241

APOPTOZA

12






12.1. Scurt istoric

Termenul de moarte celular programat a aprut n anii 60
(Locksin i Williams, 1964), iar cel de apoptoz a fost introdus n articolele
tiinifice moderne de ctre Kerr, Wiyllie i Currie (1972), pentru a descrie
o form de moarte celular distinct fa de necroz.
Termenul de apoptoz era folosit nc din Grecia antic, cu sensul de
decdere din testament i aceasta a rmas etimologia acceptat n tiinele
biomedicale. Prima menionare a termenului (= apoptosis) se
pare c i-a aparinut lui Hypocrates din Cos, printele medicinei (aprox. 460
370 .Chr.), care l-a utilizat n pasajul 35: 376 al crii Mochlicon, un tratat
despre reducerea entorselor. Traducerea textual nseamn micorarea
oaselor, dar contextul medical n care apare termenul n cartea Mochlicon
este mai ilustrativ dect citatul individual. Capitolul 35 trateaz cauzele
gangrenei provocat de tratamentul fracturilor cu bandaje, aa cum se
relateaz n traducerea englez (Mochlicon, The University Press,
Aberdeen, 1928). n concluzie, termenul de apoptoz a fost inventat pentru
a descrie modificrile structurale ale esuturilor (eroziunea osoas) i
moartea celular.
Dup Hypocrates, termenul apoptosis apare i n alte scrieri
medicale ale antichitii. De notat faptul c Galen (129 201 d. Chr.) a
extins semnificaia medical a termenului n cderea crustelor i aceast
utilizare a fost apoi tradus ca ad crustas resolvendas n textele medicale
romane, cum ar fi Obstretics de Soranus. Pentru posteritate, Galen i ali
autori de articole medicale din Roma antic i-au dovedit geniul, intuind
rolul apoptozei n vindecarea rnilor i n inflamaie.
n 1885 apreau primele diagrame ale apoptozei i unii cercettori
observau pe insecte moartea esuturilor aflate n metamorfoz. Din diverse
motive, ideea unei mori celulare fiziologice, cu importan medical i
242
biologic, nu a avut rezonan pn n urm cu cteva decenii, cnd s-a
observat c n gerontologie, teratologie, n bolile neurodegenerative i n
strile de imunodeficien, ca i n infarctul miocardic sau accidentele
vasculare cerebrale (stroke), pierderile de celule constituie un factor de
limitare a bolii, n timp ce n multe forme de cancer scderea rspunsului
celular la semnalele morii reprezint un factor major n rspndirea
celulelor tumorale.
De ce a trecut att de mult timp pn cnd apoptoza a ajuns n prim
planul cercetrii tiinifice? Poate pentru faptul c ideea conform creia
viaa are nevoie de moarte pare paradoxal, dar cu toate acestea
sinuciderea celular s-a dovedit a fi esenial pentru supravieuirea unui
organism.

