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INTRODUCCIN

Para el estudio microscpico de los microorganismos, existen mtodos muy diferentes, cada uno de los cuales nos va a proporcionar informacin sobre distintos aspectos y propiedades de los microorganismos. Dependiendo del objetivo que se pretenda alcanzar, se seleccionar un mtodo u otro. Se denomina observacin vital, al tipo de examen que se utiliza para la investigacin de los caracteres principales del microorganismo (movilidad bacteriana, morfologa, estructura, observacin de huevo, etc.) EL examen microscpico nos informa de la presencia o no de las bacterias, de su morfologa, de sus caractersticas tintoriales etc. Es el primer paso que nos permitir orientar el resto del examen para una perfecta identificacin del agente etiolgico de la enfermedad. Se ha hablado de preparaciones de bacterias vivas, no coloreadas, que no permiten observar la movilidad, pero que sobre otros hechos morfolgicos de importancia como tamao, formas, agrupacin de las clulas, posesin de estructuras especiales, como endosporas, flagelos, cpsulas y grnulos intracelulares, no arroja resultados importantes. La forma ms simple de aumentar el contraste entre las clulas y el medio que las rodea es por medio de la utilizacin de colorantes, de acuerdo con su morfologa y las reacciones tintoriales de un organismo se pueden ver los grupos en los que estn clasificadas las bacterias

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NDICE INTRODUCCIN..1 CAPTULO I: GENERALIDADES.. 3 1.1. ESPECIALIDAD.4 1.2. TITULO.....4 1.3. OBJETIVO..4 a. General:...4 b. Especficos:.4 1.4. RESPONSABLE DE LA INVESTIGACIN..4 CAPTULO II:FUNDAMENTO TEORICO ..........5 CAPTULO II: EXPERIMENTACIN...09 3.1. MATERIALES..09 a. Materiales y equipos..09 b. Reactivos: 10 3.2. METODOLOGA..12 CAPTULO IV: RESULTADOS Y DISCUSIN...13 4.1. RESULTADOS .14 4.2. DISCUSIN ..15 2

CONCLUSIONES .16

BIBLIOGRAFA..17

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I. GENERALIDADES 1.1. ESPECIALIDAD Laboratorio de microbiologa

1.2. TITULO. Examen microscpico de las bacterias 1.3. OBJETIVO. a. General:


Observar las formas y estructuras de las bacterias a partir de las muestras directas y de cultivo, utilizando coloraciones simples,

diferenciales y estructurales .

b. Especficos:
Observar las formas fundamentales de las bacterias Describir las tcnicas de coloracin simple y diferencial Identificar colonias bacterianas en forma macroscpica Observas estructuras bacterianas por tcnicas de coloracin especifica

1.4. RESPONSABLES DE LA INVESTIGACIN

Torres Villanueva Mitshell

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II. FUNDAMENTO TERICO OBSERVACION MICROSCOPICA DE BACTERIAS. El examen microscpico de microorganismos constituye una de las tcnicas caractersticas de la microbiologa y aunque es posible observar ciertos microorganismos sin colorear (Ej. protozoarios), en el caso de las bacterias se hace necesaria la coloracin de los preparados para aumentar el contraste con el fondo. Para obtener el mximo aprovechamiento de la observacin microscpica, debe poder relacionarse el comportamiento tintorial con la estructura y composicin qumica de las diferentes partes de la anatoma bacteriana. Colorantes y mordientes. Los colorantes utilizados en Microbiologa son compuestos orgnicos que contienen grupos cromforos y auxocromos unidos a anillos aromticos . La presencia de grupos cromforos en una molcula (grupos azo, nitro, etc.) no es suficiente para que sta acte como colorante, esto es que se fije a las estructuras a colorear. Para ser colorante debe poseer grupos que sean capaces de disociarse llamados auxocromos. Por ejemplo el 1,3,5 6

trinitrobenceno, es un compuesto coloreado pero no es un colorante. Sin embargo, si se reemplaza un H por un OH en el anillo bencnico, se obtiene el cido pcrico que tambin es coloreado pero al poseer un grupo disociable (auxocromo) acta como colorante.

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La distincin entre colorantes cidos y bsicos depende de la carga de la parte de la molcula responsable del color. Si es negativa se trata de un colorante cido y si es positiva se trata de un colorante bsico. Esta diferencia es importante debido a que, segn sean cidos o bsicos, los colorantes tendrn afinidad por diferentes zonas de la anatoma celular. Algunos colorantes utilizados comnmente en Microbiologa son bsica, cristal violeta, safranina, azul de metileno, etc. En algunas coloraciones se utilizan sustancias capaces de formar complejos insolubles con los colorantes y que ayudan al proceso de coloracin: los mordientes. Ejemplos de mordientes comnmente usados son el Lugol, el fucsina 7

cido tnico y algunas sales. Lgicamente, es de esperar que el colorante imparta su color a las estructuras celulares, sin embargo hay un fenmeno llamado metacromacia en el cual se observa un color diferente. Por ejemplo, pueden visualizarse corpsculos metacromticos rojos en ciertos preparados teidos con azul de metileno. Una explicacin que da cuenta de este fenmeno se muestra en la figura. El

colorante, al interaccionar con ciertas estructuras polianinicas como los polifosfatos, se dispone de tal manera que cambia la longitud de onda de absorcin. Pueden observarse corpsculos metacromticos (grnulos de volutina) en varios gneros microbianos y en general, su presencia denota algn dficit nutricional en el medio de cultivo.

