..

LAPORAN AKHIR
PENINGKATAN MUTU IKAN HIAS UPSIDE-DOWN CATFISH
(Synodontis nigriventris) MELALUI REKAYASA GENETIKA
DAN PENGELOLAAN LlNGKUNGAN UNTUK MENDUKUNG
POPULASI
PROGRAM INSENTIF RISET TERAPAN
Fokus bidang prioritas : KETAHANAN PANGAN
Kode Produk Target: 1.01
Kode Kegiatan : 1.01.09
Peneliti Utama : Eni Kusrini, M.Si.
BALAI RISET BUDIDAYA IKAN HIAS
JL. Perikanan 13, Pancoran Mas Depok, Jawa Barat 16436
021 7520482
Lembaga Iinstansi ,
NIP.
Keterangan Lembaga Pelaksana/Pe.rigelola Penelitian
A. Lembaga Pelaksana Penelitian
Nama Koordinator/Peneliti Utama Eni Kusrini , M.Si.
Nama Lembaga/lnstitusi Balai Riset Budidaya Ikan Hias
Unit Organisasi Pusat Riset Perikanan Budidaya
Badan Riset Kelautan dan Perikanan
Oepartemen Kelautan dan Perikanan .
Alamat JI. Perikanan No.13 Pancoran Mas Oepok
16436
Telepon/HP/Faksimilile-mail 021-7520482 I 021-7520482
B. Lembaga lain yang terlibat (dapat lebih dari satu)
-
I Nama Pimpinan
Nama Lembaga
Alamat
I Telepon/HP/faksimili/e-mail
-
-
-
-
Setuju diusulkan:
Koordinatori .
Peneliti Utama,
Eni Kusrini , M.Si .
NIP. 197009132000032002
Judul Peneli ti an
Fokus Bidang Prioritas
Kode Produk Target
Kode Kegiatan
Lokasi Penelitian
Penelitian Tahun Ke
Kepala

Lembar Pengesahan
Peningkatan mutu ikan hias upside-down catfish (Synodontis
nigriventris) melalui rekayasa genetika dan pengelolaan lingkungan
untuk mendukung populasi
1. Ketahanan pangan "
2. Sumber energi baru dan terbarukan
3. Teknologi dan manajemen transportasi
4. Teknologi informasi dan komunikasi
5. Teknologi pertahanan dan keamanan
6. Teknologi kesehatan dan obat
1.01
1.01 .09
Balai Riset Budidaya Ikan Hias
satu
RINGKASAN
Ikan hias upside-down catfish (Synodontis nigriventris) merupakan komoditas yang nilai
pasar dan kouta permintaannya sangat tergantung pada tren pasar dan penampilan individu.
Tren pasar akan dipengaruhi oleh selera universal yang muncul baik secara periodik ataupun
temporal, namun sifatnya driven image. Ikan hias juga memiliki andil dalam mencapai target
devisa melalui ekspor. Pasar yang dikuasai oleh driven image ini akan mendatangkan keadaan
yang menguntungkan, kareha dapat menciptakan kuota sendiri. Selain itu ikan hias memiliki
pasar yang bersifat customer base, sehingga perdagangannya dipengaruhi oleh selera
konsumen. Oleh karena itu program perbaikan mutu ikan hias melalui bentuk dan warna dari
jenis alami, akan semakin pentingdalam menciptakan pasar. Kegiatan ini sekaigus mendukung
program pemerintah dalam revitalisasi perikanan dan diversifikasi komoditas potensial ekspor.
Rekayasa penyisipan warna pada ikan hias akan dan pengetahuan tentang pola pewarisannya
akan membantu perbaikan mutu' ikan hias Indonesia sehingga dapat bersaing di pasar.
Permintaan pasar yang semakin meningkat dapat dipenuhi dari hasll budidaya. Keberhasilan
pendederan dan pembesaran utamanya dipengaruhi oleh lingkungan dan kualitas air.
Pengeloaan . kualitas air yang benar akan memberlkan tingkat keberhasilan yang dapat
diandalkan.
Penelitian ini dilaksanakan di Balai Riset Budidaya Ikan Hias dan Laboratorium Genetika
dan Reproduksi IPB selama 4 bulan dilanjutkan dengan pemeliharaan larva sampai benih.
Penelitian yang diperoleh untuk penyisipan gen warna berpendar hijau terhadap ikan hias
Synodontis nigriventris adalah telah dilakukan pemijahan buatan terhadap induk-induk yang
telah dipeliharan beberapa bulan. Pemijahan ikan uji dila1<ukan dengan siste.m buatan, induk
betina dan induk jantan yang telah matang gonad disuntik ovaprim (dosis 0,5 mLlkg) . . Setelah
12 jam dari waktu penyuntikan, induk distriping untuk mendapatkan telur dan sperma dari induk
Spermatozoa dari beberapa induk jantan dikumpulkan dalam microtube "Eppendorf,
'/ang selanjutnya dicampur dengan 25 DNA dan dimasukkan ke dalam mesin elektroporator
dHakukan kejutan dengan voltase 75 mV/s. Spermatozoa hasil dari kejutan listrik tersebut
iangsung dicampur dengan larutan fisiologis sebanyak 625 diaduk kemudian dipindahkan
-<: e dalam tube baru untuk persiapan pembuahan. Telur hasil pembuahan buatan dari sperma

yan'g diperlakukan dengan elektroporasi segera diinkubasikan ke dalam akuarium hingga

menetas.
HasH peR sperma yang telah dielektroporasi menunjukkan positif untuk beberapa
ulangan. Metode elektroporasi terhadap GFP efektif digunakan untuk transgenik ikan hias
ii

