UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE QUMICA

Tecnologa Enzimtica
TEMA DE EXPOSICIN:

INULINASAS
ELABORADO POR: SALVADOR REYES GARAY

Qu es la inulina?
Es un fructano que se encuentra en muchas plantas como carbohidrato de reserva. Qumicamente es un carbohidrato polidisperso que consiste en enlaces (21) fructosil-fructosa. Al final de la molcula puede presentarse un residuo de glucosa. Se reconocen dos tipos de origen de inulina: vegetal y bacteriano. La inulina vegetal tiene un grado de polimerizacin bajo y un pequeo grado de ramificacin; la inulina bacteriana tiene un alto grado de polimerizacin y de ramificacin.

Estructura
enlaces (2 1) fructosil-fructosa

Fuentes vegetales de inulina

Fuente Parte comestible Contenido de slidos secos Contenido de inulina (peso hmedo)

Cebolla
Alcachofa de Jerusaln Achicoria Poro Ajo Pltano

Bulbo Tubrculo
Raz Bulbo Bulbo Fruto

6 12 19 25
20 25 15 20 40 45 24 26

2-6 14- 19
15 20 3 10 9 16 0.3 0.7

Centeno Cebada
Bardana Yuca Salsif

Cereal Cereal
Raz Raz Raz

88 - 90 21 25 13 31 20 - 22

0.5 1 0.5 1.5

3.5 4 3 19 4 - 11

Hidrlisis enzimtica de la inulina: Inulinasas

La inulinasa o -1,2-fructan-fructanohidrolasa es la enzima encargada de hidrolizar los enlaces -1,2 fructano de la inulina. La hidrlisis completa de la inulina lleva a la formacin de fructosa y glucosa, cuya concentracin es proporcional al grado de polimerizacin (DP) inicial de la inulina. La inulinasa puede obtenerse de dos orgenes diferentes: origen vegetal (Diente de len, achicoria, alcachofa de Jerusaln, etc.) y origen microbiano.

Microorganismos productores de Inulinasas

Microorganismo Aspergillus sp. A. aureus MTCC 151 A. A. A. A. A. ficuum niger A42 niger mutan UV1 A. niger subtilis 430A Rendimiento (U/ml) 75 160 3000* 4600* 160 120 60 50-70 43.7 9400* 25000* 355 5600* 176 127

niger mutant 817

Clostridium acetobutylicum IFP 912 Streptomyces sp. ALKC4 A. pseudotropicalis IP513 K. fragilis ATCC 12424 K. marxianus K. marxianus K. marxianus

K. marxianus ATCC 36907

K. marxianus var. marxianus CBS 6556 K. marxianus var. bulgaricus K. marxianus UCD (FST) 5582 K. marxianus CBS 6556

260
3000 107 212 5800

Estructura de la enzima
La estructura de la enzima y su peso molecular dependen del microorganismo productor; Algunos estudios reportan los siguientes PM: K. fragilis 250kDa. A. niger 300kDa. A. ficuum 53kDa. A. candidus 54 kDa. K. marxianus 72kDa

Endo- y Exo- Inulinasas

La inulinasa puede ejercer dos efectos sobre las molculas de inulina, por lo que se puede clasificar dos tipos de inulinasas: endo-inulinasas y exo-inulinasas. La exoinulinasa comienza con la fragmentacin de la primera molcula de D-fructosa y contina hasta romper el ltimo enlace dentro de la molcula de inulina y liberar una molcula de D-glucosa; la endo-inulinasa hace cortes internos en la molcula de inulina produciendo as inulooligosacridos. La propiedad de ser endo- o exo- enzima depende de la fuente microbiana de la cual se obtuvo la inulinasa. De las diferencias en las propiedades moleculares entre los dos tipos de enzima destaca el peso molecular.

Temperatura y pH ptimos
Microorganismo Aspergillus A. awamori var 2250 A. candidus A. ficuum A. fumigatus A. niger Debaryomyces cantarellii Fusarium oxysporum K. fragilis K. marxianus Pichia guilliermondii T ptima (C) 60 60 45 60 60 55 30 37 55 55 60 pH ptimo 4.5 4.5 5.5 4.7 4.3 4.0 6.2 5.5 4.4 6.0

Propiedades cinticas
Microorganismo A. ficuum A. ficuum A. ficuum A. candidus Tipo Endo Exo EndoExo Exo T (C) 30 30 50 45 37 Km (mM) 1 15 7.89 3.8 0.003 K2 (mmol/min g) 0.06* 0.078* 8.21 175

A. awamori var Exo 2250 * Valores de kcat Penicillium sp. (seg-1). Endo + Valor de V (mol min-1). max K. marxianus Exo

40
-

0.20
0.15

106
250+

Aplicacin: Produccin de jarabes de fructosa

Durante las ltimas tres dcadas se ha desarrollado un nuevo mtodo de obtencin de jarabes de fructosa: la hidrlisis enzimtica de la inulina empleando inulinasas. El uso de inulinasas de Kluyveromyces marxianus var. bulgaricus inmovilizadas en gelatina para la conversin de inulina en fructosa se ha utilizado para fabricar jarabes de alta fructosa. La conversin de inulina en fructosa produce jarabes con un 95% de fructosa.

Inulinasas vs. Invertasa e Isomerasa

Actualmente, la fructosa es obtenida por inversin de la sacarosa con invertasas o por isomerizacin de la glucosa por accin de la glucosa isomerasa, que es el mtodo ms empleado industrialmente, sin embargo este proceso tiene una limitante termodinmica que son los valores de concentracin al equilibrio de fructosa y glucosa, que son alrededor del 50% por lo que el jarabe final que se obtiene de esta reaccin contiene aproximadamente 42% de fructosa, 50% de glucosa y 8% de oligosacridos. El ajuste a la concentracin deseada de fructosa en los jarabes se realiza por cromatografa o con el uso de aditivos, sin embargo estos procesos son muy costosos o acarrean problemas de toxicidad.

Inulinasas vs. Hidrlisis cida

Otra posibilidad es la produccin de fructosa a travs de la hidrlisis acida de inulina, pero es un proceso de alto costo; la inulina puede ser hidrolizada a pH de 1-2 y temperatura de 80-100C durante 1-2h. El proceso no logra un buen resultado debido a la formacin de productos que dan color o sabor indeseable, resultado de la hidrlisis de la inulina y al aumento en el contenido de cenizas, cuya eliminacin por medio de resinas de intercambio inico es muy caro.

Bibliografa
E. Ricca et al. The state of the art in the production of fructose from inulin enzymatic hydrolysis. Critical reviews in biotechnology, 27:129-145, 2007. Krishnan Vijayaraghavan, D. Yamini, V. Ambika and N. Sravya Sowdamini. Trends in inulinase production a review. Critical reviews in biotechnology, 29(1): 67-77, 2009. Zhenming Chi & Zhe Chi & Tong Zhang & Guanglei Liu & Lixi Yue. Inulinase-expressing microorganism and applications of inulinases. Appl Microbiol Biotechnol, 82:211220, enero 2009.