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11.- ENTEROBACTERIACEAE

11.- ENTEROBACTERIACEAE

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Enumerar las principales especies pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, señalando su importancia en salud publica y en los laboratorios farmacéuticos
Familiarizarse con las características microscópicas y las propiedades culturales de este importante grupo bacteriano
Elegir los medios de cultivo involucrados en el aislamiento y la diferenciación presuntiva de estas bacterias, señalando los componentes que los hacen selectivos y diferenciales
Seleccionar los medios de cultivo empleados en la diferenciación bioquímica de los diversos géneros involucrados en este grupo bacteriano.
Describir técnicas y fundamentos relacionados con la detección de estos microorganismos en las muestras clínicas, en materia prima y en productos farmacéuticos
Enumerar las principales especies pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, señalando su importancia en salud publica y en los laboratorios farmacéuticos
Familiarizarse con las características microscópicas y las propiedades culturales de este importante grupo bacteriano
Elegir los medios de cultivo involucrados en el aislamiento y la diferenciación presuntiva de estas bacterias, señalando los componentes que los hacen selectivos y diferenciales
Seleccionar los medios de cultivo empleados en la diferenciación bioquímica de los diversos géneros involucrados en este grupo bacteriano.
Describir técnicas y fundamentos relacionados con la detección de estos microorganismos en las muestras clínicas, en materia prima y en productos farmacéuticos

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PRÁCTICA # 11“ENTEROBACTERIACEAE”
OBJETIVOS:
Enumerar las principales especies pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, señalando su importancia ensalud publica y en los laboratorios farmacéuticos
Familiarizarse con las características microscópicas y las propiedades culturales de este importante grupobacteriano
Elegir los medios de cultivo involucrados en el aislamiento y la diferenciación presuntiva de estas bacterias,señalando los componentes que los hacen selectivos y diferenciales
Seleccionar los medios de cultivo empleados en la diferenciación bioquímica de los diversos géneros involucradosen este grupo bacteriano.
Describir técnicas y fundamentos relacionados con la detección de estos microorganismos en las muestras clínicas,en materia prima y en productos farmacéuticos.
INTRODUCCIÓN
ENTEROBACTERIACEAE 
Este grupo de organismos incluye a varios que causan infecciones primarias del tracto gastrointestinal humano. Por tanto, se les refiere comoentéricos (sin importar si causan o no enfermedades intestinales). Las bacterias que afectan el tracto gastrointestinal, incluyen a ciertas cepas de
E. coli 
y
Salmonella
, a las 4 especies de
Shigella
y a
Yersiniaentercolítica
. La enfermedad reumática, el síndrome de Reiter, puede ser resultado de una previa exposición a
Salmonella
,
Shigella
, o
Yersinia
.
Enterobacteriaceae
es una familia de bacterias Gram negativas que contiene más de 30 géneros y más de 100 especiesque pueden tener morfología de bacilos o cocos. Los miembros de esta familia forman parte de la microbiota delintestino (llamados coliformes) y de otros órganos del ser humano y de otras especies animales. Algunas especiespueden vivir en tierra, en plantas o en animales acuáticos. Sucumben con relativa facilidad a desinfectantes comunes,incluido el cloro. Con frecuencia se encuentran especies de
Enterobacteriaceae
en la bio-industria: para la fermentaciónde quesos y productos lácteos, alcoholes, tratamientos médicos, producción de toxinas en el uso de cosméticos,fabricación de agentes antivirales de la industria farmacéutica, etc.
Características
En la definición clásica de una
Enterobacteriaceae
se usan siete criterios básicos, adicional a la aparición de nuevosmétodos taxonómicos para incluir a ciertos géneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que formanparte de esta familia:
Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y otros pleomórficos.
No son exigentes, son de fácil cultivo.
Son oxidasa negativo, es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.
Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
Son anaeróbicos facultativos.
Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con o sin la producción de gas
Muchos géneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos géneros no son móviles.Adicional a ello, las
Enterobacteriaceae
no forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser encapsuladas y sonorganismos catalasa positivos. Son quimioautótrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples de carbono ynitrógeno, generalmente sólo con D-glucosa, aunque algunas requieren aminoácidos y vitaminas. La temperatura óptimade crecimiento es de entre 22ºC y 37ºC.Las diferencias entre los nombres de los diversos géneros provienen de criterios más precisos, como la fermentación delos diferentes azúcares, la producción o no de azufre, la presencia de enzimas metabólicas (β-galactosidasa,desaminasas, descarboxilasas), etc. Los serotipos de importancia medica y sanitaria pueden distinguirse entre sí por lapresencia o ausencia de antígenos en su constitución celular, tales como en el lipopolisacárido (antígeno O), el antígenoflagelar (antígeno H) o el antígeno capsular (antígeno K).
Ecología
 