Synodontis nigriventris, sehingga dapat dilakukan untuk ikan-ikan hias yang lain guna
meningkatkan kualitas khususnya warna dan bentuk. Larva yang dihasilkan dari pembuahan
sperma yang telah diperlakukan elektroporasi diinkubasi dan yang menetas rata-rata
perulangan rata-rata 75%. Larva tersebut dipelihara dalam akuarium dan setelah beberapa hari
larva dipelihara di akuarium dengan sistem resirkulasi dan diberi pakan artemia dan moina
beku. Hasil pemeliharaan benih menggunakan sistem resirkulasi dengan kepadatan berbeda
menunjukkan bahwa kepadatan benih 4 ekor/L pada pemeliharaan sistem resirkulasi
memberikan pertumbuhan terbaik dengan pertambahan panjang 1.24 cm/ekor, bobot 0,24
g/ekor dan sintasan sebesar 82,5%.
iii
PRAKATA
..
Penelitian tentang peningkatan mutu ikan hias upside-down catfish (Synodontis
nigriventris) melalui rekayasa genetika dan pengelolaan lingkungan untuk mendukung produksi
yang didanai dari Kementrian Riset dan Teknologi merupakan salah satu judul kegiatan
program insentif untuk peningkatan kemampuan peneliti dan perekayasa yang dikerjakan oleh
Balai Riset Budidaya Ikan Hias. Pada saat ini penelitian ini masih berlangsung dilaksanakan,
pemeliharaan benih hasil transfer GFP dengan sistem resirkulasi.
Hasil penelitian yang dapat dilaporkan adalah telah dilakukan pemijahan induk-induk
secara buatan dan telah dilakukan elektroporasi sperma sinodontis dengan GFP, pemeliharaan
larVa sampai benih, dan telah dilakukan pengecekan DNA secara acak dengan metode peR.
Lokasi penelitian dilakukan di hatchery BRBIH Depok dan Laboratorium Genetika dan
Reproduksi BOP, IPB.
Hasil penelitian yang didapatkan ini diharapkan. dapat digunakan sebagai bahan acuan
terhadap penelitian peningkatan kualitas ikan hias lainnya denganmetode transgenik.
Penanggung Jawab,
Eni Kusrini
iv
..
DAFTAR lSI
LEMBAR IDENTITAS DAN PENGESAHAN .. . .. ... ...... ......... .. ....... ... ..... ... .... ..... .
RINGKASAN ......... .... ........ ............ ... ... ... .... .. ... ............... ... .... .. .... .. ... ... .. . .... . ii
PRAKATA ..... . ... ... ... ... .... .... . ....... .... . .... .. .... ... .. .... ..... . ... .. .. .. .. ... ... ... ... ... ... .... .. . iii
DAFTAR lSI ... .. . ..... . .... .. .., .. . ... .. . .. . ..... .. . ....... .. ... .... ... .. .. .... ... ' " ........ , ' " ... ... ... . iv
DAFTAR TABEL .... .. .... ......... .. .. .... ... ... ............ .. ... .. .. ..~ . . . . . . . . . ... .. . .. . ........ . ... ... v
DAFTAR GAMBAR ................ .... .. ... .... . .... .. ... .. . .... ., ' " .... .. ..... . ... .. . ... ... ... .. . ... .. . vi
BAB I. PENDAHULUAN ... ...... .. . ...... .. ... .. ... .... ... .. .. ... .................. .. .. ....... ... ... .
1.1. Peningkatan kualitas warna pada ikan hias upside-down catfish
(Synodontis nigriventris) melalui penyisipan gen warna .. .......... .... .. ...
1.2. Peningkatan sintasan dan pertumbuhan benih ikan hias upside-down
catfish (Synodontis nigriventris) dengan menggunakan sistem resirkulasi
dengan kepadatan benih berbeda .................... ..... . .. .................. 2
BAB II . TINJAUAN PUSTAKA ... ...... .. ... ... . .... .... .. ...... .. .. . .. . ...... ... ... ....... 4
BAB III . TUJUAN DAN MANFAAT ... ... ..... ..... .. .. ....... .. .... . . ... ... . .... . ....... .. . ... ." 8
BAB IV. IVIETODOLOGI .. .. .. .... ... .................. .. 10
1.1 .. Peningkatan kualitas warna pada ikan hias upside-down catfish
(Synodontis nigriventris) melalui penyisipan gen warna ........ . .. ... .... 10
1.2. Pening'katan sintasan dan !?ertumbuhan benih ikan hias upside-down
catfish (Synodontis nigriventris) dengan menggunakan sistem resirkulasi
dengan kepadatan benih berbeda ......... .... ........ ... ... ... ... ... ... ... ... ... . 12
BAB V. HASIL DAN PEMBAHASAN ....... ...... .. .. ...... . ...... ..... . ....... ... ... .......... .. . 16
1.1. Peningkatan kualitas warna pada ikan hias upside-down catfish
(Synodontis nigriventris) melalui penyisipan gen warna .......... ..... .... .. 16
1.2. Peningkatan sintasan dan pertumbuhan benih ikan hias upside-down
catfish (Synodontis nigriventris) dengan menggunakan sistem resirkulasi
dengan kepadatan benih berbeda .... ..... ... ...... .. .... .. .... ...... ...... ...... ... 19
BAB VI. KESIMPULAN DAN SARAN ... .. .. ....... ... ................. ... ...... ... .. .. ..... ... .... . . 25
4.1. Kesimpulan ... ..... . ....... .... .. . .. .. .. ... ...... ...... ..... . . .... . ........... .. .. ....... . 25
4.2. Saran.......... ... ..... ... .. .. .. ... .. .... . ........... .. .... .... ...... ... ..... . ..... .. .. .. .... 25
DAFTAR PUSTAKA ........ ...... . .... .. ........ .. ... ...... ........ ..... . ...... ... .... .... . ' " ... 26
v
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Metode analisis sampel dan parameter yang diamati .. ... . .... ... ..... ..... 12
Tabel2 Kriteria motilitas sperma . ......... .... . ... ....................................................... 16
Tabel3. Hasil pengukuran rata-rata kisaran nilai kualitas air selama percobaan 19
vi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Morfologi ikan upside-down catfish (Synodontis nigriventris) ....... ..... .. .. . 4
Gambar 2. Proses pemijahan buatan ikan Synodontis ... ... .. . ...... ... ... .. . ... .. ... .... 10
Gambar 3. Peta promoter dari pKer-GFP (kiri), dan pengecekan hasil transformasi
plasmid pada 4 klon bakteri menggunakan peR .... ...... .............. ... :.. ..... 11
Gambar 3. Skema unit resirkulasi ........ .... .. .... ...... .. . ........ .... ........ ... ......... .. .............. 13
Gambar 4. . Induk-induk Synodontis yang akan dipijahkan .............................. . 16
Gambar 5. Akuarium untuk inkubasi telur dan pemeliharaan larva dilengkapi
dengan sistem resirkulasi ................................ ... .............. .. . 16
Gambar 6, Hasil uji peR DNA sperma ikan Synodontis nigriventris yang telah
dielektroporasi ......... . , .. ,.. ,.,'" ""'" ""'" .. ,'" , .... , .. ,,. ' ....... , ... ... ,' .. . ,.".,.': ....... 17
Gambar 7. Hasil peR dari sirip ekor benih ikan sinodontis ,.. .. .. .. " ' .. ,.... ... . 18
Gambar 8, Grafik petumbuhan panjang (cm) Upside-down catfish (Synodontis
nigriventris) selama percobaan ........ ," .. , ...... .., ' 22
~ a m b a r g, Grafik petumbuhan bobot (g) Upside-down catfish (Synodontis
nigriventris) selama percobaan ..... ....... ...... ............ ................. ....... ..... ... 22
3ambar 10, Grafik sintasan (%) Upside-down catfish (Synociontis nigriventris)
selama percobaan .......... .. ...... , 24
vii
...
BABI
PENDAHULUAN
1.1. Peningkatan kualitas warna ikan upside-down catfish (Synodontis
nigriventris) melalui penyisipan warna
(Synodontis nigriventris) merupakan ikan hias air tawar
introduksi termasuk famili ordo yang nilai ekonomis
tinggi di dalam dan luar saat ini ikan hias tersebut banyak dibudidaya oleh
petani ikan hias air tawar di daerah Bogor, dan Bekasi. satu .
faktor keberhasilan budidaya ikan hias pada umumnya lingkungan media
pemeliharaan yang ideal dan sesuai habitat alam. kondisi
lingkungan budidaya baik pemeliharaan larva, benih, maupun induk di media akuarium
maupun kolam tingkat atau sintasan tinggi nilai jual
ikan tersebut juga meningkat,yang akhirnya memenuhi kebutuhan (:Jari
hasH budidaya bukan dari tangkapan alam Mengingat stok di alam untuk semua
komoditas ikan hias sudah memprihatinkan.
Berdasarkan kondisi yang demikian maka ikan ini tidak sulit untuk
dilakukakan budidaya pada skala yang besar. Perlakuan lingkungan yang
diterapkan sesuai habitat asli ikan ini sangat diperlukan untuk menghasilkan
sintasan yang optimal. lingkungan
larva, pembesaran, faktor sangat pengaruhnya t ~ r h a d a p pertumbuhan,
periorman, dan sintasan. Selain dari itu, ikan hias mempunyai yang berbeda dengan
konsumsi. Tingginya harga pasar ikan hias tergantung dari periorman dan keunikan
ikan tersebut banyak dikatakan lebih
kualitas warna dan bentuk faktor utama daripada
macam cara yang difakukan oleh para pemulia untuk mendapatkan kualitas
ikan hias lebih baik dan lebih disukai pasar yang terdiri atas dua metode yaitu:
breeding
2. Manipulasi
metode (persilangan) dengan hibridisasi dan cross
a.
b.
Manipulasi set kromoso
Seks kontrol
m
.. C .
.
Industri ikan hias
tradisional untuk mendapatkan
umumnya
bentuk
akan selalu te
dan warna baru
rgantung
yang
metode seleksi
pasar walaupun
memerlukan waktu lama. itu, teknik ini mudah diterapkan oleh pembudidaya
1
...
ikan hias. Ketika gen yang diketahui maka antar varietas yang
berbeda direncanakan secara Oieh karena itu untuk
kualitas'warna ikan hias upside-down catfish akan diuji genetika.
Gen pemendar warna, khususnya pemendar warna hijau green flouroscent
protein) telah ditemukan sebagai bahan dasar pemendar pada tubuh ikan. Penggunaan
bahan dasar tersebut telah mengubah ikan menjadi warna yang menarik
mempunyai nilai jual tinggi. Gen tersebut dapat diwariskan kepada berikutnya
melalui mekanisme pewarisan sifat Namun demikian pewarisan hendaknya dipelajari
sehingga pada proses produksi masalnya. Keberhasilan penyisipan
gen warna pada ikan hias lain misalnya rainbow trout, koi, koki, dan !ain-Iain. Pada
peneiitian ini akan diuji coba ikan hias upside-down catfish yang semula ikan terse but
tidak mempunyai variasi warna dengan teknik rekayasa tersebut akan memberikan nilai jual
yang lebih baik.
1.2. Peningkatan sintasan dan pertumbuhan benih ikan hias upside-down catfish
(Synodontis nigriventris) dengan menggunakan sistem resirkulasi dengan
kepadatan benih berbeda
Kualitas air untuk budidaya merupakan mutlak yang harus dipenuhi
untuk menunjang keberhasilan usaha perikanan. satu penyebab turunnya kualitas air
adalah akumulasi bahan organik dan anorganik yang berasa! dari sisa metabolisme
dan sisa pakan yang tidak termakan. Bahan tersebut dalam air sehingga
menyebabkan turunnya kualitas air. Kualitas air yang rendah akan proses
metabolisme dan untuk kadar tertentu megakibatkan kematian ikan satu cara
yang dapat dilakukan untuk mempertahankan kualitas air adalah dengan cara penggatian
air. N'amun penggantian air secara terus-menerus akan menyebabkan pemborosan
terutama yang menggunakan sistem pompanisasi.
Pengelolaan kualitas air menggunakan sistem filter atau dikenal resirkulasi
alternatif yang untuk air tetap optimum.
Resirkulasi adalah sistem yang menggunakan air secara terus menerus cara
diputar dialirkan ke wadah berupa filter untuk dibersihkan kemudian dialirkan untuk
digunakan kembali. Sistem ini mempunyai keuntungan dalam menjaga kualitas air dan
menghemat penggunaan air. Memelihara ikan pada sistem resirkulasi selalu dihadapkan
masalah penumpukan zat-zat organik sisa pakan dan ammonia), anorganik
dan terbatasnya terlarut (Tanjung, 2004). Menurut Muir (1994), rancangan sistem
yang tepat dan cara perlakuan yang terpadu dengan memastikan efektifitas
perlakuan dan secara keseluruhan akan menyempurnakan system.
2
Filter yang digunakan dalam system resirkulasi berperan sebagai media untuk
menyerap bahan pence mar berupa sisa metabolisme dan pakan yang di perQaiki secara
fisika, biologi dan kimia. System resirkulasi menggunakan filter dengan bahan yang dapat
berfungsi secara biologi dan kimia, bahan yang biasa digunakan seperti : batu karang,
bioball , batu-batuan, zeolit , kulit kerang dan lain-lain.
3

