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ROSNGELA UHRIG SALVATORI GREICE ALINE KAISECAMP WOLF FABOLA DRESCH ANDREIA APARECIDA GUIMARES STROHSCHOEN
LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA:
normas gerais, instrues de trabalho e Procedimentos Operacionais Padres (POP)
Rosngela Uhrig Salvatori Greice Aline Kaisecamp Wolf Fabola Dresch Andreia AParecida Guimares Strohschoen
Laboratrio de Microbiologia: normas gerais, instrues de trabalho e Procedimentos Operacionais Padres

1 edio
Lajeado, 2013
Coordenao e reviso final: Ivete Maria Hammes Editorao: Bruno Henrique Braun e Marlon Alceu Cristfoli Capa: Bruno Henrique Braun
Avelino Tallini, 171 - Bairro Universitrio - Cx. Postal 155 - CEP 95900-000, Lajeado - RS, Brasil. Fone: (51) 3714-7024 / Fone/Fax: (51) 3714-7000 E-mail: editora@univates.br / http://www.univates.br/editora
S182
Salvatori, Rosngela Uhrig Laboratrio de Microbiologia: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres / Rosngela Uhrig Salvatori, Greice Aline Kaisecamp Wolf, Fabola Dresch e Andreia Aparecida Guimares Strohschoen - Lajeado: Ed. da Univates, 2013. 72 p. ISBN 978-85-8167-044-7 1. Microbiologia 2. Manual de laboratrio I. Ttulo CDU: 579(035)
Ficha catalogrfica elaborada por Nalin Ferreira da Silveira CRB 10/2186
Todos os textos so de exclusiva responsabilidade das autoras.
Dados das autoras
ANDREIA APARECIDA GUIMARES STROHSCHOEN

Possui graduao em Licenciatura em Cincias com habilitao Plena em Biologia pelo Centro Universitrio UNIVATES (1998). Tem especializao em Planejamento e Gesto Ambiental pelo Centro Universitrio UNIVATES (2000). Realizou Mestrado em Biologia Animal pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS) (2002) e Doutorado em Cincias: Ecologia pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS) (2011). Atualmente professora do Departamento de Cincias Biolgicas e da Sade do Centro Universitrio UNIVATES, como professora nos cursos de graduao, especializao e no Programa Mestrado em Ensino de Cincias Exatas.
ROSNGELA UHRIG SALVATORI

Possui graduao em Cincias pela Universidade do Vale do Rio dos Sinos (1981), graduao em Habilitao em Biologia - Licenciatura Plena pela Faculdade de Filosofia Cincias e Letras de Santa Cruz do Sul (1983) e mestrado em Microbiologia Agrcola e do Ambiente pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul (1999). Atualmente professor do Centro Universitrio Univates, socio da Sociedade Brasileira de Microbiologia, comisso - CFAP do Conselho Regional de Biologia 3 Regio e coord. lab. de microbiologia didtico do Centro Universitrio Univates. Durante 15 anos foi Gerente Tcnica do Laboratrio de Microbiologia do Unianlises - Univates. Tem experincia na rea de Microbiologia, com nfase em Microbiologia dos Alimentos, atuando principalmente nos seguintes temas: salmonela, gua, embutidos, coliformes termotolerantes, biossurfactantes e Boas Prticas de Fabricao.
FABOLA DRESCH
Graduanda do curso de Biomedicina, Centro Universitrio UNIVATES. Funcionria-tcnica do Laboratrio Didtico de Microbiologia do Centro Universitrio UNIVATES.
GREICE ALINE KAISECAMP WOLF

Graduanda do curso de Cincias Biolgicas, Centro Universitrio UNIVATES. Estagiria do Laboratrio Didtico de Microbiologia do Centro Universitrio UNIVATES.
LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres
Apresentao
Os assuntos pertinentes Microbiologia so fundamentais para diferentes reas, desde a pesquisa bsica, aplicada, indstria, etc. No entanto, poucos materiais apresentam noes bsicas de trabalho em um laboratrio de Microbiologia indispensveis para os estudantes. Este fato nos motivou a preparar este manual. As informaes aqui apresentadas so o resultado preliminar do trabalho dos profissionais que atuam em laboratrios de Microbiologia, sendo apresentados conhecimentos obtidos na experincia prtica adquirida ao longo dos anos ministrando disciplinas dessa rea, como Microbiologia Experimental e Microbiologia de Alimentos. Os experimentos propostos seguem os Padres Internacionais e so imprescindveis para a realizao de qualquer atividade em um laboratrio de Microbiologia. Contempla as Normas Gerais para o bom funcionamento de um Laboratrio de Microbiologia, os principais equipamentos necessrios para o seu funcionamento, aqui apresentados como Instrues de Trabalho. Tambm as principais metodologias inerentes a anlise de alimentos, transformadas em Procedimentos Operacionais Padres (POPs). Destinase principalmente a estudantes como um material auxiliar no seu processo de aprendizagem, bem como pretende subsidiar a prtica docente buscando a otimizao do tempo do professor que realiza atividades
prticas vinculadas s anlises microbiolgicas. Foi organizado para ser verstil e de fcil utilizao tanto para o estudante quanto para o professor. Esta a primeira verso de um manual prtico, sendo que estamos cientes de que a microbiologia uma cincia dinmica, por isso suas tcnicas so rapidamente modificadas, refinadas e atualizadas. Com isto, espera-se apresentar aqui algumas atividades bsicas e futuramente realizar a complementao, aprofundamento e atualizao. As autoras
AGRADECIMENTO
Agradecemos ao Centro Universitrio UNIVATES pelo apoio financeiro para a execuo deste projeto. Ao Laboratrio Didtico de Microbiologia do Centro Universitrio UNIVATES. As autoras
NORMAS GERAIS Instruo de Trabalho...... 8
Sumrio
NORMAS DE SEGURANA........................................9 LIMPEZA DO LABORATRIO...................................11 DESCARTE DE MATERIAL E DE AMOSTRAS...........12 USO E LIMPEZA DO APARELHO DE OSMOSE REVERSA................................................................... 13 5 - USO E LIMPEZA DAS BALANAS ELETRNICAS...14 6 - USO E LIMPEZA DO BANHO-MARIA......................16 7 - USO E LIMPEZA DA CAPELA DE FLUXO LAMINAR..................................................................18 8 - LAVAGEM, PREPARO E ESTERILIZAO DE MATERIAIS PARA ANLISES MICROBIOLGICAS...19 9 - USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS BACTERIOLGICAS.................................................. 23 10 - USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS DE ESTERILIZAO E SECAGEM...................................25 11 - USO E LIMPEZA DO FORNO DE MICRO-ONDAS...27 12 - USO E LIMPEZA DAS GELADEIRAS.........................29 13 - USO E LIMPEZA DO HOMOGENEIZADOR DE AMOSTRAS (STOMACHER)..................................... 30 14 - USO E LIMPEZA DA INCUBADORA PARA BOLORES E LEVEDURAS.......................................... 31 15 - USO E LIMPEZA DA AUTOCLAVE............................ 33 16 - USO E LIMPEZA DO AGITADOR DE TUBOS........... 36 17 - USO E LIMPEZA DO CONTADOR DE COLNIAS.... 37 18 - USO E LIMPEZA DO ESTERILIZADOR A VCUO.... 38 19 - PESAGEM DE AMOSTRAS....................................... 39 20 - PREPARO DA SUSPENSO INICIAL E DILUIES DECIMAIS DE AMOSTRAS.......................................40
1 - 2 - 3 - 4 -
NORMAS GERAIS Procedimento Operacional Padro.......................................... 41

1 - PREPARAO E CONSERVAO DE MEIOS DE CULTURA...................................................................42 2 - CONTAGEM TOTAL DE MICRORGANISMOS EM GUA UTILIZANDO O MEIO GAR NUTRIENTE.....44 3 - CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS EM PRODUTOS COM ATIVIDADE DE GUA MENOR OU IGUAL A 0,95......................................................46 4 - CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS EM PRODUTOS COM ATIVIDADE DE GUA MAIOR QUE 0,95...................................................................48 5 - CONTAGEM DE Enterobacteriaceae...............50 6 - CONTAGEM PADRO DE MICRORGANISMOS MESFILOS AERBIOS ESTRITOS E FACULTATIVOS VIVEIS...........................................52 7 - CONTAGEM TOTAL DE COLIFORMES TOTAIS E TERMOTOLERANTES...............................................54 8 - NMERO MAIS PROVVEL DE COLIFORMES TOTAIS E TERMOTOLERANTES EM GUA.............56 9 - CONTAGEM DE STAPHYLOCOCCUs AUREUs EM GAR BAIRD-PARKER...............................................59 10 - DETECO E ENUMERAO DE LIsTERIA MONOCYTOGENEs..................................................62 11 - Deteco de SALMONELLA...................................66 12 - CONTAGEM DE Bacillus cereus POR INCUBAO A 30 C................................................69 13 - CONTAGEM DE CLOsTRIDIUM PERFRINGENs......71
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NORMAS GERAIS
Instruo de Trabalho
1- NORMAS DE SEGURANA
PRINCIPAIS NORMAS de Segurana EM Laboratrio de Microbiologia

1. Refrigeradores, Micro-ondas e estufas no so apropriados para aquecer ou conservar alimentos a serem consumidos; 2. No comer, beber ou fumar dentro do laboratrio; 3. O uso do avental de algodo obrigatrio; 4. As mesas ou bancadas de trabalho devem ter superfcie lisa, de fcil limpeza e de desinfeco; 5. Quando da manipulao de material txico ou infectante, usar luvas de proteo; 6. As pipetas usadas devem ser colocadas horizontalmente em soluo desinfetante imediatamente aps o uso, antes de se proceder a sua limpeza e esterilizao; 7. No colocar materiais contaminados sobre a bancada. Esses materiais devem ser colocados em recipientes apropriados e esterilizados em autoclave; 8. Cuidado ao acender o bico de gs (bico de Bunsen). Verificar se no existem substncias inflamveis por perto; 9. Flambar alas, agulhas e pinas antes e aps o uso;
10. Todo o material deve ser identificado. As etiquetas devem ser autoadesivas; 11. No caso de derramamento de algum material infeccioso, cobrir imediatamente a rea com um desinfetante adequado e deixar de 15 a 30 minutos antes da limpeza; 12. Devem ser registrados os acidentes como o derrame de cultura, ferimentos etc. Os ferimentos devem ser desinfetados e cobertos com esparadrapo; 13. Os tubos com cultura devem ser conservados sempre em suas respectivas estantes; 14. As culturas de fungos, quando esporuladas, apresentam riscos de infeco respiratria ou de reao alrgica, mesmo sem formar aerossis. Estas culturas devem ser manipuladas rapidamente e sem movimento brusco; 15. No cheirar os meios de cultura inoculados; 16. As placas de contagem de bactrias, preparadas com meios incuos como gar nutritivo, no podem ser consideradas inofensivas; 17. Lminas e lamnulas utilizadas devem ser colocadas em recipiente com desinfetante; 18. Lavar e desinfectar as mos antes de iniciar uma atividade laboratorial. Repetir o mesmo procedimento ao final da anlise;
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1 - NORMAS DE SEGURANA
19. Limpar a mesa de trabalho, antes e depois de cada sesso de trabalho, usando desinfetante; 20. Desinfectar a bancada de trabalho no incio e trmino de cada atividade; 21. Retirar os materiais, amostras e reagentes, bem como equipamentos e aparelhos, da bancada de trabalho to logo terminar a tarefa; 22. Papis e resduos utilizados s devem ser colocados no recipiente de coleta de lixo comum quando no apresentarem risco de contaminao; 23. indispensvel a presena de extintores de incndio, estrategicamente posicionados no ambiente laboratorial. Os extintores devem ser do tipo p qumico pressurizado (tipo BC), podendo ser utilizados em casos de acidentes eltricos ou em materiais inflamveis; 24. Desenvolver o hbito da limpeza e da organizao; 25. No permitir a entrada ou permanncia de pessoas estranhas no laboratrio.
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1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO
2- LIMPEZA DO LABORATRIO
Descrever os procedimentos de limpeza e desinfeco adotados para o laboratrio de microbiologia. Aplicase ao Laboratrio de Microbiologia.
Ao iniciar o trabalho no laboratrio obrigatrio a lavagem das mos e antebrao com detergente apropriado, completando-se a desinfeco com a aplicao de lcool 70%.
2 REFERNCIAS NORMATIVAS
Manual de Gesto da Qualidade.
4.4 Lmpadas
As lmpadas do laboratrio so limpas a seco, semestralmente. Eventualmente lmpadas so substitudas, quando necessrio.
3 MATERIAIS
Luvas de borracha, lcool 70% e hipoclorito de sdio.
4.5 LimpeZa das vidrarias e materiais utiliZados

