PENENTUAN METHEMOGLOBIN DENGAN SPEKTROFOTOMETRI Pengantar Fungsi utama hemog o!in a"a ah untu# mengang#ut o#sigen "an #ar!

on "io#si"a "i "a am tu!uh$Mo e#u hemog o!in norma ter"iri "ari em%at rantai %o i%e%ti"a &ang "ise!ut g o!in' &ang se(ara %rote#ti) mem!ung#us se#itar em%at su!unit !er%igmen &ang "ise!ut heme$ Setia% hemes mengan"ung !esi "a am !entu)erro *Fe+,- &ang "a%at mengi#at se(ara re.ersi!e "engan mo e#u o#sigen tungga $ Methemog o!in a"a ah !entu# hemog o!in &ang a!norma &ang memi i#i #a%asitas untu# mam%u mengurangi%em!a/aan o#sigen$ Methemog o!in "i%ro"u#si #eti#a !esi )erro *Fe+,"a am mo e#u heme &ang tero#si"asi men0a"i !entu# )erri *Fe1,-$ Sementara "a am !entu# tero#si"asi' !esi )erri "a am su!unit heme ti"a# mam%u mengi#at o#sigen$ Sen&a/a ini ti"a# "a%at mem!eri#an o#sigen #e 0aringan' #arena itu' ha ini menguntung#an untu# mengu!ah 1, hemog o!in #e !entu# )erro +, sehingga 0aringan !isa men"a%at#an o#sigen &ang mere#a !utuh#an$ A"an&a su!stansi tero#si"asi en"ogen "an e#sogen &ang #onstan menghasi #an %em!entu#an methemog o!in se(ara terus2menerus$ Pa"a in"i.i"u norma ' ting#at methemog o!in "i%ertahan#an "i !a/ah 34 me a ui "ua 0a ur meta!o isme$ 5a ur utama me i!at#an re"u#si en6imati# "ari %ro"u# g i#o iti# NAD men0a"i NADH *Ni#otinami"a a"enin "inu# eoti"a-$ NADH #emu"ian !ertin"a# se!agai "onor e e#tron "a am re"u#si !esi )erri *Fe 1,methemog o!in men0a"i !entu# )erro *Fe+,-$ En6im NADH methemog o!in re"u#tase "i%er u#an untu# re"u#si NAD "an methemog o!in$ Da am eritrosit' %roses re"u#si en6imati# methemog o!in 0uga "a%at "i(a%ai me a ui re"u#si NADP &ang "ihasi #an me a ui 0a ur he#sosa mono)os)at$NADPH #emu"ian !ertin"a# se!agai agen %ere"u#si "a am #on.ersi tergantung "ari en6im methemog o!in "engan hemog o!in$ Sementara 0a ur ini memi i#i %eran sangat #e(i "a am re"u#si harian methemog o!in' ha ini "a%at men&e!a!#an a"an&a "onor e e#tron e#sogen' se%erti meti en ! ue$ Keti#a "i!eri#an meti en ! ue tera"ministrasi'ha ini #an ter#on.ersi men0a"i se!uah agen re"u#si #uat &ang "ise!ut eu#ometh& ene! ue o eh NADPD$ Leu#ometh& ene ! ue #emu"ian

"a%at !erea#si "engan methemog o!in &ang menga#i!at#an ter0a"in&a %roses re"u#si %a"a hemog o!in "an %er!ai#an #a%asitas %em!a/a o#sigen norma $ Ter"a%at se0um ah o!at2o!atan "an agen to#si# &ang "a%at meng#on.ersi hemog o!in men0a"i methemog o!in' se%erti nitrat' # orat' 7uinines' %hena(etin' su )onami"e' %e/arna ani in' "an anestesi o#a se%erti %ro#ain' !en6o(aines' "an i"o#ain$Me#anisme &ang te%at "ari to#sisitas !er.ariasi antara tia% agen$ Be!era%a agen memi i#i e)e# mengo#si"asi angsung %a"a hemog o!in sementara agen ainn&a men&e!a!#an %em!entu#an ra"i#a o#sigen "an ra"i#a !e!as %ero#si"a' &ang mam%u mengo#si"asi hemog o!in$ Per#em!angan methemog o!inemia "ii#uti o eh %a%aran %a"a su!stansi o#si"ati) &ang ti"a# ter!atas %a"a rute ora $ Se(ara # inis' e.e methemog o!in &ang signi)i#an te ah "iamati %a"a %asien &ang te ah menga ami %a%aran me aui #u it %a"a nitrit &ang mu"ah mengua%' meto"e umum "ari %en&a ahgunaan su!stansi' 0uga menghasi #an methemog o!in$ Presentasi K inis Tan"a "an ge0a a methemog o!inemia a"a ah sama ter e%as "ari etio ogi' namun onset /a#tu mere#a "an "urasi a"a ah agen &ang s%esi)i#$ Bagi !an&a# agen' a/a methemog o!inemia ini "a am /a#tu 32+ 0am' teta%i "itun"a untu# agen ain se%erti "a%son "an nitroethane$ Keti#a #a"ar methemog o!ine "i !a/ah 384 !iasan&a ti"a# a"a ge0a a$ Peru!ahan /arna #u it sianoti# a"a ah ti%i(a & "iamati %a"a ting#at &ang e!ih !esar "ari 394 "an sering sa ah satu )itur &ang ter!u#ti se(ara # inis a/a methemog o!inemia$ Se!agai ting#at nai#methemog o!inemia' #e%arahan mening#at *Ta!e 3-$ To#sisitas &ang serius "ihara%#an "engan ting#at &ang e!ih !esar "ari 984' "an ting#at "i atas :84 !erhu!ungan "engan #ematian$ Ta!e 3$ Konsentrasi methemog o!in "an ge0a a Konsentrasi 39 2 +8 4 +8 2 98 4 98 2 :8 4 Prinsi% Ge0a a (&anosis' (ho(o ate !ro/n arteria ! oo" #e e ahan' #e emahan' %using' ge isah' #e!ingungan' sa#it #e%a a' "is%nea' ta#i#ar"ia esu' stu%or' asi"osis' #oma' #e0ang' arrh&tmias

