EDICIN N 108

Marcadores moleculares
Desde la prehistoria, el hombre ha mejorado especies vegetales, animales y microbianas bas ndose en la selecci!n de los mejores "enotipos #ver C$aderno n %, &'() El mejoramiento tradicional de las especies, "$e posible gracias a varios "actores tales como, la variabilidad gen*tica e+istente entre los organismos, la e"icacia e intensidad de la selecci!n aplicada, el tiempo necesario para reali,ar $n ciclo de selecci!n y la heredabilidad del car cter -$e se -$er.a aislar, es decir -$* porcentaje de las di"erencias encontradas en $n cierto car cter, entre los individ$os de $na determinada poblaci!n, se debe a di"erencias en s$s genes) /in embargo, a0n -$edan m$chas preg$ntas por responder1 2c$ ntos genes est n implicados en la e+presi!n de $n car cter3, 2c$ l es el e"ecto de estos genes3, 2c$ l es s$ locali,aci!n y s$ "$nci!n "isiol!gica3 #ver C$aderno n, 40, 41( 5ist!ricamente, la ta+onom.a #o clasi"icaci!n de organismos( ha est$diado caracter.sticas "enot.picas, los c$ales se eval0an mediante marcadores mor"ol!gicos) Estos marcadores tienen la desventaja de -$e son limitados en n0mero #las caracter.sticas a medir no son in"initas(, se deben medir en cierta etapa del crecimiento y p$eden estar in"l$enciados por el ambiente) 6s., los criterios $tili,ados podr.an carecer, en alg$nos casos, de de"inici!n y objetividad) Con el advenimiento de la biolog.a molec$lar #ver C$aderno n 7%(, el desarrollo de los marcadores molec$lares est ay$dando a eliminar tanto los inconvenientes de $na selecci!n basada en el an lisis e+cl$sivo del "enotipo, como la identi"icaci!n de especies y variedades de $na "orma m s rig$rosa y repetitiva) Los marcadores moleculares y los marcadores genticos 8na serie de t*cnicas molec$lares de gran desarrollo en los 0ltimos treinta a9os permite conocer la in"ormaci!n gen*tica -$e poseen los organismos) /e las conoce con el nombre de marcadores moleculares y "$ncionan como se9aladores de di"erentes regiones del genoma) :os marcadores se $san para el mapeo gen*tico, como el primer paso para encontrar la posici!n e identidad de $n gen) /on ampliamente $tili,ados en est$dios de gen*tica h$mana, vegetal, animal y microbiana) :os marcadores molec$lares permiten evidenciar variaciones #polimorfismos( en la sec$encia del 6DN entre dos individ$os, modi"i-$en estas o no s$ "enotipo. Esto se debe a -$e los marcadores molec$lares ;se9alan< tanto regiones codi"icantes como no=codi"icantes del genoma) 8n marcador gentico es $n segmento de 6DN con $na $bicaci!n ".sica identi"icable en $n cromosoma y c$ya herencia se p$ede rastrear) >ara -$e $na porci!n de 6DN ligada al car cter de inter*s sea considerado $n marcador gentico debe mostrar $na variaci!n e+perimentalmente detectable entre los individ$os de la poblaci!n, y $n modo de herencia predecible seg0n las leyes de ?endel #@er C$adernos N 40 y 41()