Os frascos utilizados para amostragem de guas so colocados de molho em soluo de hipoclorito de sdio e sabo lquido por no mnimo 24 horas. Lavados com gua corrente, detergente e esponja, retirando todos os resduos do seu interior.
4 PROCEDIMENTO 4.1 Bancadas

Bancadas, na superfcie das quais so realizadas as anlises microbiolgicas, devem ser limpas com lcool 70% antes de iniciar a anlise e ao trmino da mesma.
4.2. Piso
O piso do laboratrio de microbiologia limpo e desinfetado diariamente com 5 mL de soluo de hipoclorito de sdio a 2% , em um litro de gua.
5 REFERNCIAS
Mtodos de Anlises Microbiolgicas para alimentos LARA. Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de alimentos ITAL
4.3 Funcionrios
Os usurios do laboratrio usam jaleco e touca durante os procedimentos.
6 REGISTROS
No aplicvel.
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4.2 Descarte de Materiais no ReutiliZveis

Placas de Petri e ponteiras so autoclavadas aps a realizao de anlises e descartadas conforme determinado na Instituio, ou seja, destinados ao lixo orgnico.
3- DESCARTE DE MATERIAL E DE AMOSTRAS
Descrever o procedimento de descarte de material utilizado e das amostras processadas no laboratrio de microbiologia. Aplica-se ao Laboratrio de Microbiologia Didtico.
Projeto Destinao dos Resduos Internos UNIVATES.
4.3 Descarte de Materiais TXicos e Perfuro-cortantes

Estes materiais so acondicionados em caixa coletora prpria, sendo seu recolhimento efetuado quando atingida a capacidade da mesma.
3 MATERIAIS
Autoclave, caixa coletora para vidraria danificada, saco para esterilizao, saco de lixo comum, caixa coletora para material txico e perfuro-cortantes.
4.4 Descarte de Vidrarias Danificadas

Estas vidrarias so armazenadas em caixa coletoras prprias e destinadas a usina de reciclagem da prpria Instituio para fins de reaproveitamento. As vidrarias quebradas com meio de cultura so autoclavadas antes do descarte, acondicionadas em recipientes apropriados (Becker de 1000 mL, potes plsticos).
4 PROCEDIMENTO 4.1 Descarte de Amostras

As amostras so descartadas quando do trmino da anlise. As amostras processadas so armazenadas em sacos adequados e destinados esterilizao em autoclave a 121 +/- 1C por 20 min. Posteriormente o material encaminhado ao destino estabelecido para lixo orgnico na Instituio. As alquotas de amostras utilizadas para as diluies nos processos analticos so autoclavadas da mesma forma e tambm encaminhadas ao lixo orgnico da Instituio.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
6 REGISTROS
No aplicvel.
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4- USO E LIMPEZA DO APARELHO DE OSMOSE REVERSA
Descrever o procedimento de uso e limpeza do aparelho de Osmose Reversa. Em laboratrios, a osmose reversa utilizada para garantir a mxima pureza em seus produtos.
utilizada nos procedimentos analticos, bem como na ltima lavagem de vidrarias e materiais pertinentes ao laboratrio.
5 REFERNCIAS
Manual de utilizao do equipamento de osmose reversa Marconi.
Manual de Instrues da Osmose Reversa.
6 REGISTROS 3 MATERIAIS
A osmose reversa um processo de separao em que um solvente separado de um soluto de baixa massa molecular por uma membrana permevel ao solvente e impermevel ao soluto. A membrana permitir apenas a passagem de solvente (gua pura), retendo os solutos (sais dissolvidos e contaminantes). Isso ocorre quando se aplica uma grande presso sobre este meio aquoso, o que contraria o fluxo natural da osmose. Pr-filtros, filtro de carvo ativado, coluna de osmose reversa, coluna de resina mista e filtro absoluto. No aplicvel.
4 PROCEDIMENTO 4.1 UtiliZao da osmose reversa

O equipamento de osmose reversa no laboratrio de Microbiologia serve para a obteno de gua a ser
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5- USO E LIMPEZA DAS BALANAS ELETRNICAS
Descrever o procedimento de uso e limpeza das balanas. A balana um equipamento utilizado para a pesagem de alquotas de amostras e para o preparo de solues nutrientes necessrias para os procedimentos analticos.
em eventuais transportes, ou quando a balana for enviada assistncia tcnica. Importante: O aperto na colocao do dispositivo deve ser efetuado com a mo, sem usar ferramentas auxiliares, tais como alicate, ou outros instrumentos. Coloc-la sobre a mesa de trabalho em local adequado, isento de radiao de calor, trepidaes, correntes de ar e umidade. Encaixar corretamente o prato na balana. Encaixar o conector da fonte de alimentao no plugue existente na parte traseira da balana. NUNCA LIGAR A FONTE REDE, SEM ANTES T-LA CONECTADA BALANA. Nivelar a balana pelos ps niveladores at centralizar a bolha de nvel.
Manual de Instrues da Balana Eletrnica.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%, esponjas e panos de limpeza adequados.
4 PROCEDIMENTO 4.1 Descrio dos componentes

Prato da balana; entrada da fonte de alimentao; ps niveladores; tecla liga/desliga; tecla calibrao/ pesagem; nvel da balana; tecla tara; display.
4.3 UtiliZao das balanas

Ao ligar rede eltrica o display mostrar DESLIGADO. Aguardar 30 minutos de pr-aquecimento. Se a fonte for desligada ou faltar energia, aguardar novo pr-aquecimento. NUNCA DESLIGAR A BALANA PELO CONECTOR TRASEIRO.
4.2 Instalao das balanas

Retirar a balana da embalagem. Retirar totalmente a trava de segurana para transporte, localizada na parte inferior da balana, girando-a no sentido anti-horrio. Girar a tampa protetora at fechar o orifcio. Guardar o dispositivo de travamento para ser usado
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5- USO E LIMPEZA DAS BALANAS ELETRNICAS
Pressionar L/D. Durante trs segundos aparecero todos os pontos do display. A seguir, o display mostrar a verso da balana e logo aps: 0.00 g (ou 0,0 g conforme o modelo da balana). O sinal ~ indica leitura no estabilizada, e o sinal = indica leitura estabilizada. Se, ao ligar a balana aparecer: Erro: plat. C/P (erro, plataforma com peso), basta remover o peso ou o vasilhame do prato. Ao desligar a balana pela tecla L/D, o display mostrar: DESLIGADO, contudo a balana continuar energizada para ser mantida em equilbrio trmico. Zerar a balana antes de efetuar as pesagens, pressionando T. Se for necessrio o uso de vasilhame, coloc-lo sobre o prato da balana e pressionar T para trav-lo. Realizar a pesagem pretendida. Retirar o vasilhame. Ao iniciar nova pesagem ter o cuidado de verificar se a balana est zerada.
Passar um pano umedecido com gua e detergente neutro. No utilizar detergentes agressivos (solventes ou similares). Cuidar para que no escorra lquido para o interior da balana. Para evitar que isto acontea, passar um pano seco e macio, logo aps a limpeza com o pano mido. Se houver alguma sujeira no prato entre uma pesagem e outra, remover com algodo ou perfex umedecido em lcool 70%.
5 REFERNCIAS
Manual de utilizao da balana eletrnica Tecnal. Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de alimentos ITAL. BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo: Melhoramentos, 1975. LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000.
4.4 LimpeZa
A limpeza realizada no final da rotina de trabalho. Antes de iniciar a limpeza, desconectar a balana da rede de corrente eltrica.
6 REGISTROS
No aplicvel.
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4.2 Caractersticas
O banho-maria um equipamento constitudo em chapa de ao inox, com paredes duplas e isoladas com l de vidro. A tampa e as estantes so de ao inoxidvel. Deve-se optar pelos banhos-maria que apresentam tampa em cunha, que evitam gotejamento da gua evaporada, fazendo com que esta corra para as extremidades da mesma.
6- USO E LIMPEZA DO BANHO-MARIA
Descrever o procedimento de uso e limpeza do banho-maria. O banho-maria um equipamento utilizado para manter uma soluo ou qualquer outro material a uma temperatura constante. utilizado tambm, para preparao de meios de cultura e para incubao de micro-organismos. Em casos de incubaes exigentes temperatura, utilizar o banhomaria com circulao de gua.
Manual de Instrues do banho-maria.
4.3 UtiliZao do banho-maria

Abrir a tampa e colocar gua at que a soluo a ser preparada fique submersa. No caso de incubao de tubos inoculados, estes devem permanecer mergulhados na gua, at uma altura superior superfcie do meio de cultura. Introduzir o material a ser incubado. Regular o termostato para a temperatura adequada. Ligar a chave eltrica. Atingida a temperatura requerida, a lmpada-piloto se apaga. Utilizar termmetro temperatura. para a verificao da
3 MATERIAIS
Termmetro, gua destilada, sabo neutro, lcool 70%, esponja e panos adequados.

Termostato automtico: de 20 C a 120 C. Lmpada piloto: quando acesa indica que o banhomaria est ligado; ao atingir a temperatura desejada, a luz se apagar. Chave liga-desliga: com chave reversvel, que seleciona a voltagem 110 ou 220 volts.
O tempo de incubao e a temperatura variam de acordo com o meio e o indicado pelo fabricante.
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6- USO E LIMPEZA DO BANHO-MARIA
No caso de manuteno de meios com gar, no estado lquido, recomenda-se a temperatura mxima de 45 C, para no comprometer nutrientes presentes no meio. A temperatura para a cultura de micro-organismos obedece a metodologia utilizada.
BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo: Melhoramentos, 1975. LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000.
4.4 Controle de temperatura

Para controlar a temperatura mxima atingida utilizar termmetro de mxima com trava. Registrar apropriadamente os dados pertinentes ao controle de temperatura.
6 REGISTROS
No aplicvel.
4.5 LimpeZa
A limpeza feita semanalmente com gua e detergente neutro. Aps a limpeza, feita a desinfeco com lcool 70%.
5 REFERNCIAS
Manual de utilizao do banho-maria. Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de alimentos ITAL.
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4.2 LimpeZa
A limpeza feita diariamente: antes do incio dos procedimentos analticos e ao final destes; Passar um pano umedecido com lcool 70%; caso houver necessidade, limpar com detergente neutro; Remover todo o vestgio de espuma e, novamente proceder a desinfeco; Quando usar lcool para a desinfeco, cuidar para no passar nas reas em acrlico, pois ficaro irreversivelmente foscas.
7- USO E LIMPEZA DA CAPELA DE FLUXO LAMINAR
Descrever o procedimento de uso e limpeza da capela de fluxo laminar. O equipamento destinado ao procedimento de inoculao das amostras.
Manual de Instrues da Capela de Fluxo Laminar.
3 MATERIAIS
Lmpada UV, detergente neutro, cido peractico 0,2 % ou lcool 70%.
5 REFERNCIAS
Manual de Mtodos de Anlises Microbiolgicas em Alimentos ITAL BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo: Melhoramentos, 1975. LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000, 129 p.
4 PROCEDIMENTOS 4.1 UtiliZao da capela de fluXo laminar

