PRÁCTICA # 9“STAPHYLOCOCCUS”
OBJETIVOS:
Determinar el tipo de microorganismo sembrado de diferentes fuentes a través de su crecimiento en diferentesmedios de cultivo y comprobado a través de diversas pruebas bioquímicas.
Describir las características microscópicas, culturales que permiten efectuar el aislamiento y la diferenciación entre
Staphylococcus aureus
y los estafilococos coagulasa negativa (ECN)
Seleccionar los medios de cultivo adecuados para llevar a cabo la detección de los estafilococos
Elegir, leer e interpretar las pruebas que permiten identificar a los estafilococos
INTRODUCCIÓN
STAPHYLOCOCCUS.Los cocos gram positivos aerobios y anaerobios facultativos, según su forma de división y agrupación, se integran endos familias (
Micrococcaceae y Deicrococcaceae
) y otros géneros con personalidad propia como el género
Streptococcus
. La familia
Micrococcaceae
que tiene interés médico incluye aquellos que se agrupan de forma irregular oen tetradas, y está constituida por los géneros
Staphylococcus
,
Micrococcus
,
Planococcus
y
Stomatococcus.
Los cocos gram positivos aerobios y anaerobios facultativos de interés médico están en los géneros
Staphylococcus
y
Streptococcus,
que a su vez comprende el neumococo (
S. pneumoniae).
CONCEPTO Y CLASIFICACIÓN.
Concepto
Los estafilococos son cocos gram positivos de 0.5-1 μm de diámetro, inmóviles, aerobios y anaerobios facultativos,caracterizados en que se agrupan de forma irregular en racimos, producen catalasa y descomponen los azúcares por fermentación. Son bacterias poco exigentes, que se cultivan fácilmente en medios comunes y presentan ciertaresistencia a los agentes externos, por cuyo motivo se pueden encontrar en la naturaleza, especialmente en el medioambiente que rodea al hombre, formando parte de la flora normal de la piel y mucosas e interviniendo en procesospatógenos diversos, sobre todo en infecciones supuradas e intoxicaciones alimentarias.
Clasificación
Se pueden distinguir las siguientes especies:
1.
S. aureus,
prototipo de los estafilococos patógenos. Es el agente causal de la mayoría de las infecciones; secaracteriza por producir coagulasa o fermentar el manitol, elaborar diversas toxinas, en especial la toxina α, ysintetizar en su mayoría un pigmento amarillo dorado, no difusible, que colorea a las colonias.
2.
S. epidermidis
y
S. saprophyticus
, prototipos de los estafilococos oportunistas. Son gérmenes comensales de la pielo libres en el medio ambiente, que en ocasiones pueden intervenir en procesos patógenos. Se caracterizan por noproducir coagulasa ni toxina α, no fermentan el manitol y elaboran en su mayoría un pigmento blanco aporcelanado.La importancia de los estafilococos deriva de su aumento progresivo de resistencia a los antibióticos, sobre todo en elmedio hospitalario, que junto con su resistencia a los agentes externos les permite difundir y producir infecciones ybrotes epidémicos (infecciones hospitalarias), que plantean serios problemas epidemiológicos y terapéuticos.STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Estructura antigénica y clasificación en tipos
La estructura antigénica de
S. aureus
es compleja y mal conocida. En la pared celular se han demostrado cerca de 30antígenos, y los más importantes son:
1.
El polisacárido A, específico de especie, constituido por ácidos teicoicos, polímeros de fosfato de ribitol, que estánunidos al peptidoglicano por enlaces covalentes. Son antigénicos e inducen la aparición de anticuerpos, y se hademostrado un aumento de anticuerpos antirrubitol en los casos de endocarditis estafilocócica. En
S. epidermidis,
los ácidos teicoicos son polímeros de fosfato glicerol y en
S. saprophyticus,
polímeros de fosfato de ribitol. Losbacteriófagos se fijan en esta capa.
2.
La proteína A, específica de especie, se encuentra en la pared celular y puede liberarse en el medio. Presenta lapropiedad de unirse a la extremidad Fc de las IgG normales y a la extremidad F(ab)
2
de las IgG específicas, asícomo de activar el complemento.3.Existen, además, en la pared celular un número indeterminado de proteínas responsables de la tipoespecificidad.4.También se han aislado cierto número de cepas mucoides capsuladas, especialmente en los animales, cuyacomposición e importancia no se conocen.La especies
S. aureus
se caracteriza por la presencia de ácidos teicoicos, polímeros de fosfato de ribitol y proteína A.Pero, además por sus antígenos tipoespecíficos se ha podido subdividir en tipos siguiendo dos criterios: a) En serotipos,mediante el empleo de sueros tipoespecíficos, y se ha clasificado en 18 serotipos. b) En fagotitos o lisotipos, por elestudios de la sensibilidad de la cepa frente a un grupo de fagos seleccionados. Se conocen más de 100 fagotipos quepor necesidades prácticas se han reunido en 4 grupos y un grupo no clasificado.Los serotipos 1, 2 y 3 se corresponden en líneas generales con los fagogrupos I, II y III. Es interesante señalar que enlos tres primeros fagogrupos se encuentran la mayoría de las cepas patógenas para el hombre: en el grupo II, cepasextrahospitalarias y productoras de toxinas exfoliativa y, en el grupo III, la mayoría de cepas multirresistentes a losantibióticos pertenecientes a determinados serotipos o fagotipos.
