Manual de Laboratorio Anlisis Instrumental II

PRCTICA No. 3 COMPROBACION EXPERIMETAL DE LA LEY DE BEER-LAMBERT DETERMINACION DE NITRITOS EN EMBUTIDOS INTRODUCCIN La ley de beer relaciona la concentracin de la fase absorbente con la radiacin de una solucin diluida; mientras que la relacin entre la absorcin de la luz y el camino recorrido por sta esta representada por la ley de lambert. La fusin de estas dos leyes proporciona la absorbancia total de un cuerpo cuando interacciona con un haz de luz monocromado. Matemticamente, estos puede representarse por: A= bc A= Absorbancia = constante de absortividad b= Longitud de la trayectoria de la solucin absorbente c= Concentracin de la muestra Con esta formula y conociendo la longitud de onda de mxima absorbancia, es posible cuantificar cualquier solucin diluida, partiendo de soluciones de concentracin conocida. Estas concentraciones de las soluciones conocidas o estndares se correlacionan linealmente con sus respectivas absorbancias, de la pendiente de esta lnea (ab) es constante para una misma sustancia. Una forma de comprobar experimentalmente la aplicacin de la ley de beer es mediante el anlisis del componente de una muestra que al reaccionar con otra sustancia forma un derivado coloreado, como sucede en el anlisis de nitritos en agua o embutidos, donde mediante su reaccin con aminas (diazotizacin) forma un derivado color rosa que varia de intensidad dependiendo de la concentracin de nitritos en la muestra. Objetivos. 1. Comprobar experimentalmente la ley de Beer-Lambert 2. Determinar la concentracin de nitritos en embutidos de marca comercial Procedimiento. Preparacin de Sulfanilamida 0.5% (solucin 1) Pesar 2.5 gramos de sulfanilamida y disolverlos en 250 ml de agua destilada. Agregar 250 ml de HCl concentrado y dejar reposar hasta que se encuentre a temperatura ambiente NOTA: almacenar en frascos mbar por no mas de 2 meses Preparacin de 1-naftil-etilen-diamina-dihidroclorada 0.1% (solucion 2) 1. Pesar 0.5 gramos de reactivo y disolverlos en 250 ml de agua destilada. 2. Agregar otros 250 ml de agua destilada. NOTA: almacenar en frascos mbar por no ms de 2 meses.

Manual de Laboratorio Anlisis Instrumental II

Curva de Calibracin 1. Pesar cerca de 25 mg de estndar de nitrito de sodio, disolver en 25 ml de agua y llevar a volumen en un baln de 50 ml. 2. Preparar una dilucin, tomando 0.2 ml de la solucin anterior para un baln de 25 ml y llevar a volumen con agua destilada 3. Pipetear 1, 3, 5 y 10 ml de la solucin anterior en cuatro balones de 100 ml. 4. Agregar a cada baln 2 ml de sulfanilamida al 0.5% y dejar reposar por 3 minutos. 5. Agregar a cada baln 1 ml de naftiletilendiamina al 0.1% y dejar reposar por 10 minutos. 6. Llevar a volumen con agua destilada y determinar su absorbancia a 540 nm, utilizando agua destilada como blanco. Determinacin de la concertacin de una muestra: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Pesar 5 gramos de muestra y triturarla o licuarla con 50 ml de agua destilada caliente. Dejar reposar por 5 minutos agitando ocasionalmente, luego filtrar la solucin. Tomar 2 ml del filtrado y colocarlos en un baln de 100 ml. Agregar a cada baln 2 ml de sulfanilamida al 0.5% y dejar reposar por 3 minutos. Agregar a cada baln 1 ml de naftiletilendiamina al 0.1% y dejar reposar por 10 minutos. Llevar a volumen con agua destilada y determinar su absorbancia a 540 nm, utilizando agua destilada como blanco.

Determinacin de la concertacin de una muestra desconocida 1. Tomar una alcuota de la solucin y colocarlos en un baln de 100 ml. 2. Proceder de la misma forma como se trabajo con los estndares y la muestra. Clculos Realizar una grafica en la cual se muestre en el eje de las abscisas la longitud de onda y en el eje de las ordenadas la absorbancia de las soluciones patrn. Encontrar la ecuacin de la recta utilizando el mtodo de correlacin lineal b, en donde y= absorbancia y x= concentracin de la muestra desconocida. Y= mx +

Determinar la concentracin de nitritos en la muestra con base a la curva de calibracin y a la ecuacin encontrada, expresar los resultados en mg/kg. Cuestionario (Entregar con el reporte). 1. Explicar de forma sencilla la ley de beer lambert y proponga 3 ejemplos

Manual de Laboratorio Anlisis Instrumental II

2. Porque se adicionan sales de nitritos a productos carnicos como embutidos, mencione cuales son los limites de nitritos de acuerdo a 2 organizaciones que se dediquen al control de alimentos

3. Cul es el riesgo que tienen la presencia de nitrititos en altas concentraciones en alimentos y que puede causar en el organismo humano

4. Cul es la funcin de la sulfanilamida y de la naftiletilendiamina en el anlisis de nitritos, diagrame la reaccin.