12.2. Apoptoza i moartea celular programat

Conceptul funcional de moarte celular programat presupune
participarea activ a celulei la propria sa moarte (sinuciderea celular), prin
activarea unui program genetic, apoptoza fiind implicat n organogenez,
n meninerea homeostaziei tisulare i n imunitate, dar i n multe stri
patologice. Caracteristicile morfologice uniforme observate la celulele
apoptotice provenite de la organisme diferite sugereaz faptul c exist un
mecanism comun, conservat pe scara evoluiei, care declaneaz moartea
celular programat. Apoptoza excesiv sau, dimpotriv, absena ei poate
avea implicaii patologice majore (de exemplu, ntr-o serie de afeciuni
neurodegenerative, cum ar fi boala Parkinson, se nregistreaz un procent
ridicat de celule apoptotice, n timp ce scderea ritmului apoptozei poate
conduce la cancer). Una din caracteristicile importante ale apoptozei este
susceptibilitatea la intervenia terapeutic, putnd fi modulat de ageni
farmacologici diveri, ceea ce ofer sperane pentru obinerea de tratamente
noi, mai eficace.
Apoptoza este definit prin modificri funcionale i morfologice
caracteristice. Astfel, volumul celulelor apoptotice se micoreaz,
dimensiunile nucleului se reduc, n timp ce cromatina se condenseaz,
mitocondriile se sparg i elibereaz citocromul c. ADN-ul celular este
degradat la nivelul situsurilor de legtur internucleozomale, rezultnd
fragmente de ADN egale (formate din 180 de perechi de baze). Proteinele
din membrana celular dezvolt legturi transversale, astfel nct membrana
devine mai rigid. Fosfatidilserina, fosfolipidul care n mod normal se afl
orientat ctre interiorul membranei plasmatice, este expus acum la
suprafa, fiind recunoscut de receptorii celulelor fagocitare. Pe suprafaa
membranei apar vezicule. Integritatea membranei celulare se menine pentru
un timp, dar, n final, membrana se fragmenteaz. Celulele se desprind unele
de altele i sunt nlturate nainte de apariia moleculelor pro-inflamatorii.
Durata de via a celulelor apoptotice este de cteva ore, astfel nct, n
seciunile tisulare se regsete un procent sczut de celule apoptotice.
Apoptoza afecteaz de obicei celule individuale, iar distribuia lor n esut
este aleatorie.
n schimb, necroza este un mod pasiv de moarte celular, care
implic frecvent grupuri masive de celule i un rspuns inflamator
important. Att apoptoza, ct i necroza pot apare n acelai timp n acelai
esut, n funcie de intensitatea factorilor declanatori (Fig. 12.1).


Fig. 12.1 Modificri structurale n apoptoz i necroz

243
244
n tabelul urmtor apoptoza i necroza sunt prezentate comparativ:

Caracteristici
i mecanisme
patologice
Apoptoza Necroza
Modelul
morii celulare
Celule singulare
Grupuri mai mari
de celule
Dimensiunea
celulelor
Contracie, fragmentare Balonizare
Membrana
plasmatic
Continuitatea pstrat,
neregulariti ale membranei,
fosfatidilserina exprimat la
suprafa
Membran neted,
liz timpurie
Mitocondriile
Permeabilitate membranar
crescut, coninutul (citocrom c,
apaf-1) eliberat n citoplasm,
structur relativ conservat
Balonizare,
modificri
structurale
Alte organite Contracie, corpusculi apoptotici
Balonizare,
dezmembrare
Degradarea
ADN
Fragmentare, clivaj
internucleozomal, eliberarea
capetelor 3, ADN n citoplasm
Difuz, aleatorie
Degradarea
celular
Fagocitoz, absena inflamaiei
Inflamaie, invazia
macrofagelor
Stimuli
generali
Semnale endogene i
intercelulare, procese patologice
Procese patologice
Stimuli
specifici
Lipsa factorilor de cretere (NGF,
IL-2), legarea activatorilor morii
(citokine - TNF, limfotoxine,
ligandul Fas, TRAIL) la receptori
de suprafa, toxice celulare
(hormoni, radiaii, ischemie
medie, creterea oxidanilor
celulari), lezarea ADN
Toxine, ischemie
sever, radiaii
Procese
celulare
Reacii n cascad (activarea
caspazelor, a endonucleazelor
internucleozomale, necesit
sinteze proteice, ATP)
Independent
energetic, depleie
de ATP, fr
sinteze proteice