Acción patógena
Es debida fundamentalmente a la acción de antígenos de superficie, toxinas y fermentos
STAPHYLOCOCCUS AUREUS SUBESPECIE AUREUS.
Staphylococcus aureus
subespecie
aureus
es sin duda el patógeno humano más importante entre los estafilococos. Selo encuentra en el ambiente externo y en las narinas anteriores del 20 al 40% de los adultos. Otros sitios de colonizaciónson los pliegues cutáneos, el periné, las axilas y la vagina. Aunque este microorganismo suele formar parte de lamicroflora humana normal, puede producir infecciones oportunistas importantes en las condiciones apropiadas. Losfactores que pueden predisponer a un individuo a infecciones graves por
S. aureus
incluyen los siguientes:
Defectos quimiotácticos de los leucocitos, sean congénitos o adquiridos.
Defectos en la opsonización por anticuerpos.
Defectos en la destrucción intracelular de las bacterias después de la fagocitosis.
Lesiones cutáneas.
Presencia de cuerpos extraños.
Infecciones por otros agentes, particularmente virus.
Enfermedades crónicas de base, como tumores malignos, alcoholismo, y cardiopatías.
Administración profiláctica o terapéutica de agentes antimicrobianos.En estas circunstancias
S. aureus
puede producir una variedad de procesos infecciosos que van desde infeccionescutáneas relativamente benignas hasta enfermedades sistémicas potencialmente fatales. Las infecciones cutáneasincluyen la foliculitis simple (infección superficial que rodea los folículos pilosos) y el impétigo (infección superficial de lapiel observada frecuentemente en los niños). Así como furúnculos y carbuncos que afectan el tejido subcutáneo yproducen síntomas sistémicos como fiebre.
S. aureus
se aísla con frecuencia de heridas quirúrgicas infectadas, las quepueden funcionar como focos para el desarrollo de infecciones sistémicas. La bronconeumonía estafilocócica adquiridaen la comunidad se observa habitualmente en ancianos y se asocia con una neumonía viral como factor predisponiente.La neumonía nosocomial producida por
S. aureus
se observa en cuadros clínicos de enfermedad pulmonar obstructivacrónica, con intubación y aspiración. Las enfermedades malignas subyacentes se reconocen como factores de riesgoimportantes para el desarrollo de una bacteriemia por
S. aureus
. La bacteriemia también puede “sembrar” localizacionesdistantes del organismo y dar origen a una endocarditis, una osteomielitis, una pioartritis y la formación de abscesosmetastáticos, particularmente en la piel, los tejidos subcutáneos, los pulmones, el hígado, los riñones y el cerebro. Lameningitis estafilocócica aparece en pacientes con anormalidades del sistema nervioso central relacionadas contraumatismos, cirugía, tumores malignos e hidrocefalia y
Staphylococcus aureus
es la segunda causa más frecuente demeningitis asociada con derivaciones ventriculoperitoneales. También es uno de los muchos microorganismos asociadoscon peritonitis en pacientes sometidos a diálisis peritoneal ambulatoria continua. Las toxinas estafilocócicas también sonresponsables de la necrólisis epidémica tóxica (síndrome estafilocócico de la piel escaldada) y del síndrome de shocktóxico. También hay cepas de
S. aureus
que pueden producir intoxicaciones alimentarias debido a la elaboración deexotoxinas durante su desarrollo en alimentos contaminados.
S. aureus
posee varias propiedades que se supone que contribuyen a su capacidad de producir enfermedad. Sinembargo, estos factores de virulencia no se encuentran en todas las cepas de
S. aureus
y este microorganismo sigue
1
A. Fumarola, et al. Microbiología y parasitología medica. Segunda edición. Editorial Masson.
2
siendo fuente de sorpresas constantes a medida que se descubren propiedades patogénicas nuevas y diferentes. Estaspropiedades incluyen las siguientes.