Antes de iniciar os trabalhos, fazer a desinfeco com lcool 70%, de toda a parte interna do fluxo; Ligar o aparelho; Ligar a lmpada germicida e esperar 15 minutos, no mnimo, para deslig-la; Colocar todo o material necessrio para o procedimento evitando o afastamento do fluxo laminar; Manipular rapidamente as amostras, mas com segurana para evitar erros e desperdcios. O descarte de pipetas e outros materiais deve ser feito em utenslio prprio que permanece prximo cabine do fluxo laminar.
6 REGISTROS
No aplicvel.
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4 PROCEDIMENTOS
Antes de iniciar o procedimento de lavagem, retirar a identificao das vidrarias com algodo umedecido em lcool ou acetona.
8- LAVAGEM, PREPARO E ESTERILIZAO DE MATERIAIS PARA ANLISES MICROBIOLGICAS
Descrever a relao de materiais utilizados nos procedimentos analticos do Laboratrio de Microbiologia bem como o seu preparo e esterilizao. Laboratrio de Microbiologia.
Associao Brasileira de Normas Tcnicas ABNT1295
4.1 Preparo de provetas, frascos de ErlenmeYer, frascos shott e bQueres 4.1.1 Lavagem
Lavar com gua e detergente, utilizando esponja e escovete. Caso os materiais apresentem incrustaes ou resduos gordurosos, proceder imerso destes em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e detergente neutro. Enxaguar dez vezes com gua corrente, enchendo e esvaziando totalmente a vidraria. Utilizar no ltimo enxgue, gua destilada ou deionizada. Deixar drenar a gua das vidrarias e secar em estufa a 100 C.
3 MATERIAIS
lcool 70%, algodo hidrfilo, algodo hidrfobo, autoclave, balana analtica, bastes de vidro, destilador, deionizador para gua, ou aparelho de osmose reversa, escovetes de diversos tamanhos, esponjas de ao e de fibra sinttica, esptulas de ao inoxidvel, estufa de esterilizao e secagem, equipada com termmetro, papel alumnio ou papel Kraft, luvas de amianto, luvas de borracha, provetas graduadas de 1000 mL, 500 mL, 250 mL e 100 mL de borossilicato ou vidro neutro, tesoura, pina de ao inoxidvel, indicadores de esterilizao (fita ou ampola com suspenso de Bacillus stearothermophilus e Bacillus subtillus), bico de Bunsen, trip, tela de amianto, bqueres de borossilicato ou vidro neutro, estiletes, fita adesiva tipo crepe ou barbante, gaze.
4.1.2 Preparo e esteriliZao

Colocar tampo de algodo hidrfobo e gaze no bocal dos frascos erlenmeyer. Cobrir com folha de alumnio ou papel Kraft e fixar com barbante, atilho ou fita adesiva tipo crepe.
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Cobrir os bocais das provetas e dos bqueres com folha de alumnio ou papel Kraft e fixar com fita adesiva tipo crepe, atilho ou barbante. Esterilizar em autoclave a 121 C, por 30 min ou em estufa a 170 C 180 C por 2 horas. Identificar o material com data de esterilizao e prova de esterilizao. Observao: Frascos destinados ao preparo de meios de cultura, que so submetidos esterilizao por autoclave no momento do preparo do meio, dispensam esterilizao prvia.
Enxaguar, tantas vezes quantas forem necessrias, at a eliminao completa dos resduos. Enxaguar com gua destilada ou deionizada. Secar em estufa a 100 C.
4.3.2 EsteriliZao
Colocar algodo hidrfobo no bocal das pipetas. Acondicionar em porta-pipetas ou embrulhar em grupos em papel Kraft. Identificar o material com nome, volume, data de esterilizao e prova de esterilizao. Esterilizar em estufa a 170 C, por 2 horas ou em autoclave a 121 C por 30 minutos. Identificar o material com data de esterilizao e prova de esterilizao.
4.2 Placas de Petri descartveis usadas

Colocar em saco prprio para autoclave, esterilizar a 121 +/- 1 C por 30 minutos e descartar.
4.3 Preparo de pipetas 4.3.1 Lavagem

Retirar o algodo do bocal de cada pipeta com estilete de ponta fina ou agulha histolgica. Imergir as pipetas em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e detergente por 24 horas. Enxaguar em gua corrente. Se necessrio, imergir em soluo de hexano alcalino at total eliminao dos resduos.
4.4 Preparo de tubos de Durham 4.4.1 Lavagem

Colocar em um recipiente com gua e levar ao micro-ondas at ferver. Imergir em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e detergente neutro por no mnimo 24 horas. Lavar os tubos com gua e detergente.
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Colocar, se necessrio, os tubos em recipiente com soluo hexano alcalino at total eliminao dos resduos. Enxaguar dez vezes em gua corrente, enchendo e esvaziando totalmente os tubos. Colocar em um recipiente com gua destilada ou deionizada e levar ao micro-ondas at ferver. Deixar esfriar e retirar bem a gua. Secar em estufa a 100 C. Os tubos de Durham dispensam prvia esterilizao.
Utilizar no ltimo enxgue, gua destilada ou deionizada. Deixar escorrer bem toda a gua, colocar os tubos para secar em estufa a 100 C.
4.5.2 Tampas
Imergir em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e detergente neutro por no mnimo 24 horas. Lavar com gua e detergente. Enxaguar dez vezes em gua corrente. Utilizar no ltimo enxgue, gua destilada ou deionizada. Deixar escorrer a gua e secar em estufa a 50 C.
4.5 Preparo de tubos de ensaio com tampas 4.5.1 Lavagem

Esvaziar o contedo do tubo e colocar de molho em soluo de hipoclorito de sdio a 2% e detergente neutro por no mnimo 24 horas. Lavar com gua e detergente, utilizando escovetes e esponjas para retirar resduos internos. Enxaguar em gua corrente. Colocar, se necessrio, os tubos em recipiente contendo soluo hexano alcalino at total eliminao dos resduos. Enxaguar dez vezes em gua corrente, enchendo e esvaziando totalmente os tubos.
4.5.3 EsteriliZao
Esse procedimento necessrio para tubos utilizados para conter meios de cultura j estreis ou para solues em ensaios complementares especficos. Vedar os tubos secos com as tampas, embrulhar em papel Kraft em grupos de trs ou cinco, de acordo com a utilizao e esterilizar em autoclave a 121 C, por 30 min, ou em estufa a 180 C, por 2 horas. Identificar com nome, volume, data de esterilizao e prova de esterilizao.
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4.6 Preparo e esteriliZao de pinas 4.6.1 Lavagem

Lavar as pinas com gua e detergente.
4.8 Ponteiras descartveis usadas

Esterilizar em autoclave a 121+/-1 C, por 30 minutos e descartar.
4.6.2 EsteriliZao
Embrulhar em grupos as pinas em papel Kraft ou papel alumnio. Esterilizar em autoclave a 121 C, por 30 min, ou em estufa a 180 C, por 2 horas. Identificar com nome, data de esterilizao e prova de esterilizao.
5 REFERNCIAS
Mtodos de Anlises Microbiolgicas para alimentos LARA. Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de alimentos ITAL.
6 REGISTROS
No aplicvel.
4.7 Preparo e esteriliZao de bastes tipo hQuei 4.7.1 Lavagem

Lavar o material com gua e detergente.
4.7.2 EsteriliZao
Embrulhar individualmente os bastes em papel Kraft ou papel alumnio. Esterilizar em autoclave a 121 C, por 30 min, ou em estufa a 180 C, por 2 horas. Identificar o material com data de esterilizao e prova de esterilizao.
23
9- USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS BACTERIOLGICAS
Descrever o procedimento de uso e limpeza de estufas bacteriolgicas. A estufa de incubao ou bacteriolgica um equipamento utilizado para os procedimentos analticos, ou seja, para a cultura de microrganismos que possa estar presente nas amostras processadas, em uma temperatura pr-determinada.
Chave liga-desliga: alm de permitir ligar ou desligar o aparelho, atravs dela que se altera a tenso da eletricidade. Controlador eletrnico: regulvel da temperatura ambiente at 240 C. Controle programvel manualmente. Termmetro de mxima e mnima: serve para acompanhamento das oscilaes de temperatura.
Manual de Instrues da Estufa Bacteriolgica.
4.2 UtiliZao estufas de incubao

Regular o programada. termostato para a temperatura
3 MATERIAIS
Termmetro de mxima e mnima, detergente neutro, lcool 70%, esponjas e panos de limpeza adequados.
Ligar a estufa na rede, o interruptor acionado e a lmpada piloto acende. Ao atingir a temperatura programada, a lmpada piloto apaga. Colocar o termmetro no orifcio localizado acima da estufa ou no seu interior. A TEMPERATURA DEPENDE DO MATERIAL INCUBADO. O LIMITE DE TOLERNCIA FICA EM 1 C.

Respiro: serve para expelir o excesso de calor e manter a uniformidade da temperatura. Antes de ligar necessrio remover a tampa plstica. Lmpada piloto: quando acesa indica que a estufa est ligada, ao atingir a temperatura desejada a luz se apagar.
4.3 Acondicionamento do material analtico

Placas que se destinam cultura de bactrias so incubadas invertidas.
24
9- USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS BACTERIOLGICAS
No sobrepor mais que cinco placas para garantir uma uniformidade de distribuio de temperatura. Os tubos devem ser levados em estantes apropriadas e com garantia de que o calor possa permear entre eles. rigorosamente necessrio que todo o material que vai para a estufa esteja identificado. Saquetas e erlenmeyers utilizados em prenriquecimentos de algumas anlises devem estar identificados e separados de tal forma que o ar quente consiga circular entre eles.
6 REGISTROS
No aplicvel.
4.4 LimpeZa
A limpeza feita semanalmente. Passar um pano umedecido com lcool 70%. Se houver alguma sujeira, como pingos de amostras incubadas, passar esponja com detergente neutro. Retirar toda a espuma com um pano enxaguado vrias vezes em gua limpa. Aps a limpeza passar um pano umedecido com lcool 70%.
5 REFERNCIAS
Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de alimentos ITAL.
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10- USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS DE ESTERILIZAO E SECAGEM
Descrever o procedimento de uso e limpeza das estufas de esterilizao e secagem de materiais. A estufa de esterilizao e secagem destina-se esterilizao de vidrarias necessrias para procedimentos analticos, bem como para a secagem de material.
Chave liga-desliga: alm de permitir ligar ou desligar o aparelho, atravs dela que se altera a voltagem. Controlador eletrnico: regulvel da temperatura ambiente at 240 0C. Controle programvel manualmente. Termmetro de Escala Linear: Serve para fazer a medida da temperatura dentro da estufa. colocado atravs do respiro.
Manual de Instrues da Estufa de Esterilizao e Secagem.
4.2 UtiliZao da estufa de esteriliZao e secagem

Antes de ligar, verificar se a estufa e a rede eltrica so da mesma tenso eltrica. Para trocar a tenso, soltar o parafuso que prende a capa da chave, girar com a alavanca no ponto central. Verificar a marcao existente no painel e fazer a ligao de acordo com a rede eltrica no local, reapertar o parafuso que prende a capa da chave. Regular o programada. termostato para a temperatura
3 MATERIAIS
Termmetro de mxima com trava, papel de embrulho, Bacillus subtilis, fita adesiva, detergente neutro, lcool 70%, esponja e panos de limpeza adequados.