245
Apoptoza poate fi consecina absenei factorilor de supravieuire sau
a expunerii la factori nocivi, letali. Necesarul de factori de supravieuire (de
exemplu, factorii de cretere neuronali; interleukina-2, esenial pentru
mitoza limfocitelor) depinde de tipul de celul, de statusul funcional al
celulei sau de prezena unor stimuli letali, cum ar fi:
- creterea nivelului oxidanilor n interiorul celulei;
- lezarea ADN-ului de ctre oxidani sau ali ageni: radiaiile
ultraviolete, razele X, chimioterapia;
- molecule care se leag la receptori specifici de pe suprafaa
celulei i semnalizeaz iniierea programului de apoptoz; printre
aceti activatori ai morii celulare se numr:
TNF- (factorul de necroz tumoral ), care se leag la
receptorul TNF;
limfotoxina (TNF-), se leag tot la un receptor TNF;
ligandul Fas (FasL), care se leag la receptorul Fas (CD95)
Apoptoza necesit expresia sau supresia anumitor gene.
Endonucleazele, transglutaminazele tisulare i proteazele sunt activate.
Inhibiia ARNm sau sintezele proteice pot provoca sau bloca apoptoza, n
funcie de echilibrul ntre factorii letali i protectivi ntr-o anumit celul.
Exist dou cauze principale care pot declana apoptoza:
1. Moartea celular programat este necesar pentru dezvoltarea
normal, ca i mitoza; iat cteva exemple:
- resorbia cozii mormolocilor de broasc n timpul metamorfozei
se produce prin apoptoz;
- formarea degetelor ftului necesit ndeprtarea, prin apoptoz, a
esutului dintre ele;
- ndeprtarea endometrului uterin la nceputul menstruaiei se
face prin apoptoz;
- formarea conexiunilor optime ntre neuronii cerebrali necesit
eliminarea prin apoptoz a celulelor n plus.
2. Moartea celular programat intervine n distrugerea celulelor
care reprezint o ameninare pentru integritatea organismului:
- una dintre cile prin care limfocitele T citotoxice omoar celulele
infectate viral este inducerea apoptozei;
- n cazul scderii rspunsului imun mediat celular, celulele
efectoare trebuie ndeprtate, pentru a preveni atacarea
componentelor proprii ale organismului; limfocitele T citotoxice
induc apoptoza i chiar propria lor distrugere; defectele aprute
n mecanismele apoptotice sunt asociate cu bolile autoimune,
cum ar fi lupusul eritematos i artrita reumatoid (Fig. 12.2);


Fig. 12.2 Implicarea celulelor T citotoxice n apoptoz


- leziunile genomului celular pot provoca anomalii de dezvoltare
embrionar i malformaii sau pot determina transformarea
malign; celulele rspund la lezarea ADN-ului prin creterea
produciei de p53, un inductor important al apoptozei; mutaiile
aprute n gena p53 produc o protein anormal, fiind frecvent
semnalate n cancer;
- radioterapia i chimioterapia utilizate n cancer induc apoptoza
anumitor tipuri de celule canceroase.


12.3. Controlul biochimic i genetic al apoptozei


246
Cile apoptotice includ un senzor care detecteaz semnalul de
inducie a morii celulare, o reea de transducie a semnalului i un
mecanism efector. Procesul apoptotic poate fi divizat n trei faze funcionale
distincte: faza de inducie se refer la o anumit modificare produs n
mediul celular, care conduce la activarea apoptozei prin mecanisme
receptoare i de transducie a semnalului; faza de execuie cuprinde
procesele intracelulare care rezult n urma apoptozei; faza de degradare
include evenimentele asociate punctului fr ntoarcere (point of no
return).
247
12.3.1. Inductori apoptotici

