Protocolo del Kit ZR Plant RNA Mini Prep 23/07/09

Añadir 48 ml de etanol al 100% o 52 ml de etanol al 95% a 12 ml del Buffer de Lysis si

este no viene preparado.

1._Transferir una muestra de planta finamente macerada al ZB Bashing Bead Lysis Tube y
añadir 800 µl del Lysis Buffer.
2.-Asegurar en batidor provistos de bolas con un tubo de 2 mili litros titular de montaje y
procesar.

3._Centrigufar la columna a 12,000 rpm durante un minuto.

4._Tomar 400 µl del sobrenadante y pasarlo al Zymo Spin III Column. Centrifugar a 800 rpm por
30 segundos y conservar el eluido.

5._Añadir 0.8 volúmenes de alcohol absoluto al eluido que estará en el tubo colector.

6._Pasar la mezcla al Zymo-Spin II Column que deberá estar colocado en su tubo colector.
Centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos y desechar el eluido.

7._Añadir 400 µl de la solución RNA Prep Buffer, centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos y
desechar el eluido.

8._Añadir 800 µl de RAN Wash Buffer a la columna, centrifugar a 12,000 rpm por 30 segundos y
desechar el eluido. Repetir este paso agregando 400 µl de RNA Wash Buffer.

9._Centrifugar la columna a 12,000 por dos minutos.

10._Retirar la columna del tubo colector y colocarla en un tubo estéril (libre de ADasa y ARasa).
Añadir 25 µl de agua estéril (libre de ADNasa y ARNasa) y dejar reposar por un minuto.

11._Centrifugar A 10,000 rpm por 30 segundos para separar el ARN de la columna. El ARN puede
o no se usado después del momento de su extracción de no se utilizado conservar a -70ºC.

12._ Si el ARN será usado transferir el eluido a la Zymo Spin IV-HRC Spin Filter en un tubo estéril
(libre de ADNasa y ARNasa) y centrifugar a 8,000 rpm por un minuto.