Organizao: Eliana Maria Beluzzo Dessen e Jorge Oyakawa

Diagramao: Regina de Siqueira Bueno

OBSERVAO DE CLULAS HUMANAS EM ESFREGAO DE MUCOSA BUCAL

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Fazer um esfregao espalhando sobre uma lmina de vidro o material raspado da bochecha.

Com um palito de fsforo raspar, levemente, a parte interna da bochecha.

Fixar o material mergulhando a lmina com o esfregao em lcool 70%. Aguardar 2 minutos.
Aguardar 2 minutos

Retirar a lmina do alcool e escorrer o excesso de lquido em um pedao de papel ltro.

Colocar a lmina sobre a bancada e pingar, sobre a regio do esfregao, uma gota de azul de metileno. Aguardar 2 minutos.
Azu l de

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Me tile no

Aguardar 2 minutos

Com o auxlio de uma pisseta, remover o excesso de azul de metileno, jogando sobre a lmina um jato de gua.

G U A

Com o auxlio do frasco contagotas pingar uma gota de gua sobre a regio do esfregao. Cobrir a preparao com uma lamnula.

Retirar as bolhas de ar pressionando levemente a lamnula com a pina.

ua

Colocar a preparao dentro de um pedao de papel ltro dobrado. Pressionar levemente para retirar o excesso de lquido.

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Observar ao microscpio o material, usando a objetiva de 10x e em seguida a de 40x. Girar vagarosamente o micromtrico para obter o melhor foco. Fazer um desenho das clulas observadas.

ETAPAS PRePARATRIAS:
Se voc professor e deseja aplicar esse protocolo em sala de aula siga as seguintes etapas preparatrias:

Antes da aula:
Familiarizar os alunos com o uso do microscpio. Para tanto poder recorrer aula sobre microscopia, disponvel nesta pgina. Providenciar a soluo de azul de metileno 0,5%*.

Material suficiente para uma classe com 8 grupos de 5 estudantes.

8 frascos com lminas de vidro para microscopia 8 frascos para o descarte das lminas de vidro usadas 8 placas de Petri com lamnulas 8 placas de Petri com palitos de fsforo 8 recipientes para descarte dos palitos usados 8 pinas de ponta fina 8 rolos de papel higinico fino e macio 8 frascos conta-gotas com azul de metileno 0,5%* 8 frascos conta-gotas com gua 8 pissetas com gua 8 recipientes com lcool 70% (tamanho suficiente para a lmina mergulhada em p) 8 pacotes de papel de filtro cortado em tiras de aproximadamente 7 cm x 25 cm. 8 pedaos de papel ( 60 x 40 cm) para cobrir a bancada 8 microscpios 8 conjuntos de protocolos para os grupos de alunos. 8 lpis e folhas de papel para desenho

*O azul de metileno um composto aromtico heterocclico solvel em gua, com a frmula molecular C16H18CIN3S. Usado como corante e indicador, um remdio de cor azul, vendido em farmcias comuns.

Observao: Qualquer tipo de frasco pode ser utilizado para conter as lminas e lamnulas,

como copinhos de iogurte, vidros de gelia, etc. Existem frascos apropriados, padronizados e baratos a venda em lojas especializadas de materiais para cosmticos e para laboratrio (Praa da S)

ANEXO 1
Sugesto de questes para serem respondidas por grupos de estudantes aps a visualizao do esfregao de bochecha.
1. Ao raspar a parte interna da bochecha, que tipo de tecido foi coletado? 2. Sugerir uma explicao para o tratamento do esfregao com lcool 70%. 3. Se possvel, faa uma nova preparao sem colocar o azul de metileno, observe ao microscpio e compare o resultado com o do material corado. Este procedimento poder ajudar a responder pergunta: - Qual a funo do azul de metileno? 4. Que estruturas voc pode observar nas clulas da bochecha? 5. Por que as clulas da bochecha aparecem isoladas umas das outras e no unidas como em outros tecidos? 6. Voc observou alguns pontos mais escuros na superfcie das clulas? provvel que sejam algumas bactrias que existem normalmente na nossa boca e que ficam aderidas na mucosa. O tamanho destes microrganismos em torno de 1 m de dimetro de forma que, para observ-las temos que usar a objetiva de 100x (objetiva de imerso) usando o leo de imerso. Se no conhece esta prtica, pea ajuda ao professor.

Respostas para as questes:

1. O epitlio de revestimento, ou seja, o tecido epitelial. 2. O lcool 70% um fixador de materiais biolgicos, isto , ele preserva os componentes estruturais dos tecidos, preparando o material para a colorao. 3. O azul de metileno, sendo um corante bsico, auxilia na visualizao das clulas corando o citoplasma em azul claro e o ncleo em azul escuro. 4. Apenas o citoplasma e o ncleo. No podemos observar nitidamente, mas sabemos que a membrana citoplasmtica que est delimitando o citoplasma. 5. As clulas da bochecha aparecem isoladas, pois o processo de raspagem com o palito rompeu a associao que existe entre elas. 6. Sim pontos mais escuros podem ser observados sobre o citoplasma e o ncleo das clulas e tambm claro em regies da preparao que no apresentam clulas eucariticas. Ao utilizar o aumento de 1000x (objetiva de 100x e ocular de 10x), observa-se que algumas apresentam a forma esfrica (cocos), outras cilndricas (bacilos) e outras filamentosas que so as formas mais comuns das bactrias.

Sugestes de atividades correlatas

1. Existem outros experimentos sobre observao de clulas humanas que podem ser encontrados em: Temas de Biologia. Ed. Moderna. http://www.moderna.com.br/moderna/didaticos/em/biologia/temasbio/ 2. Observar um esquema de clula animal (em um livro didtico ou em outra fonte) e solicitar aos alunos que localizem, no esquema, as estruturas visualizadas na preparao. Solicitar uma explicao para o fato de no terem visualizado as demais estruturas da clula eucaritica. 3. Aplicar, em sala de aula, o jogo Cara a cara com a clula, disponvel em: 4. Solicitar aos alunos uma comparao das estruturas internas de uma clula animal (eucaritica) com as de uma bactria (procaritica). Pedir uma lista das estruturas comuns e no comuns aos dois tipos de clulas. Utilizar esta aula de laboratrio para iniciar o estudo das funes das diferentes estruturas celulares. Aps este estudo, voltar ao jogo Cara a Cara com as clulas e solicitar que as perguntas sejam feitas apenas com relao s funes das estruturas celulares. Trata-se de um exerccio de motivao e de avaliao do aprendizado sobre o tema clula.
http://www.genoma.ib.usp.br/educacao/materiais_didaticos.php