Respiro: serve para expelir o excesso de calor e manter a uniformidade da temperatura. Antes de ligar necessrio remover a tampa plstica. Lmpada piloto: quando acesa indica que a estufa est ligada, ao atingir a temperatura desejada a luz se apagar.
Ligar a estufa na rede, o interruptor acionado e a lmpada piloto acende. Ao atingir a temperatura programada, a lmpada piloto apaga. Colocar o termmetro de mxima no orifcio localizado acima da estufa.
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4.3 Preparao do material a ser esteriliZado
4.5 LimpeZa
A limpeza feita semanalmente com gua e detergente neutro. Aps a limpeza, feita a desinfeco com lcool 70%.
10- USO E LIMPEZA DAS ESTUFAS DE ESTERILIZAO E SECAGEM
Proteger as placas de Petri e pipetas graduadas com papel de embrulho. A temperatura de esterilizao no mnimo 170 C. O tempo necessrio para esterilizao no mnimo 2 horas. O papel que protege o material adquire cor parda, no devendo escurecer em demasia e nem se tornar quebradio.
5 REFERNCIAS
Mtodos de Anlises Microbiolgicas para alimentos LARA. Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de alimentos ITAL
4.4 Controle de temperatura

Para controlar a temperatura mxima atingida durante a esterilizao, utilizar termmetro de mxima com trava. Opcionalmente pode ser utilizado Bacillus subtillus para a verificao da eficincia do processo de esterilizao. Verificar a temperatura atingida pelo termmetro. No atingida a temperatura de esterilizao, retornar o material para a estufa e esterilizar novamente. Abrir o forno Pasteur somente depois que este estiver atingido equilbrio com a temperatura ambiente, pois o contato do ar frio com o vidro superaquecido ir provocar quebra e estilhaos, podendo atingir o operador.
6 REGISTROS
No aplicvel.
27
11- USO E LIMPEZA DO FORNO DE MICRO-ONDAS
1 OBJETIVOS E CAMPO DE APLICAO Descrever os procedimentos para uso e limpeza do forno micro-ondas. O Forno Micro-ondas utilizado para preparao de meios de cultura e fervura de tubos de Durham.
aparelho fechada, desligue-o e desconecte o cabo de fora da tomada; Use sempre luvas trmicas para retirar o material do forno, pois h transferncia de calor aos recipientes; Depois de retirar o material do forno, manuseie com cuidado, evitando que o vapor formado pelo aquecimento entre em contato com mos ou rosto do manipulador.
Manual de Instrues de uso do forno micro-ondas.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%.
4.2 Cuidados durante a limpeZa

Mantenha sempre a porta aberta ao limpar qualquer das partes de micro-ondas: isso evita que ele seja ligado acidentalmente com o interior vazio; Antes de limpar a parte interna, remova o prato giratrio e o suporte; Nunca jogue gua em parte alguma do gabinete ou da porta: limpe-os interna e externamente com pano umedecido com uma mistura de gua e detergente neutro; Nunca utilize detergentes fortes (abrasivos), lcool, amonaco ou produtos qumicos no indicados, nem use ps, palha de ao ou esponjas grossas para lavar os acessrios; Para fazer a limpeza completa do forno (parte interna e externa), desconecte o plugue da tomada;
4 PROCEDIMENTO 4.1 Instrues de uso

Verifique se est corretamente ligado e sem nenhum material entre a porta e o gabinete; Verifique se o prato giratrio e seu suporte esto bem encaixados toda a vez que ligar o forno; Nunca ligue o forno vazio, pois isso pode provocar fascas em seu interior; Mantenha a tampa do guia de ondas sempre limpa: resduos nesse local impedem a passagem das microondas, podendo provocar choque eltrico; Se o material ou recipiente que esto dentro do forno faiscarem durante a operao, mantenha a porta
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11- USO E LIMPEZA DO FORNO DE MICRO-ONDAS
Caso a porta embaar e o interior do forno reter gua aps o preparo de algum material, seque todas as partes umedecidas com um pano macio (perfex). A limpeza geral obedece ao cronograma semanal.
5 REFERNCIAS
6 REGISTROS
No aplicvel.
29
termostato para a temperatura
12- USO E LIMPEZA DAS GELADEIRAS
Descrever os procedimentos para limpeza e uso das geladeiras de acordo com a finalidade a que se destinam. As geladeiras so utilizadas para manuteno de amostras refrigeradas aguardando processamento e de meios de cultura.
Regular o programada;
Ligar a geladeira na rede.
4.3 Procedimento de limpeZa das geladeiras

A limpeza feita mensalmente com gua e detergente neutro. Aps a limpeza, feita a desinfeco com lcool 70%.
Manual de Instrues Geladeira / Freezer Consul.
3 MATERIAIS
Termmetro, detergente neutro e lcool 70%.
5 REFERNCIAS
Mtodo de Anlises Microbiolgica para Alimentos LARA.
4 PROCEDIMENTO 4.1 Finalidades

As geladeiras do Laboratrio de Microbiologia apresentam duas finalidades: As geladeiras 1 e 2 so utilizadas para estocagem de material de laboratrio tais como meios de cultura, reagentes e outros materiais pertinentes s anlises. A geladeira 3, utilizada para armazenamento de material contaminado e cepas.
6 REGISTROS APLICVEIS
No aplicvel.
4.2 Procedimento de utiliZao de geladeira
30
13- USO E LIMPEZA DO HOMOGENEIZADOR DE AMOSTRAS (STOMACHER)
Descrever o procedimento de uso e limpeza do homogeneizador de amostras. O homogeneizador um equipamento utilizado para a triturao e homogeneizao de amostras.
Abrir a porta e inserir o saco estril com a amostra e o diluente. Fechar a porta prendendo a extremidade do saco. O homogeneizador iniciar o ciclo automaticamente, parando no final do tempo estabelecido. Abrir a porta e retirar a saqueta. O homogeneizador estar pronto para um novo ciclo.
Manual de Instrues do Bag Mixer 400.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, lcool 70%, esponjas e panos de limpeza adequados.
4.4 LimpeZa do HomogeneiZador

Desligar da corrente eltrica. A limpeza feita semanalmente ou mais frequentemente, se necessrio, com gua e detergente neutro. Utilizar pano adequado passando nas ps de homogeneizao e no interior do equipamento. Cuidar para que resduos de detergente no permaneam no equipamento. Aps a limpeza, feita a desinfeco com lcool 70%.

Boto do timer Alavanca para a abertura e fechamento da porta Conjunto de ps homogeneizadoras.
4.2 Instalao do HomogeneiZador

Remover o equipamento da embalagem. Colocar em uma superfcie plana e estvel.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
4.3 UtiliZao do HomogeneiZador

Ligar o aparelho na corrente eltrica. Ajustar o tempo necessrio para a homogeneizao de acordo com a amostra.
6 REGISTROS
No aplicvel.
31
14- USO E LIMPEZA DA INCUBADORA PARA BOLORES E LEVEDURAS
Descrever o procedimento de uso e limpeza da incubadora para fungos. A incubadora para fungos um equipamento utilizado para a cultura de amostras submetidas a pesquisa de bolores e leveduras.
A lmpada piloto ao apagar, indica que a temperatura de termostatizao foi atingida e, aps isto, iniciamse os ciclos de liga-desliga, para manuteno da temperatura desejada. Aguardar a estabilizao da temperatura +/- 30 minutos. Em caso de necessidade de movimentao do aparelho, esperar 30 minutos antes de relig-lo. No abrir a porta frequentemente para evitar a condensao dentro da cmara interna. Para evitar problemas com a estabilizao da temperatura, manter o interruptor ligado constantemente. A TEMPERATURA DEPENDE DA METODOLOGIA EMPREGADA. O LIMITE DE TOLERNCIA FICA EM 1 C.
Manual de Instrues Incubadora de Fungos Marconi.
3 MATERIAIS
Termostato, detergente neutro e lcool 70%.
4 PROCEDIMENTO
A INCUBADORA DE FUNGOS UTILIZADA EXCLUSIVAMENTE PARA O CULTIVO DE BOLORES E LEVEDURAS.
4.2 LimpeZa
A limpeza realizada semanalmente. Limpar com uma esponja, gua e detergente neutro. Retirar todo o resduo de espuma com um pano enxaguado em gua limpa. Para a desinfeco, passar um pano umedecido em lcool 70%.
4.1 Procedimento de utiliZao da incubadora para fungos

Acionar o interruptor geral e deixar os componentes eletrnicos estabilizarem por 5 minutos, lembrando sempre que o mesmo no pode ser ligado e desligado em intervalos inferiores a 3 minutos. Selecionar a temperatura desejada.
32
5 REFERNCIAS
14- USO E LIMPEZA DA INCUBADORA PARA BOLORES E LEVEDURAS
Mtodo de Anlises Microbiolgica para Alimentos LARA Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de alimentos ITAL. BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo: Melhoramentos, 1975. LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000, 129p.
6 REGISTROS
No aplicvel.
33
15- USO E LIMPEZA DA AUTOCLAVE
Descrever o procedimento de uso e limpeza da autoclave. A autoclave um aparelho utilizado nos processos de esterilizao a vapor e presso, sendo empregada para materiais destinados a anlises, meios de cultura e materiais contaminados para descarte.
Atingida a presso de trabalho, regular a chave eltrica para o mdio, a fim de manter a presso. Verificar a vlvula de segurana de modo que o manmetro fique estvel. Regular o relgio minuteiro para controlar o tempo de esterilizao. Terminado o tempo de esterilizao, desligar a autoclave. Esperar o manmetro descer a zero e abrir o registro para a sada do vapor. O TEMPO PARA A REDUO DA PRESSO IMPRESCINDVEL PARA A EFICINCIA DA ESTERILIZAO. Jamais se deve forar um abaixamento da presso para abrir a autoclave, pois todo o procedimento ser comprometido. Abrir a tampa e retirar o material sempre utilizando luvas de amianto. Em cada esterilizao verificar o nvel de gua. Para troca de gua e limpeza da autoclave utilizar o registro inferior. Materiais limpos e materiais contaminados so autoclavados em ciclos separados.
Manual de Instrues da autoclave Phoenix.
3 MATERIAIS
Detergente neutro, esponja, jarra, gua potvel, gua deionizada ou destilada.
4 PROCEDIMENTO 4.1 UtiliZao da autoclave

Abrir a tampa e colocar gua na caldeira at cobrir o descanso do cesto. Introduzir o material a ser esterilizado. Fechar a tampa, apertando bem e por igual, os manpulos. Abrir o registro de presso e ligar a chave eltrica no calor mximo. Aguardar o comeo da sada do jato contnuo de vapor dgua e, ento, fechar o orifcio de escapamento.
34
O material limpo esterilizado em autoclave temperatura de 121 C, com tolerncia de 1 C, por 15 minutos. A esterilizao em excesso de meios de cultura pode alterar caractersticas bioqumicas, propriedades nutritivas e deteriorar a qualidade do meio; Esterilizao insuficiente pode no destruir as bactrias presentes; A eficincia da esterilizao pode ser observada atravs do controle da temperatura ou da eficincia biolgica. Para melhor eficincia da autoclave recomendvel: No empacotar objetos totalmente fechados. Garantir o perfeito vedamento da tampa antes de ligar o vapor. Retirar todo o excesso de ar, trocando-o por vapor. Aguardar o equilbrio de presso antes de reabrir a autoclave. Observar continuamente as marcaes do manmetro e do termmetro. Para abrir a tampa da cmara de autoclave, devese observar se todo o vapor foi evacuado e se o manmetro est marcando zero. - Para retirada de material recm autoclavado, deve-se utilizar luvas de amianto de cano longo. - A gua utilizada na autoclave deve ser destilada ou deionizada.
4.2 Controle da temperatura

Opo 1: a) Utilizar, a cada ciclo, fitas para autoclave que so esterilizadas junto com o material. b) Findo o perodo de esterilizao, verificar a cor desenvolvida na fita. c) O desenvolvimento de listras mais escuras na fita indica a temperatura de esterilizao atingida. d) Utilizar juntamente com as fitas para autoclave, termmetro de mxima com trava e, no fim da esterilizao, verificar a temperatura mxima. e) No atingida a temperatura de esterilizao, recomear todo o processo. f) Caso a temperatura de esterilizao ultrapassar a temperatura recomendada, descartar o material autoclavado. g) Os dados obtidos so anotados em relatrio de controle. Opo 2: a) Pode-se avaliar a eficincia das esterilizaes atravs do controle de eficincia biolgica: b) Utilizar esporos de Bacillus stearothermophylus. Devido termorresistncia dos esporos, estes somente so destrudos a uma temperatura de 120+/-1 C, por 15 minutos, com 1 atm de presso.
35
Em temperaturas mais baixas ou perodos mais curtos no h destruio dos esporos. c) As ampolas so colocadas junto com o material a esterilizar, acondicionadas em tubo de ensaio para evitar que, no caso de rompimento de uma ampola haja contaminao. d) Aps o tratamento em autoclave controlado o resultado atravs da incubao das ampolas em estufa, a 55 C, por 24/48 horas. e) Incubar junto uma ampola que no tenha sido esterilizada como prova de controle. f) Sendo a esterilizao eficiente no h crescimento de Bacillus stearothermophylus e a colorao violeta da ampola permanece inalterada. g) Em caso de esterilizao ineficiente, o crescimento dos bacilos observado pela turvao do caldo e acidificao por fermentao dos acares e sua cor muda de violeta para amarelo. h) A ampola controle tambm muda de colorao passando de violeta para amarelo.
Autoclaves de esterilizao de material contaminado A limpeza feita aps cada ciclo com gua e detergente neutro.
5 REFERNCIAS
Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de alimentos ITAL. BIER, Otto. Bacteriologia e imunologia em suas aplicaes a medicina e a higiene. So Paulo: Melhoramentos, 1975. LACAZ-RUIZ, Rogrio. Manual Prtico de Microbiologia Bsica. So Paulo: Editora Edusp, 2000.
6 REGISTROS
No aplicvel.
4.3 LimpeZa
Autoclaves de esterilizao de meios de cultura e vidraria A limpeza feita semanalmente com gua e detergente neutro.
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16- USO E LIMPEZA DO AGITADOR DE TUBOS
Descrever o procedimento de uso e limpeza do agitador de tubos de ensaio. O agitador de tubos de ensaio um aparelho importante no processo de anlises microbiolgicas, j que homogeneiza o contedo dos tubos de ensaio atravs de agitao circular.
Agitar o contedo durante alguns segundos, e prosseguir a anlise.
4.2 LimpeZa
Antes e depois do uso, o agitador deve ser limpo com algodo embebido em lcool 70%.
No aplicvel.
5 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
No aplicvel.
3 MATERIAIS
lcool 70% e algodo.
6 REGISTROS
No aplicvel.
4 PROCEDIMENTO 4.1 UtiliZao do agitador de tubos