Gena p53

p53 este o gen tumorosupresoare, ale crei mutaii constituie cele
mai frecvente modificri genetice n cancerul uman i, de asemenea, joac
un rol deosebit n procesele benigne: de exemplu, expresia sa este crescut
n moartea neuronal indus de ischemia cerebral experimental, iar la
nivelul timocitelor, p53 intervine n apoptoza determinat de radiaii i de
medicamente care lezeaz ADN-ul. Modul de aciune al p53 este complex.
p53 este implicat n apoptoza declanat de absena factorilor de
supravieuire. p53 scade transcripia genelor antiapoptotice (bcl-2) i o
crete pe cea a antagonitilor (bax). Factorii externi de supravieuire sau
stimularea expresiei Bcl-2 protejeaz celulele de moartea indus de p53.
Cercetrile recente s-au axat pe stabilirea rolului p53 n oprirea
ciclului celular n faza G1, precum i pe implicarea sa n apoptoz. Este
cunoscut faptul c p53 poate fie s regleze proliferarea celular, fie s
induc apoptoza, n funcie de circumstane. p53 interacioneaz cu gena Rb
(gen tumorosupresoare, de susceptibilitate la retinoblastom). Aciunea
apoptotic a p53 poate compensa absena genei Rb funcionale, prevenind
astfel transformarea malign.
Proteina Rb mpiedic progresia ciclului celular din G1 n S, prin
inhibarea membrilor familiei E2F de factori transcripionali, blocnd astfel
expresia multor gene implicate n faza S. La nivelul cristalinului n
dezvoltare, gena Rb determin oprirea proceselor de cretere celular i
evoluia spre diferenierea final.
Studii efectuate pe oareci deficieni n gena Rb au artat c, n acest
caz, celulele continu s intre n faza S; totui, existena genei p53 active
determin evoluia celulelor spre apoptoz. Astfel de oareci au o dezvoltare
ocular anormal (microoftalmie), dar nu dezvolt tumori. oarecii
deficieni n p53, dar cu o funcionare optim a Rb au o dezvoltare ocular
normal. oarecii cu ambele deficiene nu pot fi studiai, deoarece mor n
timpul gestaiei, dar efectul absenei ambelor gene poate fi obinut pe
oareci transgenici pentru genele E6 i E7 ale virusului Herpes, care
inactiveaz p53 i Rb. Astfel de oareci dezvolt tumori oculare. Prin
urmare, n absena Rb aciunea apoptotic a p53 este esenial, datorit
activitii sale tumorosupresoare. Funciile ambelor gene sunt strns legate
de evenimentele ciclului celular din faza G1. Gena Rb este legat de
tranziia G0/ G1. p53 este capabil s induc oprirea n G1 i apoptoza.
Razele X i ali ageni care lezeaz ADN-ul cresc nivelul p53 printr-un
mecanism posttranslaional. Creterea p53 stopeaz ciclul n G1.
248
Familia proteinelor Bcl-2

Proteinele Bcl-2 reprezint o clas important de reglatori ai cilor
apoptotice i cuprinde att membrii care stimuleaz supravieuirea celular
(Bcl-2, Bcl-X
L
), ct i membrii pro-apoptotici (Bax i Bik). Expresia genei
Bcl-2 este crescut n celulele B maligne. De asemenea, s-a demonstrat c
este activat n majoritatea limfoamelor non-hodgkiniene, precum i n
condiii benigne, cum ar fi hipertrofia folicular a nodulilor limfatici i a
amigdalelor. n multe tipuri de celule limfocite, fibroblati, neuroni, celule
hematopoietice expresia Bcl-2 ntrzie sau chiar blocheaz apoptoza. n
aceleai celule, scderea reglrii prin Bcl-2 poate stimula apoptoza. Proteina
Bcl-2 este asociat membranelor, n celulele intacte fiind localizat n
nveliul nuclear, precum i la nivelul membranelor reticulului endoplasmic
i mitocondriei. Bcl-2 este nrudit cu o serie de proteine virale, aparinnd
adenovirusurilor sau virusului Epstein-Barr. Anumite gene funcioneaz ca
i Bcl-2 n inhibarea apoptozei; altele (Bax, Bcl-XS) se opun aciunii Bcl-2 i
promoveaz apoptoza. Se pare c apoptoza este reglat nu numai de Bcl-2,
ci i de raportul dintre Bcl-2 i Bax, n celulele unde acestea coexist.
Formarea heterodimerilor Bcl-2/Bax constituie un reostat pre-programat
n interiorul celulelor, determinnd extinderea apoptozei. Bcl-2 i poate
exercita aciunea anti-apoptotic prin ndeprtarea radicalilor liberi
oxidativi. Bcl-2 nu poate bloca toate formele de apoptoz: apoptoza indus
prin TNF nu este afectat de Bcl-2. Bcl-2 acioneaz sinergic cu o serie de
oncogene (de exemplu, c-myc) n reglarea apoptozei.