Formación de la cápsula
Algunas cepas de
S. aureus
producen un exopolisacárido que puede evitar la fagocitosis del microorganismo por partede los leucocitos polimorfonucleares. Estos exopolisacáridos han sido observados por microscopia electrónica enderivaciones de marcapasos, catéteres peritoneales y guías intravenosas infectadas por
S. aureus
y han sidodemostrados inmunológicamente in Vitro. Este material puede facilitar la adherencia de los microorganismos a lascélulas del huésped y a los dispositivos protésicos. Los aislamientos clínicos de
S. aureus
se han clasificado en ochotipos de acuerdo con la inmunotipificación del polisacárido capsular y entre el 70 y el 80% de los aislamientos clínicosimportantes pertenecen a los serotipos capsulares 5 u 8. Estos dos tipos capsulares, particularmente el tipo 8, tambiénestán asociados con otros factores de virulencias de
S. aureus
, como por ejemplo, la producción de la toxina delsíndrome de shock tóxico. Además, una gran cantidad de cepas de
S. aureus
que son resistentes a la oxacilina, lapenicilina antiestafilocócica utilizada con mayor frecuencia, expresan el serotipo 5 de polisacárido capsular. Los tiposcapsulares 5 y 8 también se han encontrado en aislamientos animales de
S. aureus.Proteína A
La pared celular de
S. aureus
contiene esta peculiar proteína que tiene la capacidad de unirse a la región Fc de lamolécula de inmunoglobulina G (IgG). La proteína A se encuentra unida al peptidoglucano de la pared celular y tambiénpuede ser segregada al medio durante el desarrollo. La proteína A funciona como un factor de virulencia al interferir enla opsonización y la ingestión de los microorganismos por parte de los leucocitos polimorfonucleares, activan alcomplemento y estimulan reacciones de hipersensibilidad de tipo inmediato y retardado. La proteína A es inmunogénicay en los individuos con infecciones graves producidas por
S. aureus
se encuentran anticuerpos dirigidos contra ella. Lapresencia de la proteína A en
S. aureus
constituye la base de las pruebas de coaglutinación que se utilizan muchoslaboratorios clínicos para la identificación de microorganismos y para la detección de antígenos bacterianos en líquidoscorporales.
Constituyentes de la pared celular
La pared celular de
S. aureus
contiene peptidoglucano (polímeros de N-acetilglucosamina y de ácido N-acetilmurámicoligados en forma cruzadas), que son similares a los encontrados en otras bacterias gram positivas, y ácidos teicoicos,que son polímeros peculiares de ribitol (monosacáridos de cinco carbonos) con fosfatos. Los ácidos teicoicos participanen la adherencia específica de las bacterias gram positiva a las superficies mucosas. Además de conferir rigidez y laelasticidad a la pared celular de los estafilococos los peptidoglucanos y los ácidos teicoicos poseen varias propiedadesbiológicas que se supone que contribuyen a la virulencia. Estas propiedades incluyen la capacidad de activar el sistemadel complemento, de inhibir la quimiotaxis de las células inflamatorias y de estimular la producción de anticuerpos. Laspruebas sexológicas para la detección de anticuerpos contra estas moléculas han sido investigadas en lo que respecta asu posible valor diagnóstico o pronóstico; los resultados han sido desalentadores debido a la considerable superposiciónde títulos de anticuerpos entre individuos infectados y no infectados, el amplio espectro de infecciones y enfermedadesproducidas por
S. aureus
y la variabilidad dependiente del huésped de la respuesta inmune según la edad, otrasinfecciones y la inmunocompetencia general.
EnzimasS. aureus
produce varias enzimas que pueden contribuir a su virulencia. La producción de catalasa por parte de estosmicroorganismos pueden actuar para inactivar el peróxido de hidrógeno y los radicales libres tóxicos formados por elsistema mieloperoxidasa dentro de las células fagocíticas después de la ingestión de estos microorganismos. Tanto lacoagulasa libre como la unida pueden recubrir las células bacterianas con fibrina y tornarlas resistentes a laopsonización y la fagocitosis. Las fibrinolisinas pueden degradar coágulos de fibrina y permitir la diseminación de lainfección a los tejidos contiguos. En forma similar, la hialuronidasa hidroliza la matriz intercelular de mucopolisacáridosen los tejidos y, por lo tanto, pueden actuar diseminando los microorganismos a zonas adyacentes. Las cepas de
S.aureus
que provocan furunculosis crónica son productoras de potentes lipasas que pueden contribuir a la diseminaciónde los microorganismos en los tejidos cutáneos y subcutáneos. Se ha descrito una fosfolipasa C específica para elfosfatidilinositol asociada con cepas recuperadas de pacientes con síndrome de distrés respiratorio del adulto ycoagulación intravascular diseminada. Los tejidos afectados por esta enzima se vuelvan más susceptibles al daño y ladestrucción por componentes bioactivos del complemento y los productos de la activación del complemento. Losestudios inmunológicos y de especificidad de sustrato indican que
S. aureus
produce por lo menos tres tipos diferentesde beta-lactamasas. La producción estas enzimas puede ser inducible o constitutiva y hace que estos microorganismossean resistentes a la penicilina y a la ampicilina. Los genes que codifican estas enzimas habitualmente residen enplásmidos que también poseen genes para la resistencia a diversos antibióticos, como la eritromicina y la tetraciclina.Estos genes de resistencia pueden ser transferidos a otras bacterias por transformación y tranducción.
Hemolisinas
3
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9. Staphylococcus
Determinar el tipo de microorganismo sembrado de diferentes fuentes a través de su crecimiento en diferentes medios de cultivo y comprobado a través de diversas pruebas bioquímicas.
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