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
Esta variaci!n p$ede ser considerada a di"erentes niveles biol!gicos, desde cambios "enot.picos heredables signi"icativos, hasta la variaci!n de $n solo n$cle!tido en la sec$encia de 6DN #ver C$adernos N &, 4, A0, &A() 8n marcador ideal debe ser1 altamente polim!r"ico o variable dentro y entre especies, de herencia mendeliana no epist tica #sin interacci!n entre genes(, insensible a los e"ectos ambientales, de r pida identi"icaci!n y simple an lisis de posible detecci!n en los estadios tempranos del desarrollo) 'ipos de marcadores genticos En los an lisis gen!micos, se han $tili,ado varios tipos de marcadores1 mor"ol!gicos, isoen,imas, prote.nas y marcadores basados en 6DN) (. Marcadores morfol!gicos /on caracter.sticas "enot.picas de " cil identi"icaci!n vis$al tales como "orma, color, tama9o o alt$ra) ?$chos de ellos se convierten en importantes ;descriptores<, a la hora de inscribir n$evas variedades) >or ejemplo, alrededor de %0 caracteres de pl nt$la, tallo, hoja, espiga, espig$illa y cariopse se $tili,an para inscribir e identi"icar variedades de trigo en la /ecretar.a de 6gric$lt$ra Banader.a >esca y 6limentaci!n #/6B>y6() Como se describi! anteriormente, los marcadores mor"ol!gicos presentan alg$nas limitaciones, no obstante permanecen como caracteres 0tiles en la identi"icaci!n de materiales dado -$e representan $n conj$nto de caracteres -$e p$eden ser eval$ados con m*todos sencillos y a bajo costo) ). *soen$imas /e de"inen como di"erentes "ormas molec$lares de $n tipo de en,ima, -$e poseen $na actividad catal.tica com0n, es decir act0an sobre el mismo s$strato) Ciertos cambios en la sec$encia de 6DN #m$taciones( -$e codi"ica para estas en,imas p$eden res$ltar en cambios en la composici!n de amino cidos) /i estos cambios se prod$cen, las prote.nas podr.an tener la misma actividad biol!gica, pero como s$ composici!n de amino cidos var.a, podr.an tener di"erente carga neta y por tanto di"erentes velocidades de migraci!n en $n campo el*ctrico) Estas di"erencias determinan patrones caracter.sticos de migraci!n electro"or*tica de las "ormas iso=en,im ticas #ver C$aderno n 7C, &4() :as en,imas -$e se $tili,an en estos est$dios se clasi"ican de ac$erdo a s$ "$nci!n y se representan con $na sigla de tres letras) >or ejemplo1 = dehidrogenasas #alcohol dehidrogenasa 6D5, gl$tamato dehidrogenasa BD5(, = o+idasas #pero+idasas >DE(, = hidrolasas #"os"atasas cidas 6C>, esterasas E/F(, = isomerasas #"os"ogl$coisomerasa >BI(
"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
= trans"erasas #"os"ogl$com$tasas >B?() :as isoen,imas han tenido $n rol prominente en est$dios de poblaciones vegetales para determinar variabilidad y estr$ct$ra gen*tica, sistem tica y biolog.a evol$tiva as. como en descripci!n de germoplasma e identi"icaci!n de variedades) +. Protenas de reser"a El endosperma de los cereales es el principal componente de la semilla ya -$e representa apro+imadamente el 80='0G de s$ peso seco) 6lmid!n y prote.nas son las dos macromol*c$las m s importantes) El contenido de prote.na var.a seg0n la especie, por ejemplo, los valores m s altos se dan en trigo y avena #10=1CG( y los m s bajos en ma., y arro, #7G() :a concentraci!n de prote.nas en los cereales es apreciablemente menor -$e en las leg$minosas ya -$e en *stas los !rganos de reserva o cotiledones son capaces de almacenar hasta $n 40G de s$ peso seco en prote.nas) :as prote.nas del endosperma "$eron est$diadas ya a comien,os del siglo pasado por el -$.mico Hsborne #?etodolog.a de Hsborne I ?endel(, -$ien dio las bases para las clasi"icaciones act$ales) :a misma se basa en la sol$bilidad relativa en di"erentes solventes1 alb0minas sol$bles en ag$a, glob$linas en sol$ci!n salina, prolaminas en alcohol y gl$telinas en cidos o lcalis) El $so de prote.nas de almacenamiento en est$dios de diversidad gen*tica sistem tica, se basa en el hecho -$e las prote.nas de di"erentes individ$os, poblaciones y especies son hom!logas, y -$e al separarse en $n gel prod$cir n bandas similares o di"erentes) Debido a -$e las prote.nas de reserva carecen de actividad en,im tica, ellas son detectadas en el gel por medio de t*cnicas generales de te9ido) ,. -./ y marcadores moleculares 8n marcador de 6DN es simplemente $n p$nto de re"erencia en $n cromosoma, -$e p$ede o no corresponder a $n gen) E+isten diversas t*cnicas de biolog.a molec$lar disponibles para detectar variabilidad en la sec$encia de 6DN) :a reacci!n en cadena de la polimerasa #>CD(, las en,imas de restricci!n, la separaci!n electro"or*tica de los "ragmentos de 6DN, las sondas marcadas y las hibridi,aciones #@er C$adernos &4 y 7C( son alg$nas de las t*cnicas -$e permiten obtener $n n0mero virt$almente ilimitado de marcadores molec$lares) y c$brir la totalidad del genoma de $n organismo) :os marcadores molec$lares p$eden ser clasi"icados en tres gr$pos1