O aparelho deve ser ligado na corrente eltrica. A chave liga/desliga deve ser posicionada na opo LIGA. Deve-se selecionar a agitao desejada (contnua ou no). Para agitar o tubo, basta, segurando firme, posicionlo sobre o suporte, na parte superior do aparelho e pressionar para que seu funcionamento inicie.
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17- USO E LIMPEZA DO CONTADOR DE COLNIAS
Descrever o procedimento de uso e limpeza do contador de colnias. O contador de colnias um utenslio que auxilia na contagem das colnias de microorganismos cultivadas nas placas de petri, atravs de sua observao na lupa, e com iluminao.
ser uma contagem estimada do nmero de colnias da placa.
4.3 LimpeZa
Depois do uso, o equipamento deve ser limpo com algodo embebido em lcool 70%.
No aplicvel.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
3 MATERIAIS
Placa de petri com cultura e caneta para retroprojetor. lcool 70% e algodo.
6 REGISTROS
No aplicvel.
4 PROCEDIMENTO 4.1 UtiliZao do contador de colnias

Ligar o aparelho na corrente eltrica. Lig-lo no boto liga/desliga este procedimento acender a lmpada. Colocar a placa com a cultura sobre a base quadriculada. Contar as colnias existentes. Caso, o nmero de colnias seja muito elevado, pode-se contar um quadrante e multiplicar por 20. Esta
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1 OBJETIVO
18- USO E LIMPEZA DO ESTERILIZADOR A VCUO
Descrever o procedimento de uso e limpeza do contador de colnias.
Caso, o nmero de colnias seja muito elevado, pode-se contar um quadrante e multiplicar por 20. Esta ser uma contagem estimada do nmero de colnias da placa.
2 CAMPO DE APLICAO
O contador de colnias um utenslio que auxilia na contagem das colnias de micro-organismos cultivadas nas placas de petri, atravs de sua observao na lupa, e com iluminao.
5.2 LimpeZa
Depois do uso, o agitador deve ser limpo com algodo embebido em lcool 70%.
6 REFERNCIAS 3 REFERNCIAS NORMATIVAS

No aplicvel. No aplicvel.
7 REGISTROS 4 MATERIAIS
Placa de petri com cultura e caneta para retroprojetor. lcool 70% e algodo. No aplicvel.
5 PROCEDIMENTO 5.1 UtiliZao do contador de colnias

Ligar o aparelho na corrente eltrica. Lig-lo no boto liga/desliga este procedimento acender a lmpada. Colocar a placa com a cultura sobre a base quadriculada. Contar as colnias existentes.
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19- PESAGEM DE AMOSTRAS
Descrever o procedimento de pesagem de amostras para anlise microbiolgica. A pesagem correta das amostras de suma importncia para a inocuidade da amostra e sua proporcionalidade em relao ao diluente.
4.3 Prximo chama, ou com a exausto da capela ligada, pesar, em uma bolsa estril uma quantidade de amostra representativa de, no mnimo 10 g ou 10 mL, variando em, no mximo 5% do valor pesado, para menos ou para mais; 4.4 Fechar assepticamente a bolsa e repetir com as demais amostras; 4.5 Desligar a balana.
ISO 6887-1 : 2011.
5 REFERNCIAS
No aplicvel.
3 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
lcool 70%; Algodo; Colher estril, pina estril, cabo e lmina de bisturi estreis (de acordo com a amostra a ser pesada); Bolsa plstica estril; Balana de preciso; Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar.
6 REGISTROS
No aplicvel.
4 PROCEDIMENTO
4.1 Desinfetar com algodo e lcool 70% e ligar a balana conforme IT MIC004; 4.2 Ligar a chama, ou utilizar a capela de fluxo laminar, seguindo a IT MIC006;
40
1 OBJETIVO
5 PROCEDIMENTO
5.1 Efetuar a pesagem da amostra, conforme IT MIC018; 5.2 Com a chama ligada, adicionar bolsa com a amostra, o diluente na proporo indicada no item 4; 5.3 Homogeneizar no stomacher, observando a IT MIC012; 5.4 Se a amostra possuir grandes partculas, deixar descansar para que as mesmas sedimentem. Esta ser a suspenso inicial. 5.5 Com auxlio de ponteira e micropipetador estreis, subtrair 1 mL desta suspenso e repassar para um tubo de ensaio contendo o diluente apropriado; 5.6 Homogeneizar com o agitador de tubos (ver IT MIC015). Esta ser a primeira diluio decimal, e a partir dela, sero feitas as sucessivas diluies, de acordo com a necessidade de cada amostra.
20- PREPARO DA SUSPENSO INICIAL E DILUIES DECIMAIS DE AMOSTRAS
Descrever o procedimento de preparo da suspenso inicial e das diluies decimais das amostras para anlises microbiolgicas.
2 CAMPO DE APLICAO
A diluio das amostras garante a inoculao adequada dos microrganismos no meio de cultura.
ISO 6887-1: 2011.
4 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
lcool 70%; Algodo; Tubos de ensaio ou frascos com diluente apropriado, na quantidade necessria para a amostra (9 partes de diluente para uma parte de amostra); ponteiras de 1 mL; Micropipetador de 1 mL; Agitador de tubos; Homogeneizador de amostras (Stomacher); Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar.
6 REFERNCIAS
No aplicvel.
7 REGISTROS
No aplicvel.
41
1-13
NORMAS GERAIS
Procedimento Operacional Padro
42
1-PREPARAO E CONSERVAO DE MEIOS DE CULTURA
PREPARAO E CONSERVAO DE MEIOS DE CULTURA

Meios de cultura desidratados fornecidos por diferentes fabricantes podem apresentar pequenas diferenas em suas composies. Observar atentamente a quantidade necessria de meio desidratado, em gramas por litro de meio a ser preparado, o modo de preparo, o tempo e a temperatura de esterilizao em cada caso. Ao adquirir meios de cultura, observar atentamente a formulao, comparando-a com aquela indicada neste manual. s vezes, as diferentes marcas utilizam diferentes termos para uma mesma substncia. Por exemplo, os termos triptona e tripticase referem-se peptona de casena obtida por digesto triptica ou pancretica. Assim, os produtos gar tripticase soja, gar soja triptona, Caso gar (antigo Casoy) referem-se um produto que contm peptona de casena (obtida por digesto trptica ou pancretica) e peptona de farinha de soja.
Os meios preparados no comerciais devem ser pesados separadamente em papel manteiga ou papel alumnio e adicionados em um nico frasco (normalmente em bquer), hidratar em pequena quantidade de gua at que todo o meio fique mido e s depois deve-se acrescentar o restante da gua. Sempre que for necessrio, levar o meio para fundir, usar vidro Pyrex, aquecer sobre a tela de amianto ou similar e trip, no bico de Bunsen ou, se permitido, em micro-ondas. Usar sempre luvas trmicas apropriadas para laboratrio para manipular vidrarias quentes; Sempre que for usado o termo esterilizar em autoclave, o tempo de esterilizao e a temperatura deve ser compatvel com o meio a ser produzido, conforme orientao do fabricante. Sempre que for usado o termo esterilizar por filtrao, usar o filtro com porosidade de 0,22 micra, recomendado para partculas bacterianas. Quando distribuir o meio antes de autoclavar, os tubos no precisam estar esterilizados; Quando distribuir o meio aps a autoclavao, os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias ou materiais auxiliares obrigatoriamente devem ser estreis. Os meios devem ser autoclavados com as tampas semiabertas, para que a esterilizao seja por igual
PREPARAO E DISTRIBUIO DE MEIOS DE CULTURA

Os meios comerciais devem ser hidratados em pequena quantidade de gua at que todo o meio fique mido e s depois deve-se acrescentar o restante da gua.
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1-PREPARAO E CONSERVAO DE MEIOS DE CULTURA
em todo o contedo dos tubos - tampas fechadas no permitem a entrada do vapor.
Observar com ateno para as instrues de alguns inculos que so especficos para alguns meios de cultura. Recomenda-se o uso de tubos com tampa de rosca, pois evitam o ressecamento rpido do meio (tamanho dos tubos utilizados geralmente so de 11 por 100 mm). Todos os meios confeccionados devem ser devidamente identificados com o nome, data de fabricao e data de validade. Todos os meios de placa devem ser embalados em filme plstico PVC transparente para evitar o ressecamento. Evitar o uso de sacos plsticos para embalar as placas, pois a gua de condensao formada facilita a proliferao de fungos; para meios de cultura em tubos, colocar em sacos plsticos, procurando tirar o excesso de ar. Convm guardar os tubos com meios preparados em sacos plsticos, para sua maior segurana.
CONTROLE DE QUALIDADE, ESTERILIDADE E CRESCIMENTO

Para controle dos meios confeccionados, incubar placas ou tubos no inoculados 36 1 C por 24 horas. No deve haver mudana de cor nem crescimento de qualquer colnia. Para o controle de crescimento, sempre que possvel usar cepas ATCC, que so cepas de referncias de origem e padro definido de provas para a sua caracterizao. Se no for possvel o uso de cepas ATCC, usar cepas 100% positivas para os controles de qualidade de crescimento realizados.
RECOMENDAES GERAIS
Evitar usar meios vencidos (liofilizados e prontos para uso); se usar, certificar-se com o controle de crescimento de que realmente est funcionando. No usar meios prontos para uso em tubos ou placas que estejam ressecados.
44
1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO:
4 REAGENTES E MATERIAIS:
gar Nutriente Extrato de levedura; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; placas de petri.
2- CONTAGEM TOTAL DE MICRORGANISMOS EM GUA UTILIZANDO O MEIO GAR NUTRIENTE
Aplica-se enumerao de bactrias em gua potvel tratada, incluindo tambm guas minerais engarrafadas.
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES:
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos de alimentao animal Preparao de amostras-teste, suspenso inicial e diluies decimais para anlises microbiolgicas. ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos de alimentao animal Orientaes gerais para anlises microbiolgicas. ISO 8261, Leite e produtos derivados Guia geral para preparao de amostras-teste, suspenso inicial e diluies decimais para anlises microbiolgicas. ISO/TS 11133 - Microbiologia de alimentos e de produtos de alimentao animal Orientaes gerais na preparao e produo de meios de cultura. IT MIC018 e IT MIC019.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO 5.1 Pesagem e preparo de amostra

Efetuar a suspenso inicial da amostra e suas diluies decimais conforme necessidade.
5.2 Inoculao em placas

Dispensar 1 mL de amostra em duplicata em placas de petri identificadas. Verter de 15 a 20 mL de gar sobre a amostra, homogeneizar e esperar a solidificar em superfcie plana.
5.3 Incubao
Incubar a metade das placas de petri invertidas a 36 +/-1 C, durante 44 +/- 4 horas, e a outra parte a 22+/-1 C, durante 68 +/- 4horas.
3 EQUIPAMENTOS:
Balana semianaltica; agitador de tubos; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 22 C +/- 1 C, e a 36 C +/- 1 C.
5.4 Contagem das colnias

