INTRODUCCIN Metabolismo es el conjunto de reacciones bioqumicas que efecta la clula.

El Metabolismo comprende: Catabolismo, durante el cual se efectan reacciones de degradacin o desasimilacin de sustratos con produccin de energa, la cual es utilizada en sntesis de nuevo protoplasma mediante el proceso de Anabolismo. Adems, la energa es utilizada por la clula en otras actividades como: Movilidad, transporte activo de molculas del exterior al interior de la clula, mantenimiento de barreras osmticas, etc. Todas las reacciones metablicas de las bacterias son enzimticas. Los Carbohidratos son metabolizados por la ruta anaerbica de EmbdenMeyerhof Parnas o bien por la ruta oxidativa de las pentosas (Warburg Dickens), las cuales conducen a la formacin de cido pirvico, el cual, bajo ciertas condiciones (presencia o no de oxgeno), puede transformarse en Acetilcoenzima A y pasar al ciclo oxidativo de los cidos tricarboxlicos de Krebs.Los electrones y protones liberados de todas estas conversiones son transportados por la cadena respiratoria final en los microorganismos aerobios (respiracin indirecta citocrmica), y formada por nucletidos de nicotinamida, de flavinas y citocromos, hasta el oxgeno si las clulas son puestas en presencia de l. Otros microorganismos no poseen la cadena citocrmica final y no pueden usar el oxgeno libre como aceptor final de electrones y por lo tanto no desarrollarse en presencia de este elemento, pasando su H y electrones a oxgeno combinado a otros elementos. Estos son los llamados microorganismos anaerobios estrictos. Las diferencias en el metabolismo de las especies bacterianas pueden usarse para diferenciar una especie de otra y por lo tanto son recursos usados para clasificarlas.

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NDICE INTRODUCCIN.. CAPTULO I: GENERALIDADES.. 1.1. ESPECIALIDAD. 1.2. TITULO..... 1.3. OBJETIVO.. a. General:... b. Especficos:. 1.4. RESPONSABLE DE LA INVESTIGACIN.. CAPTULO II:FUNDAMENTO TEORICO .......... CAPTULO II: EXPERIMENTACIN... 3.1. MATERIALES.. a. Materiales y equipos.. b. Reactivos: 3.2. METODOLOGA.. CAPTULO IV: RESULTADOS Y DISCUSIN... 4.1. RESULTADOS . 4.2. DISCUSIN .. 2

CONCLUSIONES .

BIBLIOGRAFA..

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I. GENERALIDADES 1.1. ESPECIALIDAD Laboratorio de microbiologa

1.2. TITULO. Metabolismo microbiano de carbohidratos y lpidos 1.3. OBJETIVO.

Observar e interpretar las diferentes reacciones metablicas de los microorganismos sobre la glucosa y el almidn incluidos en el medio de cultivos. Identificar y diferenciar microorganismos que metabolizan la glucosa con formacin de cido y7o gas. Identificar organismos que hidrolizan el almidn y diferenciarlos de aquellos que no lo hidrolizan Observar halos de hidrolisis tributirina por accin microbiana Distinguir diversas acciones microbianas frente a lpidos en los medios de cultivo.

1.4. RESPONSABLES DE LA INVESTIGACIN

Torres Villanueva Mitshell

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II. FUNDAMENTO TERICO La mayora de los microorganismos pueden producir metabolitos como las enzimas extracelulares que si bien no tienen importancia en la transmisin de enfermedades si la tienen en el deterioro y la disminucin del valor nutritivo de estos alimentos.

La produccin de estas enzimas tiene como funcin degradar compuestos orgnicos complejos, transformndolos en sustancias fcilmente metabolizables, este es el caso de las hidrolasas, proteasas y esterazas, las cuales se encargan de hidrolizar las molculas que conforman a las protenas, azcares complejos y lpidos. 6

Se conoce poco sobre cmo los factores intrnsecos (pH y actividad de agua) y extrnsecos (temperatura de almacenamiento) actan sobre la sntesis y actividad de enzimas microbianas en los alimentos, por lo que es importante estudiar las interacciones entre la presencia de microorganismos y la actividad enzimtica durante el deterioro.

La humedad es un factor crtico que influye en las reacciones enzimticas, una de las formas en las que el agua influye en las reacciones enzimticas es como reactivo (por ejemplo: reacciones de hidrlisis).