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108

Br$po 11 ?arcadores basados en la hi%rididaci!n del 6DN Estos tipos de marcadores invol$cran la detecci!n de $n segmento espec."ico #marcador( en el 6DN de est$dio por hibridaci!n con $n "ragmento marcado radiactivamente de sec$encia complementaria al marcador #sonda() Esto implica -$e el investigador -$e b$sca est$diar $n gen de inter*s, debe conocer al menos $na parte de s$ sec$encia, para poder constr$ir $na porci!n complementaria #sonda( -$e permita ;pescar< a ese gen de inter*s #@er c$aderno 7C() Dentro de este gr$po de marcadores se enc$entran los DJ:> y los @NFD o minisat*lites) :a t*cnica de 01LP #>olimor"ismo en el tama9o de los "ragmentos de restricci!n ( "$e desarrollada a "inales de los KC0, y se basa en la detecci!n de "ragmentos de 6DN de distinto peso molec$lar en di"erentes organismos) :a t*cnica est basada en la digesti!n del 6DN total de $n individ$o con di"erentes en,imas de restricci!n) Esta restricci!n prod$ce cantidades e-$imolares de "ragmentos para $na mol*c$la de 6DN dada) :os "ragmentos res$ltantes son separados por electro"oresis en geles de agarosa y trans"eridos por capilaridad a $na membrana de nylon #/o$thern Llot() Esta membrana es hibridada con $na sonda radioactiva) El prod$cto de la hibridaci!n es vis$ali,ado por medio de $na a$toradiogra".a de rayos=E, de ac$erdo al peso molec$lar de la banda) :as sec$encias de 6DN de minisatlites #@NFD( son sec$encias repetidas -$e se presentan en e$cariontes) Ellas se enc$entran repetidas en tandem #$na detr s de la otra( y dispersas a trav*s del genoma) Cada @NFD tiene distinto n0mero de repeticiones variable, asoci ndose de esta manera $n tama9o distinto a cada alelo) E+isten dos "ormas de detectar los @NFD ya sea por hibridaci!n o por t*cnicas de >CD) #>ara m s detalles de estos marcadores molec$lares, ver C$aderno N 7'(

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
Br$po A1 ?arcadores basados en la amplificaci!n del 6DN En este gr$po se incl$yen a-$ellos marcadores molec$lares en los -$e se $tili,a la reacci!n de PC0 #polymerase chain reaction( o reacci!n en cadena de la polimerasa de 6DN) Esta t*cnica se basa en la s.ntesis en,im tica de millones de copias de $n segmento espec."ico de 6DN #@er c$aderno 7C() /on m$chos los marcadores molec$lares -$e est n incl$idos en este gr$po, entre los -$e se enc$entran los microsat*lites o //D, los D6>Ds y C6>s) :os microsatlites o ##0 son los m s ampliamente $tili,ados en est$dios con marcadores molec$lares, por ser $na t*cnica relativamente sencilla y altamente reprod$cible) /e trata de regiones constit$idas por repeticiones en tandem de $nos pocos pares de bases #1 a 7() El polimor"ismo de estas regiones est dado por los di"erentes n0meros de repeticiones, dando "ragmentos ampli"icados por >CD de distinto tama9o) 6-$ellos alelos con mayor n0mero de repeticiones, tendr n $n tama9o mayor y correr n m s retrasados en $na corrida electro"or*tica)

Marcador ##00 2 1uente3 -rgenBio

Br$po &1 ?arcadores mi+tos /on a-$ellos -$e res$ltan de la combinaci!n de otros tipos de marcadores molec$lares) Entre ellos se enc$entran los 6J:>, $nos de los m s $tili,ados en estos tipos de est$dios) 6J:> consiste en ampli"icar en "orma selectiva "ragmentos de 6DN cortados con en,imas de restricci!n) El 6DN de las individ$os a anali,ar se corta con dos en,imas de restricci!n distintas y l$ego se le ligan ;adaptadores< a los e+tremos de los "ragmentos de 6DN res$ltantes de dicha digesti!n, -$e permite -$e se
"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
ampli"i-$en en "orma selectiva alg$nos de esos "ragmentos -$e tienen las bases s$plementadas a los cebadores o primers $tili,ados) :a separaci!n de estos "ragmentos por electro"oresis en geles de poliacrilamida genera entre %0 y 100 "ragmentos) :a ventaja de este m*todo radica en -$e se p$ede anali,ar, en $n solo ensayo, $n gran n0mero de regiones del genoma)

-1LP. 1uente3 http344555.udel.edu4dnase uence46.#7C4*mages4figure(.gif

De la descripci!n reali,ada, se desprende -$e los marcadores var.an ampliamente en el grado de complejidad del m*todo, el nivel de polimor"ismo y en los "actores costo y tiempo, de gran importancia c$ando los objetivos del est$dio incl$yen el an lisis de $n n0mero elevado de individ$os) Estos son alg$nos de los aspectos importantes a tener en c$enta a la hora de elegir el tipo de marcador a $tili,ar en $na determinada investigaci!n cient."ica) -plicaciones de los marcadores moleculares /on m0ltiples las aplicaciones de los marcadores molec$lares en el est$dio de especies vegetales, animales, microbianas e incl$so en el rea de los alimentos) 6lg$nas de ellas p$eden observarse en la sig$iente "ig$ra1

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
6tili$aci!n de los marcadores moleculares

