SEPARACIONES CROMATOGRFICAS COMPARACIN Dr. Enrique Sauri D.

Instrucciones Lee con mucha atencin el documento que se adjunta (titulado Cromatografa, adaptado de Abbot y Andrews, 1973) y despus resuelve los aspectos que se solicitan a continuacin:

a) Identifica cules de los procedimientos cromatogrficos que se indican en la lectura se realizan con fase estacionaria dispuesta en forma de pelcula y cules en el interior de una columna, Haz una tabla de dos columnas con esta informacin.

b) Identifica cules de los procedimientos cromatogrficos que se indican en la lectura requieren de un instrumento especial y cules no. Haz una tabla de dos columnas con esta informacin.

c) Identifica cules de los procedimientos cromatogrficos que se indican en la lectura utilizan lquidos como fase mvil y cules utilizan gases. Haz una tabla con esta informacin.

d) Considerando las caractersticas particulares de los diferentes tipos de separacin cromatogrfica que se indican en la lectura, y tomando en cuenta las caractersticas de la fase mvil y de la fase estacionaria, la forma fsica en la que stas se encuentran dispuestas, del objetivo general de la cromatografa y las caractersticas de los compuestos que se pueden analizar, indica tres caractersticas que tengan en comn los tipos los tipos de separacin cromatogrfica que se indican en la lectura.

CROMATOGRAFIA Mtodos cromatogrficos. Separaciones cromatogrficas. Mtodos variados de separacin de mezclas se conocen como cromatografa. Segn la definicin dada por Keulemans la cromatografa es un mtodo de separacin en el que los componentes a desglosar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye un lecho estacionario de amplio desarrollo superficial y la otra es un fluido que pasa a travs o a lo largo del lecho estacionario. La cromatografa se introduce en los mtodos de separacin en 1903 y su posterior desarroll y evolucin se produce hacia 1930. La primera persona que defini la cromatografa fue el botnico ruso Miguel Tswett (1872-1913) en 1906 y eligi el trmino cromatografa procedente de las palabras griegas khromatos (color) y graphos (escrito) ya que utiliz el trmino cromatografa para describir la separacin de pigmentos vegetales en distintas zonas coloreadas. Aunque la mayor parte de las separaciones que se realizan actualmente son de compuestos incoloros, el trmino inicial cromatografa se ha mantenido. Definicin de cromatografa En 1906 Tswett defini la cromatografa como: Mtodo en el cual los componentes de una mezcla son separados en una columna adsorbente dentro de un sistema fluyente. Recientemente la I.U.P.A.C define la cromatografa de forma ms amplia como: Mtodo usado principalmente para la separacin de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es mvil. La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido soportado en un slido o en un gel (matriz). La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en una capa, distribuida como una pelcula, etc... Se utiliza el trmino general de lecho para definir las distintas formas en que puede encontrarse la fase estacionaria. Las separaciones cromatogrficas se consiguen mediante la distribucin de los componentes de una mezcla entre la fase fija y la fase mvil. La separacin entre dos sustancias empieza cuando una es retenida ms fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse ms rpidamente en la fase mvil.

Las retenciones mencionadas pueden tener su origen en dos fenmenos de interaccin que se dan entre las dos fases y que pueden ser: 1.-La adsorcin, que es la retencin de una especie qumica por parte de los puntos activos de la superficie de un slido quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial. 2.- La absorcin, que es la retencin de una especie qumica por parte de una masa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera, absorcin pura, o a reaccionar qumicamente con la misma, absorcin con reaccin qumica, considerando ambas como un fenmeno msico y no superficial Aspectos histricos de la cromatografa Aunque procesos parecidos ocurren en la naturaleza cuando disoluciones pasan a travs de arcilla, rocas, etc... la cromatografa como tal adquiere importancia cuando en 1850 el qumico F.F.Runge, que trabajaba con tintas, descubri que los cationes orgnicos se separaban por migracin cuando se depositaba una disolucin que los contena sobre un material poroso, como papel. En 1906 el botnico ruso Tswett utiliz la cromatografa en columna para separar extractos vegetales coloreados, y a este proceso le di el nombre de cromatografa. Pero el mayor desarrollo se produce en 1930 con Lederer cuando consigue separar los colorantes de la yema de huevo. Posteriormente los qumicos Khun, Kamer y Ruzucca desarrollan la cromatografa en el campo de la qumica orgnica e inorgnica, y obtienen el premio Nobel por sus trabajos en 1937, 1938, 1939 respectivamente. A partir de 1940 los mtodos cromatogrficos adquieren extensin mundial de forma que en 1940 Tiselius divide los mtodos cromatogrficos en cromatografa por anlisis frontal, desarrollo por elucin y desarrollo por desplazamiento, obtuvo el premio Nobel por sus trabajos en 1948. Al mismo tiempo la cromatografa se aplicaba en el campo de la bioqumica, y as Martin consigue separar algunos aminocidos acetilados. Aspectos histricos de los distintos tipos de cromatografa Cromatografa en papel Fue desarrolla por Martin. Tiene como soporte un papel de celulosa. Adquiri una gran extensin por su sencillez y presenta la ventaja de

