Se ha aplicado la espectroscopia de segunda derivada del espectro ultravioleta para la identificación y cuantificación conjunta de ácido sorbico y benzoico en alimentos de forma sencilla y precisa. Se establecieron parámetros clave en el espectro de segunda derivada para cada ácido, como distancias características de picos, que permiten cuantificar mezclas de ambos conservadores de manera satisfactoria.
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Determinación de ácidos sórbico y benzoico mediante la segunda derivada del espectro ultravioleta
Se ha aplicado la espectroscopia de segunda derivada del espectro ultravioleta para la identificación y cuantificación conjunta de ácido sorbico y benzoico en alimentos de forma sencilla y precisa. Se establecieron parámetros clave en el espectro de segunda derivada para cada ácido, como distancias características de picos, que permiten cuantificar mezclas de ambos conservadores de manera satisfactoria.
Se ha aplicado la espectroscopia de segunda derivada del espectro ultravioleta para la identificación y cuantificación conjunta de ácido sorbico y benzoico en alimentos de forma sencilla y precisa. Se establecieron parámetros clave en el espectro de segunda derivada para cada ácido, como distancias características de picos, que permiten cuantificar mezclas de ambos conservadores de manera satisfactoria.
DETERMINACION DE ,ACIDO SORBICO Y BENZOICO MEDIANTE
LA SEGUNDA DERIVADA DEL ESPECTRO ULTRAVIOLETA
Determination of sorbic and benzoic acids by Second Derivativa U.V. Spectroscopy Por J. LPEZ * y J. SIMAL Departamento de Bromatologa, Toxicologa y Anlisis Qumico Aplicado de la Facultad de Farmacia y Seccin de Qumica Analtica Bromatolgica del C.S.I.C. (Departamento de Investigaciones Qumico-Farmacuticas) . Santiago de Compostela SUMMARY Have been applied 2th derivate espectroscopy for the identification and quantification of sorbic and benzoic acids conjunctly in food with satisfactory simplicity and precision. Key words: Sorbic acid. Benzoid acid. Second derivative spectroscopy. Juices. Marmalades. RESUMEN Se ha aplicado la segunda derivada del espectro U.V. para la identificacin y cuantificacin de cido 5rbico y benzoico conjuntamente en alimentos con una satisfactoria sencillez y precisin. Palabras clave: Acido srbico. Acido benzoico. Espectroscopia de segunda derivada. Zumos. Mermeladas. INTRODUCCION Como hemos tenido ocasin de comprobar (7), la aplicacin de la espectroscopia de derivadas puede ser utilizada de una manera rpida y sencilla para la determi- nacin de algunos conservadores de uso comn (cido benzoico). Anlogamente, entre los conservadores de naturaleza inorgnica la espectroscopia de derivadas tambin puede ser empleada para la identificacin y determinacin de nitritos y nitratos en aguas ( 6) y sales salmueras ( 1), obtenindose resultados satis- factorios. Asimismo, la espectroscopia de derivada tiene una amplia aplicacin para la de- terminacin de gran cantidad de sustancias en otros campos: cido saliclico (2), cafena (8), vitamina e (5), etc. Por lo que, debido a la creciente utilizacin conjunta de los cidos srbico y benzoico en alimentos, se hace necesario disponer de un mtodo rpido para la bs- queda y determinacin de ambos conservadores, que puede ser aplicado al anlisis de rutina de diferentes muestras de alimentos existentes en el mercado. * Este trabajo es parte de la tesis doctoral de J. Lpez Hernndez. Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121 La ae aenvaaas, en 1a reg1on uuravlOleia, aumenra 1a reso- lucin de las bandas solapadas, incrementando la especificidad de las medidas espec- trofotomtricas (4), pudiendo aplicarse tanto para la determinacin de los cidos srbico y benzoico como para detectar la presencia de sustancias interferentes que pueden ser causa de error en las medidas espectrofotomtricas. PARTE EXPERIMENTAL Para la dterminacin de ambos conservadores se realiza un estudio de los espec- tros ultravioleta correspondientes al espectro directo, derivada cero y segunda deri- vada, fijando en los dos casos una serie de puntos de inters para la identificacin de las mezclas. El material y los aparatos utilizados son similares a los descritos en un anterior trabajo (7). Reactivos Solucin patrn de cido benzoico: 5 mg disueltos en 100 ml de una solu- cin a partes iguales de ter de petrleo y ter etlico. Esta solucin se prepara diariamente. Solucin patrn de cido srbico: 5 mg en 100 ml de una solucin a partes iguales de ter de petrleo y ter etlico. Se prepara como la anterior a diario. Soluciones de trabajo de cido benzoico: 0,20, 0,40, 0,60, 0,80 y 1,0 mg/ 100 ml, obtenidas por dilucin de la solucin patrn. Soluciones de trabajo de cido srbico: 0,10, 0,20, 0,30 y 0,40 mg/100 ml, obtenidas por dilucin de la solucin patrn. Condiciones de trabajo Velocidad del papel: 160 mm/minuto. Sean: 480 nm/minuto. Modo: 3. Sensibilidad: 50 (x 100) mV para la derivada cero, y 10 20 (e 100) mV para la segunda derivada (teniendo en cuenta que la expresin de resultados la hemos realizado a 20 mV, si el registro lo hemos hecho a 10 mV, divi- dimos la altura entre 2. Parmetros de inters en el espectro directo (derivada cero) y en el espectro de segunda derivada Absorbancia mxima del cido benzoico (fig. 1). Punto que se elige a fin de estudiar la relacin entre la absorbancia del mximo del cido benzoico y la de dicho punto, que debe mante- nerse constante cuando no se presentan interferencias. Absorbancia mxima del cido srbico (fig. 2). Punto de absorbancia establecido para estudiar la relacin entre el mximo y dicho punto, que en caso de no haber interferencia, debe de permanecer constante. Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121 DETERMINACIN DE CIDO SRBICO Y BENZOICO 115 - A 290 Absorbancia a 290 nm, leda para determinar la absorcin de fondo. A dicha longitud de onda el cido benzoico y el cido srbico no pre- sentan absorcin significativa. Como el valor de A 290 puede ser en algunos casos significativo, lo consideraremos a la hora de realizar los clculos. En el espectro de la segunda derivada hemos realizado un estudio del registro grfico a fin de determinar aquellos parmetros que pueden ser susceptibles de ser utilizados para la determinacin de mezclas de cido srbico y cido benzoico, defi- niendo a cada uno de ellos por la distancia a que aparece del origen, teniendo en cuenta las condiciones de trabajo elegidas (figs. 1, 2 y 3). Las distancias que estudiamos son las siguientes: d 7 mm 9 mm d 9,5 mm 11,5 mm d 21,5 mm 22 mm _ d 22 mm 23,5 mm 12 mm -d 17 mm Procedimiento Dos primeras distancias caractersticas del cido benzoico que aparece entre 280-260 nm (fig. 1). Distancias correspondientes al mximo de 226 nm del cido ben- zoico (fig. 1). Distancias correspondientes al cido benzoico (fig. 1). Para el cido srbico se estudian estas distancias caractersticas y como punto de inflexin los que estn a 14, 17, 19 y 21 nm (fig. 2). Para realizar este estudio se ha registrado la lectura de una escala patrn de cido benzoico y cido srbico. En el Cuadro 1 se observa para ambos cidos por separado la relacin a/b y a' /b' (figs. 1 y 2). En un trabajo preliminar (3) se han estudiado los de correlacin de 7 mm las distintas rectas, habiendo resultado aptos para los picos en las distancias d 9 mm d 9,5 mm d 21,5 mm 1 d 1 , 'd b . 