BAB II
TINJAUAN PUST AKA
BIOLOGI UPSIDE-DOWN CATFISH
Ikan upside-down catfish (Synodontis nigriventris) berasal dari negara Congo, Afrika.
Ikan ini termasuk ikan hias yang unik, karena senang berenang terbalik dengan perut di
atas. Kelompok Synodontis memiliki cirri-ciri berkumis dan mempunyai patil tetapi tidak
beracun. Warna dasar tubuh mulai dari coklat tua sampai coklat muda, dan seluruh tubuh
terdapat bercak-bercak atau totol-totol berwarna hitam tersebar secara acak. Pada bagian
perut berwarna lebih gelap dibandingkan daerah punggung. Hal terse but dapat berfungsi
untuk mengelabui mangsa (Ponggo, 2002) .
Pada umumnya ikan Synodontis jantan lebih langsing, sedang ikan betina lebih
montok. Ukuran ikan dewasa antara 7-10 cm (http://www.scotcat.com). Ciri-ciri lainnya
secara morfologi adalah memilikitiga pasang sungut yang terdiri atas dua pasang sungut
bercabang dari duri keras di depan sirip dada dan sebuah di sirip punggung(Ponggo, 2002).
Morfologi Synodontis secara keseluruhan dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Morfologi ikan upside-down catfish (Synodontis nigriventris)
Ikan upside-down catfish (Synodontis nigriventris) termasuk Famili Mochocidae
merupakan kelompok catfish, dan menurut berbagai sumber didapatkan klasifikasi ikan
tersebut sebagai berikut:
Kingdom : Animalia
Filum : Cordata
Kelas : Pisces
.'
Ordo : Siluriformis
)::amili
: Mochocidae
Genus : Synodontis
3pesies : Synodontis nigriventris
4