La mayoría de las especies pueden aislarse del intestino del hombre y de otros animales, de allí su nombre
enterobacteria
(del griego
entéron
, intestino. Pueden ser flora o ser transitorias en la cavidad bucal, en las regioneshúmedas de la piel, en especial el perineo, las fosas nasales y las vías genitales femeninas. Son abundantes en lanaturaleza, en particular en medios húmedos y, por ser expulsadas por las heces, funcionan como medidoresepidemiológicos de salubridad e higiene poblacional.En el intestino, representan una fracción importante de la flora aeróbica, se encuentran en grandes números en el colon,donde contribuyen a la degradación de residuos alimenticios y a la producción de gas intestinal como parte de lafermentación.La especie
Escherichia coli 
juega una función importante en el control de otras especies intestinales, constituyendocerca del 80 por ciento de la flora aeróbica intestinal en una concentración aproximada de 10
8
en la materia fecal. Otrasespecies de
Enterobacteriaceae
con una presencia numerosa intestinal son
Proteus
y
Klebsiella
, mientras que otrasespecies, como
Citrobacter 
,
Hafnia
,
Providencia
y
Enterobacter 
están presentes de manera irregular.En ciertas oportunidades, los comensales del intestino pueden resultar patogénicos como oportunistas en infeccionesurinarias, pulmonía, septicemia o sobreinfecciones, en especial en inmunosuprimidos, en el uso de ciertos antibióticos,desnutrición, etc.La presencia de
Enterobacteriaceae
dentro del organismo es anormal y determina la aparición de infecciones, cuyagravedad depende del punto de entrada. Introducidas por los alimentos, provocan problemas intestinales al adherirse yatravesar la barrera de la mucosa gastrointestinal, manifestada por diarreas y deshidratación. Ciertas especies provocanpatologías específicas:
La especie
Salmonella typhi 
es responsable de la fiebre tifoidea.
La especie
Shigella dystenteriae
es el agente responsable de la disentería bacilar.
La especie
Escherichia coli enterotóxica
es responsable de la gastroenteritis infantil.
La especie
Yersinia pestis
es responsable de la peste.
La especie
Serratia marcescens
usualmente causa infecciones nosocomiales como resultado de tratamiento en unhospital.Las
Enterobacteriaceae
incluyen a organismos que resultan patógenos para el ser humano como la Escherichia coli o laSalmonella, especialmente importantes en la mortalidad infantil en países en desarrollo
 
y patógenos para las plantascomo Erwinia, en la mayor parte de los casos causando infecciones oportunistas. Todos los bacilos de
Enterobacteriaceae
son resistentes a antimicrobianos comunes, tales como la penicilina, la meticilina y la clindamicina,entre otros.
 Aislamiento e identificación de Enterobacteriaceae
Estas bacterias son bacilos Gram-negativos anerobios facultativos. Carecen de la enzima citocromo oxidasa y por ellose mencionan como oxidasa negativos. Frecuentemente son aislados a partir de materia fecal en agar conteniendolactosa y un indicador de pH. Las colonias que fermentan la lactosa producirán suficiente ácido para causar el vire delindicador.
E. coli 
es un fermentador de la lactosa, mientras que
Shigella
,
Salmonella
y
Yersinia
no son fermentadores.Las cepas "No-patógenas" de
E. col
(y otras bacterias entéricas lactosa-positivas)frecuentemente se encuentran en heces normales. Debido a que es difícil diferenciarlos delas cepas "patógenas" de
E. coli,
las colonias lactosa-negativas con frecuencia son las quese identifican en las heces. Todas las
Enterobacteriaceae
aisladas de otros sitios delorganismo (los cuales contienen menor mero de bacterias [ej. la orina] o quenormalmente son estériles [ej. sangre]) se identifican bioquímicamente. Los serotiposimportantes se pueden diferenciar por sus angenos como el angeno O(lipopolisacárido), el H (flagelar) y el antígeno K (capsular). Sin embargo, la serotipificación  generalmente no se realiza en el laboratorio clínico de rutina. Fermentadores de lactosa en agar Hektoen, el cual contiene sales biliares e indicadores de la presencia de ácido (azulde bromotimol y fuchsina ácida). Las bacterias gram-positivas se inhiben en estos medios ya que el agar es selectivopara las gram-negativas. Las bacterias fermentadoras de lactosa forman colonias anaranjadasmientras que las no fermentadoras aparecen en verde o verde-azul. Esto es especialmente útil paradistinguir patógenos potenciales de la flora normal en muestras fecales. Sin embargo, es difícildistinguir entre los mismos no-fermentadores. El microorganismo en ésta placa podría ser 
Salmonella
,
Proteus
, o
Shigella
.Crecimiento de un no fermentador de la lactosa en agar de MacConkey el cual contiene sales biliares y cristal violeta,componentes que inhiben el crecimiento de las bacterias gram-positivas. El agar también contiene lactosa y un coloranterojo que diferencia a los fermentadores de lactosa de los no-fermentadores. Las colonias de las bacterias quefermentan la lactosa van desde un color rosa hasta rojo mientras que las no fermentadoras son incoloras o
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transparentes. Este agar no distingue entre las no- fermentadoras de lactosa; un crecimiento como este podría indicar lapresencia de varios microorganismos como-
Proteus
,
Salmonella
o
Shigella
, por ejemplo. En una muestra fecal, estascolonias serían suficiente evidencia para continuar con más pruebas de identificación.Crecimiento de bacterias gram-negativas que no son capaces de fermentar la lactosa en agar deeosina azul de metileno (o EMB por sus siglas en inglés) el cual contiene sales biliares y colorantesque inhiben a las bacterias gram-positivas. El crecimiento en agar EMB es una herramientadiagnóstica útil para distinguir entre los fermentadores de lactosa de los no-fermentadores, loscuales aparecen incoloros.
Salmonella
y
Shigella
son patógenos que no fermentan la lactosa, asípueden ser distinguidos de la flora intestinal mas común, la cual sí lo hace.
E. Coli 
del tipo hemorrágico. Son bacilos procariontes Gram-negativos, entéricos, anaerobios facultativos.Potencialmente fatales a los humanos, que se contraen cuando la carne contaminada se cocina de manera inadecuada.
Infecciones por enterobacterias
El grupo de enterobacterias incluye la bacteria
Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia,Salmonella, Serratia, Shigella y Yersinia.
Aunque
Escherichia coli (E. coli)
normalmente habita en el intestino,determinadas cepas de
E.
 
