CLULA PRESENTADORA DE ANTGENO

CD4 CD8 CD80 MHC Clase I/II ANTGENO Complejo CD3/TCR

V V

CD86 CD80

CD86 CD58

CD40L

CD30L

CD28

CD152 CD2 CD30 CD40

LINFOCITO T

Sinapsis Inmunolgica

Natural Killers (NK)

Alfredo Prieto, alfredo.prieto@uah.es, Jorge Monserrat Sanz, jorge.monserrat@uah.es

Plan de la presentacin sobre clulas NK

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Concepto actividad y clulas NK Subtipos Receptores Accin ltica Accin inmunoreguladora Clulas NKT Implicaciones clnico biolgicas

1. Concepto Actividad citotxica espontnea, Natural Killer (NK)

Citotoxicidad celular espontnea realizada por linfocitos frente a clulas tumorales
(1972) 1. Sin - sensibilizacin previa

2. Realizada por Linfocitos no T no B 3. Sin restriccin en el reconocimiento por el

MHC como ocurre en las clulas T

1. Concepto Clulas NK
* Poblacin linfocitaria con funciones inmunolgicas
- Accin efectora citotxica - Accin inmunorreguladora

* Receptores de reconocimiento para molculas de histocompatibilidad de clase I * Papel biolgico decisivo en la defensa antitumoral y antimicrobiana * 5-15 % de los linfocitos circulantes son NK

Identificacin
Citomorfologa
Linfocitos grandes granulares
Large Granular Lymphocytes ( LGL) Ausencia de recombinacin gentica y de expresin de TCR/CD3 o sIg/CD79 Expresin de CD56 y CD16. Receptores de reconocimiento de molculas de clase I Los grnulos contienen citotoxinas: perforinas y granzimas

Caracterizacin molecular

Natural Killer (NK)

Linfocitos Grandes Granulares (LGL). Mata celulas malignas y clulas infectadas. Se identifican por la presencia de CD56 y CD16 y la ausencia de CD3. Activadas con IL2 e IFN dan lugar a clulas LAK.

Natural Killers vs Macrofagos

Funciones citotxicas

Actividad NK

(Natural Killer) Citotoxicidad espontnea. Se mide frente a clulas diana sensibles que carecen de expresin de molculas de histocompatibilidad (K-562).

Citotoxicidad inducida por citocinas (IL-2, IFN) frente a clulas diana NK resistentes (JY)

Actividad LAK (Lymphokine Activated Killer)

Actividad ADCC

(Antibody dependent cell cytotoxicity) Citotoxicidad dependiente de anticuerpos mediada por receptor FcIgG (CD16) Se mide en presencia de anticuerpos unidos a un antgeno en la superficie de la clula diana

SA Rosenberg pionero e impulsor de terapias celulares adoptivas Extraccin TIL, PBL, seleccin y expansin in vitro de clulas antitumorales Tratamiento de melanoma con linfocitos T antitumorales xito sonado Science Octubre 2002

INMUNOTERAPIAS CELULARES ADOPTIVAS: NK, TIL, LAK

S. Rosenberg

Heterogeneidad de las clulas NK

CD56 brillante CD56 dbil

CD56bright and CD56dim NK cell subsets

Subpoblacin
Produce citocinas immunoreguladoras Citotoxicidad espontnea ADCC LAK
CD56 brillante CD16 dbil/negativo CD56 dbil CD16 brillante

Si Baja Baja Potente

Pocas Potente Potente Potente

Ontogenia de las clulas NK

* Precursores en mdula sea, hgado y timo Precursor comn T y NK, Existen clulas denominadas TNK Existen receptores KIR y para hsp72 en LinfocitosT Adquisicin precoz de competencia para reconocer alelos de molculas de histocompatibilidad se selecionan las clulas con KIR para molculas de histocompatibiliddad autlogas

TIPOS DE RECEPTORES POLIVALENTES

(al revs que las Clulas T y B)

Presenta: A. Receptores para molculas de MHC I: KIR B. Receptores para HSP72: KAR C. Receptores FC, Ig: CD16 : KAR D. ADCC: Antibody dependent cell citotoxic:KAR Receptores para IgG:(Fcr) E. Receptores del complemento (ej: CD11B): KAR F. Receptores de lectinas: CD94: KAR

-ACTIVACIN NO RESTRICTA A MHC

Mecanismo de citoxidad: A. Exocitosis de granulos - Secrecin de grnulos con perforinas - Secrecin de Gramzimas B. Induccin de Apoptosis - FasL en membrana.
Los mecanismos de citotoxicidad son comunes a los Tc

Interaccin de receptores inhibidores de clula NK con molculas de histocompatibilidad

HLA-I

HLA-I

autlogo

No autlogo

Ausencia HLA-I

Molculas de histocompatibilidad como sistemas de reconocimiento de identidad celular

Documento de Identidad Celular Cada clula debe expresar 6 de clase I ocupadas por distintos antgenos El Documento debe ser presentado cuando es requerido por la autoridad por ejemplo con IFN Dos cuerpos policiales

Clulas T Detectan clulas con DIC propios que presentan algn ag. sospechoso (presencia de ag. extrao)

