ESPE INGENIERA EN BIOTECNOLOGA

Cultivo de Embriones de Frutos Inmaduros

Carrera G, Solis N. Escuela Politcnica del Ejrcito , Sangolqu, Pichincha, Ecuador, 2013 RESUMEN El cultivo de embriones de frutos inmaduros se realiz sumergierondo los frutos en una solucin al 2% de detergente ms tween 20 durante 10 minutos y en una solucin de cloro al 5% ms Tween 20 durante 2 minutos en agitacin. Se sembr los embriones en medio MS enriquecido con: 2 mg L-1 de kinetina, 0,5 mg L-1 de AIA, 100 mg L-1 de mioinositol, 30 g L-1 de azcar y 6,5 g L-1 de agar. pH ajustado a 5,7 5,8.

INTRODUCCIN La tcnica del cultivo de embriones fue iniciada por Laibach (1925) en hbridos interespecficos de Linum, mientras Brienk y col (1944) fueron los primeros en emplear ese mtodo en cereales (Kott y col, 1985). Esta tcnica puede utilizarse para eliminar la dormancia de la semilla, la cual ha sido exitosa en y otra aplicacin prctica es para evitar el deterioro o prdida de la viabilidad de la semilla, que resulta en la prdida de la variedad asociada tambin con el dao al genoma (Prez, 2006). El cultivo de embriones ha ayudado al mejoramiento gentico de especies arbreas porque acorta el tiempo de siembra floracin, ya que los embriones cultivados in vitro no necesitan un periodo de latencia previo. Por medio del cultivo de embriones es posible acortar la latencia y producir plntulas para el trasplante a las dos o tres semanas (Roca, 1991). El objetivo de la prctica es obtener brotes a partir de embriones de frutos inmaduros

MATERIALES Y MTODOS Preparacin explante y desinfeccin del

Se escogieron frutos inmaduros uno para cada integrante del grupo, en total cinco. Los frutos se lavaron en agua corriente para eliminar las impurezas ms grandes. Se sumergieron los frutos en una solucin al 2% de detergente ms tween 20 durante 10 minutos en agitacin. Las muestras se enjuagaron dos veces con agua destilada y una con agua estril. Se elimin el agua y se sumergieron los frutos en una solucin de cloro al 5% ms Tween 20 durante 2 minutos en agitacin. Se realizaron tres lavados con agua estril dentro de la cmara de siembra. Siembra del material vegetal Se trabaj con todas las medidas aspticas necesarias. Se desinfect adecuadamente la sala de siembra, cmara de flujo laminar y el material de siembra. Se sembraron dos semillas del mismo fruto por cada estudiante en dos frascos y hubo un caso de solo uno, en

total 2 frascos por grupo. Una vez realizados los lavados dentro de la cmara, se sostuvo el fruto con una pinza, se atomiz con alcohol al 90% y se acerc a la llama del mechero. Al extinguirse la llama se realiz un corte transversal al fruto, 4 semillas fueron extradas y colocadas directamente al frasco de medio MS enriquecido con: 2 mg L-1 de kinetina, 0,5 mg L-1 de AIA, 100 mg L-1 de mioinositol, 30 g L-1 de azcar y 6,5 g L-1 de agar. pH ajustado a 5,7 5,8 . Antes de sellar el frasco se flame la boca. Se sell el frasco con 2 capas de plstico adherente y una liga. Los residuos se colocaron en una funda destinada a ser basurero. Los frascos fueron rotulados con la fecha, las iniciales del estudiante y el tipo de explante. Se Incubaron los 5 frascos, la contaminacin y viabilidad fueron evaluados una semana despus.

DISCUSIN El tratamiento de desinfeccin es el adecuado para esta prctica, ya que ninguno de los explantes sembrados tuvo contaminacin, lo que tambin indica que la manera de sembrar fue correcta. La prdida de los tegumentos se debe a la humedad captada del medio. No se sabe si la no presencia de brotes se debe a errores del medio de cultivo, a las concentraciones de citocininas o auxinas o a que solo son dos semanas desde la siembra de los embriones, o al tiempo corto para la toma de datos.

CONCLUSIONES Los mtodos de desinfeccin son los adecuados porque no existe presencia de hongos o bacterias. No se puede determinar si el medio usado es el correcto o si la concentracin de auxinas o citocininas son las correctas porque todava es un tiempo demasiado corto como para comenzar a ver la presencia de brotes.

RESULTADOS El medio MS en donde se sembr los embriones no presenta contaminacin. Los embriones se han engrosado y uno ha perdido el tegumento. No se observa presencia de brotes. Las semillas han adquerido un color un poco oscuro y estn recubiertos de una cubierta gelatinosa.

BIBLIOGRAFA Prez, A. (2006). Curso de Capacitacin en Mejoramiento Gentico del Arroz. Instituto de Investigaciones del Arroz. La Habana,Cuba. Roca, W.M. y L.A. Mroginski., (1993). Cultivo de tejidos en la Agricultura: Fundamentos y aplicaciones. Segunda edicin. CIAT. Cali, Colombia,

Fig1: Foto de embriones de frutos inmaduros de Citrus limon