Ikan upside-down catfish mempunyai habitat asli di alam yaitu di dasar lumpur.
Apabila hidup di daerah yang sering terkena banjir, ikan tersebut tersembunyi di bawah
pohon-pohon yang tumbang yang terdapat genangan air (Warren, 1989 dalam Tiningrum,
2007).
Ikan synodontis merupakan salah satu jenis ikan omnivora yang di habitat aslinya
mempunyai makanan utama serangga dan kadang-kadang memakan alga. Pada
pemeliharaan di kolam atau di akuarium ikan ini pad a stadium larva dapat diberi pakan
alami , tetapi pada stadium dewasa pakan yang diberikan adalah pakan buatan. Ikan
synodontis sering mencari makan di malam hari (nocturnal), bersifat kanibal yang sering
makan ikan-ikan kecillainnya.
REKAYASA GENETIK IKAN
Perkembangan bioteknologi khususnya teknologi biologi molekuler pad a tahun 1970
an dalam rekayasa genetika yang juga dinamakan DNA rekombinan dinyatakan sebagai
kemajuan yang paling mengagumkan. Keberhasilan mengahasilkan ikan transgenik mulai
dilakukan dengan mencobamengaplikasikan keberhasilan metode transgenik pada amfibi,
tikus, dan hewan mamalia pemeliharaan. Kegiatan rekayasa genetik ikan telah dilakukan
sejak pertengahan 1980'an (Zhu et al 1985). Kegiatan ini berawal dari kegiatan rekayasa
genetik ikan mas (C. auratus) yang dilakukan oleh Zhu (Zhu et. ai, 1985). Keberhasilan
tersebut yaitu mentransfer gen hormone pertumbuhan manusia(hGH) dengan promoter gen
metallothionein mouse (mMT), ke dalam telur-telur ikan goldfish yang Jelah dibuahi._
Selanjutnya rekayasa genetik juga dilakukan pada ikan-ikan medaka (Ozato et al. 1986),
ikan catfish (Yan & OzgOnen, 1993), crayfish (Sarmasik et al. 2001) dan zebrafish (Tsai,
2008). Perkembangan teknik transfer gen di ikan bermuladari penggunaan mikroinjeksi
(Zhu,et al 1985). Perkembangan selanjutnya sampai tahun 1990, transgenik ikan telah
dilakukan pad a 13 jenis ikan yaitu atlantik salmon, common carp, goldfish, loach, medaka,
mud carp, northern pike, rainbow trout, silver crucian, nile tilapia, wuchang fish, dan zebra
fish (Chen, 1994).
Namun teknik ini menimbulkan banyak kegagalan dan kematian telur dan prosesnya
berjalan lambat (Dunham et al. 1987). 8erbagai teknik transfer gen yang kembangkan
selanjutnya adalah electroporation, retroviral integration, liposomal-reverse-phase
evaporation, spermmediated transfer and high velocity microprojectile bombardment (Chen
~ Powers, 1990). Teknik-teknik ini selanjutnya memberikan hasil yang lebih efisien yakni di
antaranya transfer gen yang dihasilkan lebih banyak dan waktu yang lebih singkat.
Elektroporasi dilakukan dengan meletakkan telur di atas buffer solusion yang mengandung
DNA dan dengan bantuan kejutan elektronik (electrical pulses), membrane sel akan
5
..
membuka dan memungkinkan material genetik yang ada di solution untuk masuk ke sel
telur. Keberhasilan teknik elektroporasi ditentukan oleh voltase listrik, jumlah i<.ejutan listrik
dan frekwensi kejutan listrik (Dunham, 1987).
Efisien dari transfer gen ditentukan oleh beberapa faktor di antaranya persentase
penetasan (yang menetas (hatching percentage), frekuensi gen yang terintegrasi (gene
integration frequency), jumlah sel yang bisa dimanipulasi persatuan waktu dan besarnya
usaha yang diperlukan untuk melakukan manipulasi embrio. Dalam hal ini elektroporasi
merupakan teknik yang paling baik untuk produksi ikan transgenik (Dunham, 1987).
Transgenesis sangat bermanfaat dalam berbagai macam studi tentang biologi
(Jaenisch 1988 da/am Meng et a/., 1999). Misalnya studi mengenaifungsi dan pola ekspresi
dari gen serta untuk memproduksi produk komersial yang diinginkan (Kinoshita & Ozato,
1995). Di bidang perikanan budidaya, transfer DNA eksogenous umumnya ditujukan untuk
memproduksi galur transgenik yang mempunyai nilai komersial yang lebih tinggi (Garcia
Pozo et aI , 1998). Perkembangan teknologi transgenik ikan di dunia meningkat dengan
cepat" Keuntungan ekonomi yang potensial dari teknologi transgenik ikan ini tidak diragukan
lagi. Ikan transgenik bisa juga digunakan sebagai bioreaktor untuk memproduksi bahan
bahan yang bersifat komersial maupun yang bermanfaat bagi kesehatan (Collas et aI,
2000).
Keberhasilan menghasilkan ikan transgenik melalui teknologi biologi molekuler
dengan karakter keunggulan tertentu memberikan harapan baru dalam budidaya ikan
khususnya dalam menunjang peningkatan produksi dan kualitas. Meskipun rekayasa
genetika bukan segalanya karena banyaknya keterbatasan dalam menghasilkan ikan
transgenik.
SISTEM RESIRKULASI
Budidaya ikan menggunakan system intensif mengakibatkan penurunan kualitas air,
karena adanya akumulasi , mineralisasi dan nitrifikasi bahan organik. Menurut Barnabe
(1986) da/am Tanjung (1994) , memelihara ikan pada sistem resirkulasi selalu dihadapkan
pada masalah penumpukan zat-zat organik (sisa pakan, feses dan ammonia) maupun
anorganik, terbatasnya oksigen terlarut, dan penurunan pH . Peran sistem resirkulasi akan
sangat menentukan keberhasilan sistem ini dalam mempertahankan kualitas air sehingga
tetap layak bagi ikan yang dipelihara. Karena itu diperlukan rancangan sistem yang tepat
pan cara perlakuan yang terpadu dengan memastikan efektivitas setiap tahap perlakuan
dan keterpaduan sistem secara keseluruhan (Muir, 1994).
Sistem resirkulasi untuk pemeliharaan ikan telah digunakan oleh beberapa peneliti
dengan berbagai kondisi yang berbeda baik sistem dan ukuran ikan maupun jenis cara
6
..
perlakuan (filter) yang digunakan (Suresh dan Lin, 1992; Tanjung, 1994; Sunarma., 1997).
Pemakaian bahan filter yang tepat akan menentukan keberhasilan pemeliharaa!1 ikan pad a
sistern resirkulasi karena akan menentukan pertumbuhan bakteri non-pathogen pada bahan
tersebul.
Menurut penelitian yang dilakukan di Laboratorium Biologi Perairan Puslitbang
Limnologi, LI PI, efektivitas filter biologi dalam sistem filter resirkulasi tergantung kepada
jumlah populasi bakteri dan jamur, besar kecilnya bahan filter dan kedalaman filter. Apabila
diperhatikan adanya kecenderungan saat jumlah bakteri naik, maka jumlah jamur menurun
atau sebaliknya (Anonymous, 1992). Menurut Rheinheimer (1985), ukuran dan komposisi
bakteri dan jamur di air sangat tergantung kepada konsentrasi dan senyawa organik, karena
senyawa ini merupakan sumber pakan bagi mikroorganisme.
Keiser dan Wheaton (1983) mengemukakan , bahwa media biofilter akan
menyediakan permukaan tempat media tumbuh. Semakin besar populasi mikroorgarnsrne,
maka proses nitrifikasi pun akan sernakin tinggi. Pad a sistem filter biologi, ukuran dan
bentuk bahan yang digunakan sebagai bahanftlter sangat penting Butiran kecil memiliki
daerah permukaan lebih besar untuk tempat menempelnya bakteri dan jamur dibanding
butiran besar (Spotte, 1979), walaupun banyak ukuran butiran kecil baik digunakan sebagai
bahan filter asalkan tidak menghambat sirkulasi air (Spotte, 1979).
FILTER MEKANIK
Filter mekanik bekerja secara fisika yaitu menyaring kotoran-kotoran atau partikel yang
_berukuran lebih besar dari pori-pori media filter (Purwakusuma, 2003). Bahan yang biasa
digunakan pada filter mekanik adalah spons, ijuk, serat kapas (dakron) (Satyani, 2001).
FILTER BIOLOGI
Filter b[ologi berfungsi untuk merombak senyawa nitrogenous yang bersifat racun
(ammonia) menjadi senyawa tidak beracun (nitrat) dengan bantuan bakteri. Dua jenis
bakteri yang berperan adalah Nitrosomonas dan Nitrobakter. Nitrosomonas mengoksidasi
ammonia menjadi nitrit, kemudian nitrit dioksidasi menjadi nitrat oleh bakteri Nitrobakter.
Tempat tinggal bakteri adalah permukaan benda-benda keras. Makin banyak bakteri
yang bersinggungan dengan air maka filter akan bekerja lebih maksimal karena air yang
terproses akan lebih banyak. Media filter yang berpori- pori merupakan media yang baik
; karena mempunyai permukaan yang luas untuk menampung lebih banyak bakteri. Selain
tempat hidup, bakteri memerlukan pakan untuk kelangsungan hidupnya. Pakan bakteri
berupa ammonia dan nitrit , ammonia dan nitrit merupakan hasil buangan yang beracun bagi
ikan, sedangkan hasil buangan bakteri berupa nitrat yang tidak beracun. Untuk
7
mengoksidasi pakannya, bakteri memerlukan suplai oksigen yang cukup. Ketergantungan
bakteri akan tersedianya ammonia di perairan menyebabkan filter biologi baru dapat
bekerja optimal setelah dua sampai enam minggu setelah sistem dijalankan.
FILTER KIMIA
Menurut Purwakusuma (2003), filter kimia adalah sebuah filter mekanik yang bekerja
pad a skala molekuler, mampu menangkap bahan terlarut seperti gas dan bahan organik
terlarut, media filtemya antara lain kulit kerang.
8
..
BAB III
TUJUAN DAN MANFAAT
3.1. TUJUAN
Kegiatan peningkatan mutu ikan hias upside-down catfish (Synodontis nigriventris
melalui rekayasa genetika dan pengelolaan lingkungan untuk mendukung produksi
bertujuan:
1 . . Mengetahui ekspresi gen warna (GFP) yang diinsersikan pada ikan hias upside-down
catfish
2. Mengetahui sintasan dan pertumbuhan ikan hias upside-down (Synodontis nigriventris)
yang dipelihara dengan kepadatan berbeda dalam sistem resirkulasi
3.2. MANFAAT
Kegiatan peningkatan mutu ikan hias upside-down catfish (Synodontis nigriventris
melalui . rekayasa genetika dan pengelolaan lingkungan untuk mendukung produksi
diharapkandapat bermafaat bagi pembudi daya ikan hias, pengambil kebijakan, dan
pengguna lainnya.
9