Los eliminan

Clulas NK detectan clulas sin molculas de histocompatibilidad clulas indocumentadas, (ausencia de lo propio)

Los eliminan

Interaccin clula NK-diana

Receptores inhibidores y activadores
T cell
Ligandos de CD28

T C R Kill

Costimulator Receptor CD28

MHCI

Cell with foreign antigens

Sealizacin receptores NK Inhibicin-activacin

Inmunoreceptor tyrosine-based activation motif Inmunoreceptor tyrosine-based inhibition motif

Nueva informacion:
Sobre los KIR Killer-cell Immunoglobulin-like Receptors

KIR tipo DL*: inhibidor via ITIM (SHP1/2) KIR tipo DS: activador via ITAM( DAP12)
*excepcin: KIR2DL4 es activador

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Acciones biolgicas de las clulas NK

Respuesta citotxica Exocitosis citotoxinas: Perforinas y Gramzimas Molculas de membrana FasL Inmunomodulacin Produccin de citoquinas

Perforinas
Forma poros en la membrana de la clula diana

Entrada de granzimas: Serin proteasas inductoras de apoptosis

Se inserta en la membrana Se polimeriza en la bicapa lipdica Forma una estructura lipoflica hueca

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Perforinas

Forma un poro de 16 nm Permite el paso de agua y solutos Muerte celular coloido-osmtica

Lesiones producidas por perforina

Necrosis celular Formacin de poros en la membrana celular

Clula de mastocitoma de ratn P815

Tejido miocrdico Miocarditis postviral

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Granzimas
No son enzimas citolticas Necesitan entrar en la clula Son famila: serin-proteasa

Actan unidas a la perforina Permite el paso al interior de la clula diana Formacin de poros Endocitosis Las granzimas, en el interior de la clula diana Activa la kinasa Cdc2 Activa la proteasa caspasa CPP-32 y la nucleasas CAD Producen fragmentacin del ADN

Induce la apoptosis de la clula diana

Muerte mediada por perforina y granzimas

Unin del CTL a la clula diana Reorientacin de los grnulos citoplasmticos Formacin de poros (perforina) Entrada en la clula de granzimas Muerte celular y liberacin del CTL

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Muerte celular dependiente de Fas

Unin del CTL a la clula diana Aumento de expresin del Fas-L en el CTL Interaccin entre Fas-L y Fas en la clula diana Induccin de apoptosis de la clula diana

CD95 Fas

N N N

N N N

N N N N N N N N N N N

FasL
Agregacin por unin a FasL
N

Apoptosis

Proteasa familia ICE inactiva

Unin de FADD y otras molculas

Proteasa cataltica activa Digestin de nucleoprotenas

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Citoquinas que regulan la actividad de las clulas NK

IL-2 IL-12 IL-15 IFN- IFN-/ IL-10
Estimula citotoxicidad, proliferacin y produccin de citoquinas Estimula citotoxicidad, proliferacin y produccin de citoquinas Estimula citotoxicidad, proliferacin y produccin de citoquinas Estimula citotoxicidad Estimula citotoxicidad Inhibe produccion de citocinas

Citoquinas secretadas por clulas NK

IFN- TNF GMCSF TGF- IL-3 IL-10
Induccin respuesta Th1. Activacin de monocitos y macrfagos Mediador de la respuesta inflamatoria. Activa monocito y L.T. Accin ltica Factor estimulante de colonias de granulocitos/macrfagos Inmunosupresin Induce proliferacin y diferenciacin de precursores hematopoyticos Inmunosupresin

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Clulas NK T

Son un subtipo de linfocitos T con dos posibles fenotipos: CD4+ y CD4- CD8- (DN). Expresan
1. 2.

receptores de clulas NK Un TCR semi-invariante, restricto por la molcula de histocompatibilidad CD1d.

Se considera que participan en la respuesta inmune innata pues sus TCR son semiinvariantes Su capacidad de secretar inmediatamente grandes cantidades de citoquinas cuando sus TCR son activados les confiere un papel inmunoregulador.

Las clulas NKT proporcionan cooperacin a las clulas B que es restringida por CD1d

Son tan eficientes como los linfocitos CD4+ TH0 para promover in vitro la proliferacin de linfocitos B autlogos, y la produccin de Ig. Los dos mayores subtipos de clulas NKT expresan niveles comparables de CD40L y citoquinas, e inducen niveles similares de proliferacin de clulas B. Las clulas NKT CD4+ inducen altos niveles de produccin de Ig.

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INTRODUCCIN/BACKGROUND

5. TETRMEROS+ -

GalCer/CD1d

Implicaciones clnicobiolgicas de las clulas NK

* Defensa antitumoral * Defensa antimicrobiana

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Implicaciones inmunopatognicas

* Enfermedades autoinmunes: artritis reumatoide, PTA * Fracaso de la tolerancia injerto placentaria * Rechazo de trasplantes * Enfermedad de injerto frente a husped

Fin

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Mecanismos de accin citotxica

Exocitosis polarizada de grnulos con citotoxinas NK cell

Molculas de membrana FasL

caspasas

NK cell

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