Contar as colnias presentes nas placas e calcular o nmero estimado de colnias presentes em 1 mL de amostra.
45
5.5 EXpresso dos resultados
2- CONTAGEM TOTAL DE MICRORGANISMOS EM GUA UTILIZANDO O MEIO GAR NUTRIENTE
Expressar o resultado em UFC/mL. No havendo crescimento bacteriano, expressar os resultados como no detectados em 1 mL. Havendo mais de 300 colnias nas placas com as maiores diluies, expressar o resultado como >300.
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA
Norma ISO 6222:1999.
7 REGISTROS
No aplicvel.
46
4 REAGENTES E MATERIAIS
gar Base Glicerol Diclorano (DG18); lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; pina, bisturi e cabo para este, estreis; saqueta plstica estril; ponteira de 1 mL estril; ala de drigalski estril; placas de petri.
3- CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS EM PRODUTOS COM ATIVIDADE DE GUA MENOR OU IGUAL A 0,95
Aplica-se enumerao de bolores e leveduras em produtos cuja atividade de gua seja menor ou igual a 0,95.
2 DOCUMENTOS COMPLEMENTARES
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO 5.1 Conceitos

Colnia Acmulo de massa microbiana localizada e visvel desenvolvida sobre ou dentro de meio nutriente slido a partir de uma partcula vivel. Leveduras Microrganismos aerbicos mesoflicos, os quais, a 25C em meio gar micolgico sob as condies estabelecidas nesta parte da ISO 21527, desenvolvem colnias redondas, foscas ou no, sobre a superfcie do meio, geralmente possuindo borda regular e superfcie medianamente convexa. Bolores Microrganismos filamentosos, mesoflicos e aerbicos, os quais, em meio gar micolgico sob as condies estabelecidas nesta parte da ISO 21527, desenvolvem propgulos/gametngios ou colnias, achatados ou aveludados, geralmente com corpos de frutificao ou esporos coloridos.
3 EQUIPAMENTOS
Balana semianaltica; agitador de tubos; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; incubadora a 25 C +/- 1 C.
47
5.2 Pesagem e preparo de amostra
Norma ISO 21527-2:2008.
3- CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS EM PRODUTOS COM ATIVIDADE DE GUA MENOR OU IGUAL A 0,95
Pesar a amostra e/ou efetuar sua suspenso inicial e suas diluies decimais conforme necessidade.

Dispensar 0,1 mL de amostra na superfcie do gar nas placas de petri identificadas. Espalhar o inculo com ala de drigalski.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
5.4 Incubao
Incubar as placas de petri sem inverter a 25 +/-1 C, durante 5 a 7 dias. No caso de suspeita de Xeromices bisponi, incubar por 10 dias.

Contar as colnias presentes nas placas contendo at 150 colnias. Bolores e leveduras separadamente. devem ser contados

Expressar o resultado em UFC/mL ou UFC/g. NOTA: manipular as placas com cuidado devido a facilidade da disperso de esporos no ar.
48
gar Base Diclorano Rosa de Bengala com Cloranfenicol (DRBC); lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; pina, bisturi e cabo para este, estreis; saqueta plstica estril; ponteira de 1 mL estril; ala de drigalski estril; placas de petri.
4- CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS EM PRODUTOS COM ATIVIDADE DE GUA MAIOR QUE 0,95
Aplica-se enumerao de bolores e leveduras em produtos cuja atividade de gua seja maior que 0,95.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO 5.1 Conceitos

Colnia Acmulo de massa microbiana localizada e visvel desenvolvida sobre ou dentro de meio nutriente slido a partir de uma partcula vivel. Leveduras Microrganismos aerbicos mesoflicos, os quais, a 25 C em meio gar micolgico sob as condies estabelecidas nesta parte da ISO 21527, desenvolvem colnias redondas, foscas ou no, sobre a superfcie do meio, geralmente possuindo borda regular e superfcie medianamente convexa. Bolores Microrganismos filamentosos, mesoflicos e aerbicos, os quais, em meio gar micolgico sob as condies estabelecidas nesta parte da ISO 21527, desenvolvem propgulos/gametngios ou colnias, achatados ou aveludados, geralmente com corpos de frutificao ou esporos coloridos.
3 EQUIPAMENTOS:
Balana semianaltica; agitador de tubos; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; incubadora a 25 C +/- 1 C.
49
5.2 Pesagem e preparo de amostra
6 DOCUMENTOS DE REFERNCIA:
Norma ISO 21527-1:2008.
4- CONTAGEM DE BOLORES E LEVEDURAS EM PRODUTOS COM ATIVIDADE DE GUA MAIOR QUE 0,95

Dispensar 0,1 mL de amostra na superfcie do gar nas placas de petri identificadas. Espalhar o inculo com ala de drigalski.
7 REGISTROS:
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
5.4 Incubao
Incubar as placas de petri sem inverter a 25 +/-1 C, durante 5 dias.

Contar as colnias presentes nas placas contendo at 150 colnias. Bolores e leveduras separadamente. devem ser contados

Expressar o resultado em UFC/mL ou UFC/g. NOTA: manipular as placas com cuidado devido a facilidade da disperso de esporos no ar.
50
de gar VRBG; gar Nutriente; gar Glicose; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; pina, bisturi e cabo para este, estreis; saqueta plstica estril; ponteira de 1 mL estril; ala de drigalski estril; placas de petri.
5- CONTAGEM DE ENTeROBACTeRIACeAe
Aplica-se enumerao de colnias Enterobacteriaceae em anlises microbiolgicas.
ISO 6887- Microbiologia de alimentos e de produtos de alimentao animal Preparao de amostras-teste, suspenso inicial e diluies decimais para anlises microbiolgicas. ISO 7218, Microbiologia de alimentos e de produtos de alimentao animal Orientaes gerais para anlises microbiolgicas. ISO 8261, Leite e produtos derivados Guia geral para preparao de amostras-teste, suspenso inicial e diluies decimais para anlises microbiolgicas. ISO/TS 11133 - Microbiologia de alimentos e de produtos de alimentao animal Orientaes gerais na preparao e produo de meios de cultura. IT MIC 018 e IT MIC019.

Pesar a amostra e / ou efetuar sua suspenso inicial e suas diluies decimais conforme necessidade.

Dispensar 1 mL de amostra na placa de petri identificada. Verter 10 mL de gar VRBG sobre o inculo e homogeneizar. Deixar solidificar e verter mais 15 mL de gar como cobertura para criar uma ambiente de semianaerobiose.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; agitador de tubos; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; incubadora a 37 C +/- 1 C.
5.3 Incubao
Incubar as placas de petri invertidas a 37 +/-1 C, durante 24 +/- 2 horas.
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Norma ISO 21528-2:2004.
5- CONTAGEM DE ENTeROBACTeRIACeAe
Selecionar as placas contendo at 150 colnias caractersticas (rosa at vermelho ou roxa, com ou sem halo). Contar as colnias caractersticas e selecionar aleatoriamente 5 destas para repique. Estriar as colnias selecionadas sobre o gar nutriente e incubar a 37 +/-1 C, durante 24 +/- 2 horas. Realizar o teste de oxidase, estriando uma colnia sobre a tira teste. No havendo mudana de cor, conforme indicao do fabricante das tiras, considerar o teste negativo.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
5.5 Teste de fermentao

Com agulha de inoculao, semear as colnias negativas para oxidase, em tubos com gar glicose e incub-los a 37 +/-1 C, durante 24 +/- 2 horas. O desenvolvimento de uma colorao amarelada no meio indica resultado positivo.

Colnias glicose positivas e oxidase negativas so consideradas Enterobacteriaceae. Expressar o resultado em UFC/g ou mL.
52
gar PCA; Soluo de TTC; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; placas de petri.
6- CONTAGEM PADRO DE MICRORGANISMOS MESFILOS AERBIOS ESTRITOS E FACULTATIVOS VIVEIS
Aplica-se enumerao de microrganismos mesfilos aerbios estritos e facultativos viveis em amostras matrias-primas, alimentos e gua.

Pesar a amostra, e efetuar sua suspenso inicial e suas diluies decimais conforme necessidade.

Dispensar 1 mL de amostra e das diluies necessrias em placas de petri identificadas. Verter de 15 a 20 mL de gar PCA sobre a amostra, homogeneizar e esperar solidificar.
5.3 Incubao
Incubar as placas de petri invertidas a 36 +/-1 C, durante 48 horas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Equipamento de homogeneizao; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 36 +/- 1 C.

Selecionar as placas para leitura, da seguinte forma: Entre 25 e 250 colnias para produtos em geral e entre 20 e 300 colnias para gua.
53
6- CONTAGEM PADRO DE MICRORGANISMOS MESFILOS AERBIOS ESTRITOS E FACULTATIVOS VIVEIS
Contar as colnias e expressar o resultado em UFC/g ou mL.
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. IN No 62, 26 de agosto de 2003.
7 REGISTROS:
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
54
gar VRB; Caldo Verde Brilhante Bile 2% lactose; Caldo EC; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; placas de petri.
7- CONTAGEM TOTAL DE COLIFORMES TOTAIS E TERMOTOLERANTES
Aplica-se contagem de coliformes totais e termotolerantes em alimentos, matrias-primas e raes que contenham limite mximo igual ou superior a 100 UFC/g ou mL de amostra.


Dispensar 1 mL de amostra e das diluies desejadas em placas de petri identificadas. Verter 15 mL de gar VRBA sobre a amostra, homogeneizar e esperar solidificar. Adicionar mais 10 mL de VRBA formando uma sobrecamada.
5.3 Incubao
Incubar as placas de petri invertidas a 36 +/-1 C, durante 18 a 24 horas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Equipamento de homogeneizao; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 36 +/- 1 C; banho-maria a 45 C.

Selecionar as placas para leitura, as placas que contenham entre 15 e 150 colnias.
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7- CONTAGEM TOTAL DE COLIFORMES TOTAIS E TERMOTOLERANTES
Contar as colnias tpicas, ou seja, as que apresentarem cor rsea, com 0,5 a 2 mm de dimetro, rodeadas ou no por uma zona de precipitao da bile presente no meio. Anotar os resultados da contagem. Contar colnias tpicas e atpicas separadamente e prosseguir com a confirmao, selecionando de 3 a 5 colnias dos dois tipos para repique. Inocular cada colnia em tubos contendo caldo verde brilhante bile 2% lactose e tubos de Durham, e incubar a 36 +/- 1 C por 24 a 48 horas. A presena de coliformes totais confirmada atravs da formao de gs em pelo menos 1/10 do tubo de Durham, ou ainda, pela efervescncia quando agitado gentilmente. Anotar o resultado para cada colnia utilizada, bem como a sua diluio. Tubos que apresentarem resultado negativo aps 24 horas devero ser incubados por mais 24 horas. Coliformes Termotolerantes: Inocular as colnias suspeitas em tubos contendo caldo EC com tubos de Durham, e incubar a 45 +/- 2 C, por 24 a 48 horas em banho-maria com agitao. O resultado positivo dado da mesma forma que na confirmao de coliformes totais (ou por formao de gs, ou efervescncia).
Da mesma forma, se no houver formao de gs em 24 horas, as amostras devero ser reincubadas por mais 24 horas.