BAB IV
METODOLOGI
4.1. Peningkatan kualitas warna pada ikan hias upside-down catfish (Synodontis
nigriventris) melalui penyisipan gen warna
Penelitian dilakukan di Balai Riset Budidaya Ikan Hias Oepok dan Laboratorium
Reproduksi dan Genetika Organisme Akuatik, IPB. Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini antara lain: ovaprim, larutan fisiologis, dan induk ikan hias sinodontis
(Synodontis nigriventris) yang telah matang gonad dan siap memijah.
Koleksi Gamet. Sperma dan telur didapatkan dari induk-induk ikan Sinodontis yang
telah dipelihara selama 2 bulan untuk mematangkan gonadnya. Pemijahan ikan uji
dilakukan dengan sistem buatan, induk betina dan induk jantan yang telah matang gonad
disuntik dengan hormon ovaprim dosis 0,6 mLlkg untuk induk betina dan 0,2 mLlkg untuk
induk jantan. Setelah 12 jam dari waktu penyuntikan, induk distriping untuk mendapatkan
telur dan sperma dari induk jantan.
Gambar 2 . Proses pemijahan buatan ikan Synodontis
. Konstruk.si Plasmid. Promoter pKer-GFP yang digunakan dalam transformasi gen
penelitian ini adalah dikontrol oleh promoter dari spesies ikan Japanese flounder (ikan
sebelah) dan dikonstruksi oleh Yazawa et al. (2006), diintroduksikan ke Indonesia pada
tahun 2008 oleh Dr. Alimuddin. Peta plasmidpKer-GFP ditunjukkan pada Gambar 1 (kiri).
pKer-GFP diperbanyak menggunakan bakteri Ecoli strain OH5a melalui transformasi dan
isolasi plasmid sebelum digunakan untuk perlakuan . Gambar 1 (kanan) menunjukkan 4 klon
bakteri yang mengandung plasmid pker-GFP.
10
M 1 2 3 4 N M
Kpnl Bam HI
pKer-GFP (6,0 kb)
kb
3,0
1,5
1,0
0,5 ~ 600 kb
0,2
Gambar 2. Peta promoter dari pKer-GFP (kiri), dan pengecekan hasil transformasi
plasmid pada 4 klan bakteri menggunakan peR'
Elektroporasi sperma. Metode transfer GFP dengan elektroporasi dilakukan
menggunakan mesin Gene Pulser II (Biorad, USA). Spermatozoa dari beberapa induk
. jantan dikumpulkan dalam microtube Eppendorf, yang selanjutnya dicampur dengan 25 [JL
DNA dan dimasukkan ke dalam mesin elektroporator untuk dilakukan kejutan dengan
voltase yang 75 mV/s. Spermatozoa hasil dari kejutan listrik tersebut langsung dicampur
dengan larutan fisiologis sebanyak 625 [JL, diaduk kemudian dipindahkan ke dalam tube
baru untuk persiapan pembuahan. Perlakuan transfer gen tersebut dilakukan secara massal
dengan kuat medan listrik dan konsentrasi DNA yang sama. Pengulangan dilakukan
sebanyak 10 kali. Elektroporasi dilakukan dengan tipe kejutan squae wave dengan panjang
kejutan (pulse length) 30 milidetik dan interval kejutan (pulse interval) 0,1 detik. Dosis DNA
GFP yang digunakan adalah 25 fJL.
Motilitas Sperma: Kualitas sperma hasil elektroporasi diukur dengan menentukan
derajat motilitasnya. Satu tetes sperma diteteskan dengan menggunakan mikropipet di atas
gelas objek kemudian ditutup dengan gelas penutup. Pada tepi gelas penutup diteteskan
akuades dan dilihat pergerakan spermatozoa setelah terkena air di bawah mikroskop
dengan pembesaran 40 X. Penilaian motilitas didasarkan pada persentase kriteria
~
banyaknya sperma yang bergerak maju (progresif).
11
Deteksi GFP: Sam pel sperma sebelum dilakukan ekstraksi DNA, dicuci untuk
membuang sisa plasmid pad a media elektroporasi dengan menambahkan larut.an fisiologis
dan disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 1 menit. Supernatan yang terbentuk
dibuang, pelet sperma diresuspensi dengan menggunakan 20 I-lL larutan fisiologis.
Selanjutnya sam pel sperma terse but diekstrasi dengan extraction kit dan diinkubasi sampai
mendapatkan DNA. DNA yang sudah didapatkan di PCR dengan menggunakan primer
GFP-r : 5'- ACG MC TCC AGC AGG ACC AT - 3' dan GFP-f : 5' - GGT CGA GCT GGA
CGG CGA CG - 3'. Program PCR untuk GFP yang digunakan adalah denaturasi awal 94C
selama 3 menit sebanyak 1 siklus sebagai tahap pertama. Tahap kedua sebanyak 35 siklus
mulai dari proses denaturasi akhir 94C selama 30 detik. Proses annealing (penempelan
primer) pada suhu 62C selama 30 detik. Proses ekstensi awal (elongasi) pada suhu 72C
selama 1 menit. Selanjutnya proses ekstensi akhir pada suhu 72C selama 3 menit dan 4C
selama 59 detik. Hasil PCR dianalisis dengan elektroforesis untuk mengetahui pola pita
tunggal.
Efektivitas Tansfer GFP. Keberhasilan transfer gen GFP diidentifikasi pada benih
ikan Synodontis nigriventris setelah berumur 3 bulan. Setelah ikan berukuran sekitar 3 em,
sirip ekor dipotong dan dilakukan ektraksi DNA dan dengan teknik PCR untuk mengetahui
individu ikan yang membawa gen GFP. Analisis data dilakukan seeara deskriptif. Ekspresi
EGFP di gonad dilakukan dengan analisis RNA yang diambil dari jaringan sirip juga dengan
teknik RT (ReserveTransformation)-PCR.
4.1. Peningkatan sintasan dan pertumbuhan benih ikan hias upside-down catfish
(Synodontis nigriventris) dengan menggunakan sistem resirkulasi dengan
kepadatan benih berbeda
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Lingkungan, Balai Riset Budidaya Ikan
Hias (BRBIH), Depok. Metode penelitian yang digunakan adalah metode eksperimen yang
dilaksanakan di laboratorium. Rancangan yang digunakan adalah Rancangan Acak
Lengkap (RAL) dengan lima taraf perlakuan, masing-masing diu lang sebanyak empat kali.
Langkah awal untuk menjalankan sistem resirkulasi dengan melakukan pemberian pakan
berupa pelet komersial sebanyak 200 g/filter, di masukan kedalam air resirkulasi kemudian
didiamkan selama 7-10 hari. Sistem berjalan di tandai adanya perubahankualitas air berupa
t fluktuasi kadar ammonia, nitrit dan nitrat dan adanya koloni bakteri. Satuan pereobaan yang
dicobakan adalah A. 1 ekor/L, B. 2 ekor/L, C 3 ekor/L, D. 4 ekor/L dan E. 5 ekor/L.
Selengkapnya sistem resirkulasi yang digunakan disajikan di Gambar 1.
12
3
Filter 1)
Pump (2)
2. Pompa submersibel 30 watt
3. Inlet
4: Outlet
S. Akuarium
- - - ~ ~ . : Arah aliran air
Skema unit resirkulasi . Gambar 3.
Teknik Pengumpulan Data
Pengambilan dan pengamatan kualitas air dilakuan setiap satu minggu. Metode analisis
dan pengawetan eontoh tereantum pada Tabel 1.
Tabel 1. Metode analisis sam pel dan parameter yang diamati
Parameter Satuan Metode Pengawetan samp'el
Suhu
BODs
Ammonia
Oksigen terlarut
N0
2
N0
3
Alkalinitas total
pH
CO
2
c
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mg/L
mgCaCOiL
mg/L
Termometer (min-max)
Inkubasi 20 uc, Titrimetrik
Spectrofotometer
DO meter
Spectrofotometer
Spectrofotometer
Titrasi
pH meter
Titrasi
Analisis langsung
Lab
Lab
Lab
Lab
Lab
Analisis langsung
Analisis langsung
Analisis langsung
B. Biota
Bakteri
Ikan (panjang,
be rat, warna)
cmu/mL
Cm, g, %
Plate Count, gram positif
negatif
Timbangan elektrik , milimeter
blok, Spectrofotometer
Lab
Analisis lang sung
! Desain dan waktu evaluasi
Selama pereobaan dilakukan evaluasi terhadap BODs, ammonia, nitrit, nitrat, DO.
Sebagai parameter penunjang dilakukan analisis : pertumbuhan (em,g), survival rate (SR).
13

Pertumbuhan
Pertumbuhan bobot mutlak atau nisbi :
h = W
t
- Wo
dimana:
h = perubahan bobot mutlak atau total tubuh ikan selama percobaan (g)
W
t
=bobot total tubuh awal percobaan (g)
lJ\b=bobot total tubuh selama percobaan (g) (WeatherleY, 1972).
Laju Pertumbuhan Harian
Laju pertumbuhan harian (a) dihitung berdasarkan rumus dari Effendi (2002), yaitu:
x 100 %
Keterangan :
a = laju pertumbuhan harian (% bobot tubuh/hari).
Wt = bobot rata-rata individu pada akhir penelitian (g) .
Wo = bcibot rata-rata individu pad a awal penelitian (g) .
t = lama penelitian (hari)
Kelangs,:!ngan Hidup (SR)
Nt
SR X 100%
dim ana: SR =kelangsungan hidup (%)
Nt = populasi ikan pada akhir masa pemeliharaan (ekor)
No = populasi ik an pada awal masa pemeliharaan (ekor)
Rancangan Percobaan
Rancangan disusun berdasarkan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan lima
perlakuan yang diu lang sebanyak em pat kali
Model Statistik : Steel and Torrie (1991)
Yij : ~ i +tj + ij ,
Yij : Pegaruh aditif Filter ke-i, ulangan ke-j
~ i : Nilai tengah populasi
tj : Pengaruh aditif filter ke-i
ij : Galat percobaan filter ke-i ulangan ke-j
14
Analisis Data
Data yang diperoleh berupa kualitas air dianalisis secara deskriptif dqlam bentuk
gambar dan grafik. Untuk sintasan dan pertumbuhan dilakukan uji sidik ragam (ANOVA),
apabila terjadi perbedaan yang nyata antar perlakuan dilkukan uji lanjut dengan uji LSD (uji
t) menggunakan program SPSS versi 12.0.Pakan pertama adalah moina diberikan sampai
ukuran 2 cm setelah itu diberi pakan cacing tubifek. Pakan tambahan berupa pakan buatan
diberikan setelah ukuran lebih dari 2,0 cm sampai panen (5,0 cm) dengan pemberian secara
ad libitum. Pengamatan akan dilakukan terhadap pertumbuhan ikan yaitu panjang standar
dan bobot ikan setiap 15 hari dengan cara mengambil contoh sebanyak sekitar 5 % dari
populasi . Sintasan diamati dengan menghitung ikan yang mati setiap kali bila ada. Kualitas
air dimonitor terhadap parameter baku seminggu sekali . Analisa pakteri dilakukan untuk
mengetahui peran filter dalam menjaga kualitas air agar tetap optimum selama
pemeliharaan.
15