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III. EXPERIMENTACIN. 3.1. MATERIALES. a. Materiales y equipos:

Lamina portaobjetos

Lamina cubreobjetos

Microscopio ptico de luz

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b. Reactivos, muestra y cultivos : Solucin iodada

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Alcohol acetona

Safranina

Cristal violeta

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Aceite de inmersin

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Estaphylococcus aureus

Bacilus subtilis

Echerichia coli

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3.2. METODOLOGA. FORMAS BACTERIANA
COLORACIN GRAM (E. coli, Estaphylococcus aureus y Bacilus subtilis) Realizar la extensin de la muestra

Secar las muestras a T de ambiente

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Agregar cristal violeta y dejar por 30 a 60 segundos.

Lavar con agua de cao a chorro.

Cubrir con lugol y actuar 2 a 3 minutos.

Lavar con agua de cao a chorro.

Decolorar con alcohol acetona.

Lavar con agua de cao a chorro

Contrastar con safranina de 10 a 30 segundos

Lavar, sacar y observar a inmersin

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA E.A.P ING AGROINDUSTRIAL IV. RESULTADOS Y DISCUSIN
4.1. RESULTADOS Estaphylococcus aureus

Su morfologa es redondeada (coco), el color no es variable de reconocimiento dado a los colorantes usados deterioran la originalidad de la bacteria.Las bacteria se encuentra dispersa en forma huecas. es de 100x de aumento a inmersin.

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Bacilus subtilis

Su morfologa es alargada (bacilo) y se encuentra dispersada a una escala neutra, el color no es variable de reconocimiento. es de 100x de aumento a inmersin.

Echerichia coli

Su morfologa es larga (bacilo) y su dispersin es uniforme. El color nuevamente no es variable. La observacin microscpica es de 100x de aumento a inmersin.

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4.2. DISCUSIN Los rasgos morfolgicos (estructurales) han ayudado a los taxonomistas por muchos aos a clasificar organismos. Los organismos superiores tienen rasgos anatmicos tan diferentes que pueden ser fcilmente utilizados en su clasificacin, pero con respecto a los microorganismos, stos lucen bajo el microscopio tan similares que se dificulta su clasificacin. Es decir, que estos microorganismos que se ven tan parecidos bajo un microscopio, pueden diferir en propiedades bioqumicas, fisiolgicas y/o serolgicas. Sin embargo, aun cuando la morfologa celular dice poco sobre las relaciones filogenticas, sigue siendo til para la identificacin bacteriana. Por ejemplo: la presencia de endoesporas y su localizacin resulta de mucha utilidad en la identificacin de bacilos esporulados. Es posible sacar conclusiones en relacin con la morfologa de una bacteria, examinando una lmina que fue sometida a un proceso de tincin diferencial. Estos criterios morfolgicos encabezan las primeras etapas del proceso de identificacin bacteriana. La mayor parte de las bacterias, teidas con Gram, las podemos clasificar como gram positivas o gram negativas, otras tinciones diferenciales, como el cido resistente, se aplican a otro tipo de bacterias, como por ejemplo micobacterias. Un examen microscpico de una lmina teida por medio de gram o de una tincin diferencial es til para obtener una informacin rpida sobre la calidad de un ambiente clnico. Por otro lado, un mdico tambin puede obtener suficiente informacin de un reporte tcnico de laboratorio para comenzar el tratamiento apropiado de un paciente. Siempre que sea posible se debe utilizar el mtodo ms eficiente y ms barato. Las identificaciones utilizando PCR son muy costosas debido a los equipos, los reactivos y los materiales de laboratorio que se deben utilizar. El rea donde se realiza una parte del ensayo slo puede utilizarse para un determinado agente. 15

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CONCLUSIONES Aunque las bacterias no aparecen muy diferentes del medio que las rodea, difieren mucho qumicamente, esta diferencia qumica es lo que permite distinguir las bacterias por tincin, pues generalmente, el colorante reacciona con la clula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior. 16 Debido a eso la tincin es importante para la microbiologa debido a que: Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea, permitiendo diferenciar varios tipos morfolgicos. Permite el estudio de las estructuras internas de la clula bacteriana, tales como paredes celulares, vacuola o cuerpos celulares. Permite el empleo de mayores amplificaciones.

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BIBLIOGRAFA Madigan M.T, Martingo J. M. y Jack Parker. 2004. Dcima Edicin. Brock Biologa de losMicroorganismos Prentice Hall Mahon, C. and Manuselis G. 2000. Textbook of Diagnostic Microbiolgy. Second Edition. W.B. Saunders Company. USA Prescott, L.; Harley, J.; Klein, D. 1999. Microbiologa. Cuarta edicin. McGraw-Hill Interamericana. Tortora G. J., B. R. Funke and Ch. L. Case 2007. Introduccin a la Microbiologa 9na Edicin. Editorial Mdica Panamericana.

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