:as herramientas descriptas anteriormente se $tili,an en n$merosas reas relacionadas con el mejoramiento vegetal y el an lisis de la biodiversidad) 6 contin$aci!n se describen alg$nas de estas aplicaciones1 *dentificaci!n de genotipos 2 Pure$a "arietal El control de la p$re,a varietal y la discriminaci!n de variedades protegidas #es decir, registradas( re-$ieren de $na adec$ada identi"icaci!n de los materiales) Esta identi"icaci!n se basa tradicionalmente en el $so de descriptores mor"ol!gicos y "isiol!gicos) /in embargo, varios de los caracteres $sados como descriptores presentan limitaciones en c$anto al n0mero restringido de variantes, in"l$encia ambiental y dependencia del estadio de desarrollo de planta) Como alternativa para resolver estos problemas, los polimor"ismos molec$lares de prote.nas y 6DN res$ltan de $tilidad en la determinaci!n de los criterios .6# #distinci!n, $ni"ormidad y estabilidad() /e $tili,an localmente como datos complementarios de los descriptores mor"ol!gicos y "isiol!gicos para el registro de los c$ltivares) 6so en %ancos de germoplasma :os marcadores molec$lares permiten caracteri,ar las accesiones o m$estras a ser incl$idas en las colecciones, est$diar el proceso de domesticaci!n, establecer relaciones "ilogen*ticas y colaborar en la elecci!n de las estrategias de conservaci!n en los Lancos de germoplasma #ver c$aderno 8'() Mapeo gentico 8n mapa gen*tico de $na especie m$estra la distrib$ci!n linear de $n gr$po de genes y marcadores en cada $no de los cromosomas -$e constit$yen el genoma de $n organismo) El objetivo es encontrar a-$ellos marcadores molec$lares -$e est*n ;ligados< a $n gen de inter*s #es decir, -$e est*n lo s$"icientemente cerca como
"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
para -$e segreg$en j$ntos en la meiosis() 6s., si $n marcador res$lta estar gen*ticamente ligado a $n gen -$e controla $n car cter de inter*s agron!mico, la selecci!n de este marcador res$lta en la selecci!n indirecta del gen de inter*s) Este hecho constit$ye el "$ndamento del proceso denominado selecci!n asistida por marcadores moleculares 8M-#9: aplicado en el mejoramiento gen*tico vegetal y animal) C$anto m s pr!+imos est*n el marcador y el gen en c$esti!n, m s e"iciente ser la selecci!n) Mapeo comparati"o :a comparaci!n de mapas de ligamiento entre di"erentes especies se denomina mapeo comparati"o) /i $n gr$po de marcadores molec$lares mantiene el orden y s$s relaciones de ligamiento entre dos especies se dice -$e m$estran sintenia. Diversos est$dios en di"erentes gr$pos ta+on!micos mostraron $na estrecha relaci!n entre los genomas de las especies comprendidas dentro de cada gr$po) Esto se ha observado, por ejemplo, entre especies pertenecientes a las /olan ceas #tomate, papa, pimiento(, entre 6rabidopsis y c$ltivos del g*nero Lrassica, y dentro de las gram.neas entre especies pertenecientes a la trib$ Friticeas #trigo, cebada, centeno( as. como entre especies pertenecientes a distintas s$b"amilias ta+on!micas, tal el caso de arro,, ma., y sorgo) .istri%uci!n de la "aria%ilidad gentica en po%laciones naturales :as especies est n constit$idas por $nidades m s o menos aisladas denominadas poblaciones) 8na especie vegetal raramente se e+tiende en "orma contin$a e ininterr$mpida) En general adopta $na distrib$ci!n en parches) El n0mero de individ$os en cada poblaci!n, el modo reprod$ctivo #a$togamia=alogamia(, las distancias entre poblaciones, el tipo de polini,aci!n #gravedad=anem!"ila= entom!"ila(, la acci!n del hombre en la "ragmentaci!n del h bitat y el origen hist!rico #especies nativas=especies introd$cidas( determinan en conj$nto $na distrib$ci!n de la variaci!n gen*tica propia de cada especie) :os proyectos destinados a la conservaci!n de especies nat$rales, tienen como objetivo seleccionar poblaciones -$e "ormar n parte de las reas protegidas, las c$ales deber n contener la mayor diversidad gen*tica posible de modo de aseg$rar el mayor potencial evol$tivo #ver C$aderno 8'() :os marcadores molec$lares permiten establecer la diversidad gen*tica e+istente en estas poblaciones) Estimaci!n del flu&o gnico El "l$jo g*nico entre poblaciones vegetales oc$rre mediante el movimiento de polen o de semillas) :a mor"olog.a de semilla y polen, los mecanismos de dispersi!n, el tipo de polini,aci!n, etc), hacen -$e la contrib$ci!n de estas dos v.as al "l$jo total var.e de ac$erdo a la especie) :os marcadores molec$lares permiten c$anti"icar cada $no de estos procesos) En res$men, en los 0ltimos treinta a9os se prod$jeron grandes avances en biolog.a molec$lar -$e permitieron el desarrollo de t*cnicas molec$lares -$e admiten anali,ar en "orma r pida y precisa el genoma de los seres vivos) 6 trav*s de estas t*cnicas se obt$vieron gran cantidad de marcadores molec$lares dispersos a lo
"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
largo de todo el genoma, se constr$yeron mapas gen*ticos de diversas especies, y se $bicaron genes de resistencia a en"ermedades, plagas, etc) :os marcadores ligados a genes de inter*s agron!mico se p$eden $tili,ar para reali,ar selecci!n genot.pica temprana, en pl nt$las, y de esta manera se evita manejar cientos o miles de plantas en la selecci!n "enot.pica en invern c$lo o a campo) :a selecci!n asistida por marcadores molec$lares es $na herramienta m$y interesante para los planes de mejoramiento, ya -$e permite acelerar la selecci!n y dismin$ir los costos en el manejo de grandes poblaciones de plantas)

