Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular ph y equilibrios acido-base

2. CURVAS DE TITULACION DE ACIDOS & BASES

ESQUEMA - Curvas de titulacin. Concepto - Fases de una curva de titulacin - Ejemplo de curva de titulacin. Aplicacin prctica

Curva de titulacin y volumetra de neutralizacin La titulacin cido-base es un procedimiento analtico cuyo objetivo es determinar la concentracin de un analito con propiedades cidas o bsicas, utilizando una disolucin valorada de una base o cido, mediante una reaccin de neutralizacin para formar una sal y agua. Asimismo, mediante una titulacin tambin es posible deducir el pK del analito. Las valoraciones cido-base poseen las siguientes caractersticas - Se basan en una reaccin volumtrica cido-base. - El fundamento terico de dicha reaccin es la transferencia de protones entre el cido y la base - El intervalo de viraje se caracteriza por un cambio brusco del pH. - Se necesita un indicador qumico o un pHmetro para monitorizar la valoracin. Los casos ms frecuentes en las valoraciones cido-base son: 1. valoracin de cido fuerte con base fuerte 2. valoracin de base fuerte con cido fuerte 3. valoracin de cido dbil con base fuerte 4. valoracin de base dbil con cido fuerte

Veronica Gonzalez Nez

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En los casos 3 & 4 tambin hay que tener en cuenta el equilibrio cido-base del disolvente. NUNCA se valora un cido o base dbil con una base cido dbil. Las curvas de titulacin son las representaciones grficas de la variacin del pH durante el transcurso de la valoracin. Dichas curvas nos permiten: - estudiar los diferentes casos de valoracin (cido fuerte vs. base fuerte; base fuerte vs. cido fuerte; cido dbil vs. base fuerte; base dbil vs. cido fuerte). - determinar las zonas tamponantes y el pKa. - determinar el intervalo de viraje y el punto de equivalencia. - seleccionar el indicador cido-base ms adecuado.

Los casos ms frecuentes en Bioqumica son las valoraciones de cidos y bases dbiles, ya que muchos metabolitos presentan un cierto carcter cido bsico. A modo de ejemplo, a continuacin se presenta la curva de titulacin del Tris, una base dbil, que se ha de titular con un cido fuerte (ej. HCl) cido fuerte = cido titulante (HCl) vs. base dbil = analito (Tris)

Grfica V vs. pH
H 2O Tris + HCl TrisH+ + Cl

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Fases de una curva de titulacin En esta curva de valoracin se pueden distinguir las siguientes fases 1. Antes de aadir el cido: BH + + OH B + H 2O

El pH de la disolucin viene determinado por el pKb (=14-pKa) y predomina la base conjugada dentro del par.

2. Al ir aadiendo el cido titulante (HCl), se forman las especies B = Tris y BH+ = TrisH+. La relacin entre la abundancia de las distintas especies y el pH se puede establecer mediante la ecuacin de Henderson-Hasselbalch. Tal y como se ha descrito anteriormente, cuando [ A ] = [ AH ] , entonces pH = pK a . El pKa supone un punto de mnima pendiente en la curva de titulacin y se sita en el punto medio de la zona tampn. Zona tampn: tramo de la curva de titulacin en el que se producen mnimas variaciones de pH al aadir equivalentes H3O+/OH- ; se localiza en el intervalo de pH = pKa 1 unidad de pH. En esta regin, el cido y su base conjugada se presentan en concentraciones similares (factor de 10; es decir cuando pH- pKa = 1, el cido se encuentra desprotonado en un 90%).

3. PE = Punto de equivalencia. Es el pH al cual se cumple que N .meq.acido = N .meq.base y se localiza en el punto medio del intervalo de viraje. En el punto de equivalencia toda la base se ha transformado en su forma cida conjugada, y se cumple que B BH + ; en nuestro caso, B = Tris, por lo que Tris TrisH + . El intervalo de viraje es el tramo de la curva en el cual pequeas adiciones del cido titulante producen grandes variaciones del pH de la disolucin y es la zona de mxima pendiente de la curva de titulacin. Teniendo en cuenta que se emplea un cido fuerte y una base dbil en esta valoracin, el punto de equivalencia (PE) se localiza a pH < 7, por lo que se habla de una HIDRLISIS ACIDA.