Para clculo dos resultados, consultar o Anexo IV da IN 62 Procedimento para contagem de colnias, e expressar o resultado em UFC/g ou mL.
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. IN No 62, 26 de agosto de 2003.
7 REGISTROS:
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
56
Caldo Lauryl Sulfato de Sdio concentrao simples e dupla; Caldo Verde Brilhante Bile 2% lactose; Caldo EC; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; placas de petri.
8- NMERO MAIS PROVVEL DE COLIFORMES TOTAIS E TERMOTOLERANTES EM GUA
Aplica-se a determinao do NMP de coliformes totais e termotolerantes em gua e gelo usados em estabelecimentos produtores de alimentos.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO 5.1 Preparo de amostra

Preparar a amostra de gua de acordo com as instrues contidas nas ISOS 6887 e7218. No caso de amostras de gelo, quando encaminhadas em frascos de boca larga, deixar descongelar no prprio frasco, sob refrigerao, pelo perodo necessrio para seu completo descongelamento. Antes do incio da anlise, homogeneizar bem. Quando o gelo for encaminhado em sacos plsticos, colocar a amostra dentro de outro saco plstico resistente (sem perfuraes) e deixar descongelar, sob refrigerao, pelo perodo necessrio para seu completo descongelamento. Aps descongelamento total, verificar a presena de gua no saco plstico de proteo da amostra, o que indica a presena de perfuraes na embalagem do gelo. Nesse caso, no analisar a amostra. Da mesma forma, as amostras de gelo que chegarem descongeladas ou em descongelamento devero ser descartadas.
3 EQUIPAMENTOS
Bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 36 +/- 1 C; banho-maria a 45 C.
57
Quando a embalagem da amostra de gelo mostrar evidncias de que no continha perfuraes, aps o descongelamento total, homogeneizar bem e proceder anlise, seguindo o procedimento estabelecido para amostras de gua.
Repicar dos tubos de lauryl sulfato de sdio para tubos contendo caldo verde brilhante bile 2% lactose e tubos de Durham, e incubar a 36 +/- 1C por 24 a 48 horas.
5.2 Inoculao
Dispensar 10 mL da amostra em uma srie de 3 tubos contendo lauryl sulfato de sdio em concentrao dupla. Inocular 1 mL em uma srie de 3 tubos contendo lauryl sulfato de sdio em concentrao simples. Efetuar uma diluio decimal e dispensar 1 mL desta em outra srie de 3 tubos contendo lauryl sulfato de sdio em concentrao simples.
5.4.1Confirmao de totais
A presena de coliformes totais confirmada atravs da formao de gs em pelo menos 1/10 do tubo de Durham, ou ainda, pela efervescncia quando agitado gentilmente. Anotar o nmero de tubos positivos para cada srie de diluio. Tubos que apresentarem resultado negativo aps 24 horas devero ser incubados por mais 24 horas.
5.3 Incubao
Incubar os tubos a 36 +/- 1 C, por 24 a 48 horas.
5.4.2 Coliformes Termotolerantes

Repicar dos tubos de lauryl sulfato de sdio para tubos contendo caldo EC com tubos de Durham, e incubar a 45 +/- 0,2 C, por 24 a 48 horas em banhomaria com agitao. O resultado positivo dado da mesma forma que na confirmao de coliformes totais (ou por formao de gs, ou efervescncia). Da mesma forma, se no houver formao de gs em 24 horas, as amostras devero ser reincubadas por mais 24 horas.
5.4 Leitura
A positividade para coliformes totais dada pela formao de gs (pelo menos 1/10) nos tubos de Durham e por efervescncia sob gentil agitao da amostra. Anotar o nmero de tubos positivos para cada srie.
58
A partir da combinao de nmeros correspondentes aos tubos que apresentaram resultado positivo em cada um dos testes confirmativos, verificar o Nmero Mais Provvel (NMP) de acordo com a tabela correspondente no BAM. Expressar o valor obtido em NMP/100 mL.
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. IN No 62, 26 de agosto de 2003. BAM. Bacteriological Analytical Manual. [Online].
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
59
gar Baird-Parker; Caldo BHI; Coaguplasma; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; pina, bisturi e cabo para este, estreis; bolsa plstica estril; ponteira de 1 mL estril; ala de drigalski estril; tubos de ensaio; placas de petri.
9- CONTAGEM DE STAPHYLOCOCCUs aureus EM GAR BAIRDPARKER
Aplica-se baixa contagem de Staphylococcus aureus em anlises microbiolgicas, com gar BairdParker.


Dispensar 0,1 mL da suspenso inicial ou da prpria amostra, se lquida, em placas contendo gar BairdParker, espalhando o inculo com a ala de Drigalski.
5.3 Incubao
Incubar as placas invertidas a 35 C por 24 +/2horas. Olhar as placas e marcar, no fundo das mesmas quaisquer colnias atpicas presentes. Reincubar por mais 24 +/- 2 horas, e marcar as colnias tpicas e atpicas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; agitador de tubos; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa a 35C +/- 1 C.
60
Contar as colnias apenas nas placas com no mximo 300 colnias, e destas, at 150 tpicas e/ou atpicas em duas diluies sucessivas. Para enumerao de baixos valores de estafilococos coagulase positiva, confirmar todas as colnias presentes. As colnias tpicas de estafilococos coagulase positiva podem ser pretas ou cinzas, brilhantes e convexas, com 1 a 1,5 mm de dimetro. So circundadas por um halo translcido, que pode conter outro halo opalescente, justaposto colnia. As colnias atpicas podem ser pretas e brilhantes, com ou sem borda branca bem marcada, ausncia ou difcil visualizao de rea translcida ou de halo opalescente, ou ainda, podem ser cinza, sem zonas claras ou translcidas.
Em caso negativo, reanalisar aps 24 horas de incubao, ou aps tempos de incubao descritos pelo fabricante. Como controle, inocular 0,1 mL de caldo BHI em 0,3 mL de coaguplasma. Esta amostra no poder sofrer coagulao para que as anlises sejam vlidas. Considerar como positivos, os testes em que o cogulo ocupa mais da metade do volume original.

Calcular o nmero de colnias positivas conforme clculo descrito na ISO 6888-1:1999. Quando o nmero de colnias confirmadas for igual ao nmero de colnias selecionadas e repicadas, o resultado ser igual contagem inicial, levando-se em considerao a diluio utilizada. Quando o nmero de colnias confirmadas for diferente do nmero de colnias selecionadas e repicadas, calcular a proporo de colnias positivas conforme clculo descrito na ISO 6888-1:1999. O resultado final ser a soma dos resultados de colnias tpicas e atpicas confirmadas. Expressar o resultado como: Contagem de Staphylococcus aureus: X x 10y UFC/ g ou mL ou Contagem de Staphylococcus coagulase positiva: X x10y UFC/ g ou mL..
5.4 Confirmao
Selecionar 5 colnias tpicas e 5 atpicas para semear em tubos contendo caldo BHI, e incubar a 35 ou 37 C por 24 +/- 2horas. Adicionar, em tubos estreis, 0,1 mL da cultura a 0,3 mL de coaguplasma e incubar a 35 ou 37 C, por 4 a 6 horas. Verificar os tubos, inclinando-os para ver se houve coagulao.
61
Norma ISO 6888-1:1999.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
62
gar Oxford; gar Palcam; gar Triptona Soja Extrato de levedura; gar Sangue de Carneiro; gar de Motilidade; Caldo Demi Fraser; Caldo Fraser; Caldo Triptona Soja Extrato de levedura; Caldo de utilizao de carboidratos (Xilose e Rhamnose); Meio CAMP; Soluo de perxido de hidrognio; Soluo salina de tampo fosfato (PBS); lcool 70%; algodo; placas de petri; pina estril; bisturi e cabo para o mesmo, estreis; tbua de fatiar estril, bolsa plstica estril; ponteiras de 1 mL, estreis.
10- DETECO E ENUMERAO DE LIsTERIA MONOCYTOGENEs
Aplica-se ao cultivo e isolamento de Listeria monocytogenes em anlises microbiolgicas de alimentos.
5 DESCRIO/PROCEDIMENTO 5.1 Pesagem e preparo da amostra

Pesar a alquota de amostra representativa para o produto em uma saqueta estril.
5.2 Pr- enriQuecimento

Verter o caldo Demi Fraser, respeitando a poro de 1/10 (amostra/diluente), dentro da bolsa contendo a amostra, homogeneizar no stomacher e incubar a 30 C, por 24+/- 2 horas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Homogeneizador de amostras (stomacher); agitador de tubos; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 36 C +/- 1 C, e a 41,5 C +/- 1 C; banho-maria a 37 +/- 1C.
5.3 EnriQuecimento seletivo

Inocular 0,1 mL deste preparado em tubos contendo 10 mL de caldo Fraser e incubar a 35 ou 37C, durante 48 +/- 2 horas.
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5.4 Isolamento
5.5 Confirmao de LIsTERIA spp

Selecionar, de cada meio seletivo, pelo menos cinco colnias tpicas. Caso haja menos de cinco, utilizar todas as que houver. Estriar as colnias selecionadas em placas contendo gar Triptona Soja Extrato de Levedura, de forma a se formarem colnias isoladas e incubar, invertidamente a 35 ou 37 C, por 18 a 24 horas, ou at que haja crescimento satisfatrio. As colnias tpicas sero convexas, opacas sem cor e com borda lisa, medindo cerca de 1 a 2 mm de dimetro. Utilizar estas colnias para os testes confirmativos.
Estriar, em Palcam e Oxford, uma alada da amostra enriquecida no meio Demi Fraser e no meio Fraser. Incubar as placas com o primeiro meio seletivo invertidamente em estufa a 30, 35 ou 37 C, e as placas com o segundo meio em jarras de microaerobiose ou anaerobiose por 24 horas, podendo haver at 24 horas adicionais, caso o crescimento seja sutil ou nulo aps as primeiras 24 horas. Examinar as placas e observar colnias tpicas de Listeria spp. NOTA: Colnias tpicas de Listeria spp. no gar Oxford so pequenas, possuem cor acinzentada, com um halo enegrecido. Aps 48 horas as colnias tornam-se mais escuras podendo apresentar um brilho esverdeado, um pouco maiores, com halo enegrecido e centro cncavo. Para o gar Palcam em microaerobiose, expor as placas ao ar por 1 hora, para que retomem a cor rseo-arroxeada. Aps 24 horas as colnias tpicas apresentam colorao verde-acinzentada, com 1,5 a 2 mm de dimetro, algumas vezes com centro negro e sempre com halos enegrecidos. Aps 48 horas, as colnias so verdes, cncavas no centro e circundadas por um halo negro.
5.5.1 Reao de catalase

Suspender uma alada de colnia sobre algumas gotas de perxido de hidrognio vertidas em lamina microscpica ou placa de petri e observar. A formao de borbulhas indica reao positiva.
5.5.2 Colorao de Gram

Listeria spp. Gram positiva, em forma de bastonetes curtos e finos.
64
5.5.3 teste de motilidade (se necessrio)
5.5.4.2 UtiliZao de carboidratos

Inocular, em cada um dos meios de utilizao de carboidratos, uma alada da cultura obtida no caldo Triptona Soja Extrato de Levedura e incubar a 35 ou 37 C, por at 5 dias. A reao positiva indicada pela cor amarela, que ocorrer principalmente nas primeiras 24 a 48 horas.
Inocular uma colnia isolada em um tubo contendo caldo Triptona Soja Extrato de Levedura, e incubar a 25 C, por 8 a 24 horas, ou at haver turbidez do meio. Transferir uma alada para lmina microscpica e sobre a cultura, colocar a lamnula. Observar no microscpio. Listeria spp. Apresenta a forma de bastonete fino e curto com movimentao flagelar rotatria ou de tombamento. Com uma alada da cultura, perfurar o gar teste de motilidade e incubar a 25 C por 48 horas. Observar o crescimento ao redor da perfurao. Listeria spp. apresenta crescimento em forma de guarda-chuva. No havendo crescimento suficiente, incubar por at 5 dias e observar novamente.
5.5.4.3 Teste CAMP

Semear culturas de S. aureus e Rhodococcus equi em linhas nicas sobre o gar sangue, de maneira paralela e diametralmente oposta. Semear culturas obtidas no gar Triptona Soja Extrato de levedura perpendicularmente as culturas descritas no item anterior, mantendo uma distncia de 1-2 mm destas. Estriar linhagens controle de L. monocytogenes, L. innocua e L. ivanovii. Incubar as placas a 35 ou 37 C, por 18 a 24 horas. Considera-se positiva a reao quando forma-se uma zona de hemlise aumentada na interseco entre as linhagens-teste e as linhagens de S. aureus e R. equi.
5.5.4 Confirmao de LISTeRIA MONOCYTOGeNeS 5.5.4.1 Teste de hemlise

Inocular em placas de gar Sangue, uma alada da cultura tpica, perfurando tambm o gar. Incubar a 35 ou 37 C, por 24 +/- 2 horas. Listeria monocytogenes apresenta zonas claras , estreitas e translcidas.
5.5.4.4 Confirmao definitiva

Enviar as culturas para um laboratrio de sorotipagem ou, possivelmente tipagem lisognica.
65
Norma ISO 11290-1:1996.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
66
gar XLD; outro gar para Salmonella; gua peptonada tamponada; Caldo Rappaport Vassiliadis Soja; gar TSI; Meio de descarboxilao L - lisina; Meio VP; gar Ureia; gar Nutriente; Reagentes Galactosidase; Tolueno; Triptona/Triptofano; lcool 70%; algodo; placas de petri; pina estril; bisturi e cabo para o mesmo, estreis; tbua de fatiar estril, saqueta plstica estril; ala de inoculao; ponteiras de 1 mL, estreis.
11- Deteco de SALMONELLA
Aplica-se ao cultivo e isolamento de Salmonella spp. em anlises microbiolgicas de alimentos.