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
C;/#*.E0-C*;/E# ME';.;L<7*C-# El tema -$e plantea este C$aderno tiene $n nivel de complejidad -$e re-$iere ciertos conocimientos de gen*tica y biolog.a molec$lar -$e se plantearon en C$adernos anteriores, y se s$giere s$ lect$ra previa #entre ellos, los C$adernos N &, 4, &A, &4, 40, 41, 7C y 8'() 6 partir de esto, es posible la adaptaci!n de los conceptos de este C$aderno a la c$rr.c$la escolar, desde dos p$ntos de vista) >or $na parte, es posible est$diar las di"erentes t*cnicas de marcadores molec$lares, haciendo hincapi* en la sec$encia de 6DN, s$s variaciones, la posibilidad de ampli"icar el 6DN, y las di"erentes t*cnicas -$e se emplean para el aislamiento, separaci!n e identi"icaci!n de sec$encias de 6DN espec."icas) Este abordaje se adapta mejor en los a9os s$periores, o en esc$elas con especiali,aci!n en ciencias) Htro abordaje, -$e se p$ede encarar de "orma m s simple, y m s aplicable al trabajo en el a$la en la esc$ela sec$ndaria, es en"ocar el tema de marcadores molec$lares tomando como eje s$ $tilidad y aplicaci!n #a partir del es-$ema -$e se m$estra en el C$aderno1 6tili$aci!n de los marcadores moleculares) >or ejemplo, al est$diar en clase el tema de evol$ci!n, se p$ede reconocer el aporte de la gen*tica y de las t*cnicas de marcadores molec$lares en la identi"icaci!n de especies ya e+ting$idas y s$ parentesco con especies act$ales) Esto permite armar rboles geneal!gicos y reconocer las ramas -$e llevaron al desarrollo de determinada especie, a partir de otras antecesoras) Htra aplicaci!n posible, es en la identi"icaci!n de individ$os, ya sea para an lisis de "iliaci!n #paternidad( como para casos de identi"icaci!n de parentesco de personas desaparecidas a partir del 6DN de otros individ$os) H, como se plante! en el C$aderno N 8', estas t*cnicas permiten conservar la biodiversidad, a partir de la recolecci!n y c$idado de di"erentes variantes en bancos de germoplasma) En el C$aderno se desarrollan alg$nas de las aplicaciones de estas t*cnicas, ligadas "$ndamentalmente a las especies vegetales, s$ identi"icaci!n y mejoramiento) /e s$giere inc$rsionar en las otras aplicaciones de estas t*cnicas mencionadas, mediante $n trabajo de investigaci!n en el c$al los al$mnos averigMen en -$* consisten las otras aplicaciones de los marcadores molec$lares) >or ejemplo, es posible b$scar in"ormaci!n acerca de casos de "iliaci!n, incl$so es interesante la alternativa de entrevistar a alg0n especialista de instit$ciones $ hospitales -$e c$entan con bases de datos gen*ticos, o -$e reali,an este tipo de est$dios) Fambi*n se p$ede investigar la aplicaci!n de estas t*cnicas para el est$dio de la historia evol$tiva de especies) De este modo, sin abordar las t*cnicas en s$s detalles m s complejos es posible -$e los al$mnos comprendan el alcance de estas t*cnicas en di"erentes reas de investigaci!n)

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
-C'*=*.-.E# -cti"idad (3 Lectura y anlisis de un artculo periodstico
Diario Clarn, 09/08/2008 La rural de Palermo: avances en tecnologa ganadera