Oncogena myc

Oncogena myc pare s activeze un program genetic comun, care
poate determina att diviziunea, ct i moartea celular. Prezena sau
absena semnalelor adiionale (cum ar fi factorii externi de supravieuire sau
Bcl-2) poate determina destinul celulei: expresia necontrolat a myc
stimuleaz proliferarea celular n prezena factorilor de cretere, dar n
celulele deficiente n aceti factori induce apoptoza. Myc activeaz
transcripia p53, iar inducia morii celulare prin myc presupune intervenia
p53.
Pentru a explica rolurile aparent contradictorii al myc n proliferare
i apoptoz au fost propuse cteva modele. Unul dintre ele este modelul
conflictului, n care myc apare ca un promotor al proliferrii. n prezena
mitogenilor (factori care influeneaz creterea i diferenierea celular), nu
exist nici un conflict ntre aciunea myc i alte semnale primite de celule.
Atunci cnd mitogenii sunt abseni sau cnd este administrat un citostatic,
249
apare un conflict ntre semnalele de proliferare provenite de la myc i alte
semnale, de ncetare a proliferrii. Acest conflict pare s declaneze
apoptoza. Rolurile myc n proliferare i n apoptoz sunt strns legate. Myc
este un reglator transcripional care acioneaz printr-un domeniu
transactivator amino-terminal, implicat att n proliferare, ct i n
apoptoz. Nivelul expresiei myc se coreleaz att cu capacitatea
proliferativ, ct i cu susceptibilitatea la apoptoz. n final, myc formeaz
prin heterodimerizare un complex activ cu o protein partener, numit max,
complex care intervine att n proliferare, ct i n apoptoz. Un alt model
este cel al semnalului dual, n care myc activeaz simultan proliferarea i
cile apoptotice.


12.3.2. Mecanismele efectorii ale apoptozei

Mecanismele apoptotice includ trei componente principale:
proteazele morii (caspazele), moleculele adaptor CED-4/Apaf-1 i membrii
familiei Bcl-2. Caspazele reprezint braul executor al mecanismelor
apoptotice. CED-4/Apaf-1 par s joace un rol critic n conversia pro-
caspazelor n caspaze active prin interaciuni fizice directe. Familia Bcl-2
include att membrii pro-, ct i antiapoptotici, care se influeneaz reciproc
pentru a echilibra balana ntre diferite condiii de mediu.

Caspazele

O familie de proteaze cisteinice, denumite caspaze, joac un rol
important n mecanismele morii celulare. Exist mai multe caspaze clonate
i caracterizate la mamifere i o mare parte dintre ele sunt implicate n
procesele apoptotice. Ele sunt sintetizate n celule ca precursori inactivi
compui din patru domenii distincte: un domeniu amino-terminal, o
subunitate mare (20 kDa), o subunitate mic (10 kDa) i o regiune de
legare ntre cele dou domenii, flancat de un rest aspartat. Activarea
fiecrei caspaze este indus de clivajul proteolitic dintre domenii, constnd
n ndeprtarea pro-domeniilor i a regiunilor de legare i asamblarea celor
dou subuniti ntr-un complex enzimatic activ. Caspazele pot fi mprite
n iniiatori i efectori. Dou cascade caspazice principale au fost definite
n celulele mamiferelor. Activarea pro-caspazei-8 necesit cuplarea cu
proteina adaptor FADD (Fas associated death domain, proteina asociat
domeniului morii al Fas), prin intermediul DED (death effector domain,
domeniul efector al morii), n timp ce activarea pro-caspazei-9 necesit mai
250
muli factori, incluznd Apaf-1, citocromul c i ATP. Diferite caspaze de
iniiere mediaz seturi distincte de semnale. De exemplu, caspaza 8 este
asociat cu apoptoza prin receptorul Fas, iar caspaza-9 este implicat n
moartea indus de ageni citotoxici. Un semnal pro-apoptotic determin
activarea unei caspaze de iniiere, care la rndul ei, activeaz o caspaz
efector, cum este caspaza-3, ceea ce conduce la dezasamblarea celular.
Acest model explic cum semnale apoptotice distincte induc aceleai
modificri biochimice i morfologice caracteristice apoptozei. Un mecanism
potenial de control al activrii caspazelor de iniiere poate implica blocarea
interaciunilor dintre pro-caspaze i activatorii lor.