1 , 'd , b' 1 1 en e caso e ac1 o enzotco y para e ac1 o sor 1co, os 1,5 mm 22 mm f . . b 1 d' . d 12 mm coe 1c1entes son uenos en as 1stanc1as . 17 mm El Cv % observado cuando se lee una mezcla de cido srbico y benzoico en 1 d . . d 7 mm d 9 mm 1 'f' as 1stanc1as , es muy ato, por tanto, para cuant11car mez- 9 mm 11,5 mm das mediante espectrofotometra de segunda derivada se utilizar para el cido benzol.co la dt'stancta d 21 ' 5 mm. P 1 ' 'd ' b' 1 d' ili' d ' ara e ac1 o sor 1co a 1stanc1a ut za a sera 22,5 mm d 12 mm 17 mm Asimismo, se estudiar en la segunda derivada del espectro la presencia de inter- ferencias, mediante la determinacin de las relaciones a/b y a' /b' (figs. 1 y 2), siendo estos parmetros los siguientes para cada conservador: Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121 116 J. LPEZ y J. SIMAL t' mm "' 1 Fig. l.-Registro grfico del espectro directo (derivada cero) y segunda derivada del espectro U.V. de 0,60 mg de cido benzoico, en 100 ml de ter de pertleo-ter etlico (1: 1). Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121 DETERMINACIN DE CIDO SRBICO Y BENZOICO 117 1 1 226 250 2. Derivada 1 __ l..!f!'.!."2._ Derivada O Fig. 2.-Registro grfico del espectro directo (derivada cero) y segunda derivada del espectro ultravioleta de 0,20 mg de cido srbico, disueltos en 100 mi de ter de petrleo-ter etlico (1 : 1). Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121 118 J. LPEZ y J. SIMAL 300 2. Derivada Derivada O 3oo Fig. 3.-Registro grfico del espectro directo (derivada cero) y segunda derivada del espectro ultravioleta de una mezcla de 0,20 mg de cido srbico y 0,40 mg de cido benzoico, disueltos en lOO mi de ter de petrleo-ter etlico (1 : 1). Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121 Acido benzoico La relacin para determinar interferencias se establece entre el pico localizado entre la lnea base, y el mximo a 21,5 mm (a) y el pico que aparece entre el mnimo a 22 mm y la lnea base (b), en las condiciones de trabajo elegidas (fig. 1). Acido srhico Se calcula en el espectro de la segunda derivada, la relacin existente entre el pico que aparece entre la lna base y el mximo localizado a 12 mm en las condi- ciones de trabajo (a'), y el pico localizado entre dicha lnea base y el mnimo a 17 mm (b') (fig. 2). Esta relacin tanto para el cido srbico como para el cido benzoico es cons- tante (Cuadro 1). Cuadro 1 ACIDO BENZOICO ACIDO SORBICO CONCENTRACION a/b CONCENTRACION a' /b' mg/100 ml mg/100 ml 0,20 2,28 0,10 0,796 0,40 2,34 0,20 0,785 0,60 2,21 0,30 0,754 0,80 2,27 0,40 0,791 Valor medio 2,275 0,781 Desviacin standard 0,0532 0,0189 Coef. de variacin % 2,3 2,4 Resultados Se ha aplicado este mtodo al anlisis de nuevas muestras de zumos, una de refresco y 10 de mermeladas, que presentaban cido srbico y benzoico conjunta- mente como conservadoras, pudiendo realizar la determinacin de ambos cuando las relaciones a' /b' (cido srbico) y a /b (cido benzoico) eran