BABV
HASIL DAN PEMBAHASAN
5.1. Peningkatan kualitas warna pada ikan hias upside-down catfish (Synodontis
nigriventris) melalui penyisipan gen warna
Pemeliharaan induk ikan hias upside-down catfish (Synodontis nigriventris) mulai
dilakukan pad a awal bulan Mei 2010 di kolam beton secara massal untuk mematangkan
gonad sebelum dipijahkan (Gambar 4). Persiapan pemijahan buatan dengan stimulasi
hormone ova prim dan alat suntik. Selain itu persiapan inkubasi telur dan tempat
pemeliharaan larva telah dibuat akuarium berikut perlengkapannya (Gambar 5).
Gambar 4. Induk-induk Synodontis yang akan dipijahkan
Gambar 5. Akuarium untuk inkubasi telur dan pemeliharaan
larva dilengkapi dengan sistem resirkulasi
Untuk mendapatkan kondisi elektroporasi yang optimal pada sperma ikan
maka dilakukan uji motilitas sperma. Hasil pengujian beberapa pengulangan
kejutan medan listrik terhadap motilitas dan ketahanan hidup spermatozoa dapat dilihat
pada Tabel 2.
Tabel2. Kriteria motilitas sperma
Voltage Konsentrasi DNA Motility (%)
75 50 75
75 50 50
75 50 55
75 50 30
75 50 50
75 50 45
75 50 55
75 50 70
75 50 50
75 50 45
16

Keberhasilan pembuahan (fertilisasi) dapat didukung oleh kualitas spermatozoa
yang baik, secara fisik maupun motilitasnya. Untuk mengetahui tingkat ferilisasj yang lebih
tinggi, perlu dicari larutan fisiologis yang dapat menambah daya motilitas dan viabilitas
spermatozoa. Menurut Rustidja (1985) penggunaan larutan fisiologis yang mengandung
NaCI dan urea dapat mempertahankan daya hidup spermatozoa antara 20-25 menit.
Menurut Soehartojo (1995), di luar testis sel spermatozoa mampu memakai sumber
energi dari luar untuk melanjutkan hidupnya. Bahan utama yang dipakai sebagai sumber
energi dari luar adalah fruktosa yang akan diubah menjadi asam laktat dan energi dengan
bantuan enzim fruktolisin. Pemberian larutan fruktosa sebagai pengencer untuk
spermatozoa ikan dimaksudkan untuk memberikan energi dan nutrisi untuk spermatozoa
ikan agar ' dengan energi yang berupa ATP terse but dapat meningkatkan atau
memperpanjang waktu motilitas dan viabilitas spermatozoa.
Kemampuan spermatozoa hidup secara normal setelah keluar dari testis hanya berkisar
antara 1-2 menit. Menurut Suquest (1994)dalam Cossonet aI, (1999) bahwa di alam durasi
motilitas terjadi dalam periode yang sangat pendek padaikan air tawar . Billard dalam
Jamieson (1990) menyatakan bahwa motilitas spermatozoa ikan dibatasi pad a periode detik
dan menit karena adanya osmotic injury.
Sebagian sperma yang dihasilkan dari kejut listrik dianalisis untuk mengetahui
inkorporasi plasmid pKer-GFP dalam sperma menggunakan metode PCR. Sebagian besar
sperma ikan yang sudah dielektroporasi selanjutnya digunakan untuk membuahi telur. Hasil
analisis PCR del1gan DNA dari spermajkan hasil elektroporasi ditunjukkan pad a Gambar 8.
M 1 2 P N
t Gambar 6. Hasil uji PCR DNA sperma ikan Synodontis nigriventris yang telah
dielektroporasi
Hasil penggabungan DNA gen warna (integrasi) pada spermatozoa dapat diketahui
dengan dua cara yakni menggunakan mikroskop flourescent dan pemindaian DNA. Pada
17
Gambar 6 terlihat bahwa pada DNA dengan konsentrasi 50 ~ L dengan voltage 75 volt
terdeteksi GFP dan ada yang tidak terdeteksi. Penyebab tidak keluarnya. pita dapat
disebabkan karena proses ekstraksi yang tidak tepat atau konsentrasi DNA yang terlalu
tinggi sehingga sulit annealing pada saat proses peR.
Jumlah ikan hidup yang telah diberi perlakuan penyisipan gen GFP diamati mulai
saat inkubasi sampai 24 jam. Jumlah telur yang menetas bervariasi bahkan ada yang sama
sekali tidak menetas, dan ada yang menetas tetapi pada saat larva banyak yang mati
bahkan untuk kontrol tidak ada yang menetas. Kualitas telur ikan pada panelitian ini bagus
yang dibuktikan dengan derajat penetasannya yang tinggi, walaupun pada fase larva banyak
yang mati, kecuali pad a kontrol. Faktor mortalitas dimungkinkan banyak penyebab
eksternal , di antaranya lingkungan dan penanganan. Identifikasi telur adalah hal yang
penting untuk mengetahui nilai derajat kelangsungan hidup embrio telur kontrol maupun
telur yang diberi perlakuan gen (elektroporasi).
Fragmen GFP produk peR dengan ukuran 650 bp terdeteksi pada benih ikan hasil
elektroporasi , sedangkClrl pada kontrol tidak tampak (Gam bar 7). Hasil anal isis DNA benih
sinodontis yang diambil secara acak pada tiap-tiap ulangan dengan jumlah individu 10 ekor
menunjukkan bahwa keberhasilan transfer gen GFP terhadap ikan sinodontis sebesar 50%.
Persentase keberhasilan transfer gen GFP ikan sinodontis ini jauh lebih besar dibandingkan
dengan penelitian transfer gen GFP terhadap ikan komet yang hanya sebesar 20% (Hadie
et aI., 2009)
M 2 3 4 5 6 7 8 9 10 + M
Gambar 7. Hasil peR dari sirip ekor benih ikan sinodontis
18

5.2. Peningkatan sintasan dan pertumbuhan benih ikan hias upside-down catfish
(Synodontis nigriventris) dengan menggunakan sistem resirkulasi dengan
kepadatan benih berbeda
Hasil yang diperoleh selama penelitian menggambarkan setiap satuan percobaan
menunjukkan filter biologi bekerja dengan baik yang ditandai adanya fluktuasi ammonia,
nitrit dan nitrat dan kerja bakteri, selengkapnya di sajikan di Tabel 3. Koloni bakteri yang
bekerja di filter diharapkan merupakan bakteri non patogen, tersedianya bakteri posistif akan
menghasilkan output berupa kualitas air yang optimal. Kelimpahan koloni bakteri selama
penelitian di setiap filter menggambarkan kemampuan dan fungsi yang berbeda jika dilihat
dari jumlah bakteri yang ada di dalamnya. Rata-rata tertinggi koloni bakteri yang diperoleh
selama penelitian, dengan kepadatan 3 ekor/L dengan jumlah koloni (3.560.20)10
3
.
Kinerja filter dapat diukur dengan melihat kosentrasi unsur N terutama amonia, nitrit
dan nitrat , unsur ini merupakan salah satu parameter utama untuk menunjukkan kinerja dari
bakteri Nitrifikasi. Adanya kosentrasi unsur N di dalam sUatu media air mengindikasikan
bahwa di dalamnya terdapat bakteri nitrifikasi di dalamnya, sedangakan unsur lain seperti
lemak dan kabohidrat akan dimanfaatkan oleh bakteri jenis lain seperti Pseudomonas yang
akan mengoksidasi lemak menjadi bahan yang bisa dimanfaatkan oleh mikroorganisme lain.
Hasil pengamatan percobaan menunjukkan terjadi oksidasi bahan organik ditandai adanya
fluktuasi ammonia, nitrit dan nitrat serta jumlah koloni bakteri yang terdapat di dalam filter,
selengkapnya disajikan di Tabel 3 ..
Tabel3. Hasil pengukuran rata-rata kisaran nilai kualitas air selama percobaan
Parameter Perlakuan
A B C D E
Suhu(u C) 26-30 26-30 26-29 25-31 25-30
pH 7.1-8.4 70-8.3 70-82 70-88 70-83
DO(mg/l) 5.64-10.23 4.94-10.59 6.35-10.59 5.34-10.23 8.47-10.53
BODs(mg/l) 226-3406 3.17-24.71 3.53-27.53 8.64-34.23 8.28-28.95
Ammonia(mg/ l).10':" 8.6-24.9 3.1-26.8 4.1-40.5 6.9-132.8 3.6-313
Nitrit(mg/l).10" 0.05-1.99 0.05-8.42 0.50-7.03 0.8-6.90 0.7-8.21
Nitrat(mg/l) .10" 3.79-250.9 7.7-267 6.4-272.2 70-2535 2.32-257.3
Alkalinitas 11 .80-55.31 11.80-46.28 11 .80-33.37 11 .80-33.18 11 .80-22.12
Ket : A 1 ekor/liter, B. 2 ekor/liter, C. 3 ekor/liter, D. 4 ekor/liter dan E. 5 ekor/liter
t Sistem resirkulasi menggunakan bahan filter menerapkan peran ganda antara
proses kimia, fisika dan biologi. Masing-masing proses mempunyai fungsi dan kemampuan
yang berbeda yang akan saling melengkapi sehingga sistem yang ada dapat berjalan lebih
sempurna. Filter biologi mengandalkan kinerja bakteri dalam mendegradasi bahan organik
19