Coli 
puede causar infecciones intestinales que producen sangre, acuosa o diarreainflamatoria (diarrea del viajero). En los niños, la diarrea causada por determinadas cepas de
E.
 
Coli 
puede conducir ala destrucción de los glóbulos rojos y la insuficiencia renal (síndrome hemolítico-urémico).
E.
 
Coli 
también puedencausar infecciones del tracto urinario (especialmente en mujeres) y la bacteriemia y meningitis en recién nacidos(especialmente los recién nacidos prematuros). Las infecciones causadas por 
E.
 
Coli 
son diagnosticadas por labúsqueda de las bacterias en cultivos de sangre o fluidos corporales. La infección se trata con antibióticos, comotrimetoprim-sulfametoxazol
Klebsiella, Enterobacter, Serratia
y las infecciones son usualmente adquiridos en el hospital, principalmente por personas que tienen una disminución de la capacidad para luchar contra las infecciones. Estas bacterias suelen infectar la orina o de las vías respiratorias, a pesar de las quemaduras y las heridas a veces se infectan. La neumonía causadapor 
Klebsiella
es una rara, pero grave, la infección pulmonar que es más común en los alcohólicos, las personasmayores y las personas con diabetes. Normalmente, las personas con esta infección tosa y pegajoso de esputo que esde color marrón oscuro o rojo oscuro. La neumonía puede llevar a la formación de abscesos (colecciones de pus) en elpulmón o en el revestimiento de los pulmones (empiema). Si tratan con tiempo suficiente, esta neumonía puede curarsecon antibióticos por vía intravenosa, por lo general las cefalosporinas o quinolonas.
Proteus
normalmente está presente en el suelo, el agua y las heces. También puede causar infecciones profundas, enparticular en el tracto urinario y de la cavidad abdominal.
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Los bacilos gramnegativos pertenecientes a Enterobacteriaceae son los aislamientos bacterianos recuperados con másfrecuencia de muestras clínicas. Distribuidos en la naturaleza en forma amplia, estos microorganismos se encuentran enel suelo y el agua, sobre las plantas, y como lo indica el nombre de la familia, dentro del tracto intestinal de sereshumanos y animales. Antes del advenimiento de los antibióticos, la quimioterapia y las medidas inmunosupresoras, lasenfermedades infecciosas causadas por Enterobacteriaceae estaban relativamente bien definidas. Se sabía que lossíndromes diarreicos y disentéricos, acompañados por fiebre y septicemia en los casos clásicos de fiebre tifoidea erancausados por especies de Salmonella y Shigella. Se sabía que los casos clásicos de neumonía, caracterizados por laproducción de esputo rojo ladrillo o “jalea de grosella”, eran causados por el bacilo de Friedlander (Klebsiellapneumoniae). Escherichia coli, especies de Proteus, y varios miembros del grupo Klebsiella-Enterobacter serecuperaban comúnmente de heridas traumáticas, contaminadas con tierra o material vegetal o de incisionesabdominales luego de una cirugía gastrointestinal.Por lo tanto, los miembros de Enterobacteriaceae pueden ser incriminados en virtualmente cualquier tipo de enfermedadinfecciosa y recuperados de cualquier muestra recibida de laboratorio. Los pacientes inmunocomprometidos odebilitados son altamente susceptibles a las infecciones adquiridas en los hospitales, después de la colonización concepas ambientales o a continuación de procedimientos invasivos, como caterización, broncospopía, colposcopia obiopsias quirúrgicas, en las cuales las membranas mucosas se traumatizan y se cortan.El shock endotóxico es una manifestación potencialmente letal de la infección por bacterias gramnegativas, incluidas lasEnterobacteriaceae. Las endotoxinas son lipopolisacáridos farmacológicamente activos que están contenidos dentro delas paredes celulares de las especies gramnegativas. Estos lipoposacáridos están estructuralemente en tres capas:1)una porción variable externa de carbohidratos que determinan la especificidad antigénica.2)Un core medio de polisacárido que es estructuralmente similar entre las especies y3)Una porción lipídica central altamente conservada llamada lípido A.
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