similares a las esta- blecidas con los patrones: cido srbico cido benzoico a' /b' = 0,781 0,019 a' /b' = 2,275 0,053 Para facilitar la nomenclatura se ha denominado a las muestras de la siguiente manera: Z = muestra de zumo R = muestra de refresco M = muestra de mermelada Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121 120 J. LPEZ y J. SIMAL En todos los casos la letra indicativa de la muestra va acompaada de un sub- ndice indicativo del nmero de la muestra. Los resultados se encuentran recogidos en el Cuadro 2. Cuadro 2 Determinacin de cido srbico y benzoico mediante la segunda derivada del espectro U.V. Acido srbico Acido benzoico Muestra a'/b' a/b mg/100 de mg/100 de muestra muestra ------ zl 0,632 3,61 z. 0,770 2,26 6,5 41,3 z" 0,769 2,28 17,4 39.0 z4 0,679 3,13 z" 0,601 2,80 Zs 0,562 2,45 z7 0,691 2,52 z. 0,463 2,33 23,5 z. 0,650 2,39 Z1o 0,769 2,30 18,9 24,1 R1 0,763 1,76 17,7 M1 0,672 2,49 M. 0,552 1,97 M" 0,701 2,51 M. 0,683 2,44 Ms 0,769 2,31 23,6 29,2 Ms 0,765 2,22 31,1 24,6 M1 0,772 2,23 34,5 26,9 Ms 0,754 3,12 M. 0.782 3,62 11,8 M1o 0,796 1,93 Nota: La expresin de resultados se realiza en 100 g o ml, segn se trata de muestras slidas o lquidas. Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121 DETERMINACIN DE CIDO SRBICO Y BENZOICO 121 CONCLUSIONES 1. 0 La segunda derivada del espectro ultravioleta es aplicable al anlisis cualitativo y cuantitativo de los cidos srbico y benzoico, cuando ambos conservadores se emplean individual o conjuntamente, siempre que no existan en las muestras sustancias interferentes. 2. 0 Se ha comprobado la presencia de cido srbico y benzoico en 21 muestras de distinta naturaleza, habiendo sido posible cuantificar estos conservadores en diferentes casos. (Vase Cuadro 2.) 3. 0 Los niveles detectados de estos conservadores, no sobrepasan en ningn caso las cantidades mximas autorizadas por la legislacin alimentaria ( 60 mg/ 100 g para refrescos y zumos y 100 mg/100 g para mermeladas para ambos conservadores) . BIBLIOGRAFIA l. FERNNDEZ, B. (1982): Memoria de Licenciatura. Facultad de Farmacia. Santiago de Com- postela. 2. GoMEZA, J.: Determinacin de cido saliclico mediante la l." y 2." derivada de su @Spec- tro U.V.. Memoria de Licenciatura. Facultad de Farmacia. Santiago de Compostela. 3. LPEZ HERNNDEZ, J. (1982): Determinacin de aditivos conservadores en alimentos. Tesis Doctoral. Facultad de Farmacia. Santiago de Compostela. 4. O. HAVER, T. C. y GREEN, C. L. (1971): Espectroscopia de derivadas. lnternational Labo- ratory. 5. LAGE, M. A.; SIMAL, J.; TocA, M. J. (1980): Aplicacin de la segunda derivada del espec- tro para el anlisis cualitativo y cuantitativo de la vitamina C. Anal. Bromatol., XXXII, 4, 353-360. 6. SIMAL, J.; LAGE, M. A.; IGLESIAS, I. (1981): Investigacin y determinacin de nitritos y nitratos en aguas, mediante espectroscopia de derivadas. 111 Jornadas Farmacuticas. La Manga, Murcia. Octubre. 7. SIMAL, J.; LPEz, J. (1982): Aplicacin de la 2.' derivada del espectro U.V. para la deter- minacin de cido benzoico en alimentos. Anal. Bromatol., XXXIV, 103-111. 8. SIMAL, J.; PASEIRO, P.; REMON, M. C. (1981): Determinacin de cafena espectrofotomtri- camente. 111 Jornadas Farmacuticas. La Manga. Murcia. Anal. Bromatol. XXXIV-1 (1982), 113-121
1 Validación de La Determinación de Aceite Fusel (Alcohol N - Butanol e Isoamílico) Dentro de Una Bebida Alcoholica "Ron" Por Cromatografía de Gases Con Detector Fid