dan anorganik selama prosesnya. Apabila proses tersebut tidak berjalan sempurna akan
mengakibatkan penurunan kualitas air atau media sehingga tidak optimal bagL biota yang
terutama ikan. Sistem biofilter mengandalkan kerja bakteri, selama hidupnya
mikroorganisme memerlukan bahan organik dan anorganik serta media sebagai tempat
menepel selama proses hidupnya. Menurut Keiser dan Wheaton (1983), media biofilter akan
menyediakan permukaan media tumbuh bagi mikroorganisme. Untuk filter biologi, ukuran
dan bentuk bahan yang digunakan sebagai filter sangat penting karena akan mempengaruhi
besar keeilnya populasi mikrooraginisme selama proses nitrifikasi. Pemakaian bahan filter
yang tepat akan menentukan keberhasilan pemeliharaan ikan di dalam sistem resirkulasi,
karena akan menentukan pertumbuhan bakteri non-pathogen pada filter sehingga air yang
dihasilkan akan menjadi tolok ukur keberhasilan sistem. Efektifitas filter biologi dalam sistem
resirkulasi tergantung jumlah bakteri dan jamur, besar keeil bah an dan kedalaman. Kondisi
akan berbeda dengan sistem dan ukuran ikan maupun jenis filter yang dipakai (Suresh dan
Lin, 1992) dan karakter fisik filter (ketebalan dan porositas).
Kualitas Air
Kinerja sistem resirkulasi menggunakan proses biologi berupa biofilter akan bekerja
dalam mengoksidasi bahan organik dan anorganik yang tersedia di air. Hasil dari kinerja
sistem ini merupakan output pertama yang akan digunakan oleh ikan yang dipelihara.
Sistem ini dapat dikatakan berjalan dengan. baik, apabila kualitas air pemeliharaan tetap
optimal. Sistem ini menjaga kualitas air dengan organik dan
anorganik yang dihasilkan dari sisa metabolisme dan pakan yang tidak termakan. Bahan
bahan tersebut menjadi sumber makanan bagi mikroorganisme yang terdapat di dalam filter.
Maksimal dan tidaknya hasil yang diperoleh di tentukan oleh bahan filter, bahan organik
. - anorganik sebagai makanan dan mikroorganisme yang bersimbiosis di dalamnya. Hasil
pengukuran parameter fisika kimia media pemeliharaan untuk setiap perlakuan selama
penelitian menunjukkan semua perlakuan selama pereobaan masih dalam kisaran
mendukung proses okidasi biologi, sehingga kualitas air mampu dengan optimal untuk
pemeliharaan ikan patin sehingga mendukung pertumbuhan dan sintasan ikan patin.
Peningkatan kualitas air yang diperoleh berkaitan dengan semakin berkurangnya kebutuhan
oksigen biokimia (deoksigens/) selama proses perombakan bahan organik. Sejalan dengan
penurunan penurunan BODs terse but kemungkinan ketersediaan oksigen di dalam air akan
meningkat akibat oksigen yang ditransfer (reoksigenas/) akan lebih tinggi dibandingkan
oksigen yang dipakai (deoksigenas/).
Efisiensi penyisihan unsur N menjadi nitrit dan nitrat menjadi tolak ukur keberhasilan
bakteri Nitrobakter dan Nitrosomonas dalam mengoksidasi ammonia. Hasil pengukuran
20

penyisihan ammonia antar perlakuan menunjukkan perbedaan yang nyata untuk perlakuan
C dan B, dengan tingkat efisiensi penyisihan sebesar 95.89% dan 92.03 % (Tabel 2) .
Menurut Narhidayat et. aI. , (2009), efektifitas penyisihan amonia menggunakan bahan zeolit
dalam proses perbaikan kualitas air memberikan nilai sebesar 75.01 %. Efisiensi nitrifikasi
mempengaruhi metabolisme sel sehingga menurunkan kemampuan bakteri selama tumbuh
dan berkembangbiak. Menurut Mc Carty dan Haug (1979) , kemampuan oksidasi oleh bakteri
dipengaruhi oleh 6 faktor yaitu : keberadaan senyawa beracun (bakterisida) air, suhu, pH,
oksigen terlarut , salinitas dan luas permukaan untuk menempel bakteri. Aktifitas bakteri
nitrifikasi menurun dengan meningkat atau menurunnya salinitas dimana bakteri hidup.
Oksidasi ammonia dan nitrit lebih efisien pada kondisi aerob (Kawai et al. dalam Spotte,
1979). Bakteri nitrifikasi hidup pad a kisaran pH 6.5-8.5, hidup di habitat tanah , air tawar dan
laut (Buchanan dan Gibbons, 1974 dalam Linda, 1995). Genus Nitrosomonas, dengan sel
berbentuk batang lurus dengan membran peripheral , terdapat lamela berbentuk pita. Genus
Nitrobacter sel berbentuk batang pendek, sering berbentuk baji dengan penutup polar dari
Cytomembrane . Spotte (1979), menyatakan, bahwa proses nitrifikasi di air laut akan
berhenti pada pH 5.5 dan terjadi oksidasi ammoniak dan nitrit dengan pH 7.1-7.8. Menurut
Burford (2003) , konsumsi oksigen dibawah 20% mengindikasikan rendahnya proses
nitrifikasi terhadap ammonia menjadi nitrit dan nitrat.
Setelah filt er yang di gunakan dapat bekerj a dengan baik akan menghasi lkan kual itas
air yang opt imal bagi ikan yang dipelihara. Baiknya kual itas air yang dihasilkan sebagai '
salah satu input yang akan digunakan untukproses budidayaikan. Kualitas air yang baik
akan memberikan output terhadap ikan berupa pertumbuhan dan sintasan yang optimal.
Panjang Mutlak
Hasil pengamatan dan pengukuran pertumbuhan, sintasan (SR) , menunjukkan filter
memberikan pertumbuhan terbaik dengan rata-rata pertumbuhan panjang tertinggi D. 12.42
mm/ekor, diikuti A. 12.28, E. 11 .60, B.10.45 mm/ekor dan C.6.87 mm/ekor, mm/ekor.
Selengkapnya disajikan dalam Gambar 8.
21
40.00
35.00
E
E30.00
-
.s 25.00
co
...
.s 20.00
co
... 15.00
Cl
s::
co 10.00
'2
co
5.00
a..
0.00
2 3 4 5
Waktu (bulan)
-----+- Kepadatan 1 ekorliiter
---- Kepadatan 2 ekorliiter
--.- Kepadatan 3 ekor/liter
---*- Kepadatan 4 ekorliiter
--*- Kepadatan 5 ekor/liter
Gambar 8. Grafik petumbuhan panjang (em) Upside-down catfish (Synodontis nigriventris)
selama pereobaan
Sobot
Hasil perhitungan rata-rata pertumbuhan panjang selama pereobaan terlihat filter A,
memberikan pertumbuhan yang lebih tinggi dibanding perlakuan lain dengan berat m a s i n g ~
masing filter A. 0.35 gram/ekor, diikuti perlakuan D. 0.24 gram/ekor, B. 0.22, E. 021
gram/ekor dan terendah C. 0.1 1 gram/ekor. Selengkapnya disajikan dalam .Gambar 9.
0.70
0.60
E 0. 50
(\I
...
~ 0.40
s::
(\I
~ 0.30
-
0.20
~
0.10
0.00
-
4 5 2 3
Waktu (bulan)
-+--- Kepadatan 1 ekor/liter
--Kepadatan 2 ekor/liter
-----..- Kepadatan 3 ekor/liter
____ Kepadatan 4 ekor/liter
___ Kepadatan 5 ekoriliter
Gambar 9. Grafik petumbuhan bobot (g) Upside-down catfish (Synodontis nigriventris)
selama pereobaan
22

