่มา
: Russell, 1991)
of 00
dna replication
3,289 Reads
Info and Rating
| Category: | Uncategorized. |
| Rating: | |
| Upload Date: | 07/21/2009 |
| Copyright: | Attribution Non-commercial |
| Tags: |
Leave a Comment