Los procesos de deshidratacin o la incorporacin de humectantes pueden reducir la cantidad de agua disponible para las reacciones y as reducir esta relacin .Conocer los roles del agua respecto a la estabilidad y actividad enzimtica puede ayudar a controlar las reacciones enzimticas y puede usarse como una herramienta sencilla para limitar estos cambios no deseables que afectan al a calidad de los alimentos.

Las enzimas para mantener su actividad, deben mantener su estructura. El estudio de las actividades enzimticas de los microorganismos constituye un punto de partida en la comprensin de la posible relacin metablica y fisiolgica que establecen con sus hospederos, a la vez que permite investigar enzimas con potenciales aplicaciones biotecnolgicas.

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Los cultivos iniciadores son preparaciones de cultivo de cepas de

microorganismos seleccionados por su actividad enzimtica que agregados en proporcin definida producen la transformacin deseada del sustrato, se hace necesario hacer crecer microorganismos en un agar nutritivo que lo contenga. Si el microorganismo es capaz de hidrolizar, entonces aparece en el medio de cultivo un precipitado alrededor del crecimiento bacteriano debido a la combinacin del Ca2+ y los cidos grasos liberados por la hidrlisis. Cuando la bacteria no posee la capacidad para hidrolizar, no se observa ningn tipo de precipitado. As por ejemplo tenemos hidrolizados como: 7

1. Hidrlisis del almidn .- El medio de cultivo utilizado ha sido Agar Almidn. El crecimiento bacteriano en una placa de agar almidn se cubre con una solucin acuosa de lugol. La hidrlisis se manifiesta por los halos claros alrededor del crecimiento bacteriano.

2. Hidrlisis de la casena .- Los microorganismos se desarrollan en un medio que contiene casena. Las cepas se siembran mediante una estra central gruesa y la lectura de la prueba se realiza observando la aparicin de un halo transparente alrededor del crecimiento bacteriano, cuando la bacteria es capaz de hidrolizar la casena.

3. Hidrlisis de la gelatina .- Los biotipos bacterianos se inocularon en placas de medio de Gelatina Nutritiva mediante estra por agotamiento; se va examinando diariamente las placas para observar el crecimiento y la liquefaccin de la gelatina.

4.Hidrolisis de lpidos.-Se hace uso de SO4Cu2 para indicar la produccin de la enzima lipasa.

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III. EXPERIMENTACIN. 3.1. MATERIALES. a. Material biolgico.
Escherichia coli sp, pseudomonas sp, saccharomyces cerevisiae y bacillus subtilis.

Muestra de caspa y pelos de cuero cabelludo

b. Medio de cultivo Caldo glucosado

Agar almidon

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Agar tributirina

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c. Material de vidrio
Laminas portaobjetos

Campana de durham

Placas Petri

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Tubos de ensayo 13x100mm

d. Otros
Asa bacteriolgica

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Lugol

Mechero, otros.

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3.2. METODOLOGA. METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS
DEGRADACIN DE GLUCOSA (Escherichia coli sp(A), pseudomonas sp(B) y bacillus subtilis(C).)

3 Tubos con caldo glucosado

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Colocar a cada una campana de Durham (invertida)

Sembrar muestras A,B y C respectivamente una por cada tubo

Incubar a 37C/24h

Observar a travs de la degradacin de cido, mediante el viraje amarillo del indicador rojo fenol.

Observacin de degradacin respecto a la formacin de gas en la campana de Durham

Anotar resultados

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DEGRADACIN DE ALMIDN (saccharomyces cerevisiae (A) y bacillus subtilis(B).)===== (procedimiento II) En 1 placa Petri (agar almidn)

Sembrar por puntura en forma de aspa, los 4 puntos exteriores con muestra B y el punto de intercepcin con la muestra A

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Incubar a 37C/48h

Cubrir con lugol y actuar 2 a 3 minutos.

Observar resultados y anotar

METABOLISMO DE LOS LPIDOS (se aplica el procedimiento II)

En una placa Petri (agar tributirina)

Agregar caspa con pelos del cuero cabelludo

Encubar a 37C/24h

Identificar los halos de hidrolisis

Resultados

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA E.A.P ING AGROINDUSTRIAL IV. RESULTADOS Y DISCUSIN
DISCUSIN DE RESULTADOS METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS
DEGRADACIN DE GLUCOSA (Escherichia coli sp(A), pseudomonas sp(B) y shiguella sp(C).)