Ahora, los marcadores moleculares

En una jornada de Angus y el Instituto de la Carne, se detall el potencial de esta tecnologa para la produccin crnica. La ganadera argentina est lejos de dejarse arrastrar por un marco institucional des avora!le " tra!aja irmemente para producir carne de la mejor calidad# Prue!a de esto son los avances en investigaci$n gen%tica &ue se 'an desarrollado durante los (ltimos a)os para seleccionar a los mejores reproductores# * trav%s del estudio de los genes, las Di erencias +speradas entre Progenies ,D+Ps- " la o!servaci$n enotpica, se puede seleccionar a los mejores animales para lograr una ma"or rea de ojo de !i e, menor cantidad de grasa dorsal o menor porcentaje de grasa intramuscular, entre otros aspectos# Pero la (ltima caracterstica de calidad carnicera &ue se sum$ a las investigaciones es la terne.a, un actor clave para la ma"ora de los consumidores# La *sociaci$n *rgentina de *ngus ,***- " el /nstituto de Promoci$n de la Carne 0acuna *rgentina ,/PC0*presentaron en el marco de la +1posici$n 2ural de Palermo un tra!ajo conjunto so!re los aspectos gen%ticos de la terne.a " la presencia de este componente en la po!laci$n de ra.a *ngus, la primera en cantidad de animales en el pas# La investigaci$n consisti$ en anali.ar muestras de *D3 de 404 toros *ngus para determinar en ellos la recuencia de marcadores moleculares de terne.a# +l m%todo tradicional para medir la terne.a de la carne es el denominado 56arner78rat.ler5, &ue consiste en cortar la carne con una guillotina al momento de la aena " medir la uer.a de corte en 9ilogramos# +sta no 'a resultado una 'erramienta prctica para el mejoramiento del ganado, "a &ue implica matar al potencial toro padre 'aciendo reserva de semen o matar a los novillos " reali.ar una prue!a de progenie de cuatro o cinco a)os# :racias a los avances de la gen%tica " la utili.aci$n de los marcadores moleculares, se evita la aena de ejemplares " se gana en tiempo " en costo# Los marcadores moleculares de terne.a son protenas o *D3 &ue se pueden identi icar " caracteri.ar para de inir un genotipo determinado# Para esta investigaci$n se tom$ como o!jeto a la Calpastatina 29;9, la Calpana 4<=, " la Calpana >?;<, tres en.imas &ue determinan el proceso de tierni.aci$n post mortem de la carne# +l Dr# @oracio :uitou, responsa!le de la investigaci$n, e1plic$ &ue 5'a" muc'os marcadores moleculares &ue son utili.ados por las empresas, pero para este tra!ajo se eligi$ a estos tres por&ue ueron validados por al menos cinco universidades de los +stados Anidos#5 La Calpana degrada las protenas de la i!ra muscular una ve. &ue muere el animal, " eso es lo &ue a!landa la carne# @a" animales con ms en.imas de Calpana &ue otros, " por eso 'a" di erencias en la terne.a# La Calpastatina, por su parte, es la en.ima encargada de regular la acci$n de la Calpana# Cada animal 'ereda de cada uno de sus progenitores una variante gen%tica de cada marcador molecular &ue puede avorecer o no avorecer el proceso de tierni.aci$n# +s decir &ue cada animal puede ser 'omocigota para ma"or terne.a, 'omocigota para menor terne.a o 'eterocigota en cada uno de los marcadores, " la com!inaci$n de los tres marcadores determina un genotipo de ma"or o menor terne.a# +so es e1actamente lo &ue !usca registrar el estudio &ue llevan adelante el /PC0* " la *** desde el a)o 200;# Los primeros resultados de la investigaci$n sirven como punto de partida para sa!er en d$nde se encuentra la ra.a en materia de terne.a# +ntre los datos ms destaca!les, el 8,?B de los toros anali.ados tiene las seis variantes gen%ticas ,denominadas 5al%licas5- avora!les a la terne.a, " estn transmitiendo a sus progenies el <00B de esas caractersticas# *dems, 'a" un 2<,8B de los toros padres con cinco alelos avora!les, siendo %ste el genotipo ms com(n# +stos animales tam!i%n transmitirn a su descendencia caractersticas gen%ticas avora!les a la terne.a# +stos datos aportan elementos de juicio para mejorar las ra.as " optimi.ar la calidad del producto inal a trav%s de la selecci$n de los mejores ejemplares# Ceg(n *l redo :usmn, presidente de la ***, 5aun&ue la situaci$n de la ganadera argentina no sea avora!le, la (nica manera de avan.ar es seguir apostando a lo &ue uno cree5#