Cile apoptotice


Calea receptorilor morii este declanat de membrii unei
superfamilii de receptori pentru factorii de necroz tumoral (TNFR).
Receptorii morii sunt receptori celulari de suprafa, care transmit
semnalele apoptotice iniiate de liganzi specifici. Ei joac un rol important
n apoptoz i pot activa cascada caspazic n cteva secunde de la ataarea
ligandului. Inducia apoptozei prin acest mecanism este deci foarte prompt.
Printre cei mai bine caracterizai receptori ai morii se afl CD95 (sau Fas),
TNFR1 i receptorii DR4 i DR5 ai TRAIL (TNF related apoptosis-inductive
ligand, ligandul care induce apoptoza nrudit cu TNF).
CD95/Fas are trei roluri principale:
- anihilarea celulelor infectate viral, mediat de celulele T citotoxice;
- distrugerea celulelor T activate la sfritul rspunsului imun;
- distrugerea celulelor inflamatorii i imune n situsurile
privilegiate din punct de vedere imun (camera anterioar a
ochiului, testicule).
Ligandul pentru CD95 (CD95L sau FasL) este un trimer, care, prin
asocierea cu receptorul, determin trimerizarea acestuia. Ca urmare, are loc
o grupare intracelular a regiunilor din receptor care alctuiesc domeniile
morii (DD). Aceasta permite proteinei adaptor FADD, s se ataeze la
receptor prin interaciunea dintre domeniile omoloage. Proteina FADD
conine i un domeniu efector al morii (DED), care permite legarea pro-
caspazei-8 la complexul protein FADD receptor CD95 (Fig. 12.3).

Fig. 12.3 Complexul FasL - CD95 FADD pro-caspaz 8

Pro-caspaza-8 (cunoscut i ca FLICE) se asociaz cu FADD prin
intermediul propriului domeniu efector al morii, care odat recrutat de
FADD, este imediat clivat pentru a produce caspaza 8. Complexul de
proteine CD95, FADD i pro-caspaza 8 care declaneaz apoptoza este
cunoscut ca DISC (death- inductive signaling complex, complexul
semnalizator care induce moartea). Activarea caspazei 8 poate fi blocat
prin recrutarea unui omolog degenerat al caspazei, c-FLIP.
Calea mitocondrial este utilizat mai ales n cazul unor stimuli
externi sau leziuni interne, cum ar fi lezarea ADN. Aceste ci diferite de
rspuns converg la nivelul mitocondriei, prin activarea unui membru
proapoptotic al familiei Bcl-2. Spre deosebire de Bcl-2, care rmne mereu
ataat la membranele intracelulare, ali membrii ai familiei, incluznd Bax,
Bad, Bim i Bid, se mic ntre citosol i organite. Formele citosolice
reprezint grupul de proteine inactive, dar gata de aciune. Semnalele
proapopotice direcioneaz aceste proteine ctre mitocondrie, unde se va
251
decide soarta celulei. Activarea membrilor proapoptotici se poate face prin
proteoliz, defosforilare sau alte mecanisme. Membrii pro- i anti-apoptotici
ai familiei Bcl-2 se ntlnesc la suprafaa mitocondriei, unde vor
competiiona pentru reglarea ieirii citocromului c printr-un mecanism care
este nc discutat. Dac factorii pro-apoptotici au ctig de cauz, o gam
larg de molecule va fi eliberat din compartimentul mitocondrial. Dintre
acestea, cel mai important este citocromul c, care se asociaz cu Apaf-1 i cu
pro-caspaza 9 (i, probabil, i cu alte proteine) pentru a forma apoptozomul.
Proteinele de oc termic acioneaz la nivele multiple n aceast cascad
pentru a modula apoptoza.
Cele dou ci converg la nivelul activrii caspazei-3. Activarea
caspazei-3 i funcionarea sa ulterioar sunt antagonizate de ctre proteinele
IAP, care la rndul lor sunt antagonizate de proteina Smac/DIABLO
eliberat din mitocondrie. n aval de caspaza-3, cascada apoptotic se
ramific, ducnd n final la dezmembrarea controlat a celulei (Fig. 12.4).

