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Kit ZR Plant RNA Mini Prep

Kit ZR Plant RNA Mini Prep

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Extraccion de ARN
Extraccion de ARN

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07/31/2009

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Protocolo del Kit ZR Plant RNA Mini Prep 23/07/09Añadir 48 ml de etanol al 100% o 52 ml de etanol al 95% a 12 ml del Buffer de Lysis sieste no viene preparado. 1._Transferir una muestra de planta finamente macerada al ZB Bashing Bead Lysis Tube yañadir 800
µ
l del Lysis Buffer.2.-Asegurar en batidor provistos de bolas con un tubo de 2 mili litros titular de montaje y procesar.
3._Centrigufar la columna a 12,000 rpm durante un minuto.4._Tomar 400
µ
l del sobrenadante y pasarlo al Zymo Spin III Column. Centrifugar a 800 rpm por 30 segundos y conservar el eluido.5._Añadir 0.8 volúmenes de alcohol absoluto al eluido que estará en el tubo colector.6._Pasar la mezcla al Zymo-Spin II Column que deberá estar colocado en su tubo colector.Centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos y desechar el eluido.7._Añadir 400
µ
l de la solución RNA Prep Buffer, centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos ydesechar el eluido.8._Añadir 800
µ
l de RAN Wash Buffer a la columna, centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos ydesechar el eluido. Repetir este paso agregando 400
µ
l de RNA Wash Buffer.9._Centrifugar la columna a 12,000 por dos minutos.10._Retirar la columna del tubo colector y colocarla en un tubo estéril (libre de ADasa y ARasa).Añadir 25
µ
l de agua estéril (libre de ADNasa y ARNasa) y dejar reposar por un minuto.11._Centrifugar A 10,000 rpm por 30 segundos para separar el ARN de la columna. El ARN puedeo no se usado después del momento de su extracción de no se utilizado conservar a -70ºC.12._ Si el ARN será usado transferir el eluido a la Zymo Spin IV-HRC Spin Filter en un tubo estéril(libre de ADNasa y ARNasa) y centrifugar a 8,000 rpm por un minuto.

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