LAMPIRAN A.

KOMPOSISI BAHAN PENELITIAN

1. Phosphate Buffer Saline pH 7.4 Nama Bahan NaCl KCl Na2HPO4 KH2PO4 Aquadest steril Jumlah 8 gram 0,2 gram 1,145 gram 0,24 gram ad 1000 ml

2. Medium Plus Komposisi Medium lengkap Medium tidak lengkap Nama Bahan Serum darah manusia RPMI 1640 HEPES Na-bikarbonat Hipoksantin Gentamisin Aquadest Jumlah 10 ml 10,4 gram 5,96 gram 2,1 gram 0,05 gram 0,5 ml 960 ml

3. Freezing Solution Nama Bahan Gliserol absolut NaCl Sorbitol Aquadest Jumlah 87 % 0,5 % 3% Ad 1000 ml

Media Roswell Park Memorial Institute 1640 (RPMI 1640) merupakan salah satu media yang banyak digunakan untuk menumbuhkan sel mamalia, terutama sel suspensi, contohnya sel limfosit manusia.[1] Selain itu, media ini juga dapat digunakan untuk menumbuhkan sel hybrid.[2] Media ini merupakan modifikasi dari media RPMI 1630 yang membutuhkan bikarbonat sebagai buffer serta terdapat perubahan komposisi asam amino dan vitamin.[1] Media ini berwarna merah karena adanya phenol red sebagai indikator pH untuk mendeteksi

terjadinya perubahan pH akibat metabolisme sel.[1] Jika sisa metabolisme sudah terakumulasi di media, maka warna media akan berubah menjadi kuning.[1] Hal ini menandakan bahwa sel harus dikultur di media baru agar sel tidak mati akibat sisa metabolisme tersebut.[2] Selain itu, RPMI 1640 mengandung CaCl2, Ca(NO3)2.4H2O, KCl,MgSOz7H2O, NaCl, NaHCO, Na2HPO4.7H2O, glukosa, Glutathione, phenol red, berbagai asam amino (L-aspargie, LCystine, tirosin, valin, dan sebagainya), serta vitamin (biotin, pantotenat, kolin).[3]

Serum yang sering digunakan sebagai suplemen kultur sel adalah serum janin sapi atau fetal bovine serum (FBS).

NaHCO3 Merupakan senyawa komponen medium yang berperan dalam menjaga pH dan osmolalitas kultur sel (Marther dan Robert, 1998). Konsentrasi bikarbonat sangat penting dalam mempertahankan keseimbangan dengan CO2 atmosfer. Beberapa medium mengandung konsentrasi bikarbonat yang tinggi dan meningkatkan CO2 di atmosfer, sedangkan medium lain memiliki konsentrasi bikarbonat yang rendah untuk digunakan dengan fase gas udara. Jika medium yang digunakan dirubah, maka akan mengubah konsentrasi bikarbonatnya, sehingga penting untuk memastikan bahwa osmolalitas medium tetap berada dalam kisaran yang ditentukan (Freshney, 2005). Penicillin dan Streptomycin dalam Medium Kultur

Fungsi penicillin dan streptomycin dalam medium kultur adalah untuk membantu mencegah kontaminasi yang berupa bakteri. Penicillin menghambat pertumbuhan bakteri dengan menghambat sintesis peptidoglikan. Streptomisin menghambat pertumbuhan bakteri dengan menghambat sintesis protein. FBS

Dalam mengkultur sel, diperlukan medium kultur yang biasanya dikombinasikan dengan Fetal Bovine Serum (FBS), yaitu suatu serum (darah tanpa sel dan faktor penggumpal/pembeku). FBS berisi berbagai substansi yang dibutuhkan sel yang dikultur untuk tumbuh dan hidup dengan baik. FBS merupakan serum yang digunakan secara luas dalam kultur sel, jaringan, ataupun organ secara invitro, karena dapat digunakan hampir di semua jenis sel serta karena mengandung banyak faktor pendukung pertumbuhan dan metabolisme embrionik (Jochems, 2009).