Fig. 12.4 Cile apoptozei
252

Rolul mitocondriei n apoptoz

Mitocondria joac un rol important n reglarea morii celulare. De
exemplu, membrii anti-apoptotici ai familiei de proteine Bcl-2, cum sunt
Bcl-2 i Bcl-XL sunt localizai n membrana mitocondrial extern i
acioneaz n sensul promovrii supravieuirii celulare. Ali membrii pro-
apoptotici ai familiei Bcl-2, cum sunt Bad i Bax i mediaz efectele prin
intermediul mitocondriei, fie prin interaciunea cu Bcl-2 i Bcl-XL, fie prin
interaciunea direct cu membrana mitocondrial (Fig. 12.5).


Fig. 12.5 Rolul mitocondriei n apoptoz

Mitocondria are posibilitatea de a promova apoptoza prin eliberarea
citocromului c. Acesta, mpreun cu Apaf-1 i ATP, formeaz un complex
cu pro-caspaza 9, numit apoptozom, care determin activarea caspazei 9 i a
cascadei caspazice (Fig. 12.6).
253

Fig. 12.6 Formarea apoptozomului, activarea caspazei 9 i declanarea
cascadei apoptotice

Se pare c Bax i Bad, ca i alte proteine din familia Bcl-2, pot
forma pori prin membrana mitocondrial extern, determinnd pierderea
potenialului de membran i efluxul citocromului c i al AIF (factorul de
inducie al apoptozei). n schimb, Bcl-2 i Bcl-XL acioneaz n scopul
prevenirii formrii porilor. Heterodimerizarea Bax sau Bad cu Bcl-2 sau
Bcl-XL inhib aceste efecte protectoare.


12.3.3. Modificri nucleare n timpul apoptozei

Unul din markerii apoptozei l constituie clivajul ADN n unitile
nucleozomale. Degradarea ADN-ului n nucleii celulelor apoptotice apare
ntr-o serie de ci consecutive activrii caspazelor i se desfoar n cteva
etape:
1. Inactivarea enzimelor implicate n reparaia ADN. Enzima poli
(ADP-riboz) polimeraza (PARP) a fost prima protein identificat ca fiind
un substrat al caspazelor. PARP este implicat n repararea leziunilor ADN
i funcioneaz prin catalizarea sintezei de poli (ADP-riboz), prin legarea
de rupturile lanurilor ADN i prin modificarea proteinelor nucleare.
Caspaza 3 cliveaz PARP, mpiedicnd astfel repararea leziunilor ADN.
254
2. Inactivarea enzimelor implicate n replicarea celular. ADN
topoizomeraza II este o enzim nuclear esenial pentru replicarea ADN i
reparare. Caspazele pot inactiva aceast enzim, determinnd leziuni ADN.
3. Degradarea proteinelor structurale nucleare. Lamina este o
protein intranuclear care contribuie la meninerea formei nucleului i
mediaz interaciunile dintre cromatin i membrana nuclear. Degradarea
laminei de ctre caspaza 6 determin condensarea cromatinei i
fragmentarea nuclear, observat n celulele apoptotice.
4. Fragmentarea ADN. Fragmentarea ADN n unitile
nucleozomale este provocat de o enzim numit CAD (DN-aza activat de
caspaze). n mod normal, CAD exist sub forma unui complex inactiv cu
ICAD (inhibitorul CAD sau factorul 45 de fragmentare al ADN). n timpul
apoptozei, ICAD este clivat de caspaze, incluznd caspaza 3, pentru a
elibera CAD. Deoarece CAD este o DN-az cu activitate specific intens
(comparabil sau chiar mai puternic dect DN-aza I i DN-aza II), apare o
fragmentare rapid a ADN-ului nuclear (Fig. 12.7).

Fig. 12.7 Fragmentarea ADN n procesul apoptotic
255