15 Se puedo observar que la reaccin acida se dio con 2 de las muestras microbianas, por otra lado una no reaccion de forma acida pero si a un punto de crear gas dentro de la campana de Durham.

DEGRADACIN DE ALMIDN (saccharomyces cerevisiae (A) y bacillus subtilis(B).)

Respecto al almidn se puede observar una hidrolizacion en los 5 puntos trazados en la siembre, dando como resultado las muestras presentes son degradadoras del almidn. el color blanquecino es el medio hidrolizado.

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METABOLISMO DE LOS LPIDOS saccharomyces cerevisiae (A) y
bacillus subtilis(B).)

Los segmentos BLANCUSCOS son conocidos como halos que a partir de la degradacin de lpidos se forman, sin embargo solo el bacilo fue degradador, mientras la muestra del punto de intercepcin no ha correspondido a LO dicho comportamiento.

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Una clula, para crecer, necesita sintetizar los nutrientes que tienen en el ambiente, y por biosntesis forma los componentes celulares. Los nutrientes son fuentes de C, N, O,... La energa que se necesita para estas biosntesis, procede del exterior y puede ser de diversa naturaleza: luz, compuestos orgnicos y compuestos inorgnicos. La mayora de los microorganismos usan compuestos qumicos orgnicos que son captados del ambiente, introducidos en la clula y degradados por catabolismo en sistemas ms simples que la clula necesita (la clula los expulsa, ms tarde, como productos de desecho). Esta energa se usa para el anabolismo y para otras funciones celulares, como puede ser el movimiento de los flagelos, transporte de solutos por la membrana... Los microorganismos se puede clasificar atendiendo al tipo de metabolismo que realice. En concreto, se agrupan atendiendo a la fuente de energa que toman del medio o la fuente de C.

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CONCLUSIONES Todo proceso de degradacin se encuentra en relacin con la enzima especfica degradadora. El mtodo de observacin para definir la degradacin de glucosa se regido ya sea por la formacin de cido o la formacin de gas en la campana de Durham. La diferencia entre los organismos hidrolizadores de almidn y los no hidrolizadores, es la capacidad de combinacin molecular, es decir la unin de una molcula de agua a otra molcula. Los halos se forma por un proceso oxidativo, que solo pueden realizar aquellos microorganismo capacitados como agente oxidante, de tal forma que se forman segmentos MINIMAMENTE oscuros y tornan a una forma circular. 17

BIBLIOGRAFA MADIGAN Michael, MARTINKO John, PARKER Jack. Brock, Biologa de los microorganismos. Editorial Pearson Prentice Hall. Mxico. 2004.

http://www.tdr.cesca.es/TESIS_URV/AVAILABLE/TDX-0326104113325//MATERIALESYM%C9TODOS.pdf

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CUESTIONARIO

1. Todos los microbios usan glucosa? La mayora de los microorganismos de inters mdico usan la glucosa como fuente de carbono, como parte importante de su metabolismo. Se determina si el microorganismo usa la glucosa produciendo cido y/o gas a partir de un dicho carbohidrato. 18

2. Qu sucedera si no se agrega el indicador al caldo glucosado? No se podra determinar los halos formados por la degradacin microbiana.

3. que son amilasas? La amilasa, denominada tambin sacarasa o ptialina, es

un enzima hidrolasa que tiene la funcin de catalizar la reaccin de hidrlisis de los enlaces 1-4 del componente -Amilosa al digerir el glucgeno y el almidn para formar azcares simples, se produce

principalmente en las glndulas salivales (sobre todo en lasglndulas partidas) y en el pncreas. Tiene actividad enzimtica a un pH de 7.

4. A que se debe la transparencia del halo de la hidrolisis en agar tributirina?

5. se podr aislar organismos lipoliticos del medio ambiente? dnde y por qu? Si se podra, en medios de cultivo totalmente adecuados y ptimos para su produccin, ya que a partir de dichos organismos lipoliticos se pueden regir varias reacciones de degradacin enzimtica.

6. Por qu algunos microorganismo no hidrolizan el almidn? Por la falta de la enzima correspondiente al sustrato ya mencionado.