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
Preguntas para anali$ar el artculo 1) 2C$ les son las caracter.sticas -$e se desean mejorar en el ganado vac$no destinado a cons$mo3 A) 2>or -$* es posible mejorar esta caracter.stica en el ganado3 &) 2C$ l es el m*todo tradicional para medir terne,a3 2-$* aportan los marcadores molec$lares en *sta rea3 4) 2C$ les son los marcadores molec$lares ligados a la c$alidad de terne,a de la carne3 2N$* rol j$egan estas en,imas en el proceso de tierni,aci!n de la carne3 %) 2N$* bene"icio trae el conocimiento de estos genes al mejoramiento de esta ra,a vac$na3
0espuestas3 1) /eg0n el art.c$lo, los prod$ctores desean seleccionar a los mejores animales para lograr $na mayor rea de ojo de bi"e, menor cantidad de grasa dorsal o menor porcentaje de grasa intram$sc$lar) 6 estas caracter.sticas de inter*s para los cons$midores, se s$m! la terne,a de la carne) :a terne,a de la carne se de"ine, como la di"ic$ltad o la "acilidad con la -$e $na carne se p$ede cortar o masticar) A) El mejoramiento es posible por-$e esta caracter.stica se enc$entra gobernada por ciertos genes, con lo c$al la terne,a es $n car cter heredable, sensible al mejoramiento) &) El m*todo de OParner=Lrat,lerO es el tradicional para medir la terne,a de la carne y consiste en cortar la carne con $na g$illotina al momento de la "aena y medir la "$er,a de corte en Qilogramos) Debido a -$e este m*todo es poco pr ctico en est$dios gen*ticos en donde se deben medir los caracteres en los progenitores y la progenie, la $tili,aci!n de los marcadores molec$lares, permite gana en tiempo y en costo y evita la "aena de ejemplares) 4) :os marcadores molec$lares e+istentes asociados a terne,a son de tipo prote.nas y 6DN) >ara esta investigaci!n se est$di! la Calpastatina A'%', la Calpa.na &17, y la Calpa.na 4C%1, tres en,imas -$e determinan el proceso de tierni,aci!n post mortem de la carne) %) :a Calpa.na degrada las prote.nas de la "ibra m$sc$lar $na ve, -$e m$ere el animal, y eso es lo -$e ablanda la carne) 5ay animales con m s en,imas de Calpa.na -$e otros, y por eso hay di"erencias en la terne,a) :a Calpastatina, por s$ parte, es la en,ima encargada de reg$lar la acci!n de la Calpa.na) E+iste variante gen*tica de cada marcador molec$lar -$e p$ede "avorecer o no el proceso de tierni,aci!n) Como los marcadores se segregan de "orma ?endeliana, cada animal p$ede ser homocigota para el alelo asociado a mayor terne,a, homocigota para el relacionado a menor terne,a o heterocigota en cada $no de los marcadores, y la combinaci!n de los tres marcadores determina $n genotipo de mayor o menor terne,a) 7) :$ego del est$dio se sabe -$e el 8,CG de los toros anali,ados tiene las seis variantes gen*ticas "avorables a la terne,a, mientras -$e $n A1,8G de los toros padres poseen cinco alelos "avorables, siendo *ste el genotipo m s com0n) Estos animales transmitir n a s$ descendencia caracter.sticas gen*ticas "avorables a la terne,a) Estos marcadores molec$lares permitir n anali,ar las variantes al*licas asociadas a esta caracter.stica de

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
inter*s, optimi,ando la calidad del prod$cto "inal a trav*s de la selecci!n de los mejores ejemplares)

-cti"idad )3 -nlisis de marcadores moleculares microsatlites /e propone observar el sig$iente es-$ema y responder las preg$ntas

>reg$ntas para anali,ar el es-$ema1 1) 2N$* caracter.stica tiene el marcador molec$lar, -$e hace -$e sea considerado $n microsat*lite3 A) 2N$* t*cnica permite ampli"icar la regi!n microsat*lite3 &) 2N$* signi"ican los segmentos lineares rojos y las "lechas contig$as a la regi!n microsat*lite3 4) 2N$* t*cnica permite discriminar o di"erenciar los "ragmentos ampli"icados -$e poseen distinto tama9o3 26 -$* se deben las di"erencias en los tama9os de dichos "ragmentos de 6DN3 %) En el es-$ema del gel, 2c$ ntas m$estras de 6DN de di"erentes individ$os se han incl$ido en el an lisis3 7) 2c$ ntos alelos hay en este conj$nto de % individ$os3 2C$ l es el de mayor tama9o3 2R el de menor3 C) 2C$ l es el n0mero m +imo de alelos -$e p$ede tener $n individ$o diploide3 8) Describir -$* individ$os son homocigotas o heterocigotas y -$* alelos poseen)
0espuestas 1) Est constit$ido por sec$encias repetitivas del din$cle!tido 6B #o CF en la cadena complementaria()
"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
A) :a regi!n repetitiva se p$ede ampli"icar #o copiar( mediante la t*cnica de >CD &) :as lineas rojas adyacentes a la regi!n microsat*lite, representa a la cadena de 6DN -$e rodea al microsat*lite) Esta sec$encia de 6DN debe conocerse para poder dise9ar los cebadores #segmentos de 6DN de simple cadena, se9alados con "lechas en el es-$ema( complementarios a dicha sec$encia) :os cebadores a derecha e i,-$ierda del microsat*lite determinar n los e+tremos de la regi!n del 6DN del -$e se obtendr n millones de copias l$ego de reali,ar la >CD) 4) :a di"erencia en tama9o de los "ragmentos de 6DN est dada por el di"erente n0mero de repeticiones de las sec$encias en tandem) 6 cada "ragmento de di"erente tama9o se lo llama alelo) >or ejemplo, en el es-$ema se m$estra $n alelo de 10 repeticiones) /e debe tener en c$enta -$e en individ$os dipolides #An(, en cada loc$s, se enc$entran A regiones microsat*lites #$na en cada cromosoma hom!logo() /i el individ$o posee dos microsat*lites del mismo tama9o, se lo considera homocigota para ese loc$s, si en cambio las regiones microsat*lites en los dos cromosomas hom!logos son di"erentes, el individ$o es heterocigoto para ese loc$s) 8na manera de separar los "ragmentos #alelos( de di"erente tama9o, es por medio de electro"oresis en geles #de agarosa o acrilamida() El 6DN, -$e tiene carga neta negativa, migrar hacia el polo positivo del campo el*ctrico creado a trav*s del gel) Debido a la porosidad de dichos geles, las mol*c$las m s grandes #alelos con mayor n0mero de repeticiones( -$edar n retra,adas en el gel y correr n menos #m s cerca del polo negativo(, mientras -$e las m s pe-$e9as se despla,ar n m s) %) /e incl$yeron 6DNs de % individ$os, en los c$ales se reali,! previamente la >CD, para ampli"icar la regi!n microsat*lite) 7) 5ay & alelos de di"erentes tama9os #indicados como alelos 6, L y C() El alelo de mayor tama9o es el 6 #corre menos en el gel(, mientras -$e el de menor tama9o es el C) C) 8n individ$o diploide posee A alelos) /i los dos alelos son del mismo tama9o #se ven como $na 0nica banda en el gel( se dice -$e es homocigota, mientras -$e si los dos alelos son di"erentes, es heterocigota para ese loc$s) 8) Individ$o 11 homocigota, posee A alelos ig$ales #L(S indiv) A1 heterocigota con los alelos L y CS indiv) &1 homocigota, con el alelo 6S indiv) 41 homocigota para el alelo CS indiv) %1 heterocigota, con los alelos 6 y L)