4. En este tramo de la curva existe un exceso de H3O+ provenientes de la hidrlisis del cido fuerte, y por lo tanto, el pH de la disolucin viene definido por el exceso del cido titulante.

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Ejemplo de curva de titulacin. Aplicacin prctica I. Introduccin El N-Tris(hidroximetil) aminometano (TRIS) es una base dbil que se disocia segn la reaccin

Tris( NH 3+ ) Tris ( NH 2 ) + H 3O +
En esta prctica se realizar una titulacin cido-base de una solucin 0.1 M de TRIS con HCl 1 M, un cido fuerte. Una vez realizada la titulacin, se determinarn los valores para la constante de disociacin Ka y del pKa. Para realizar esta prctica es necesario disponer de un pHmetro.

II. El pHmetro El pH metro es un potencimetro que mide la diferencia de potencial (E) entre dos electrodos, que estn en contacto a travs de una solucin con H3O+. Uno de los electrodos (electrodo de referencia) posee un potencial conocido e invariable (+ 0.250 V a 25 C). El otro es el electrodo indicador, en el que se genera un potencial que depende de la concentracin de H3O+ de la solucin. La diferencia de potencial (E) que existe entre los dos electrodos depende del potencial generado en el electrodo de referencia y el indicador, y est relacionada con la concentracin de H3O+ y el pH de la solucin: E = ERe f Esolucion Donde ERe f es el potencial del electrodo de referencia y Esolucion es el potencial del electrodo indicador. El pHmetro es un aparato caro y manejarlo con cuidado. Algunas consideraciones a tener en cuenta son: - El bulbo de vidrio que contiene los dos electrodos es muy frgil y no ha de tocarse con los dedos. - El bulbo del pHmetro tiene que estar continuamente humedecido - Las soluciones a valorar deben estar a temperatura ambiente. - Antes de introducir el electrodo en la solucin hay que lavarlo con agua destilada y secarlo con papel. Esta operacin ha de repetirse siempre y cuando se cambie de solucin.

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- Cuando no haya solucin alguna para medir con el pHmetro, el bulbo ha de volverse a lavar, secar e introducir en la solucin de KCl 3 M. - Antes de realizar la titulacin, hay que calibrar el pHmetro. - Cada adicin de cido base valorante debe mezclarse mediante agitacin antes de realizar la medida del pH.

III. Indicaciones para realizar el procedimiento experimental 1. El pHmetro ha de calibrarse, segn las instrucciones del fabricante. 2. Se miden el volumen de analito que se va a valorar y se aade a un vaso de precipitados. En este caso, 60 mL de Tris 0.1 M. 3. Se mide el pH inicial de la solucin. 4. Se aaden alcuotas del cido valorante, se mezcla por agitacin y de mide el pH resultante. En este caso, se pueden emplear alcuotas de 500 L HCl 1 M. 5. El proceso ha de repetirse hasta terminar la valoracin.

IV. Anlisis de los resultados. Resultados esperables Para analizar y representar grficamente los resultados obtenidos se puede utilizar un programa informtico, tipo Excel, Calc Prism, y es imprescindible que todas las magnitudes estn acompaadas de sus correspondientes unidades. Consideraciones a tener en cuenta: - En las hojas Excel utilizadas en Espaa se debe poner coma decimal (,) y NO punto decimal (.). - Las fmulas se pueden introducir directamente en la barra de frmulas, o bien buscar la operacin matemtica deseada en la ventana que se abre al picar en fx. - Para copiar una frmula en varias celdas, simplemente es necesario seleccionar la celda que contiene la operacin matemtica deseada, copiar (CTRL + c), seleccionar las celdas donde se quiere aplicar dicha frmula y pegar (CTRL + p). En muchos casos, tambin se puede arrastrar la frmula. - Siempre que sea posible, es conveniente utilizar la notacin cientfica.

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[botn izquierdo del ratn formato de celdas nmero cientfica 2 decimales] - Todas las entradas de volmenes deben ir expresadas en litros (L) y las concentraciones en molar [M]. La herramienta de GRAFICO se emplea para representar los resultados. En nuestro caso, se va a utilizar el diagrama de dispersin, siguiendo los pasos indicados en el asistente para grficos. Para que una grfica sea informativa, es conveniente que tenga un ttulo y es absolutamente imprescindible que los ejes tengan una leyenda, donde se indique la magnitud que se representa, junto con las unidades utilizadas.