S%e#trum a!sor!ansi "ari methemog o!in nam%a# se"i#it' %un(a# #ara#teristi#n&a %a"a ge om!ang ;182;19 nm$ Penam!ahan sianami"a menghi ang#an %un(a# ini "engan meng#on.ersi methemog o!in men0a"i (&anmethemog o!in$ Penurunan a!sor!ansi se!an"ing "engan #onsentrasi methemog o!in$ S%e#trum a!sor!ansi &ang norma %a"a o#sihemog o!in menun0u##an a!sor!ansi &ang sangat se"i#it "i atas ;88 nm$ Namun' 0i#a su )hemog o!in ter"a%at"i "a am hemo isat' ter"a%at %ening#atan !esar "a am #ur.a a!sor%si %a"a #isaran ;882;+8nm$Ni ai sta!i Su )hemog o!in ti"a# ter%engaruh terha"a% siani"a$ S%esimen Darah segar "ari atau &ang "i!eri anti#oagu asi "engan he%arin' EDTA atau arutan A<D *asam2sitrat2"e#strosa-$ Ti"a# "i!utuh#an %em!atasan atau ti"a# %er u %uasa ma#anan "an minuman$ Reagen
1. Hemog o!in stan"ar 314 2. Potassium )erri(&ani"e =K1Fe*<N-;>$ Pe arut +'8 g =K1Fe*<N-;> &ang "isu ing "an

"i arut#an %a"a 38'8 mL H+O$ 5i#a "isim%an "a am !oto (o# at %a"a suhu ?@<' arutan ini sta!i seti"a#n&a se ama satu tahun
3. Larutan %otassium siani"a$ *PERHATIANA ra(un memati#an-$ Pe arut 988 mg K<N &ang

"isu ing "an "i arut#an %a"a 38'8 mL H+O$ La!e BRA<UNB sta!i %a"a suhu +8@< se ama minima ? !u an$
4. Bu))er %otassium )os)at 8'39 mo C L' %H ;'; *+8 8<-$ Pe arut 3:'3 g K+HPO? &ang "isu ing

%a"a air$ Trans)er arutan KH+P8? #e "a am ge as #imia +L "an menam!ah#an .o ume arutan K+HPO?$ Tem%at#an e e#tro"a %H "a am ge as #imia$ Kemu"ian %er ahan2 ahan menam!ah#an e!ih !an&a# arutan K+HPO?' "engan %enga"u#an &ang #onstan' sam%ai ter(am%ur "an menun0u##an %H ;';$ Sim%an %a"a ?8<$ Buang arutan#eti#a arutan ter ihat #eruh$Bu))er &ang !aru harus "isia%#an seti"a#n&a se#a i setia% tiga !u an Prose"ur

1. Sia%#an (u.et ! an#o &ang !erisi 3'9 m !u))er )os)at "an 3'9 mL H+O$ Tan"ai #u.et ini

"engan a!e <3

2. Masu##an 8'3 mL "arah mengguna#an %i%et #e "a am ta!ung rea#si !erisi 1'8 m %e arut

H+O' "i#o(o# me ing#ar agar ter(am%ur "engan !ai#

3. Tam!ah#an 8'? mL !u))er %otassium )os)at "an a"u# rata 4. Memin"ah#an 1 mL hemo isat #e "a am + (u.et$ Beri a!e <+ "an <1 5. Pa"a (u.et <1' tam!ah#an 8'3 mL arutan =K1Fe*<N-;>$ Tutu% "engan %ara)i m' (am%ur

"engan mem!o a#2!a i##an #u.et se!an&a#1D' "an menghitung a!sor!ansi %a"a menit #e2 +
6. Menghitung a!sor!ansi %a"a ;18 nm untu# (u.et <+ "an <1' mengguna#an <3 se!agai

! an#o$ <atat se!agai A+A "an A1a

7. Tam!ah#an 8'3 mL K<N %a"a semua (u.et$ *tam!ah#an + tetes "enganmengguna#an %i%et

trans)er &ang "i eng#a%i "engan !oh am #aret-$ <am%ur "engan mem!o a#2!a i##an #u.et se!an&a#1D"an "iam#an se ama 9 menit E$ Hitung a!sor!ansi %a"a ;18 nm untu# (u.et <+ "an <1 "engan <3 se!agai ! an#o$ <atat se!agai A+! "an A1! Perhitungan A+A 2 A+! Methemog o!in *%ersen "ari %igmen tota - F 388 22222222222222222222 A1a 2 A1! Re)erensi RangeA 8 2 34 Komentar "an Ke/as%a"aan So usi hemog o!in se"i#it #eruh' namun' #arena #e#eruhan ti"a# !eru!ah "engan %enam!ahan =K1Fe*<N-;> atau K<N' a!sor!ansi men&e!a!#an sama untu# #e"ua %em!a(aan "engan masing2masing (u.et "an #arena itu #om%ensasi "a am %erhitungan ini$ Meto"e se"erhana ini memuas#an untu# %engu0ian methemog o!in 0i#a u0i su )hemog o!in ti"a# "i%er u#an$