-cti"idad +3 .etecti"es moleculares de alimentos

#E+tra.do de Liotecnolog.a en el sector alimentario) Benoma Espa9a http1TTUUU)gen= es)orgT1AV>8L:TdocsTLIHFECNV/ECFV6:I?)pd" (

:as aplicaciones de la t*cnica de >CD en el control de alimentos son n$merosas) /e p$eden $tili,ar para identi"icar especies c rnicas y especies de pescado de inter*s alimenticio, detectar la presencia de agentes pat!genos en los alimentos #/almonella spp), :isteria monocytogenes, Escherichia coli H1%C15C( o detectar la presencia o a$sencia de organismos gen*ticamente modi"icados #HB?( en los alimentos) En la sig$iente "ig$ra se m$estra el res$ltado obtenido al ampli"icar por >CD $n gen $niversal presente en todas las especies animales) En este ensayo, cada especie genera $na banda de ampli"icaci!n de $n tama9o determinado) 6s., las m$estras problema #de Ca 1A( p$eden compararse con las m$estras control #1 a 7(
"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
correspondientes a cabra, pollo, vaca, oveja, cerdo y caballo) :as calles C a 1A corresponden a distintos alimentos, en los c$ales se -$iere determinar -$* tipo de carne poseen) :as calles C y 8 son d$plicados de la m$estra 6, las ' y 10 pertenecen a la m$estra L y las calles 11 y 1A, corresponden a la m$estra inc!gnita C)

Feniendo en c$enta el tama9o relativo de los genes ampli"icados en las m$estras control, 2podr.a decir -$* prod$cto animal poseen los alimentos 6, L y C3
Desp$estas 6l comparar los tama9os al*licos, se p$ede concl$ir -$e1 =la m$estra 6 #calles C y 8( contiene pollo, =la m$estra L #calles ' y 10( contiene en s$ composici!n carne de pollo, vaca y cerdo) =la m$estra C #calles 11 y 1A(, al ig$al -$e la m$estra 6, contiene s!lo carne de pollo)

Material de Consulta

:ibro1 Liotecnolog.a y mejoramiento vegetal) Ediciones Instit$to Nacional de Fecnolog.a 6gropec$aria) Editores1 Dra) @iviana Echeni-$e, Dra) Clara D$binstein, Ing) 6gr) :$is ?roginsQi) Cap.t$los 4 y % http1TTUUU)argenbio)orgTinde+)php3 actionWbibliotecaIoptW8IvieUW1 ?as$elli, D)P) 1''') 8so de marcadores molec$lares en el mejoramiento gen*tico de especies hort.colas) 6vances en 5ortic$lt$ra) 4 #1(1 71=C%)

Liotecnolog.a en el sector alimentario) Benoma Espa9a http1TTUUU)gen=es)orgT1AV>8L:TdocsTLIHFECNV/ECFV6:I?)pd"

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.

EDICIN N 108
?arcadores molec$lares1 N$* son, c!mo se obtienen y para -$* valen http1TTUUU)ciencias)$ma)esTp$blicacionesTenc$entrosTENC8ENFDH/4'Tmarcadores)html Introd$cci!n al mejoramiento de plantas asistido por marcadores molec$lares) 8niversidad Nacional del Nordeste) 6rgentina) http1TTagr)$nne)ed$)arT"aoTNica= pptTDojas)pd"

"El Cuaderno de Por Qu Biotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el e uipo pedag!gico del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa. #u reproducci!n est autori$ada %a&o la condici!n de ue se aclare la autora y propiedad de este recurso pedag!gico por parte del Programa Educati"o Por Qu Biotecnologa.