Grfica de la curva de valoracin En el eje de abscisas se representa la cantidad de agente titulante aadido (equivalentes, moles, volumen) y en el eje de ordenadas, el pH obtenido. Los puntos se pueden unir con una lnea. En esta grfica se pueden distinguir las distintas fases indicadas en la prctica anterior; cabe recordar que en el punto medio de la zona tampn se localiza el valor pKa, y en el punto medio del intervalo de viraje, el punto de equivalencia. As, a partir de la curva de valoracin es posible determinar de forma intuitiva el valor pKa y la cantidad de base valorada.

Resultados esperables Normas a tener en cuenta a la hora de realizar esta tarea.

Empleo del S.I. Utilizacin correcta de las magnitudes, unidades y cifras significativas. Los resultados deben deducirse, y no slo incluir el resultado final. Empleo de la notacin cientfica. Queda absolutamente descartado el uso de reglas de tres, por no ser clculos matemticos vlidos.

A continuacin se muestra una tabla modelo, donde se han completado las casillas siguiendo las instrucciones anteriores. Los datos de esta tabla se han representado grficamente, obtenindose una curva de valoracin.

Veronica Gonzalez Nez

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Agente titulante (L) 0,00E+00 5,00E-04 1,00E-03 1,50E-03 2,00E-03 2,50E-03 3,00E-03 3,50E-03 4,00E-03 4,50E-03 5,00E-03 5,50E-03 6,00E-03 6,30E-03 7,00E-03

VT (L) 5,00E-02 5,05E-02 5,10E-02 5,15E-02 5,20E-02 5,25E-02 5,30E-02 5,35E-02 5,40E-02 5,45E-02 5,50E-02 5,55E-02 5,60E-02 5,63E-02 5,70E-02

pH medido 10,6 9,06 8,71 8,49 8,3 8,14 7,98 7,82 7,64 7,42 7,1 6,06 4,25 2,31 1,35

[H3O+] (M) 2,51E-11 8,71E-10 1,95E-09 3,24E-09 5,01E-09 7,24E-09 1,05E-08 1,51E-08 2,29E-08 3,80E-08 7,94E-08 8,71E-07 5,62E-05 4,90E-03 4,47E-02

Curva de titulacion del Tris

12 11 10 9 8

Zona tampn

pH medido

7 6 5 4 3 2 1 0 0 1.010 -3 2.010 -3 3.010 -3 4.010 -3 5.010 -3 6.010 -3 7.010 -3 8.010 -3

pKa

PE

V HCl (L)

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Tras realizar la representacin grfica de la curva de valoracin, se han calculado intuitivamente el valor pKa y el punto de equivalencia. - para calcular el valor pKa, se establecen los lmites de la zona tampn y se halla el punto medio 7.1 < zona tampn < 9.06 punto medio =

7.1 + 9.06 = 8.08 2

Por lo tanto, el valor del pKa del Tris hallado a partir de la grfica es pKa = 8.08 El valor de K a = 10 pK a = 108.08 = 8.32 *109 - para calcular el punto de equivalencia, se establecen los lmites del intervalo de viraje (si bien es ms complicado que establecer los lmites de la zona tampn) y se halla el punto medio. 2.31 < intervalo de viraje < 7.1 punto medio =

2.31 + 7.1 = 4.71 2

Se puede observar que a pH = 4.71, aproximadamente se ha aadido 6 mL de HCl 1M; por lo tanto habria 6 meq de cido en solucin. Como en el punto de equivalencia se cumple que

N .meq.acido = N .meq.base , debera haber 6 meq de base. Si el volumen inicial de Tris era de
60 mL 0.1 M, hay 6 meq de base. Se esta forma se comprueba la propiedad que define el punto de equivalencia.

V. Preguntas adicionales 1. Cul es la forma predominante del Tris a pH = 3? 2. Cules son las unidades en las que se expresa el pKa? 3. Cuntos moles de Tris hay en 100 mL de una disolucin 500 mM y pH = 8? 4. Si se prepara una disolucin de Tris 0.1 M, y el pH medido es igual a 5, Cul es la concentracin de [H3O+] en solucin? 5. Utilizando el dato de pKa obtenido para el Tris, y sabiendo que la relacin entre [A-]/[AH] = 10-2, Cul es el pH de la disolucin?

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