Selama percobaan pakan yang diberikan adalah cacing tubifex, ikan ini masih
cenderung menyukai pakan alami yang merupakan pakan yang biasa d i t e m ~ i di habitat
aslinya. Senada yang dikatakan oJeh Toma (2008), Pemberian pakan dengan berbagai jenis
pakan alami berbeda menyatakan cacing Tubifex memberikan pertumbuhan dan sintasan
lebih baik dibanding pakan larva artemia dan moina sp. Sedangkan untuk ikan jenis lain
yaitu patin pemberian pakan maksimum sebanyak 20-49 gram memberikan pertumbuhan
harian sebesar 0.18 gram/ekor (Meilizsa, et. a/. 2009) .
Pertumbuhan merupakan salah satu parameter untuk mengetahui perubahan ukuran
ikan baik berat, panjang dan volume dalam perubahan waktu (Wetherley, 1972). Menurut
Effendie (2002), pertumbuhan dipengaruhi oleh faktor-faktor antara lain: jumlah, ukuran
makanan yang tersedia, kualitas air, umur, ukuran ikan dan kematangan gonad. Makanan
adalah satu unsur terpenting dalam menunjang keberhasilan budidaya intensif, karena
makanan alami tidak lagi mencukupi untuk pertumbuhan (Hickling, 1971). Makanan yang
diberikan berkaitan dengan jumlah bahan organik dan anorganik yang dibuang ke media
budidaya, bahan ini yang nerupakan sumber penggerak bagi filter yang digunakan. Bakteri
yang berasosiasi didalamnya selain memerlukan oksigen selama proses metabolisme juga
sangat memerlukan bahan organik untuk kehidupannya. Menurut Hickling (1971) , makanan
yang diberikan berfungsi untuk memelihara tubuh dan mengganti alat yang rusak,
sedangkan kelebihanya digunakan untuk pertumbuhan. Kualitas air yang baik akan
memberikan tempat yang nyaman bagi biota air terutama ikan sehingga proses
metabolilsme berjalan maksimal yang akan menghasilkan energi yang cukuR _untuk
pemeliharaan dan kelebihanya di perlukan untuk pertumbuhan dan reproduksi (Wedemeyer,
1996).
Sintasan
Selain pertumbuhan panjang dan berat sebagai salah satu parameter budidaya
adalah sintasan. Hasil pengamatan dan pengukuran pertumbuhan, sintasan (SR) ,
menunjukkan filter A memberikan nilai sintasan selama percobaan (100%) sedangkan
kepadatan lain B. 88.5%, D. 82.5%, E. 80.5% dan C. 72.9%. Selengkapnya disajikan dalam
Gambar 10. Hasil yang diperoleh di perlakuan C pada minggu ketiga terjadi perubahan
kualitas yang cukup besar sehingga mengakibatkan kualitas air turun secara dratis. Turunya
kualitas air yang melewati ambang bagi ikan akan menyebabkan stres bahkan kematian.
23

120.0
100.0
-+- Kepdatan 1 ekor/liter
80.0
-e-- Kepadatan 2 ekor/liter
-.- Kepadatan 3 ekor/liter
~ Kepadatan 4 ekor/liter
60.0
40.0
~ Kepadatan 5 ekor/liter
20.0
0.0
2 3 4
Waktu (bulan)
Gambar 10, Grafik sintasan (%) Upside-down catfish (Synodontis nigriventris) selama
percobaan
24

BAB VI. KESIMPULAN DAN SARAN
4.1. Kesimpulan
1. Penyisipan GFP terhadap ikan hias Synodontis nigriventris berhasil dilakukan
dengan metode elektroporasi
2. Individu yang mebawa gen GFP berhasil diperoleh pada FO, berdasarkan hasil
peR
3. Performa ikan yang disisipkan GFP belum terlihat secara morfologi pada benih
ikan berumur 3 bulan , sehingga masih menunggu menjadi calon induk
4. Kepadatan benih 4 ekor/L pada pemeliharaan sistem resirkulasi memberikan
pertumbuhan terbaik dengan pertambahan panjang 1.24 cm/ekor, bobot 0,24
g/ekor dan sintasan sebesar 82 ,5%.
4.2. Saran
1. Penelitian mengenai transgenik ikan hias masih perlu dilakukan untuk perbaikan
terhadap peningkatan kualitas melaui metode elektroporasi '
2. Pada penelitian ini tidak dikaji mengenai jenis bakteri filter, maka diperlukan
penelitian lanj utan mengenai lamanya jenis bakteri yang terdapat di filter.
25

DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2006. Synodontis nigriventris. http://www.scotcat.com/factsheets/s_nigriventris .htm.
diakses 4 November 2009 pukul 23.00 WIB. 3pp.
2007. Upside-down Catfish Information.
http://www.timtropicals.com/inventory/catfish/upside-downcatfishinfo.asp. diakses 4
November 2009 pukul 23.00 WIB.1 p.
2007 . Upside-down Catfish (Synodontis nig riven tris).
http://www.fishmongabay.com.lspecies/Synodontis_nigriventris .html . diakses 4
November 2009 pukul 23.00 WIB. 3pp.
Burford, M.A., Peter J. Tompson, R P. Mc. Intosh, R Bauman and D.C. Pearson. 2003.
. Nutrient and Microbial Dynamics in High-Intensity, Zero-exchange Shrimp Ponds in
Belize. Aquaculture 219 : 393-411 . .
Effendie, M.1. 1979. Metode Biologi Perikanan. Cetakan I. Yayasan Dewi Sri , Bogor.
Hickling, C. F. 1971 . Fish Culture. Faber and Faber London.
Iriana, I., Kusdiarti, Djajasewaka, H., dan Zuhaynisah. 2008 Peningkatan keragaan benih
Cherax albertisi dengan system resirkulasi :' Teknologi Perikanan Budidaya 2008.
Pusat Riset Perikanan Budidaya, p: 221 -228.
Keiser, G. E. and F. W. Wheaton. 1983. Nitrifi cation Filter For Aquatic Culture System State
of Art. J. World Maricul. Soc: 14:39-324.
Linda. 1995. Kaj i-a n Kinerja Bakteri Terhadap Air Limbah Organik di Waduk Set iabud i.
Jakarta. Tesis . Sekolah Pascasarjana, IPB.
Lingga,P. dan H. Susanto. 2003. Ikan Hias Air Tawar. Penebar Swadaya, Jakarta.
Me Carty, PL. and RT. Haug. 1971 . Nitogen Removal for Waste Water by Biological
. Nitification. The Society for Applied Bacterological Sympocium Series No.1 academic.
Press, London.
Meilizsa N ., A. Permana, R. Hirnawati dan Y. Moreau. Prosiding. Seminar Nasional VI. Hasil
Penelitian Kelautan dan Perikanan. Jurusan Perikanan dan Ilmu Kelautan. Fakultas
Pertanian . UGM . Jgjakarta .
Muir, J. F. 1994: Water Reuse System in Aquaculture. Infofish International , 6:40-48
Nurhidayat, K. Nirmala dan D. Djokosetyanto. 2009. Peran mikroba dalam memperbaiki
kualitas air sistem resirkulasi aliran tertutup. Pro siding Seminar Kelautan .
Universitas Hang Tuah. Surabaya
Ponggo, A.D. 2002. Petunjuk Beberapa Jenis Ikan Akuarium Air Tawar. Taman Akuarium Air
Tawar. Jakarta.
Satyani, D.L. 2001 . Budidaya Ikan Hias Air Tawar Populer. Penebar Swadaya, Jakarta.
Spotte, S. 1979. Fish and Invertebrate Culture. Water Management in Closed System. Sec
edition. Jhon Willey an Sons, New York. 179 p.
26

Sumantadinata, K. 1981 . Pengembangbiakan Ikan-ikan Pemeliharaan di Indonesia. IPB.
Steel , R. G. D. and Torrie, J. H. 1991 . Principles and Procedures of Statistics. A Biometrical
approach. Seconded. Mc. Graw Hill International Book Company. Sydney.
Sures, A. V. and C. K. Lin. 1992. Effect of Stocking Dencity on Water Quality and Production
of Patin Tilapia in Recirculating System. Aquaculture Enggineering 11: 1-22.
Tanjung, L. R. 1994. Pengaruh Lama Penyimpanan Terhadap Kemampuan Inokulasi
Bioesfer Sistem Aliran Tertutup. Limnostek Perairan Daerah Tropis Indonesia.
Tiningrum, R. 2007. Teknik Pemeliharaan Larva Synodontis (Synoodontis eupterus) di
Instalasi Loka Riset Budidaya Ikan Hias Air Tawar Depok. Laporan PKL, Fakultas
Perikanan dan Ilmu Kelautan UNDIP.
Toma M. 2008. Pengaruh Pemberian Jenis Pakan Alami Yang Berbeda Terhadap
Pertumbuhan dan sintasan Larva Ikan Hias Upside-Down Catfish (Synodontis
nigriventris). Skripsi. Tidak dipublikasi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam Universitas Negeri Jakarta. Jakarta
27