Pesar a alquota de amostra representativa para o produto em uma saqueta estril.
5.2 Pr- enriQuecimento

Verter a gua peptonada tamponada, respeitando a poro de 1/10 (amostra/diluente), dentro da saqueta contendo a amostra. Homogeneizar no stomacher e incubar a 37+/- 1 C, por 18+/- 2 horas.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Homogeneizador de amostras (stomacher); agitador de tubos; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 36 C +/- 1 C, e a 41,5 C +/- 1 C; banho-maria a 37 +/- 1C.
5.3 EnriQuecimento seletivo

Inocular 0,1 mL deste preparado em tubos contendo 10 mL de caldo Rappaport Vassiliadis Soja e incubar a 41,5+/-1 C, durante 24 +/- 3 horas.
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5.4 Isolamento
Interpretao: a) fundo: amarelo glicose positiva (utilizada). vermelho ou inlaterada glicose negativa (no utilizada). preto sulfeto de hidrognio (formado). bolhas ou fendas formao de gs da glicose. b) superfcie: amarelo lactose e/ou sacarose positiva (utilizadas). vermelho ou inalterada lactose e sacarose negativas. Culturas tpicas de Salmonella mostram inclinao alcalina (vermelho) e cida (amarelo) no fundo com formao de gs. Em cerca de 90% dos casos h formao de H2S, com escurecimento do gar. Para Salmonella lactose-positiva, a parte inclinada do TSI fica amarela, portanto, faz-se necessria a continuidade dos testes confirmativos.
Estriar, em gar XLD e XLT4, uma alada da amostra enriquecida no meio RVS e incubar as placas invertidas a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas. Examinar as placas e observar colnias tpicas e atpicas que possam ser Salmonella e marc-las, no fundo da placa. NOTA: Colnias tpicas de Salmonella no gar XLD, possuem centro negro, com halo rosado em seu entorno; Salmonellas variantes negativas de H2S, so rosas, com um rosa mais intenso no meio da colnia; Salmonella lactose-positiva amarela, com ou sem escurecimento.
5.5 Seleo
Selecionar, de cada meio seletivo, pelo menos uma colnia tpica ou suspeita, e, em seguida, mais quatro colnias, caso a primeira seja negativa. Estriar as colnias selecionadas em placas contendo gar nutriente, de forma a se formarem colnias isoladas e incubar, as placas invertidas a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas.
5.6.2 gar ureia

Estriar, em superfcie inclinada do gar Ureia e incubar a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas, examinando em intervalos. Se a reao for positiva, a diviso da Ureia libera amnia e a cor do meio alterada para rosa e
5.6 Confirmao BioQumica 5.6.1 gar TSI

Estriar, a partir de picada no fundo do bisel, uma alada da cultura obtida em gar TSI inclinado e incubar a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas.
68
posteriormente para cereja escuro. A reao, muitas vezes, j visvel aps 2 a 4 horas de incubao.
creatina, trs gotas de soluo alcolica de 1-naftol e, em seguida, duas gotas de soluo de hidrxido de potssio, agitando aps a adio de cada reagente. A mudana da cor rosa para a cor vermelha brilhante dentro de 15 minutos indica reao positiva.
5.6.3 Meio de descarboXilao L-lisina

Inocular imediatamente abaixo da superfcie do meio lquido e incubar a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas. A turvao da cor roxa d o resultado por positivo, e a colorao amarela indica reao negativa.
5.6.6 Meio para reao de Indol

Inocular um tubo contendo 5 mL de triptona/ triptofano com a colnia suspeita e incubar a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas. Adicionar 1 mL do reagente de Kovacs. A formao de um anel vermelho indica uma reao positiva. Um anel amarelo-marrom indica reao negativa. Consultar Tabela 1 ISO 6579:2002, para interpretao das reaes da Salmonella.
5.6.4 Deteco de Galactosidase

Suspender uma alada da colnia suspeita em um tubo contendo 0,25 mL de soluo salina. Adicionar uma gota de tolueno e agitar o tubo, colocando-o em banho-maria a 37 C por 5 minutos. Adicionar 0,25 mL de reagente para deteco de Galactosidase e mistur-lo. Recolocar no banho-maria e deixar at 24 +/- 3 horas examinando em intervalos. A cor amarela indica reao positiva e possvel de ser detectada aps 20 minutos. Se utilizar discos de papel, seguir a instruo de uso do fabricante.
7 REGISTROS
No aplicvel.
5.6.5 Meio de reao VP Voges Proskauer

Suspender em tubo estril com 3 mL do meio, uma alada da colnia suspeita e incubar a 37+/- 1 C, por 24+/- 3 horas. Aps, adicionar duas gotas de
8 ANEXOS
No aplicvel.
69
gar manitol gema de ovo polimixina (MYP); gar sangue de carneiro; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; pina, bisturi e cabo para este, estreis; bolsa plstica estril; ponteira de 1 mL estril; ala de drigalski estril; tubos de ensaio; lminas de microscpio e leo de imerso; placas de petri.
12- CONTAGEM DE BACILLUs cereus POR INCUBAO A 30 C
Aplica-se baixa contagem de Bacillus cereus em anlises microbiolgicas, pelo mtodo de incubao a 30 C.

Pesar a amostra e / ou efetuar sua suspenso inicial e suas diluies decimais conforme necessidade.
5.2 Inoculao
Dispensar 0,1 mL da suspenso inicial ou da prpria amostra, se lquida, em duas placas contendo gar MYP, espalhando o inculo. Incubar invertidamente a 30 C por 18 a 24 horas. Aps a incubao, analisar a presena de colnias tpicas e atpicas. Em MYP, as colnias possuem de 2 a 5 mm de dimetro e so irregulares. Sua colorao rosa contra um fundo carmesim, circundadas por um halo de precipitao de at 5 mm de extenso. Em casos duvidosos a confirmao deve ser feita de qualquer forma.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; agitador de tubos; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa a 30C +/- 1 C; banho-maria a aproximadamente 80 C; microscpio.
70
5.3 Confirmao em gar sangue de carneiro
12- CONTAGEM DE BACILLUs cereus POR INCUBAO A 30 C
Estriar as colnias suspeitas em placas contendo gar sangue e incubar a 30 C, por 24 +/- 2 horas e verificar a hemlise, atravs do clareamento do entorno das colnias. Calcular o total de colnias de B. cereus conforme ISO 7218:1996/Emenda 1:2001.
7 REGISTROS
No aplicvel.
8 ANEXOS
No aplicvel.
71
gar sulfito-cicloserina (SC); Soluo D-Cicloserina (adicionar 1 mL a cada 100 mL de gar, antes de plaque-lo); Meio fluido Thioglicato; Meio Lactose Sulfito; lcool 70%; soluo salina peptonada 0,1%; algodo; placas de petri.
13- CONTAGEM DE CLOsTRIDIUM PERFRINGENs
Aplica-se enumerao por contagem em placa de Clostridium perfringens em anlises microbiolgicas.

5.2 Inoculao
Dispensar em duplicata, 1 mL de amostra em placas de petri identificadas. Verter cerca de 15 mL de gar SC sobre a amostra, homogeneizar e esperar solidificar. Verter mais 5 a 10 mL de gar como cobertura.
3 EQUIPAMENTOS
Balana de preciso; Equipamento homogeneizao; banho maria a 46 C; de
5.3 Incubao
Incubar as placas de petri invertidas em jarras de anaerobiose a 37 +/-1 C, durante 20 +/- 2 horas.
jarras de anaerobiose; bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar; micropipetador de 0,1 a 1 mL; estufa bacteriolgica a 37 +/- 1 C.
72
5.4 Contagem de colnias
13- CONTAGEM DE CLOsTRIDIUM PERFRINGENs
Selecionar as placas contendo menos de 150 colnias, e se possvel, placas representando diluies sucessivas. Contar as perfringens. colnias presumidamente de C.
meio LS com tubo de Durham e incubar aerobicamente a 46 C por 18 a 24 horas em banho-maria, analisando quanto s mesmas determinantes.
5.5 Confirmao
Selecionar 5 colnias de cada amostra para confirmao.
7 REGISTROS
No aplicvel.
5.5.1 Confirmao usando meio lactose sulfito (LS)

Inocular cada uma das colnias em meio fluido thioglicolato, e incubar em anaerobiose a 37 C por 18 a 24 horas. Transferir assepticamente, 5 gotas da cultura para tubos contendo o meio LS com tubos de Durham e incubar aerobicamente a 46 C por 18 a 24 horas em banho-maria. Verificar a presena de gs nos tubos de Durham e a colorao preta. Tubos de Durham contendo mais de de gs e com colorao preta do meio so considerados positivos. Em caso de dvida, transferir assepticamente 5 gotas da cultura do meio LS para outro tubo contendo o
8 ANEXOS
No aplicvel.

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ROSNGELA UHRIG SALVATORI GREICE ALINE KAISECAMP WOLF FABOLA DRESCH ANDREIA APARECIDA GUIMARES STROHSCHOEN

Laboratrio de Microbiologia: normas gerais, instrues de trabalho e Procedimentos Operacionais Padres

Ficha catalogrfica elaborada por Nalin Ferreira da Silveira CRB 10/2186

Todos os textos so de exclusiva responsabilidade das autoras.

Dados das autoras

ANDREIA APARECIDA GUIMARES STROHSCHOEN

ROSNGELA UHRIG SALVATORI

GREICE ALINE KAISECAMP WOLF

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

NORMAS GERAIS Instruo de Trabalho...... 8

NORMAS GERAIS Procedimento Operacional Padro.......................................... 41

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

PRINCIPAIS NORMAS de Segurana EM Laboratrio de Microbiologia

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

4.5 LimpeZa das vidrarias e materiais utiliZados

4 PROCEDIMENTO 4.1 Bancadas

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

4.2 Descarte de Materiais no ReutiliZveis

3- DESCARTE DE MATERIAL E DE AMOSTRAS

4.3 Descarte de Materiais TXicos e Perfuro-cortantes

4.4 Descarte de Vidrarias Danificadas

4 PROCEDIMENTO 4.1 Descarte de Amostras

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

4- USO E LIMPEZA DO APARELHO DE OSMOSE REVERSA

4 PROCEDIMENTO 4.1 UtiliZao da osmose reversa

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

5- USO E LIMPEZA DAS BALANAS ELETRNICAS

4 PROCEDIMENTO 4.1 Descrio dos componentes

4.3 UtiliZao das balanas

4.2 Instalao das balanas

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

5- USO E LIMPEZA DAS BALANAS ELETRNICAS

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

6- USO E LIMPEZA DO BANHO-MARIA

4.3 UtiliZao do banho-maria

4 PROCEDIMENTO 4.1 Descrio dos componentes

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

6- USO E LIMPEZA DO BANHO-MARIA

4.4 Controle de temperatura

LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA: normas gerais, instrues de trabalho e procedimentos operacionais padres

1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

7- USO E LIMPEZA DA CAPELA DE FLUXO LAMINAR

4 PROCEDIMENTOS 4.1 UtiliZao da capela de fluXo laminar

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1 OBJETIVO E CAMPO DE APLICAO

8- LAVAGEM, PREPARO E ESTERILIZAO DE MATERIAIS PARA ANLISES MICROBIOLGICAS

4.1.2 Preparo e esteriliZao

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8- LAVAGEM, PREPARO E ESTERILIZAO DE MATERIAIS PARA ANLISES MICROBIOLGICAS

4.2 Placas de Petri descartveis usadas

4.3 Preparo de pipetas 4.3.1 Lavagem

4.4 Preparo de tubos de Durham 4.4.1 Lavagem

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8- LAVAGEM, PREPARO E ESTERILIZAO DE MATERIAIS PARA ANLISES MICROBIOLGICAS