poder utilizar miligramos y microgramos, adems presenta la opcin de utilizar tanto la tcnica descendente como la tcnica ascendente. Cromatografa en capa fina Fue originada por los trabajos de los investigadores rusos Izmailov y Schraiberen en 1938 al separar mezclas de tinturas farmacuticas. En este tipo de cromatografa la fase estacionaria se extiende sobre un soporte inerte formando una pelcula relativamente delgada, la dificultad que presentaba el mtodo era el crear una capa homognea, sin ningn tipo de rugosidad. La cromatografa en capa fina tuvo valor limitado hasta que Stahl estandariz el mtodo para elaborar capas finas por mtodos mecnicos. Cromatografa de intercambio inico Esta tcnica apareci durante la II Guerra Mundial y en principio tena la finalidad de separar las tierras raras y los elementos de transicin. En 1938 Taylor y Urey utilizan este mtodo para separar istopos de Litio y Potasio utilizando resinas slidas llamadas zeolita, las cuales tienen la propiedad de intercambiar iones. En 1939 Samuel logra sintetizar resinas de intercambio inico. Normalmente la zeolita se encuentra dentro de una columna. Cromatografa de gel-filtracin Fodin y Porath en 1958 descubren que usando como fase estacionaria ciertos geles porosos (que se depositan dentro de columnas) se consigue separar polmeros sintticos de alto peso molecular. Cromatografa de afinidad Ideada por Porath en 1967, usando como fuente un pptido o protena unida covalentemente a un ligando y se utiliza para la separacin de molculas proteicas. Cromatografa de gases Es una de las tcnicas ms utilizadas e importantes, de forma que ha revolucionado el campo de la qumica analtica. Se caracteriza porque la fase mvil es un gas y se requiere de un instrumento especial para poder realizarla. Se utiliza para separar compuestos voltiles o que se pueden volatilizar. Cromatografa de lquidos de alta resolucin Es una de las tcnicas instrumentales ms utilizadas e importantes, de forma que ha revolucionado el campo de la qumica analtica. Se caracteriza porque la fase mvil es un lquido que se desplaza a travs de la fase estacionaria que se encuentra dentro de una columna. Permite separar y analizar gran diversidad de compuestos con caractersticas diferentes.

Clasificacin segn el procedimiento de separacin El principio bsico de la separacin de las sustancias que componen una mezcla se fundamenta en una serie de sucesivos equilibrios entre la fase estacionaria y la fase mvil. El equilibrio depender de la particin o diferente adsorcin que tengan la fase estacionaria y los componentes de la mezcla. La diferencia depender de las propiedades fsicas y qumicas de los componentes. El mayor o menor avance en el sistema cromatogrfico depender de la afinidad del componente y la fase estacionaria. El componente con menor afinidad por la fase estacionaria en presencia de una fase mvil llamada eluyente ser eluido en primer lugar, y por tanto se desplazar con mayor velocidad por el sistema cromatogrfico. Tabla de clasificacin de mtodos cromatogrficos F. F. mvil Soporte Cromatografa estacionaria slido gas columna slido-gas (adsorcin) lquido columna lquida capa fina en papel y/o capa fina lquido gas columna lquido-lquido (particin) liquido columna gas-lquido resina lquido columna intercambio (intercambio inico, (lquidoinico) slido) gel lquido columna filtracin de gel, (filtracin en ) (lquido-slido) *H.P.L.C : cromatografa lquida de alta resolucin

Siglas G.S.C / G.C C.L / H.P.L.C T.L.C C.G.L C.L.L / H.P.L.C

Referencia Abbot D., Adrews B.S., 1973. Introduccin a la Cromatografa. Alhambra, Madrid.